骨髓间充质干细胞培养

细胞共培养体系在观察骨髓间充质干细胞对损伤脊髓神经元生长存活影响中的应用

摘要
范洪学王苹４，５
目的：立细胞共培养体系，建观察骨髓问充质干细胞（ＭＣ）正常及损伤的脊髓神经元的影响。ＢＳｓ对
方法：取新生７选ｄ的大鼠，菌条件下大鼠，菌条件下分离脊髓背根神无４无
结果：培养组神经元细胞ＮＳ阳性率较相应对照组高。在ＢＣｓ与神经元共培养到第６天，数神经元的存活共ＥＭＳ计
率，纯神经元细胞培养组仅有４％的神经元存活，单０而共培养组神经元的存活率达到６％。单纯损伤神经元细胞培５养组仅有２％的神经元存活，培养组神经元的存活达到５％，胞凋亡的数量较对照组明显低。６共１细结论：ＭＳｓＢＣ可促进正常的脊髓神经元存活，损伤的脊髓神经元有保护作用，能诱导神经前体细胞分化为脊髓对并
ＲｅｕｔＩｈｇｏｐｆＣｃｌｒｄｉＢＣｓａｄｎｒａｓｉａｃｒｎｕｏｓｈｐｓｔｅａｅｆＮＳｗｓｓ：ｎｔｅｒｕｏＯ— ｕｔｅｗｔｌｕｈＭＳｎｏｍｌｐｎｌｏｄｅｒｎ，ｔｅｏｉｖｒｔｉｏＥａ
经节神经元，制备机械损伤的模型细胞。用Ｔａｓｅ并ｒｎｗｌｌ可渗透培养皿构建共培养体系，过细胞形态学，疫细胞通免

大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养的实验研究

性，Ｄ。达７．、Ｄｌ表达８．％；ＣＣ。表１５Ｃ６６３２ＭＳｓ用１的ＦＳ培养，ＯＢ其增殖明显高于用无血
清、％及２的ＦＳ培养；１３５１５ｏＢ第、、、ｏ代ＭＳｓ的生长曲线及细胞贴壁率无明显差异（ＣＰ
ｂｖｎｅｕ（ＢＳｗａｂｅｖｄｂＴＴｏｏｉｔｙＴｈｒｗｔｕ，ｎｔａｈｎｆｉｉｎｙｏｏｉｅｓｒｍＦ）ｓｏｓｒｅｙＭｃｌｒｍｅｒ．ｅｇｏｈｃｒ，ａｄａｔｃｍｅｔｅｆｅｃｆ，ｅｃ
Байду номын сангаас
ｗｅｅｄｔｃｅｔｏｃｔｍｅｒｎｌｓｓｒｅｅｔｄｗｉｈＦｌｗｙｏｔｙａａｙｉ．ＴｈｒｗｔｕｖｆＭＳｓｉｉｆｒｎｏｃｎｒｔｎｏｅａｅｇｏｈｃｒｅｏＣｄｆｅｅｔｃｎｅｔａｉｆｆｔｌｎｏ
ＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｅｔｅｊｃｉ：Ｔｏｅｐｏｅａｐｒｐｉｔｏｄｔｎｏｓｌｔｎａｄｃｌｕｅｏａｏｅｖｘｌｒｎａｐｏｒｅｃｎｉｉｆｉｏａｉｎｕｔｒｆｒｔｂｎａｏｏ
ｍａｒｗ— ｅｉｅｓｎｈｍａｔｍｅｌ（ＳｓｎｖｔｏｒｏｄｒｖｄｍｅｅｃｙｌｓｅｃｉＭＣ）ｉｉｒ、Ｍｅｈｄ：ＲａＳｒｓｌｔｄｗｉｅｃｌｓｔｏｓｔＭＣｓｗｅｅｉｏａｅｔｐｒｏｌｈ
大鼠

人骨髓间充质干细胞与脐静脉内皮细胞体外共培养的研究

Ｕｉｒｉ，ｉｎｆｎ５０７Ｃｉ．ｏｒｓｏｄｎｕｏ：ＮｉｂｉＥｍｉｙｎｎ＠１６ｏ）ｎｖｓｙＨｅｏｇａｇ１４０，ｈｎＣｒｐｎｉａｔｒＹｅｔｌｉａｅｇｈｎｅ（－ａｌｉ—ｂ２．ｍ．ｇ：ｃ【ｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｂｅｖｈｆｃｓｆＯｃｈｒｏｕｎｂｎｒｗｍｅｅｃｙｌｔｍｌｅｓｆＢＣ）Ａｓｒｃ】ｊｃｉｏｏｓｒｅｔｅｅｆｔｏ — ｕｕｅｆｍａｏｅｍａｒｓｎｈｍａｓｏａｃｌＭＳｓｖｅＣｈｏｒｌｈ
Ｎｅｏｐｔ（ｓｔｔ）ＣＭＳＰＭＣＢｉｎ００１Ｃｉａ２Ｄｎａａｐｔ，ＪｍｕｉｌｉＳｒｒＨｓｉｌＩｔｕ，Ａ，Ｕ，ｅｉ１０４，ｈｎ，ｅｔＨｉｓｃｇｙａｎｉｅｊｇ＂ｌｓａｌｉｓａ
刘春晓吴欢欢马慧雨康宁曹谊林肖苒尹宁北
【要】目的摘
观察人骨髓间充质干细胞（ｕｎｂｎｒｗｍｓｎｈｍｌｔｍａｃｌ，ＢＣ）脐静脉内皮细胞ＨｍａｏｅｍａｒｅｅｃｙａｓｏｌｅｓｈＭＳｓ与ｏｒｌ
组织工程与重建外科杂志
２１０１年４月第７卷第２期
・
６・５
・
论著・
ｄｉ０３６￣ｉｎ１７ — ３４２１．２０ｏ：．９．ｓ．６３０６．００．２１９ｓ１０
人骨髓间充质干细胞与脐静脉内皮细胞体外共培养的研究

BMSCs成脂成骨分化实验总结

骨髓间充质干细胞（BMSCs）培养以及成脂、成骨诱导分化一，C57小鼠BMSCs原代培养1，实验前准备好相关手术器械，培养器材及相关试剂PBS 平衡缓冲液、10％FBS，IMDM培养基。

2，脱颈法处死C57小鼠，在75％乙醇中浸泡5min，转移至超净工作台中，无菌条件下分离出小鼠的长骨(股骨和胫骨)，浸泡于PBS溶液中。

3，对股骨和胫骨进行深层次解剖，去除附着的肌肉组织，剪掉长骨两端的干骺端，用10％FBS，IMDM培养基反复冲洗骨髓腔，直至骨髓腔发白，收集洗涤液，用移液枪轻轻吹散分离为单个细胞。

4，细胞接种于六孔板中培养，轻微摇匀，使细胞在孔中均匀分布，放置于37℃、5％CO2培养箱中静置培养，培养期间不要移动六孔板，使BMSCs充分贴壁。

5，培养48h后换液，用预热的PBS缓冲液轻轻洗涤细胞2次，添加新鲜培养基，之后每隔48h换液1次。

原代培养6-7d 后细胞铺满80％(图1)，可进行传代培养。

图1：BMSCs原代培养6-7d二，BMSCs成脂诱导分化BMSCs铺皿，细胞融合达80％以上后，弃去原培养基，添加成脂诱导培养基(IMDM中加入10%FBS，10μg/ml胰岛素，1μM 地塞米松，0.5mMIBMX，0.1mM吲哚美辛)。

3d换液1次，分化12d。

待脂滴形成后进行油红O染色，PBS缓冲液清洗3次，10％中性甲醛固定20min，再用PBS缓冲液清洗2次，油红O染液浸染30min，PBS缓冲液清洗2次，苏木素染液浸染1min，弃去染液，倒置显微镜下观察拍照。

成脂诱导分化过程中发现在诱导5d时，细胞形态开始变圆并大量脱落，部分细胞中出现细小脂滴(图2)。

图2：BMSCs成脂诱导5d三，BMSCs成骨诱导分化BMSCs铺皿，细胞融合达80％以上后，弃去原培养基，添加成骨诱导培养基(IMDM中加入10%FBS,5μg/ml胰岛素，0.1μM 地塞米松，0.2mM维生素C和10mMβ-甘油磷酸盐)。

小鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养和鉴定方法学探讨

中国实验诊断学
２０１３年４月
第１７卷
第４
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６４７・－ — — —
文章编号：１００７ —４２８７（２０１３）０４ —０６４７ —０４．
小鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养和鉴定方法学探讨
无菌条件下分离处死后取小鼠双下肢骨，低糖ＤＭＥＭ培养液冲出骨髓，离心５ａｉｒｎｓ，用５ｍｌ含１Ｏ
胎牛血清的低糖ＤＭＥＭ培养液重悬细胞。加入等体积密度为１．０７３ｇ／Ｉｐｅｒｃｏｌ１分离液离心３０ｍｉｎｓ。取中层云雾状细胞。３７ ℃、５ＣＯ培养箱中贴壁培养。取５～１Ｏ代细胞培养至对数生长期后，洗涤离心。取１００ｌ细胞悬液分别加
Ｇｕａｎｇ — ｙｕｅ。ＣＨＥＮＳｕ — ｐｉｎｇ，ＤＩＮＧＪｕｎ — ｌｉ，ｅｔａ１．（１．ＤｅｐａｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，２．ＤｅｐａｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙＰ
ｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ，ｆｉｎｄａｂｅｔｔｅｒｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｔｏｓａｔｉｓｆｙｔｈｅｉｒｑｕａｌｉｔｙａｎｄｑｕａｎｔｉｔｙ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｋｉｌｌｅｄｕｎ—

兔骨髓间充质干细胞的体外培养及相关检测的实验研究

中医正骨２１０１年１第２１月３卷第１１期
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（８３３・总０）・
基础研究・
兔骨髓间充质干细胞的体外培养及相关检测的实验研究
王萧枫童培建金红婷吴银生，，，
（．１浙江省温州市中西医结合医院，浙江温州３５０；．１２００２浙江中医药大学，浙江杭州３０５）１３０
ＷｎｈｕＣｔ，ｅｚｏ２００Ｚｅａｇ，ｈｎｅｚｏｉＷｎｈｕ３５０，ｈｆｎＣｉｙｉａ
ＡＳＲＴＯｂｅｔｅＴｘｌｒｔｐｒａｈｓｔｉｌｔ，ｕｕｅａｄｉｅｔｙｔｅｂｎａｏｓｎｈｍｌｔｍｃｌ（Ｃ）０ＢＴＡＣｊｃｉ：ｏｅｐｏｅｈａｐｏｃｅｏａｃｌｒｎｎｉｈｏｅｍ￣ｗｍｅｅｃｙａｓｅｌＭＳｓｆｖｅｏｓｅｔｄｆｅｓ
ｒｂｉｎｖｔｏＭｅｈｄ：ａｂｔＭＳｅｅｅｔｃｅｈｏｇｈｅｓｔｒｄｅｔｅｔｆｇｔｎａｄｓｐｒｔｎｏｅｃｍｂｎｔｎａｈｒａｂｔｉｉ．ｓｒｔｏｓＲｂｉＣｓｗｒｘｒｔｄｔｒｕｈｔｅｄｎｉｇａｉｎｎｒｕａｉｎｅａａｉｆｔｏｉａｉｄｅ－ａｙｃｉｏｏｈｏ
ｅｔｃｌｇｏｔａｅａｄｍｏｐｏｏｉａｈｎｅｓｏｓｒｅｓｎｅｉｖｒｄｍｉｒｓｏｅｓｌｃｈ３ｃｌｎｕｅｓｎｐｃａｄａｎ，ｅｌｒｗｈｒｔｎｒｈｌｇｃｌａｇｓｗａｂｅｖｄｕｉｇｔｎｅｅｃｏｃｐ，ｅｅｔｅＰｅｌｉｄｃｄｕｉｇｓｅｉｍｅｉｃｈｔｔｓｌｓｐｌｍｅｔｄ，ｂｅｖｈｅｓｂｌｙｏｉｅｅｔａｉｎｉｔｏｅｃｌ，ａｅｌ，ａｔｌｇｅｌ．ｘｒｓｉｎｏ２Ｃ４Ｃ４，Ｄ５ｗｓｕｐｅｎｅｏｓｒｅｔｅｆａｉｉｔｆｄｆｒｎｉｔｎｏｂｎｅｌｆｔｃｌｃｒａｅｃｌＥｐｅｓｏｆｉｆｏｓｓｉｓＣＤ９，Ｄ４，Ｄ３Ｃ４ａｄｔｃｅｓｎｏｙｏｔ．ｓｌ：ｈｕｕｅｅｌｈｗｉｇｌｎｕｉｒａｄｆｒｂａｔｉｅｇｏｔｐａｔｔｃｍｅｔａｄｒｐｄｅｅｔｄｕｉｇｆｗｃｔｍｅｒＲｅｕｔＴｅｃｈｒｄｃｌｓｏｎｏｇｆｓｆｍｎｂｏｌｓ－ｌｒｗｈ，ｌｓｉａｔｈｎｎａｉｌｙｓｓｏｉｋｃａ

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞分离及培养

ｔｎｗｓｉｖｓｉａｅｙｇｏｈｃｒｅｉａｎｅｔｔｄｂｒｗｔｕｖ．ＲｅｕｔＡｌａｉｏｄａｘｓａｎｏａｃｕｎｄｓａｄｏｌｒｄｓａｎｗｅｅｐｓ— ｏｇｓｌｓｉｒｎＢｒｅｕｔｉｆｃｌｉｍｏｕｎｉｅｔｉｒｏｉｚ
维普资讯
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６６・７
Ｉ临床儿科杂志第２６卷第８期２００８年８月ＪＣｉｅｉｒＶ１６Ｎ．ｇ２０ｌＰｄａｏ．ｏ８Ａｕ．０８ｎｔ２
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论
著・
再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞分离及培养
能力减低。结论再障患儿骨髓问充质干细胞存在异常，可能在再障发病机制中起着重要作用。
Ｃ床儿科杂志。Ｏ８２（）６６－９临２０。６ｓ：７－７］６
关键词：再生障碍性贫血；骨髓；间充质干细胞；生长曲线；
ｔｖ．ＩｏａｅｅｌｈｏｄｎｅａｉｅｉｅｓｌｔｄｃｌｓｓｗｅｇｔｖＣＤ３４ａｄｎＣＤ４５，ｐｏｉｉｅＣＤ７ａｄｓｔｖ３ｎＣＤ９０．Ｄｅｒａｅｇｏｈｄｉｇａｅｓｉｌｃｅｓｄｒｗｔｕｒｎｌｔｅｒａｓｂｕｖｔｏｏｇｏｈｕｒｅｕｃｈｉａｉｎｆｒｗｔｃｖｗａｏｓｒｅｉｐｔｅｔ．ＣｏｎｃｕｓｏＩｏａｅｃｌｓ，ｗｈｉｈｓｂｅｖｄｎａｉｎｓｌｉｎｓｓｌｔｄｅｌｃｄｉｅｅｔａｅｉｔｆｒｎｉｔｄｎｏｆ

人骨髓间充质干细胞体外培养及鉴定

２００７年５月
论
著
・
人骨髓问充质干细胞体外培养及鉴定
梁雪，粟永萍，孔佩艳，陈幸华，彭贤贵，徐辉，曾东风，艾国平
（Ｉ．第三军医大学附属新桥医院血液科，重庆４０００３７；２．预防医学院解放军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆４０００３８）
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ＸｉｎｑｉａｏＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｅｈｉＴｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００３７，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｙｒｏｆＴｒａｕｍａ，ＢｕｒｎＩｎｊｕｒｙａｎｄＣｏｍｂｉｎｅｄＩｎｊｕｒｙ，ＭｉｌｉｔａｒｙＣｏｎ— ｒｂｉｎｅｄＩｎｊｕｙｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＰｒｅｖｅｎｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｌ￣ｇｅ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００３８，Ｃｈｉｎａ）
Ｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ