氨基酸的薄层层析
阿胶、藕节、天花粉等氨基酸薄层层析方法研究与改进
阿胶、藕节、天花粉等氨基酸薄层层析方法研究与改进目的改善和提高氨基酸薄层层析的分离效果。
方法采用盐酸﹕水（1∶1）提取，以正丙醇-36%乙酸（7∶3）为展开剂，含1%茚三酮的丙酮溶液为显色剂，105℃加热显色至斑点显色清晰。
结果色谱斑点清晰，分离理想，各斑点Rf 值适中。
结论本方法较《中华人民共和国药典》中关于氨基酸的薄层层析的方法简单，重复性好，具有较好的可行性和实用性。
标签：阿胶；鹿角胶；地龙；天花粉；半夏；藕节；薄层层析从2005年版《中华人民共和国药典》（简称《中国药典》）到2010年版《中国药典》，关于氨基酸的薄层层析效果一直很不理想，例如，阿胶中由于展开剂的极性不理想，展开剂无法上展；藕节中供试品显色不理想；展开剂正丁醇-冰醋酸-水，展开时间过长并且斑点分离不好，此外还有拖尾、重现性差等缺点。
通过实验摸索累积，和对原方法的改进，笔者得出了较好的氨基酸提取和分离的方法。
本文参考了文献[1-7]，采用了薄层层析方法对氨基酸进行薄层鉴别，为全面控制质量提供了依据。
现以2010年版《中国药典》[8]中阿胶、鹿角胶、地龙、天花粉、半夏、藕节几味药材为例，对其进行系统阐述。
报道如下：1 药材与试剂1.1 药材阿胶（河南辅仁堂制药有限公司，批号为110801）、鹿角胶（河南老君堂制药有限公司，批号为120301）、地龙（安国国奥中药饮片有限公司，批号为120514）、天花粉（安徽国奥中药饮片有限公司，批号为100902）、半夏（安徽国奥中药饮片有限公司，批号为120201）、藕节（亳州国奥中药饮片有限公司，批号为100301）。
以上药材均经承德颈复康药业集团有限公司正高级工程师李云霞鉴定为合格药材。
1.2 试剂精氨酸（批号872-200203）、丙氨酸（批号0873-9802）、缬氨酸（批号0874-9802）、赖氨酸（批号140673-200405）、亮氨酸（批号876-200204）、瓜氨酸（批号0875-200205）、甘氨酸（批号735-200102）均由中国药品生物制品检定所提供，所有化学试剂均为分析纯。
氨基酸薄层层析实验报告doc
氨基酸薄层层析实验报告篇一：生物化学实验-氨基酸分析实验报告【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】一、预习报告? 实验原理：根据固定相基质的形式，层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。
薄层层析是在玻璃或塑料等光滑表面铺一层很薄的基质进行层析。
薄层层析（thin layer chromatography，TLC）：是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层（固定相），再把样品点在薄层板一端，再把板的这端浸入适当的溶剂（流动相）在薄层板上扩展。
并在此过程中通过吸附——解吸附——再吸附——再解吸附的反复进行，而将样品各组份分离出来。
本次实验：? 具体原理：当流动相在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
? 吸附剂（固定相）：硅胶（C.P.）。
为使制成的薄层板不易松散，加入5%羟甲基纤维素钠（CMCNa）作黏合剂。
? 展开剂：正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液（80:10:10,V/V/V）。
? 展层-显色剂：按照10:1比例（V/V）混匀的展开剂和0.1%茚三酮溶液。
? 活化（activation）：在一定温度下，对吸附剂硅胶加热去除水分。
可使硅胶的活性提高，吸附能力加强。
? 氨基酸与茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原，此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合，以及另一分子水合茚三酮缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。
? Rf值：Rf?斑点中心到样品原点的距离对应溶剂前沿到样品原点的距离由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
?实验材料：? 样品：1、0.01mol/L丙氨酸;2、 0.01mol/L精氨酸;3、0.01mol/L甘氨酸;4、混合氨基酸溶液。
实验六 纸层析法分离氨基酸
实验材料与试剂
实验试剂 1、氨基酸标准液(1mg/mL) 四种氨基酸是丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸,脯氨酸分别配制成一定浓度 的溶液。
2、80%甲醇(稀释前需测比重)。
3、0.1%茚三酮丙酮溶液。 4、0.5%茚三酮丙酮溶液。
5、氨基酸混合液(每种氨基酸500mg/mL)。
6、正丁醇(需重蒸，沸程：116～120℃)。
B、点样：点样要合适，样品点的太浓，斑点易扩散或拉长，以致分离不 清，氨基酸的点样量以每种氨基酸含 5～20μg为宜，将准备好的滤纸悬 挂在点样架上，滤纸垂直桌面，用点样管(也可用血色素管代替)吸取氨 基酸样品10μg(1μg/μL)，与滤纸垂直方向轻轻碰触点样处的中心，这时 样品就自动流出。点样的扩散直径控制在0.5cm之内，点样过程中必须 在第一滴样品干后再点第二滴，为使样品加速干燥，可用一加热装置(如 吹风机或灯泡)，但要注意温度不可过高，以免氨基酸破坏，特别是谷氨 酰胺破坏，影响定量结果。 将点好样品的滤纸两侧比齐，用线缝好，揉成筒状。注意缝线处纸 的两边不要接触。避免由于毛细管现象使溶剂沿两边移动特别快而造成
质的组分在两相中的分布不同，因此当流动相移动时，不同组分移动的速度也
不相同。易溶于流动相中的组分移动快，在固定相中溶解度大的组分移动就慢， 于是得到分离。
分配层析法中不同溶质的分离取决于其在两相 (固定相和流动相)间
分配系数的不同。分配系数(α)的定义是：
α=溶质在固定相的浓度(CS)/溶质在流动相的浓度(CL)
计算出 4种氨基酸在酸系统中的Rf值。
注意
使用茚三酮显色法，必须在整个层析操作中避免手直
接接触层析纸，因为手上常常有少量含氮物质。显色时它也
呈现紫色斑点。污染了层析结果，因此操作时应戴橡皮手套 或指套。同时也要防止空气中的氨。
氨基酸的薄层层析实验报告【范本模板】
生物化学实验报告姓名： XXXXX学号： XXXXXXXXXXXXXX专业年级： XXXXXXXXXXXXXXX 组别：第X实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称氨基酸的薄层层析实验日期XXXX—XX-XX 实验地点第X实验室合作者XXXX 指导老师XXX评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握薄层层析法的实验原理。
2、掌握氨基酸薄层层析法的基本操作方法。
3、掌握如何根据移动速率（R f值）来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液）的方法.二、实验原理1、薄层层析法是色谱分析技术的一种。
是将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板（如玻璃板、塑料片、金属片等）上，形成薄层（常用厚度为0。
25毫米左右)后，在此薄层上进行层析分离的分析方法. 一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。
当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
（即通过吸附—解吸-再吸附—再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）硅胶吸附薄层层析：吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。
硅胶：表达式为SiO2·XH2O。
层析用硅胶是一种多孔性物质，它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（－Si－OH),这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附.硅胶吸附薄层层析的特点：②硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。
②硅醇基显较弱的酸性，因此，硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成分不能用它分离。
③硅胶的活化温度通常为105℃－110℃，不能过高.2、氨基酸与茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时,还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
3、混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—R f值（rate of flow)来表示。
氨基酸分析
姓 名：XXX
学 号：XXXXXXXXXX
专业年级：XXXXXXXXXXX
组 别：第二实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
氨基酸的薄层层析
实验日期
2016-10-25
实验地点
第二实验室
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
一、实验目的
1、掌握薄层层析法的一般原理。
2、掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
1.实验材料
（1）材料：分析样品（氨基酸混合液）、吸附剂（硅胶）、粘合剂（0.5%的羧甲基纤维素钠）、氨基酸的异丙醇溶液（丙氨酸、精氨酸、甘氨酸）、展开-显色剂（正丁醇、乙酸、水、茚三酮溶液）；
（2）器材：层析板、尺子、铅笔、烧杯、玻棒、量筒、吹风机、毛细管、层析缸、药匙、烘箱。
2.实验步骤
（1）实验流程：
④显色：
用热风吹干或在90℃下烘干30分钟，即可显出各层斑点。
四、结果与讨论：
1.结果：
（1）数据处理：
样品
斑点-原点
溶剂前缘-原点
Rf值
Ala
3.20
5.90
0.542
Gly
2.60
5.90
0.441
Arg
1.50
5.90
0.254
混合点1
1.50
5.90
0.254
混合点2
2.60
5.90
0.441
3、掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。
二、实验原理
1.薄层层析法是色谱分析技术的一种。
一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）
植物组织中游离氨基酸的鉴定
植物组织中游离氨基酸的鉴定（吕培银）一、实验原理层析技术是一种物理的分离方法，可以用来分离各类性质极为近似、用一般化学方法难以分离的化合物，如氨基酸、核苷酸、糖、脂肪酸、蛋白质和核酸等。
层析技术一般不需要很复杂的设备，操作简便，样品量可大可小，既可用于实验室的分析分离，又可用于工业生产中的制备分离，因此是近代生物化学领域中最常用的技术之一。
薄层层析是在薄层板上进行的层析，其分离物质的原理因薄层材料而异，可分为分配层析、吸附层析等。
如以纤维素粉制作薄层，则属分配层析；而以硅胶G制作薄层，则主要是吸附层析。
本实验以硅胶G制成薄层，用于分离鉴定植物组织中的游离氨基酸组分。
硅胶G中含有10%~15%的煅石膏粉作为黏合剂。
该混合物是微酸性的吸附剂。
由于各种氨基酸的极性不同，因而被固定相吸附的程度和在流动相中的溶解度各不相同。
层析时，随着流动相在固定相上流动，点在薄板上的混合氨基酸组分被不同程度地吸附、溶解(或解吸)、再吸附、再溶解(或解吸),从而以不同速度随流动相向前移动。
经过一段时间，即可将混合物各组分分离开。
一般来说，酸性氨基酸和中性氨基酸所受吸附力较弱，移动距离较长；碱性氨基酸所受吸附力较强，移动距离较短。
展层后用茚三酮溶液显色，将样品各显色斑点的R值与同时展层的标准氨基酸的R1值比较，即可判断样品中含有何种氨基酸。
二、操作步骤1.马铃薯提取液的制备30g去皮新鲜马铃薯加100mL80%乙醇，用组织捣碎机捣碎过滤，滤液用蒸发皿水浴蒸干，所得残渣加水溶解成30mg/mL的溶液。
2.制板称取1.8g硅胶G置于研钵中，加入6mL0.5%CMC溶液(可制6cm*10cm 薄板一块)，研磨2~3min，然后倒在玻璃板上铺平，水平放置8~12h，在空气中干燥后备用。
用前需在110℃烘箱中活化30min。
3.点样取活化过的硅胶G薄板，用铅笔在距底边2cm水平线上轻轻地画一条线(画线时轻轻用力，以免划伤薄层表面),在线上确定相距约1cm的4个点，点距两边约1.5cm。
氨基酸聚酰胺薄膜层析
氨基酸聚酰胺薄膜层析——DNS-Cl法一、实验目的：1．掌握聚酰胺薄膜层析技术的基本方法和应用。
2．熟悉蛋白质及肽的N末端氨基酸DNS分析法。
二、实验原理：.1.层析技术①概念：是利用化合物中各组分的物理性质的差别（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性等）使各组分在两相中的分布不同，从而使各组分以不同速度随流动相向前移动而达到分离的目的。
②特点：分离效率高，能分离各种性质相类似的物质。
不仅可用于少量物质的分离纯分，也可用于大量物质的分离纯化和制备。
③层析法的分类气相层析（以气体为流动相的层析法）液相层析（以液体为流动相的层析法，此为生物化学领域里常用的方法）I.吸附层析：薄层吸附层析、吸附柱层析II.分配层析：纸层析、柱层析、薄层层析III.离子交换层析IV.凝胶层析：柱层析、薄膜层析V.亲和层析④纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。
纸层析法是用滤纸为支持物进行层析的方法，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。
溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。
将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。
由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示：Rf=原点到层析斑点的距离/原点到溶剂前沿的距离在一定条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变，Rf 值是常数，故可根据Rf值作定性判断。
样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的Rf值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。
试验一 氨基酸的分离鉴定——薄层层析法
试验一氨基酸的分离鉴定——薄层层析法注：每组带一个小格尺，一支铅笔一、实验目的1、掌握分配层析的原理2、学习氨基酸薄板层析的操作方法二、实验原理薄层层析（thin layer chromatography ）又称薄层色谱，是将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板上，形成薄层后，在此薄层上进行层析分离的分析方法。
例如：以纤维素作为支持物，将其均匀的涂布在玻璃板上成一薄层，然后在此薄层上进行层析，即纤维素薄层层析。
纤维素是一种惰性支持物，它与水有较强的亲和力而与有机溶剂亲和力较弱。
层析时吸着在纤维素上的水是固定相，有机溶剂是流动相，当被分离的各种物质在固定相和流动相中的分配系数不同时，即可被分开。
三、实验材料和仪器1、实验材料：绿豆芽、黄豆芽或萌发小麦种子2、主要仪器：玻璃板5cm×15cm；层析缸；毛细管；喷雾器；研钵；吸管5mL；洗耳球；量筒10mL（或25 mL）；10mL塑料离心管；电吹风或烘干箱；电子天平；离心机四、实验试剂1、硅胶板2、层析溶剂系统：正丁醇（分析纯）：冰醋酸（分析纯）：水＝4：1：1（V/V）。
上述溶剂需在临用时配制。
每组配25~30mL。
层析缸内平衡几分钟。
3、显色剂：0.1％茚三酮－丙酮溶液。
4、若干种氨基酸混合标准液：天冬、亮、苯丙、脯氨酸等各取5mg，溶于1mL 0.01mol/L 盐酸溶液中，每种氨基酸浓度为5mg/mL。
五、实验步骤1、氨基酸的提取：取已萌发好的小麦种子2g左右（或绿豆芽下胚轴2g），放入研钵中，加入95％乙醇4mL及少量的石英砂，研成匀浆后，倒入离心管中3000r.min-1离心15min，上清液为氨基酸提取液，用滴管小心吸入点样瓶备用。
2、点样：用刀片将薄层板上薄层的左右两边各让出0.5cm，防止边缘效应。
在纤维素薄板上距一端1.5cm处，用铅笔轻轻划出点样记号。
点样间距合适（1.3cm左右）。
用毛细管吸取样品，在记号处点样，即分次滴加在薄板原点处，样品斑点直径控制在2mm左右。
氨基酸的薄层层析生化实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级： 2013级临床医学（妇幼医学）组别：第二实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称氨基酸的薄层层析实验日期2014-10-13 实验地点第二实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期（一）实验目的利用薄层层析法测定混合氨基酸中各分离斑点的Rf值，以分离和鉴别混合氨基酸的成分。
（二）实验原理①薄层层析法分离氨基酸：由于吸附剂（本实验采用硅胶）对各种氨基酸的吸附能力不一样，而且不同氨基酸在展开剂中的溶解速度以及在薄板上移动速度也不相同，所以利用此法可将不同种类的氨基酸吸附在薄板的不同位置上，达到分离的效果。
②氨基酸的显色反应：茚三酮水化后可与氨基酸发生显色反应，使氨基酸斑点呈现紫色，使我们可以测定氨基酸Rf值。
③通过所测得混合氨基酸各成分的Rf值与单种氨基酸Rf值的对比来鉴别混合氨基酸的成分。
（三）实验材料实验样品：①丙氨酸②精氨酸③甘氨酸④混合氨基酸主要试剂：①硅胶粉②0.5％的羧甲基纤维素钠 ③展层-显色剂仪器及器材：天平、小烧杯、小勺子、移液管、玻璃板、铅笔、尺子（四）实验步骤：实验流程图操作步骤①用天平称取3.0g 硅胶于小烧杯中，另用移液管取8ml0.5％的羧甲基纤维素钠与硅胶混合，搅拌均匀成糊状。
②把做好的糊状物均匀涂在一块干净的玻璃板上，晾干备用。
③取另一块已经做好的展板，在距其底边2cm 处的水平线上均匀确定4个点并用铅笔标记。
用毛细吸管分别吸取丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、混合氨基酸依次点在4个点上。
④待样品干了之后就放进展层-显色液中进行层析分离氨基酸。
⑤待层析液上升到超过展板长度三分之二时取出，用铅笔画出溶剂前缘后交由老师统一帮我们烘干。
⑥烘干后取回展板，测定各斑点中心到样品原点中心的距离（a ）以及溶剂前缘至样品原点中心的距离（h ）。
⑦数据记录、计算Rf=a／h ×100％123平均a值溶剂前缘至样品原点中心距离（h）Rf值注意事项：①点样斑点直径大小要控制在一定范围内，一般来说样品斑点直径不应超过2mm，否则易造成相互交叉或拖尾。
06薄层色谱法定性分析氨基酸
薄层色谱法分析氨基酸一、实验目的1 了解利用硅胶G薄层色谱法分离氨基酸的原理；2 掌握薄层色谱的操作技术。
二、实验原理将一定粒度的吸附剂均匀的涂铺在表面光洁的玻璃或朔料平板上，制成薄层板。
然后把待分析试样的溶液滴加在薄层板一端的起始线上。
再把点样后的薄板放在层析缸中，使薄层板的底端浸入适当的溶剂，展开剂在薄层的毛细管作用下。
缓慢的在薄层上向前移动，当展开剂经过原点时，就带着试样组分一起向前移动，在展开的过程中，组分在俩相之间发生多次的吸附-解吸平衡，由于吸附剂对不同组分的吸附能力不同。
展开一定时间后，不用组分互相分离。
各组分在薄层板上的距离用比移值Rf表示。
公式 Rf=a/c(a 为原点中心至斑点中心的距离，c 为原点中心至溶剂前沿的距离）R f 值相差越大则分离越好。
一般在0.2～0.8之间，各组分的Rf值之差应大于0.05。
三、仪器与试剂仪器：层析缸、硅胶板、玻璃毛细管、研钵、干燥箱玻璃喷雾器试剂：、展开剂(正丁醇：乙酸：蒸馏水=3：1：1)、甘氨酸、色氨酸、HCl溶液(0.01mol/L)、显色剂（茚三酮）四、实验步骤1 点样在薄层板一端距离边缘2cm处作起始线。
用玻璃毛细管吸取待测液点在起始线中央处，同法将标准液点在样点一侧，相邻斑点之间距离1-1.5cm，斑点直径控制在2～3mm左右。
2层析在层析缸中倒入适量展开剂（展开剂深度约1.0-1.2cm），加盖密封0.5小时，使展开槽内展开剂蒸汽饱和。
然后把点好样的薄层板近垂直放到层析缸中，点样端倾入层析液约0.5cm（注：样点不能浸入到溶液中）。
展开适当时间后取出硅胶板，并标出前沿位置，吹干，均匀地喷洒茚三酮显色剂，吹干后置于烘箱中（40度）烘干，使斑点显色，用铅笔尖标出斑点中心位置。
3定性分析测量各斑点的“原点中心至斑点中心”和“原点中心至溶剂前沿”的距离，分别计算出各自的R f值。
将展开后的样品斑点与氨基酸标准斑点比较，Rf值相等或相近的斑点为同一种氨基酸。
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实验2 氨基酸的薄层层析
一、目的
熟悉层析技术的一般原理，分类及应用范围。重点掌握薄层层析法的原理及
操作技术，用以分离混合氨基酸中各游离氨基酸组分。了解层析技术来分离不同
物质的基本原理，以及层析技术的优点。
二、原理
层析法又称色谱法、色层法或层离法，是广泛应用的一种生物化学技术。根
据流动相不同分为液相层析和气相层析。
按照层析过程的机理不同，层析法分为以下几种类型：
1、吸附层析：利用吸附剂表面对不同物质吸附性能的差异进行分离。例如活性
炭，硅胶等。
2、分配层析：利用不同组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，使之分离。
3、离子交换层析：利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同。对于蛋白质、核
酸、氨基酸及核苷酸的分离分析有极好的分辨力。
4、凝胶层析：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。例如聚
丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶。
5、亲和层析：利用某些蛋白质能与配体分子特异而非共价地结合进行分离。例
如酶和抑制剂，抗原和抗体，激素和受体等
按操作形式不同，层析法分为以下几种类型：
1、柱层析：将固定相装于柱内，使样品沿一个方向移动而达到分离。
2、纸层析：用滤纸做液体的载体，点样后，用流动相展开，以达到分离鉴定的
目的。
3、薄层层析：薄层层析是一种微量而快速的层离方法，与纸层析方法类似。这
种层析方法是把吸附剂如氧化铝或硅胶涂布于薄板上（玻璃或金属等）形成
薄层，把要分析的样品溶液滴加到薄层的一端，然后在此薄层上用适当的溶
剂进行展开即为薄层层析。
本实验中用到薄层层析是一种微量而快速的层离方法。这种层析方法是把吸
附剂如氧化铝或硅藻土涂布于薄板上（玻璃或金属等）形成薄层，把要分析的样
品溶液滴加到薄层的一端，然后在此薄层上用适当的溶剂进行展开即为薄层层
析。本实验中硅胶作为一种固相支持物，它与水有较强的亲和力而与有机溶剂亲
和力较弱。层析时吸着在硅胶上的水是固定相，而展层溶剂是流动相。当欲被分
离的各种物质在固定相和流动相中的分配系数不同时，它们就能被分离开。
三、实验材料
1．仪器
薄层板：2.5×7.5cm（×1）、毛细管（×3）、研钵（×1）、药匙（×1）、量筒10mL
（×1）、小尺子（×1）、层析缸（×1）、电吹风（×1）、喷雾器（×1）、烘箱（200℃）、
铅笔。
2. 试剂
（1）1% 脯氨酸水溶液；
（2）0.2%亮氨酸水溶液；
（3）脯氨酸和亮氨酸的混合溶液；
（4）硅胶G（C.P.,层析用）；
（5）粘合剂：0.2%羧甲基纤维素钠（CMCNa）；
（6）层析溶剂：正丁醇（分析纯）﹕冰醋酸（分析纯）﹕乙醇﹕水＝4﹕1﹕1
﹕2（V/V），临用时配制。
（7）显色剂：0.2%茚三酮-乙醇溶液。
四、步骤
1、制板：
称取层析用的硅胶G3.2g加8ml 0.2%羧甲基纤维素钠（CMCNa）,在研钵中
调成均匀糊状，迅速地倾在玻璃板上（玻璃板要清洁平整，无油污），小心将玻
璃板轻轻振荡和倾斜，使硅胶均匀铺在玻璃板上。室温下静置，自然晾干，移至
60℃烘箱中烘烤30min，选择厚薄均匀平整的板使用。 使用前放入105℃烘箱中
烘烤30min活化（有利于提高硅胶的吸附能力，同时排除硅胶内已吸收的水分和
其他气体，通过活化硅胶，主要改变硅胶内部的微孔结构，使其孔径大小及微孔
结构排列得到改善）。
2、点样：
活化后的硅胶板室温冷却后，在距底边1.5cm水平线上以间距1cm的宽度
确定3个点样点（注意点样点尽量靠近板中心），用毛细管吸取氨基酸样品溶液，
垂直轻轻接触薄层表面，每次加样后原点扩散直径不超过2mm，干后再点一次。
3、展层：
将薄板有样品的一端浸入扩展剂，扩展剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖，
上行展层。当展层剂前沿达薄板3/4高度时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出
溶剂前沿界线，用热风吹干。
4、显色：
用喷雾器将0.2%茚三酮溶液喷洒在薄板上（注意喷雾器和薄板要保持一定距
离，不要使硅胶层吹散，且应喷洒均匀），用热吹风吹干，即可观察到紫红色的
氨基酸斑点。用铅笔圈出氨基酸斑点，量出溶剂前沿的距离及各斑点中心与起点
之间的距离，并计算各氨基酸的Rf值。
Rf值为迁移率（rate of flow, Rf），在恒定条件下，每种氨基酸有其一定的
Rf值。
五、结果计算
Rf=
色斑中心至样品原点中心的距离
溶剂前沿至样品原点中心的距离
六、注意事项
1. 在操作过程中，手必须洗净，只能接触薄板的上层边角或用镊子，不能对着
薄板说话，以防唾液掉在板上。
2. 点样：点样的次数依照样品溶液的浓度而定，样品量太少时有的成分不易显
示，样品量太多时易造成斑点过大，互相交叉或拖尾，不能得到很好的分离。
3. 吹风机温度不宜太高或离得太近，否则斑点变黄。