亲水作用色谱柱评价与动力学研究
糖类化合物亲水作用色谱保留行为评价_傅青
松三糖（ｍｅｌｅｚｉｔｏｓｅ），均 购 自 Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ Ｇｍ－ ｂＨ （Ａｕｇｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。称 取 适 量 的 标 准 品 用 ５０％（ｖ／ｖ）的乙腈水 溶 液 溶 解 配 制 成 混 合 标 准 溶 液 备用。 乙腈（Ｍｅｒｃｋ）、甲 醇 （Ｍｅｒｃｋ）、丙 酮 （Ｋｅｒｍｅｌ）均 为色谱纯；Ｍｉｌｌｉ－Ｑ 超纯水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）。甲 酸 铵 和 甲 酸购 自 Ａｃｒｏｓ（Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ）。１００ ｍｍｏｌ／Ｌ 甲酸铵 缓 冲 溶 液：称 取 ６．３ｇ 甲 酸 铵 固 体 溶 入 １Ｌ 水中制得，并用甲酸将其 ｐＨ 值调至３．０。 药 材 及 样 品 处 理：取 干 燥 的 地 黄 药 材 ２５ｇ，粉 碎，用２５０ｍＬ 水 煎 煮 １２０ ｍｉｎ。 固 液 分 离 后，固 体 继续 用 ２５０ ｍＬ 水 再 煎 煮 ９０ ｍｉｎ。 合 并 两 次 煎 煮 液，喷雾 干 燥。 称 取 上 述 地 黄 干 粉 １０ ｍｇ，溶 于 １ ｍＬ 水 中，使 用 石 墨 化 碳 进 行 预 处 理［１８］，收 集 １５％ （ｖ／ｖ）的 乙 腈 水 溶 液 洗 脱 部 分，氮 气 吹 干 后，溶 于 ２００μＬ ５０％ （ｖ／ｖ）的 乙 腈 水 溶 液 中 ，备 用 。 １．２ 实 验 条 件 流 动 相：Ａ 相 为 乙 腈，Ｂ 相 为 水，Ｃ 相 为 １００ ｍｍｏｌ／Ｌ 甲酸铵 缓 冲 液 （ｐＨ ３．０）；考 察 有 机 溶 剂 影 响时将乙腈换为甲 醇 或 丙 酮；用 于 建 立 保 留 方 程 的 保留时间测定时使用 Ａ、Ｂ 两相，Ｂ 相 体 积 比 依 次 为 １０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％ 和 ４０％，预测 保 留 时 间时 Ｂ 相体积比为２２％；考察缓冲盐浓度影响时，Ａ 相体积比为 ７８％，Ｃ 相 体 积 比 依 次 为 ０、５％、１０％、 １５％ 和 ２０％；每 个 实 验 重 复 两 次；流 速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱 温：３０ ℃；检 测 器：蒸 发 光 散 射 检 测 器 （ＥＬＳＤ），参 数 设 置 为 吹 扫 氮 气 压 力 为 ２．０７×１０５ Ｐａ，漂移管温度８５ ℃，增益值１０；保留因子（ｋ）：ｋ＝ （ｔＲ－ｔ０）／ｔ０，其中，ｔＲ 为溶质保 留 时 间，ｔ０ 为 死 时 间。 ｔ０ 的测定方法：流动相为１００％乙腈时，进样０．５μＬ 甲醇得到的保留时间。实验测得麦芽糖色谱柱的死 时 间 为 １．９１２ ｍｉｎ。
HILIC色谱柱介绍
HILIC色谱柱介绍HILIC（Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography）是一种基于水性相互作用的色谱技术。
与传统的反相色谱相比，HILIC色谱具有许多独特的优点，在许多研究领域中得到了广泛的应用。
HILIC色谱是一种液相色谱技术，涉及在含水流动相中使用水亲和性固定相材料。
与反相色谱不同，HILIC色谱是在极性流动相中分离极性化合物。
这些化合物通过极性流动相中的水性分区相和水相关的分区系数来进行分离。
相比之下，反相色谱使用非极性流动相进行分离，根据化合物的亲水性来分离化合物。
HILIC色谱具有许多优点。
首先，它适用于分析极性化合物，这些化合物在反相色谱中可能很难分离。
HILIC色谱对于亲水性化合物，如水溶性维生素、氨基酸和糖类化合物的分离具有很高的选择性和灵敏性。
其次，HILIC色谱不需要在样品和固定相之间添加有机溶剂，因此有利于对生物样品进行分析，如血浆、尿液和蛋白质样品。
此外，HILIC色谱还能够分离极性化合物的异构体和同分异构体，有助于解决化合物纯度和杂质分析问题。
HILIC色谱柱的选择是该技术成功应用的关键。
目前市场上有许多不同类型的HILIC色谱柱可供选择。
根据固定相材料的特性，可以将HILIC色谱柱分为两大类：吸附型HILIC色谱柱和离子交换型HILIC色谱柱。
吸附型HILIC色谱柱是通过将水亲和性的高分子有机化合物固定在色谱柱中来实现分离。
这些固定相材料通常是通过化学修饰或共价交联来实现的，以增加固定相的亲水性。
常见的吸附型HILIC色谱柱固定相材料包括亲水性羟乙基磺酸酯、碳水化合物、氨基酸和糖类衍生物等。
这些材料具有良好的亲水性，并且能够在水性条件下提供良好的分离效果。
离子交换型HILIC色谱柱是通过在色谱柱中使用离子交换材料来实现分离的。
这些材料具有固有的离子交换特性，可以在水性条件下提供选择性分离。
离子交换型HILIC色谱柱的固定相材料通常是在无机载体上固定有离子交换基团，如硅胶或硅氧烷。
亲水色谱固定相研究进展
亲水色谱固定相研究进展【摘要】：亲水作用色谱（Hydrophilic interaction chromatography，HILIC）作为一种新型的色谱分离技术，在分离极性化合物方面作用显著，被广泛的应用于药物分析、食品检验、代谢组学、蛋白组学等领域。
固定相作为色谱发展和应用的基础，对色谱的分离性能有着重要的影响。
本文通过对HILIC固定相的组成、结构和性能等进行了综述，为HILIC的应用提供理论支持。
【关键词】：亲水色谱；固定相；强极性化合物色谱分离技术已经有100多年的历史，反相色谱是应用最为广泛的分离模式，大部分的化合物在反相色谱柱上都能够实现分析与分离，这种分离的实现主要依靠的是疏水固定性与溶质之间的疏水相互作用实现对极性和中等极性化合物的高效分离，但是强极性和亲水性化合物在反相柱上却无法保留。
正相色谱和离子交换色谱可以部分补充反相色谱的不足，但是由于各自应用的局限性使得分离技术没有得到很大的突破[1]。
亲水色谱作为一种新型的分析模式，采用的是正相的固定相，反向的流动相，流动相中有机相的比例占60%-95%。
由于采用了反相的流动相体系，有效的改善了正相色谱应用中样品溶解度差的问题，在分析极性和亲水物质方面有着极大的优势[2]。
HILIC有很好的保留和分离选择性、水溶性样品溶解性好、保留时间不受流动相水含量的影响以及与质谱检测能够有效兼容等优势受到了研究者青睐，在药品分析和食品检验等领域应用广泛。
随着药品和食品标准的提高、各项组学技术的快速发展以及色谱连用技术的迅速崛起，极性化合物的有效分离和检测受到了越来越多的关注[3]。
1990年，Alpert[4]提出了HILIC的概念，同时他在试验中发现了氨基酸反相和亲水洗脱顺序的差异性。
2006年，Hemstrom和Ingum[5]对HILIC的分离机理、分离材料和各方面的综合应用进行了全面综述，发现占主导的保留机理与溶质的性质和使用的固定相密切相关。
亲水作用色谱范文
亲水作用色谱范文亲水作用色谱（hydrophilic interaction chromatography，HILIC）是一种常用的反相色谱的补充和扩展方法。
相对于传统的反相色谱，亲水作用色谱在样品分析中具有独特的优势。
本文将从亲水作用色谱的原理、应用及发展前景三个方面展开论述。
首先，亲水作用色谱的原理是基于水分子与亲水官能团之间的相互作用。
在亲水作用色谱中，固定相通常采用亲水性的吸附材料，如含有亲水官能团硅胶或改性硅胶等。
样品在移动相中与固定相发生亲水作用，随后固定在固定相上。
亲水作用色谱的机理与反相色谱不同，反相色谱是通过样品与非极性固定相之间的疏水作用分离成分。
其次，亲水作用色谱具有广泛的应用领域。
首先，亲水作用色谱在天然产物分离和分析中具有重要作用。
许多天然产物具有复杂的化学结构和多样的功能活性，在传统的反相色谱中往往难以有效分离和分析。
而亲水作用色谱可以充分利用天然产物中的亲水官能团与固定相之间的相互作用，提供更好的分离效果和分析精度。
其次，亲水作用色谱在糖类分析中得到广泛应用。
糖类在生物体内起着重要的生理功能，对于糖类的分离和分析有着较高的要求。
亲水作用色谱可以有效地分离糖类，提高分析的灵敏度和准确性。
此外，亲水作用色谱还可应用于蛋白质和多肽的分离和纯化，药物代谢产物的分析等领域。
亲水作用色谱在理论和技术上还有很大的发展空间。
从理论上看，亲水作用色谱的机理与反相色谱不同，但相关理论尚不完全，需要进一步研究和探索。
例如，亲水作用色谱中的水合作用和流动相的组成对分离效果有显著影响，需要深入研究这些因素的相互关系。
同时，亲水作用色谱的技术也在不断发展和创新。
近年来，高效亲水作用色谱材料的开发和改进成为研究热点，如亲水性修饰的亲水交联剂、亲水性化学修饰的硅胶、碳纳米管等。
这些新材料的研发将为亲水作用色谱的应用提供更多的选择和可能性。
综上所述，亲水作用色谱作为一种重要的色谱分析方法，在分析领域有着广泛的应用和发展前景。
亲水作用色谱范文
亲水作用色谱范文亲水作用色谱（hydrophilic interaction chromatography，HILIC）是一种常用的色谱技术，适用于水溶性、极性化合物的分离和分析。
相比于传统的反相色谱技术，亲水作用色谱具有更宽的应用范围和更好的保留能力，被广泛用于药物分析、天然产物的分离纯化和化学品的质控等领域。
亲水作用色谱的原理基于样品化合物与色谱固定相（通常是亲水性的硅胶或负载富锂铝石的硅胶）之间的极性相互作用。
在亲水作用色谱中，样品与固定相之间的作用力包括静电作用、氢键作用和范德华力等。
这些相互作用使得样品化合物在色谱系统中的保留时间产生变化，从而实现其分离。
1.更广泛的应用范围：亲水作用色谱适用于各种水溶性和极性化合物的分离和分析，包括药物、天然产物、肽类、糖类等。
特别是对于具有亲水性功能团（如羟基、羧基等）的化合物，亲水作用色谱能够更好地实现其分离。
2.更好的保留能力：亲水作用色谱与传统的反相色谱相比，具有更好的保留能力。
在亲水作用色谱中，极性化合物可以通过与固定相之间的极性相互作用产生更强的保留，从而更好地分离。
此外，亲水作用色谱还能实现复杂样品的分离，并避免样品中组分之间的峰重叠问题。
3.载气适应性强：亲水作用色谱既可以使用常见的有机溶剂作为流动相，也可以使用水作为流动相。
这使得亲水作用色谱可以在反相色谱之外提供另一种分离模式，即在承载气相色谱（GC）中使用气体作为流动相，并实现对水溶性化合物的分离。
亲水作用色谱的操作步骤与其他色谱技术类似。
首先，选择合适的色谱柱和固定相（通常是硅胶柱），并调整流动相的pH值和组成。
然后，将待分离的样品注入进样口，并适当调整流速和检测器参数。
最后，通过梯度洗脱或等温洗脱等方式，实现目标化合物的分离。
亲水作用色谱在药物分析和天然产物的分离纯化等方面有着广泛的应用。
例如，在药物分析领域，亲水作用色谱可以用于药物的含量测定、质量控制和生物样品的代谢产物分析等。
亲水色谱法原理及应用
亲水色谱法原理及应用
2009-10-22
三、高效液相色谱仪流程图
亲水(作用)色谱法 （hydrophilic interaction chromatography ，HILIC）
• 属含水的正相色谱法，主要采用硅胶、氰 基、胺基和二醇等色谱柱，以高比例的乙 腈-水体系（乙腈比例50-95%）作为流动相， 化合物按极性从小到大次序出峰，特别适 合于反相色谱柱不保留的强极性碱性化合 物的分离, 特别适合于质谱的分析。 • 反相色谱法很好的补充
出峰次序
出峰次序与反 相色谱相反， 即极性大的化 合物后出峰， 极性小的化合 物先出峰
简化样品前处理步骤－SPE洗脱液 直接进样
SPE柱活化
上样
淋洗
用高比例乙腈洗脱
应用
糖醇类分离 单糖类分离
三聚氰胺的分离
河豚毒素的分离
谢
谢！
1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质） 2．高压泵（输液泵） 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置(工作站)
• 高压泵---心脏 • 检测器—眼睛 • 色谱柱-关键
高压输液泵
恒流泵
恒压泵
注射型泵
往复型泵
双泵头往复 式柱塞泵
双柱塞往复 式串联泵
均由色谱柱来决定
应用范围
液相色谱法最常用的有反相液相色谱法 ， 采用 C18、C8柱，适合于中等极性化合物的 分离; 弱极性的化合物需用正相液相色谱法； 对于强极性的化合物，如糖类、生物胺、氨 基酸、河豚毒素、维生素等C18、C8柱上往 往不保留或保留很少，在死时间附近出峰， 常用的方法有离子对色谱法，而离子对色谱 法柱平衡时间长，离子对试剂往往对色谱柱 有影响。
hilic色谱柱原理及注意事项
hilic色谱柱原理及注意事项
HILIC 色谱柱的原理是利用不同极性的物质在相同的流动相中溶解度不同的特性，使不同极性的物质分离开来。
其主要原理如下：
1.HILIC 色谱柱中的固定相为填料，其表面由亲水的有机基团和疏水的硅基组
成。
2.流动相为高极性的有机溶剂（如甲醇），通过泵的加压作用将其注入色谱
柱中，同时流动相也携带少量的水相作为湿润剂，将固定相均匀涂布在填
料表面。
3.待色谱柱中的流动相达到平衡后，样品中的待测物质与流动相中的离子发
生相互作用，通过流动相和固定相之间的分配作用，将样品中的待测物质
分离出来。
在使用HILIC 色谱柱时，需要注意以下几点：
1.填料的选择：选择合适的HILIC 填料，其比表面积、孔径大小等性质需要
满足样品分离的要求。
2.流动相的选择：根据待分离样品的性质选择合适的流动相，一般情况下，
流动相中需要含有一定比例的水相作为湿润剂，以保证固定相在填料表面
的均匀分布。
3.温度和压力的控制：在使用HILIC 色谱柱时，需要控制好温度和压力的条
件，以保证分离效果和柱效。
4.柱的平衡与清洗：在使用HILIC 色谱柱前，需要对其进行平衡，以保证其
处于良好的工作状态。
同时，在使用过程中，需要定期对其进行清洗，以
保证其性能的稳定性。
亲水作用色谱HILIC实用指南
亲水作用色谱HILIC实用指南亲水作用色谱（Hydrophilic Interaction Chromatography，HILIC）是一种基于样品分子与固定相之间的亲水相互作用的分离技术。
该技术在生命科学、药物分析等领域得到广泛应用。
本文将为您介绍有关HILIC的实用指南。
一、原理与机理HILIC是一种液相色谱技术，其分离机理与反相色谱（RP）相反。
在RP色谱中，采用疏水固定相与亲水样品分子之间的亲和相互作用进行分离，而在HILIC中，采用亲水固定相与亲水样品分子之间的亲和相互作用进行分离。
亲水固定相通常是由硅胶修饰的材料构成，如硅胶、羧甲基硅胶等。
HILIC的机理主要涉及样品溶剂化和静电作用等。
二、样品前处理1.pH调节：在HILIC中，样品的pH值对分离效果有着重要影响。
一般来说，pH值在2-10之间时，HILIC的分离效果较好。
2.溶剂选择：在选择溶剂时，应考虑样品的亲水性。
对于极性较强的样品，可选用含有醇类（如乙醇、异丙醇）的水性溶剂作为流动相。
三、固定相选择在HILIC中，固定相的选择至关重要。
不同类型的固定相可用于分离不同性质的样品。
常用的固定相包括硅胶、羧甲基硅胶、硅胶化学修饰剂等。
根据具体分析需求，选择合适的固定相以提高分离效果。
四、流动相条件1.缓冲液的选择：HILIC常使用含醋酸、磷酸盐等盐酸盐或醋酸盐缓冲液作为流动相。
缓冲液的选择应考虑HILIC的柱效应以及样品的酸碱性质。
2.有机溶剂的比例：有机溶剂的比例对分离效果起着关键作用。
一般来说，有机溶剂的比例在20-90%之间，根据样品性质进行调整。
五、其他注意事项1.流速的选择：流速的选择应根据分析需求和分离效果进行调整。
一般来说，流速较低时，分离效果较好，但分析时间较长。
2.柱温控制：柱温的控制也会影响色谱分离效果。
过高的温度可能导致样品提前达到检测器，而过低的温度可能导致分离不彻底。
3.柱寿命的延长：在使用HILIC柱时，保持合适的pH值，避免有机溶剂与纤维相互作用，可以延长柱的使用寿命。
一种聚甲基丙烯酸酯类亲水作用毛细管电色谱整体柱的制备与评价
一种聚甲基丙烯酸酯类亲水作用毛细管电色谱整体柱的制备与评价黄桂华;陈思谨;林旭聪;谢增鸿【摘要】以2-羟基乙基甲基丙烯酸酯(HEMA)为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,制备了亲水分离模式的聚HEMA-co-EDMA新型毛细管电色谱(CEC)整体柱.考察了整体柱的结构特征及其CEC性能,研究了极性物质的保留行为,并对其可能的保留机理进行了探讨.所制备的整体柱稳定性好,固定相表面带有极性羟基功能团,不仅能提供亲水相互作用位点,且能吸附流动相中的阴离子产生阳极电渗流(EOF).在流动相中乙腈含量较高(＞62% ,体积分数)的条件下,整体柱表现出典型的亲水作用,实现了对核苷、碱基和苯胺类带有碱性的强极性化合物的高效分离,并成功分离了苯酚类、苯甲酸类等中性或酸性的极性化合物.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2010(028)012【总页数】6页(P1173-1178)【关键词】毛细管电色谱;亲水作用;聚合整体柱【作者】黄桂华;陈思谨;林旭聪;谢增鸿【作者单位】福建中医药大学药学院,福建,福州,350108;福州大学食品安全与环境监测技术研究所,福建,福州,350108;福州大学食品安全与环境监测技术研究所,福建,福州,350108;福州大学食品安全与环境监测技术研究所,福建,福州,350108【正文语种】中文【中图分类】O658毛细管电色谱 (CEC)结合了高效液相色谱(HPLC)的高选择性和毛细管电泳 (CE)的高效性,是当今微分离领域的研究热点[1]。
毛细管色谱柱作为 CEC的核心,其新型固定相及分离模式的研究是当前CEC研究的前沿热点。
毛细管整体柱克服了开管柱相比不足的缺点,同时避免了填充柱需制作塞子的步骤,具有制备简单、渗透性好、柱效高等优点[2-5]。
亲水作用毛细管电色谱(H I-CEC)是针对极性化合物分离困难而发展的一种新的分离模式[6-10]。
H I-CEC的分离模式类似于正相色谱,采用极性较强的固定相和有机溶剂含量较高的含水流动相;固定相可有效保留极性物质,解决了分离极性化合物时反相 CEC为增加极性物质在非极性疏水固定相的保留而普遍采用有机相含量很低的流动相所导致的极易产生气泡、反相整体固定相容易塌陷等问题[11]。
亲水基团键合硅胶色谱柱
亲水基团键合硅胶色谱柱一、亲水基团键合硅胶色谱柱的原理亲水基团键合硅胶色谱柱是一种用于水溶性化合物分离的色谱柱。
其原理是利用亲水基团（如羟基、胺基等）与水溶性化合物分子之间的亲水作用，在色谱柱上实现化合物的分离。
亲水作用取决于化合物分子的极性和亲水性，不同化合物分子的分子间亲水作用力不同，因此在亲水基团键合硅胶色谱柱上可以实现不同分子之间的分离。
亲水基团键合硅胶色谱柱的分离机制可以分为两种：一种是通过亲水基团与水溶性化合物之间的静电作用来分离，另一种是通过亲水基团与水溶性化合物之间的疏水作用来分离。
在前者的机制下，分析物与色谱柱表面的亲水基团发生静电作用，从而使不同极性或亲水性化合物之间发生相互作用，实现分离。
而在后者的机制下，分析物与色谱柱表面的亲水基团发生疏水作用，从而使不同极性或亲水性化合物之间发生相互作用，实现分离。
二、亲水基团键合硅胶色谱柱的结构亲水基团键合硅胶色谱柱一般由色谱柱床、填料和壁包三部分构成。
色谱柱床是色谱柱的主体结构，用于固定填料和分隔分析物。
填料是用于分离分析物的介质，通常由硅胶或其他材料制成。
壁包是用于包裹填料的外层，具有一定的化学性质，可以选择不同的亲水基团进行键合。
亲水基团键合硅胶色谱柱的填料通常是以硅胶为主要材料，硅胶的化学性质稳定，对大多数化合物都具有很好的分离效果。
填料的粒度大小和孔隙结构对色谱分离效果有很大影响，一般情况下，填料的粒径越小、孔隙越大，分离效果越好。
不同的亲水基团键合硅胶色谱柱可以选择不同的亲水基团进行键合，常见的亲水基团包括氢氧基、氨基、硝基、甲基等。
选择合适的亲水基团可以增强色谱柱对特定分析物的识别能力，提高分离效果。
三、亲水基团键合硅胶色谱柱的应用亲水基团键合硅胶色谱柱广泛应用于生物化学、制药、环境监测等领域。
在生物化学领域，亲水基团键合硅胶色谱柱常用于分离蛋白质、多肽等生物大分子。
在制药领域，亲水基团键合硅胶色谱柱常用于药物分析和研究。
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何谓亲水作用色谱HILIC (Hydrophilic interaction chromatography or Hydrophili c interaction liquid chromatography, HILIC)技术并说明了为何该技术会成为新宠儿。
接下来提纲挈领地指出了HILIC色谱柱的特性——“两反”运动：“反-反相”&“正-反相”。
具体地说就是——
“反-反相”，是指虽然用的是反相色谱的流动相，但是色谱行为与反相色谱是相反的。
即普通的反相色谱是随着甲醇或者乙腈的比例增加而出峰变快，但是H ILIC则相反，水相多，出峰快。
“正-反相”，是指早期的HILIC色谱柱比较多见的是硅胶柱，此之谓正，但是流动相又是典型的甲醇-水，乙腈-水，故又谓之反相～，二者联姻就是“正-反相”。
HILIC作为一种分离极性化合物的液相色谱技术，与离子交换技术（IEC）、离子对色谱（IPC）等比较起来，具有流动相组成简单且与强大检测功能的质谱兼容等优势，在生物医药（蛋白质、核苷类药物、药物II相代谢产物等）、食品
安全（比如三聚氰胺分离检测）、环境毒理等领域有越来越广泛的应用。
HILIC虽好处多多，但仍有其自身缺陷：缺点之一，样品在流动相中的溶解度问题；缺点之二，需较长的再平衡时间。
亲水作用色谱技术的兴起，从一个侧面反映出了色谱填料技术的发展，HILIC色谱柱对强极性化合物的独特保留特性主要依赖其色谱固定相分子结构的独特性。
为此，面老师推介了一篇综述——亲水作用色谱固定相及其在中药分离中的应用/bbs/viewthread.php?tid=2458&extra=page%3D1%26amp% 3Bfilter%3Dtype%26amp%3Btypeid%3D22&frombbs=1。