人胃癌细胞株MGC_803侧群细胞的分选与生物学特征
紫杉醇诱导人胃癌MGC803细胞凋亡作用研究
紫杉醇诱导人胃癌ＭＧＣ803细胞凋亡作用研究目的：研究胃癌发生过程中原位细胞凋亡活动以及紫杉醇对人胃癌细胞系MGC803诱导细胞凋亡的作用。
方法：用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测了胃癌MGC803细胞凋亡, 用紫杉醇处理培养胃癌细胞MGC803、显微镜下进行观察并且进行琼脂糖电泳，流式细胞仪检测细胞周期分布和端粒体酶活性检测。
结果：癌旁对照组原位凋亡细胞增多, 紫杉醇处理胃癌细胞可以诱导细胞产生典型的细胞凋亡变化。
DNA发生断裂, 琼脂糖电泳产生梯形条带，细胞阻滞于G2/M期，端粒体酶活性下降。
结论：在体内肿瘤细胞凋亡降低, 细胞分裂可加快，癌旁对照中细胞凋亡增多, 体外紫杉醇可以诱导胃癌细胞系MGC803凋亡。
[Abstract] Objective:To investigate the action of insitu apoptosis in occurrence of gastric cancer and the biological effect of Paclitaxel on MGC803 cell line inducing apoptosis. Methods:The apoptosis in the gastric cancer detected with terminal deoxynucl neotidyl transferase mediated dUTP nick end labelling (TUNEL) , the MGC803 cell line cultured in medium were treated with Paclitaxel and observed undermicroscope, and their DNA was assayed by gel electrophoresis, Flow cytometry analysis was used to observe the cell cycle, the effect measured telomerase.Results: In situ apoptosis cells in the cancer adjacent tissues inceased；treatment of gastric cancer with Paclitaxel could induce the cells to manifest a typical apoptosis morphology. Their DNA was fractured and a characteristic ladder pattern could be found using electrophoresis, which was associated with arrest of G2/M phase, and inhibited telomerase activity.Conclusion:In vivo the apoptosis of gastric cancer lower, maybe the cells divide quickly and then the cancers occur. In the cancer adjacent tissues, the apoptosis prick up, and in vitro Paclitaxel can induce the apoptosis of MGC803 cells.[Key words] Gastric cancer；Apoptosis；Paclitaxel腫瘤的发生机制之一是由于正常的细胞凋亡过程被抑制，破坏了细胞增殖与凋亡之间平衡的结果[1]。
《胃癌组织中间充质干细胞的分离鉴定及其生物学特性的研究》
《胃癌组织中间充质干细胞的分离鉴定及其生物学特性的研究》一、引言胃癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居高不下。
近年来，随着干细胞研究的深入，人们发现胃癌组织中存在一种特殊的细胞群体——中间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）。
这种细胞具有自我更新能力和多向分化潜能，对于胃癌的发病机制、诊断和治疗具有重要意义。
因此，对胃癌组织中间充质干细胞的分离鉴定及其生物学特性的研究显得尤为重要。
二、材料与方法1. 材料本研究所用材料包括胃癌组织样本、相关试剂及仪器设备等。
2. 方法（1）胃癌组织样本的采集与处理从医院收集胃癌患者的手术切除组织样本，经过无菌处理后，进行中间充质干细胞的分离。
（2）中间充质干细胞的分离与培养采用组织块法或酶消化法将胃癌组织中的中间充质干细胞分离出来，进行原代培养及传代培养。
（3）中间充质干细胞的鉴定通过流式细胞术、免疫荧光等方法对分离出的细胞进行鉴定，确定其是否为中间充质干细胞。
（4）生物学特性的研究通过细胞增殖实验、细胞周期测定、分化能力检测等方法，研究胃癌组织中间充质干细胞的生物学特性。
三、结果1. 分离与培养结果通过组织块法或酶消化法成功分离出胃癌组织中的中间充质干细胞，并进行原代培养及传代培养。
培养的细胞具有典型的中间充质干细胞形态，生长良好。
2. 鉴定结果通过流式细胞术、免疫荧光等方法对分离出的细胞进行鉴定，证实其为中间充质干细胞。
其中，流式细胞术结果显示，分离出的细胞表达MSCs相关表面标志物，如CD73、CD90等；免疫荧光结果显示，这些细胞具有MSCs的典型形态和功能特征。
3. 生物学特性研究结果（1）细胞增殖实验结果显示，胃癌组织中间充质干细胞具有较高的增殖能力。
（2）细胞周期测定结果显示，这些细胞具有较短的细胞周期，有利于其快速增殖和分化。
（3）分化能力检测结果显示，胃癌组织中间充质干细胞具有多向分化潜能，可以分化为多种类型的细胞，如成骨细胞、脂肪细胞等。
紫草素对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响
紫草素对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响张欣;霍浩然;薛佳栋;武星;刘帆;任继中;袁增江【期刊名称】《新乡医学院学报》【年(卷),期】2024(41)6【摘要】目的探讨紫草素对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及机制。
方法将对数生长期MGC803细胞随机分为空白对照组、紫草素组、紫草素+胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组和紫草素+LY294002组。
空白对照组细胞在无药培养基中培养,紫草素组细胞在含终浓度10μmol·L^(-1)紫草素的培养基中培养,紫草素+IGF-1组细胞在含终浓度10μmol·L^(-1)紫草素和终浓度10μmol·L^(-1) IGF-1的培养基中培养,紫草素+LY294002组细胞在含终浓度10μmol·L^(-1)紫草素和终浓度30μmol·L^(-1) LY294002的培养基中培养。
培养24 h后,采用细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)、激活型caspase-3(cleaved caspase-3)、cleaved caspase-9、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、磷酸化PKB(p-PKB)蛋白表达。
结果紫草素组MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率显著低于紫草素组(P<0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率均显著高于紫草素组(P<0.05)。
紫草素组MGC803细胞划痕愈合率和侵袭细胞数显著低于空白对照组(P<0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞划痕愈合率和侵袭细胞数显著高于紫草素组(P<0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞划痕愈合率和侵袭细胞数显著低于紫草素组(P<0.05)。
《胃癌组织中间充质干细胞的分离鉴定及其生物学特性的研究》
《胃癌组织中间充质干细胞的分离鉴定及其生物学特性的研究》一、引言胃癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤，其发病原因和发病机制十分复杂。
近年来，随着生物医学的不断发展，干细胞研究在胃癌治疗领域展现出巨大的潜力。
其中，胃癌组织中间充质干细胞（Gastric Cancer Mesenchymal Stem Cells，GC-MSCs）的分离鉴定及其生物学特性的研究成为了研究的热点。
本文旨在通过对GC-MSCs的分离、鉴定及对其生物学特性的研究，为胃癌的治疗和预防提供新的思路和方法。
二、方法本部分主要介绍了实验中GC-MSCs的分离方法、细胞培养、以及采用的技术手段进行GC-MSCs的鉴定。
（一）GC-MSCs的分离在胃癌组织中，通过酶消化法、机械破碎法和细胞贴壁法等方法相结合，将GC-MSCs从胃癌组织中分离出来。
该过程中应保证实验操作的无菌和避免细胞的损伤。
（二）细胞培养分离得到的GC-MSCs在特定培养基中培养，定期更换培养基以保证细胞的营养需求和生长环境。
通过显微镜观察细胞的形态变化和生长情况。
（三）GC-MSCs的鉴定采用流式细胞术、免疫荧光染色、RT-PCR等技术手段对GC-MSCs进行鉴定。
通过检测细胞的表面标志物、多向分化能力和基因表达情况等，确认GC-MSCs的身份。
三、结果（一）GC-MSCs的形态学特征通过显微镜观察，GC-MSCs呈纺锤形或多角形，细胞核大而圆，胞质丰富，具有明显的干细胞特征。
（二）GC-MSCs的分离纯度及生长特性流式细胞术和免疫荧光染色结果显示，分离得到的GC-MSCs 纯度高，具有较好的增殖能力和生长特性。
（三）GC-MSCs的多向分化能力通过诱导分化实验，GC-MSCs可分化为多种细胞类型，如成骨细胞、成脂细胞和神经细胞等，证明了其多向分化的能力。
（四）GC-MSCs的基因表达情况RT-PCR结果显示，GC-MSCs表达一系列与干细胞相关的基因，如Oct4、Sox2等，进一步证实了其干细胞的特性。
阿魏酸对人胃癌MGC—803细胞增殖的影响-
阿魏酸对人胃癌MGC—803细胞增殖的影响?目的觀察阿魏酸对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响，探讨其诱导胃癌细胞凋亡的作用机制。
方法不同浓度阿魏酸干预体外培养人胃癌MGC-803细胞，作用24、48、72 h后，MTT法检测细胞增殖；不同浓度（0、5、7.5、10 mg/mL）阿魏酸作用MGC-803细胞48 h，Annexin V-FITC/PI法和流式细胞仪检测细胞凋亡，RT-qPCR和Western-blot检测Capase-3、Capase-9、Bax、Bcl-2和Xiap的mRNA和蛋白表达。
结果与对照组比较，5、7.5、10、12.5 mg/mL阿魏酸作用MGC-803细胞的OD值明显降低，阿魏酸抑瘤作用明显，阿魏酸作用MGC-803细胞24、48、72 h的IC50分别为12.93、9.73、5.52 mg/mL；5、7.5、10 mg/mL 阿魏酸作用MGC-803细胞48 h后均能诱导MGC-803细胞凋亡，5、7.5、10 mg/mL 阿魏酸均能上调Capase-3、Capase-9和Bax的mRNA和蛋白表达，下调Bcl-2和Xiap的mRNA和蛋白表达。
结论阿魏酸能有效抑制MGC-803细胞增殖，并能诱导MGC-803细胞凋亡，其作用机制与内源性线粒体凋亡途径和下调Xiap 的表达有关。
Abstract：Objective To explore the effects of ferulic acid on gastric cancer cell line MGC-803 proliferation；To discuss the mechanism of apoptosis induced by ferulic acid. Methods Ferulic acid with a variety of concentrations was used to treat gastric cancer cell line MGC-803 for 24，48，72 h；MTT experiment was used to detect the growth of gastric cancer cells. After gastric cancer cell line MGC-803 were treated with ferulic acid with a variety of concentrations （0，5，7.5，10 mg/mL）for 48 h，all gastric cancer cells were collected and stained by Annexin V-FITC/PI for the detection of apoptosis by flow cytometry. RT-qPCR and Western-blot methods were used to detect mRNA and protein levels of Caspase-3，Caspase-9，Bax，Bcl-2 and Xiap. Results Compared with the control group，the OD value of cell line MGC-803 treated by ferulic acid with a variety of concentrations （5，7.5，10，12.5 mg/mL）decreased significantly；the anti-tumor effect of ferulic acid was obvious；IC50 of 24，48，and 72 hours after treated by ferulic acid was 12.93，9.73 and 5.52 mg/mL respectively. Cell lineMGC-803 treated by ferulic acid with a variety of concentrations （5，7.5，10 mg/mL）after 48 h could induce the apoptosis of MGC-803 cells，up-regulate mRNA and protein levels of Caspase-3，Caspase-9，and Bax，down-regulate mRNA and protein levels of Bcl-2 and Xiap. Conclusion Ferulic acid can inhibit the proliferation of MGC-803 cells effectively and induce the apoptosis of MGC-803 cells，which mechanism is related to mitochondria apoptosis pathway and the down-regulation of Xiap expression.Key words：ferulic acid；gastric cancer；cell proliferation；cell apoptosis阿魏酸是多种中药如川芎、当归、升麻、木贼、蒲公英、酸枣仁等的有效成分之一，现代药理研究表明，阿魏酸具有抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗凝、解毒、保肝、调节免疫等功效[1]。
《2024年ANP通过NPRA及Cx43对胃癌细胞MGC-803迁移影响的相关性研究》范文
《ANP通过NPRA及Cx43对胃癌细胞MGC-803迁移影响的相关性研究》篇一摘要：本研究旨在探讨心钠肽（ANP）通过自然抵抗相关蛋白A （NPRA）及连接蛋白43（Cx43）对胃癌细胞MGC-803迁移的影响。
通过实验数据，分析ANP与NPRA、Cx43之间的相互作用关系，以及这种相互作用对胃癌细胞迁移的潜在机制。
本研究的发现为胃癌治疗提供了新的理论依据。
一、引言胃癌是全球常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病与多种因素相关，其中涉及细胞迁移的关键因子尤为重要。
近年来，研究表明心钠肽（ANP）在细胞生理过程中扮演重要角色。
特别是ANP 通过自然抵抗相关蛋白A（NPRA）介导的信号通路在胃癌细胞迁移中的作用机制尚不明确。
因此，本研究关注ANP与NPRA 及连接蛋白43（Cx43）之间的相互作用，以及这种相互作用对胃癌细胞MGC-803迁移的影响。
二、材料与方法1. 材料：选用胃癌细胞系MGC-803，ANP、NPRA及Cx43的相关抗体和试剂。
2. 方法：（1）通过免疫荧光、Western blot等方法检测MGC-803细胞中NPRA及Cx43的表达情况。
（2）利用细胞划痕实验、Transwell迁移实验等方法评估ANP对MGC-803细胞迁移能力的影响。
（3）采用基因转染技术调控NPRA及Cx43的表达水平，观察其对ANP介导的MGC-803细胞迁移的影响。
（4）利用生物信息学方法分析ANP、NPRA及Cx43之间的相互作用关系。
三、结果1. NPRA及Cx43在MGC-803细胞中表达情况：通过免疫荧光和Western blot实验发现，MGC-803细胞中NPRA和Cx43的表达水平较高。
2. ANP对MGC-803细胞迁移的影响：细胞划痕实验和Transwell迁移实验显示，外源性ANP处理能够显著抑制MGC-803细胞的迁移能力。
3. NPRA及Cx43在ANP介导的MGC-803细胞迁移中的作用：通过基因转染技术调控NPRA及Cx43的表达水平，发现NPRA 和Cx43的表达变化能够影响ANP对MGC-803细胞迁移的抑制作用。
DMSO对人胃腺癌MGC80-3细胞的诱导分化作用
DMSO对人胃腺癌MGC80-3细胞的诱导分化作用杨善民【期刊名称】《实验生物学报》【年(卷),期】1994(27)3【摘要】用光镜、电镜和生化分析方法研究DMSO在体外对MGC 80-3细胞的作用,不同浓度DMSO对MGC 80-3细胞有不同的生长抑制作用。
1.5%DMSO是本研究较适合的浓度。
1.5%DMSO处理7天后细胞生长率、分裂指数、克隆形成率和Con-A凝集率分别下降35.15%、18‰,90%和55.8%。
处理后,癌细胞膜的碱性磷酸酶(不存在于正常人胃粘膜)比活性下降了90%,接种裸鼠致瘤率亦下降75%。
处理后细胞主要形态变化是细胞变大,铺展,长直的微绒毛变成短突状,胞质内有发育特别好的高尔基体和丰富的粗面内质网,这些资料提示DMSO能改变MGC 80-3的恶性表型,对MGC 80-3细胞是一种诱导分化剂。
【总页数】6页(P282-287)【关键词】二甲亚砜;诱导;分化;胃肿瘤;腺癌【作者】杨善民【作者单位】厦门大学抗癌研究中心【正文语种】中文【中图分类】R735.202【相关文献】1.二甲基亚砜（DMSO）对人肝癌 HepG2细胞的诱导分化作用的实验研究 [J], 赵岩;赵斐然;满永宏2.cAMP,DBcAMP及DMSO诱导人肺腺癌AGZY—83α细胞分化的显微... [J], 王万忠;赫明昌3.人体胃低分化粘液腺癌细胞株MGc80-3的超薄切片电镜观察 [J], 黄宗平4.DMSO对人胃腺癌MGC80—3细胞的诱导分化作用 [J], 杨善民5.环六亚甲基双乙酰胺对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化及PKA-RⅡ与PKC-α亚型在细胞内分布的变化 [J], 彭敬;方家椿;梁云燕;石永进;王代树因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
龙葵多糖对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响
龙葵多糖对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响常乐;刘艺【期刊名称】《牡丹江医学院学报》【年(卷),期】2012(033)004【摘要】目的:研究龙葵多糖(Solanum nigrum polysaccharide,SNPS)粗提物对人胃癌MGC-803细胞株生长的移植,对其细胞周期的影响,探讨龙葵多糖对人胃癌细胞增值的影响.方法:MTT法检测SNPS对胃癌细胞MGC-803增殖作用;使用流式细胞仪检测1.6mg/mL SNPS作用72 h,MGC-803细胞的周期分布的影响.结果:结果表明SNPS对MGC-803细胞的增殖具有抑制作用,并具有时间及浓度依赖性.龙葵多糖1.6mg/mL组作用72 h,人胃癌MGC-803细胞被阻滞于G0/G1期(60.01±1.04),S(29.79±1.01)期和G2/M期(10.20±0.99)细胞数量减少,与细胞对照组比较有显著差异,具有统计学意义(P<0.05).结论:SNPS能显著抑制MGC-803细胞的增殖,阻止胃癌细胞由G1期进入S期、阻滞细胞周期进程.【总页数】3页(P24-26)【作者】常乐;刘艺【作者单位】牡丹江医学院药学院,黑龙江,牡丹江,157011;牡丹江医学院药学院,黑龙江,牡丹江,157011【正文语种】中文【相关文献】1.龙葵碱对人胃癌MGC-803荷瘤小鼠癌细胞钙粘蛋白表达的影响 [J], 张卫东;孙睿;李莉;张丽敏;薛春梅;罗志文2.树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增殖及对酪氨酸激酶活性的影响 [J], 李荣辉;潘洪明;于彩洁;邹宇;周丽3.红花多糖对胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭的影响 [J], 刘超; 姬乐; 白铁成4.膜联蛋白A7过表达对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响 [J], 王小杰;柏友兰;刘明伟;王新杰;李宏伟;李欣5.树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增殖及对EGFR表达的影响 [J], 李荣辉;王玉;郑丽红;张春晶;许惠玉;张英博;潘洪明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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人胃癌细胞株MGC-803侧群细胞的分选与生物学特征俞薇1，吴婷1，司今2，姜伟2，李锦毅2*（1辽宁医学院武警总医院研究生培养基地，北京100039；2武警总医院）摘要：目的从人胃癌细胞株MGC-803中分离侧群（SP）细胞，研究其生物学特征。
方法利用流式细胞分选术（FACS）从MGC-803细胞株中分选出SP细胞和非SP细胞亚群进行培养，采用克隆形成实验比较两组亚群细胞的体外增殖能力，NOD/SCID鼠成瘤实验检测两组亚群细胞体内成瘤能力。
结果FACS结果显示，细胞株MGC-803中SP细胞亚群占总细胞的0．3% 1．2%；SP细胞体外克隆形成率为（0．862ʃ0．050）%，非SP细胞体外克隆形成率为（0．325ʃ0．207）%，两者比较P＜0．05；SP细胞最低成瘤数量是1ˑ103/只，非SP细胞为5ˑ103/只。
结论人胃癌细胞株MGC-803中存在SP细胞，其生物学特性与干细胞基本符合。
关键词：胃肿瘤；干细胞；分离；侧群细胞中图分类号：R735．2文献标志码：A文章编号：1002-266X（2012）01-0004-03Isolation and biologic characteristics of the side population in human gastric cancer celllines MGC-803YU Wei1，WU Ting，SI Jin，JIANG Wei，LI Jin-yi（1Graduate Education Center of Liaoning Medical University in General Hospital of ChinesePeople’s Armed Police Forces，Beijing100039，P．R．China）Abstract：Objective To investigate isolation and biologic characteristics of the side population（SP）in human gas-tric cancer cell lines MGC-803．Methods Fluoresence activated cell sorting was used to sort SP and NSP cells from MGC-803s．Tumorigenicity of the two subpopulations was observed by sphere forming assay．Proliferation was determined by sub-cutaneous tumor formation in NOD/SCID mice．Results The percent of SP cells was0．3%-1．2%．Clone formation effi-ciency of SP cells and NSP cells was（0．862ʃ0．050）%and（0．325ʃ0．207）%respectively，there were significant differ-ences（P＜0．05）．In vivo，the tumorigenic ability of SP cells was higher than that of NSP cells．Tumor formed only by1ˑ103SP cells in nude mice，but5ˑ103NSP cells．Conclusion Human gastric cancer cell lines MGC-803contained some SP cells with stem cell properties．Key words：stomach neoplasms；stem cells；isolation；side population cells随着医学水平的进步，胃癌的生存率有所提高，但仍有相当一部分胃癌患者治疗后出现远处转移最终死亡。
探索防止胃癌转移的途径是进一步提高胃癌生存率的关键。
肿瘤干细胞理论的提出为胃癌的治疗开辟了新的研究方向。
研究发现，在乳腺癌、肺癌、卵巢癌等多种肿瘤中，侧群细胞（SP）具有高增殖和体内高致瘤性等干细胞特性［1 3］。
胃癌干细胞的研究国内外报道较少。
2010年10月 2011年8月，我们通过分离胃癌SP细胞，对其生物学特征进行初步研究。
现报告如下。
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81072969）。
*通讯作者1材料与方法1．1材料人胃癌细胞系MGC-803由中国协和医科大学细胞中心提供。
3 4周龄NOD/SCID小鼠32只，购自中国医学科学院动物所。
胎牛血清、胰蛋白酶、Hochest33342、PI、DMEM培养液购自美国Sigma公司。
主要仪器包括CO2恒温细胞培养箱、FACS流式细胞仪、倒置显微镜。
1．2方法1．2．1细胞培养与分选将胃癌细胞置于含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM培养液中，37ħ、5%CO2、饱和湿度条件下培养，胰蛋白酶消化，常规换液传代。
收集对数生4山东医药2012年第52卷第1期长期细胞，制成1ˑ106/mL的单细胞悬液，设对照组和实验组，对照组加入维拉帕米。
两组分别加入终浓度为5μg/mL的Hoechst33342，37ħ水浴90 min，离心弃上清，PBS冲洗，重悬于含2%胎牛血清的培养基中。
检测前10min加入PI至终浓度1μg/mL，去除死细胞，用FACS流式细胞仪分选SP 细胞和非SP细胞，分别接种于细胞培养皿中培养2周，达到再次分析的细胞数目后收集细胞做Ho-echst33342染色，计算SP细胞比例。
1．2．2细胞平板克隆形成实验分别收集分选的SP细胞和非SP细胞，按200个/孔接种于6孔板，设3个平行孔。
2周后终止培养，结晶紫染色。
显微镜下计数＞50个细胞的克隆数，计算克隆形成率（CFE）：CFE=克隆形成数/接种细胞数ˑ100%。
1．2．3体内致瘤性的研究将小鼠随机分成8组各4只。
将SP细胞和非SP细胞分别以1ˑ104、5ˑ103、1ˑ103、5ˑ102数量级注射于每组小鼠腋下的同一个位点。
每日观察成瘤情况并记录成瘤时间，8周时处死。
取瘤体10%甲醛固定，制作小鼠移植瘤石蜡切片，HE染色。
1．2．4统计学方法采用SPSS17．0软件，计量资料以珋xʃs表示，组间比较采用t检验。
P≤0．05为差异有统计学意义。
2结果2．1流式细胞仪分析结果用FACS检测到胃癌细胞株中存在SP细胞亚群，其占细胞总数的0．3% 1．2%，经维拉帕米阻断后SP细胞亚群减少至0 0．1%。
镜下观察分选后的SP和非SP细胞无明显形态学差异。
2．2克隆形成率2周后终止培养，显微镜下可见SP细胞和非SP细胞均有集落形成，SP细胞形成的克隆细胞排列密集且直径较非SP细胞明显增大。
两者的CFE分别为（0．862ʃ0．050）%和（0．325ʃ0．207）%，二者比较P＜0．01。
2．3体内致瘤性及病理染色接种SP细胞和非SP细胞到小鼠8周时，各组均未发生意外死亡。
各组接种的细胞数和形成的肿瘤数见表1。
SP细胞最低成瘤数量是1ˑ103；非SP细胞仅5ˑ103注射组有2只小鼠有肿瘤生长，且成瘤体积小。
两者形成肿瘤的组织学结果见图1。
3讨论Reya等［4］于2001年提出肿瘤干细胞学说，认为肿瘤组织中存在一小部分具有干细胞特性的肿瘤细胞，其具有无限自我更新、高度增殖能力及多向分化潜能，能够产生不同表型的肿瘤细胞，并使肿瘤具表1各组接种的细胞数和形成的肿瘤数注射细胞数肿瘤形成数/注射小鼠数SP细胞非SP细胞5ˑ1020/40/41ˑ1031/40/45ˑ1034/42/41ˑ1044/44/4SP细胞非SP细胞图1SP细胞、非SP细胞在小鼠体内形成肿瘤的组织学结构有异质性、增殖和浸润等特性。
Hoechest33342是一种脂溶性DNA结合荧光染料，某些癌细胞和干细胞可以将其排出细胞，表现为细胞核不着色或者很低程度的着色，利用流式细胞仪可以将不着色细胞加以分离。
这种可以排除Hoechest33342的特性称为SP表型，分离出来的细胞称为SP细胞。
本研究利用这种原理培养胃癌细胞株分选SP细胞，发现在胃癌MGC-803细胞株中SP亚群占细胞总数的0．3% 1．2%，进一步证实胃癌肿瘤组织中SP细胞亚群的存在。
王宁等［5］对胃癌MKN-28肿瘤细胞系SP 细胞亚群初步分析发现，该细胞系SP细胞占细胞总数的0．25%。
提示不同肿瘤细胞系中SP细胞亚群的比例存在差异。
肿瘤干细胞是肿瘤研究的热点。
干细胞和肿瘤细胞有很多共同点［1］，研究推测胃癌也可能属于干细胞疾病。
本研究表明，SP细胞和非SP细胞在形态学上无明显差异，只能从功能学角度鉴定SP细胞的干细胞特性。
平板克隆形成实验是测定单个细胞增殖能力的有效方法之一，本研究采用克隆形成试验证实SP细胞体外克隆形成能力显著高于非SP细胞。
NOD/SCID鼠体内成瘤实验是验证肿瘤干细胞最可靠的指标。
本研究发现，SP细胞形成肿瘤所需最低细胞数为1ˑ103，而非SP细胞所需最低细胞数为5ˑ103。
以5ˑ103注射SP细胞成瘤率高达100%，而非SP细胞成瘤率仅为50%，SP细胞的致瘤能力显著高于非SP细胞。
以上均证实了SP细胞的干细胞样特性。
Burkert等［6］从HCG101胃癌细胞株中分选出SP细胞和非SP细胞，分别注射到10只小鼠的皮下，16周后未发现肿瘤生长，这可能与细胞系的选择有关。
干细胞多处于G0期，传统的放疗和化疗治疗恶5山东医药2012年第52卷第1期性肿瘤主要针对肿瘤中快速增殖的细胞，治疗后仍有相当一部分人出现复发和转移。
针对干细胞的靶向治疗将为延长胃癌患者的生存期甚至治愈胃癌提供可能。
如能杀灭胃癌干细胞或诱导其分化可能解决胃癌术后复发和转移两大问题，对改善预后有重要意义。
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