实验室高效液相色谱仪的管理与使用维护

第１２卷第２期　２０１４年４月　实验科学与技术　

Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｖ０１．１２　Ｎｏ．２　Ｆｅｂ．２０１４　

实验室高效液相色谱仪的管理与使用维护　邹月利，徐雅琴，白靖文，赵李霞　（东北农业大学理学院，　哈尔滨１５００３０）　

摘要：高效液相色谱仪的科学管理和正确使用维护，是获得良好色谱分离效果和延长仪器使用寿命的前提和基础。文中介　绍了实验室高效液相色谱仪的管理方法与使用维护技术，为液相色谱仪的初学者提供宝贵的操作知识和管理经验，使其能　更好地为实验教学和科研服务。　关键词：液相色谱仪；管理方法；使用；维护　中图分类号：０６—３２　文献标志码：Ｂ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—４５５０．２０１４．０２．０７１　

Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ　ｏｆ　Ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｉｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　

ＺＯＵ　Ｙｕｅｔｉ，ＸＵ　Ｙａｑｉｎ，ＢＡＩ　Ｊｉｎｇｗｅｎ，ＺＨＡＯ　Ｌｉｘｉａ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｉｌａｒｂｉｎ　１５００３０，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｃｏｒｒｅｃｔ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ　ｏｆ　ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂａｓｅ　ｆｏｒ　ｏｂｔａｉｎｉｎｇ　ｇｏｏｄ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ａｎｄ　ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｌｉｆｅ　ｏｆ　ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ．Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｓ　ｔｈｅ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，ｏｐｅｒａ—　ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｗｈｉｃｈ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｖａｌｕａｂｌｅ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｎｄ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ　ｏｆ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｂｅｇｉｎｎｅｒ．Ｔｈｕｓ，ｉｔ　ｃａｎ　ｇｒｅａｔｌｙ　ｓｅｒｖｅ　ｆｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｔｅａｃｈｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｃｉｅｎｃｅ・ｒｅｓｅａｒｃｈ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ；ｏｐｅｒａｔｉｏｎ；ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ　

随着科学技术的不断发展，高效液相色谱　（ＨＰＬＣ）作为一种具有高灵敏度、高选择性和高效　快速分离的检测技术得到了长足的发展，现已成为　我国高等农业院校化学化工专业应用最广泛的分析　方法¨　。它既能用于微量组分的分析测定，又能　用于大量的制备分离，其应用范围已超过其他各种　分离检测方法，尤其在生化医药样品的分析、分离　方面更能充分发挥特长，目前广泛应用于食品安　全、化学分析、环境科学、农药残留和石油化工等　领域　。　高效液相色谱仪的科学管理和正确使用维护，　是获得良好色谱分离效果和延长仪器使用寿命的前　提和基础。化学实验中心于２０１２年１２月对所有大　型精密仪器设备实施网上预约共享管理模式，已经　取得了良好的运行效果。虽然液相色谱仪的种类繁　多，但是它们的管理方法与使用维护是一致的。本　收稿日期：２０１３—０６—２５　基金项目：高等教育科学研究“十二五”规划课题　（ＨＧＪＸＨＢ２１１０４３８）；黑龙江省高等教育教学　改革项目（ＪＧ２０１３０１０１２８）；黑龙江省高等教　育教学改革项目（ＧＴＺ２０１３０１０７６）。　作者简介：邹月利（１９８０一），男，硕士，实验师，主要从　事实验室色谱类仪器的管理工作。　文结合对该实验室Ａｇｉｌｅｎｔ　１　１００高效液相色谱仪十　几年的管理和使用经验，较详细地介绍了高效液相　色谱仪在日常管理和使用维护等方面的一些体会，　希望与同行们共享　。　

１管理与维护　化学实验中心在液相色谱仪的管理上，要求所　有用户在使用仪器前必须仔细阅读操作流程，按具　体要求进行操作。本科生一律在指导教师的陪同下　方可使用，不得单独操作。　１．１流动相　１）所用流动相必须经０．４５　ｍ微孔滤膜真空　抽滤２～３次，然后用超声仪超声４５～６０　ｍｉｎ后，　方可作为流动相使用　Ｉ。　２）甲醇、乙腈等有机溶剂必须为色谱纯，当　用酸或者碱来调节流动相ｐＨ值时，范围一定不能　超过２～７．５。水则必须为去离子水，使用期限不　得超过２　ｄ，逾期则要重新配制。　３）流动相瓶口不准用密封带封死，以保证内　外压力相等。不要随便更换流动相接口，Ａ瓶（棕　色）固定为水，Ｂ瓶（白色）固定为甲醇或乙腈；流　动相的流速不要超过３．０　ｍＬ／ｍｉｎ。　４）流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲　第１２卷第２期　邹月利，等：实验室高效液相色谱仪的管理与使用维护　・２１５・　基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙　醚、异丙醚、丙酮、甲基环己胺等，以免造成对柱　塞密封圈的腐蚀。　５）当有缓冲盐做流动相时，缓冲溶液与有机　溶剂互相转换前一定要用５　甲醇清洗泵，防止盐　在有机相中结晶损坏泵中各组件。缓冲溶液的浓度　不能高于０．５　ｍｏｌ／Ｌ，尽量不超过该色谱柱的ｐＨ　范围。ｃｌ一的浓度要小于０．１　ｍｏｌ／Ｌ（防止腐蚀流　路）。高浓度的缓冲盐会缩短密封垫和活塞的使用　寿命，长时间使用０．１　ｍｏｌ或更高浓度的缓冲液　时，必须用１０　异丙醇溶液从泵的背面冲洗掉所　有可能存在的结晶，从而保护柱塞杆和密封垫。用　后的异丙醇经０．４５　ｍ（或０．２２　ｍ）滤膜过滤后可　反复使用２～３次　一　。　６）当泵的压力上限超过６　０００　ｐｓｉ时，应及时　检查和更换泵头过滤白头和保护柱芯。　１．２排气泡　１）当拧松快速清洗阀时不宜拧得过松，一般　拧松２圈左右即可，拧得过松流动相容易从清洗阀　部位流进泵头中引起报警。　２）使用快速清洗阀时，只能一个一个通道地　排气泡，不得将几个通道　ｄ时按比例排气泡，因为　比例阀的快速切换易导致损坏。　１．３　自动进样器　建议用甲醇：水＝１：１的溶液洗针，同时每天　洗针前要检查一下洗针瓶中是否有洗液（５０　甲　醇）。　１．４样品处理　测定的样品或标样在流动相中一定要易溶，否　则进样后会结晶造成定量不准确或堵塞色谱柱。最　好使用流动相溶解样品，样品和标准溶液在进样前　必须用０．４５　Ｄｘｍ（或０．２２　ｌｘｍ）滤膜（有机膜或者水　膜）过滤，除去微粒杂质；样品中一般不得含有盐类　及强酸、强碱性等物质。可以使用预处理柱除去样　品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质　］。　１．５色谱柱　使用自带色谱柱，则腹把换下的色谱柱用堵头　（无孔）及时密封。用完后需把实验室原来的色谱　柱安装好。换柱必须在有流动相流出的情况下进　行，以免空气进入色谱柱。仪器长时间不用，每个　泵通道和整个流路一定要用甲醇冲洗后保存，以免　结晶或造成污染　］。　１．６检测器　１）检测器的紫外或可见灯在长期打开的情况　下，一定要保证有溶液流经检测池。若不需要做　样，可设置一个较低的流速（如０．０５　ｍＬ／ｍｉｎ）或关　闭灯的电源。　２）检测器的灯一般要在流通池有溶液连续流　动几分钟后才打开，如果流动池中有气泡，则会提　示漂移过大无法通过自检和校正。　３）检测器的氘灯或钨灯不要经常开关，每开　关一次灯的寿命约损失３０　ｈ。若仪器经常使用，可　几天开关灯一次。　４）清洗检测池时可以在不接柱子的情况下，　用１００　异丙醇冲洗整个流路。如果还不行，同法　用１０　戈５　的稀硝酸冲洗，大约４５～６０　ｍｉｎ，最　后用水冲干净。　１．７　实验结束　１）实验完毕立即清理操作台面，打扫室内卫　生，拖干净地面，关好门窗。　２）如实做好实验登记。若机器出现异常，请　勿擅自拆开机器，应及时通知仪器管理人员。使用　液相色谱仪需提前预约，每次使用不准超过３　ｄ，　如继续使用则应再次进行网上预约。　

２操作流程　２．１　开机步骤　１）打开计算机后自动弹开＜ＣＡＧ　Ｂｏｏｔｐ　ｓｅｒｖｅｒ＞　菜单＿÷通信成功。　２）打开色谱仪开关，进入在线工作站。（红　色：未就绪）　３）预热３０　ｍｉｎ即可。（黄一未就绪，绿一已就　绪，蓝一采集数据，红　报警）　４）设置泵。点击＜泵＞＜检测器＞开关，左　键点击＜泵＞　＜Ｓｏｌｖｅｎｔ　ｂｏｔｔｌｅｓ＞＿÷＜Ｓｏｌｖｅｎｔ　Ｂｏｔ—　ｔｌｅｓ　Ｆｉｌｌｎｇ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　１＞设置每瓶中实际液体量、　最低液体量及瓶容量。　５）排气泡。若新换流动相或长时间没开机，应　向左旋开排气阀，逐个流动相瓶排气泡，排气时应　逐渐升高流速（１～２　ｍＬ／ｍｉｎ），再逐渐降低流速。　（１）在对话框中点击相应瓶Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ图标一＜　Ｓｅｔ　ｕｐ　Ｐｕｍｐ…＞。（２）出现＜Ｓｅｔ　ｕｐ　Ｐｕｍｐ：Ｉｎｓｔｒｕ—　ｍｅｎｔ　１＞　设置＜Ｆｌｏｗ＞流速为１．０和瓶Ｂ、Ｃ、Ｄ的　百分比（例如：Ａ为１００、Ｂ为０、Ｃ为０、Ｄ为０）即　排Ａ内的空气）｛＜Ｐｒｅｓｓｕｒｅ　Ｌｉｍｉｔｓ＞（压力）０～２００　之间；＜Ｔｉｍｅｔａｂｌｅ＞（设置梯度洗脱）。｝（３）改变流　速为１．５一ＯＫ！（当没有气泡即洗脱完毕，向右旋　关闭排气阀，最后将流速调至使用流速——大约　・２１６・　实验科学与技术　１．０　ｍＬ／ｍｉｎ。）依次排Ｂ、Ｃ、Ｄ的气泡。　６）编辑检测方法。（１）首先编辑方法前将排气　阀门关闭，将流速逐渐降至１．０　ｍＬ／ｍｉｎ。（２）点击　＜Ｍｅｔｈｏｄ＞＿＋＜Ｅｄｉｔ　Ｅｎｔｉｒｅ　Ｍｅｔｈｏｄ＞。（３）弹出对　话框＜Ｅｄｉｔ　Ｍｅｔｈｏｄ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　１＞ａ方法信息；ｂ　参数设置（可设置流量、波长、溶剂配比）；ｅ数据　分析、报告处理（一般不选）；ｄ运行时间表。　（４）点击＜ＯＫ＞进入＜Ｍｅｔｈｏｄ　Ｃｏｍｍｅｎｔｓ＞，可输　人实验名称，也可不选，在后面也会提示输入。　７）参数设定。点击＜ＯＫ＞进人参数设定（根据　文献或实验方法设定）。（１）＜Ｃｏｎｔｒｏｌ＞（流速）：　一般为１—２　ｍＬ／ｍｉｎ。（２）＜Ｓｏｌｖｅｎｔｓ＞（溶剂名称　及配比）。（３）＜Ｐｒｅｓｓｗｒｅ　Ｌｉｍｉｔｓ＞（压力限）Ｍａｘ：　３００　ｂａｒ（压力保护限，默认）；Ｍｉｎ：０　ｂａｒ。　（４）＜Ｔｉｍｅｔａｂｌｅ＞（洗脱梯度）一般为：一种溶剂配　比递增或递减。（５）点Ｄｉｓｐｌａｙ选择显示方式。　（６）点＜ＯＫ＞　＜ＶＷＤ　Ｓｉｇｎａｌ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　１＞（检　测器设置）对话框，＜Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ＞（波长），＜　Ｐｅａｋｉｗｉｄｔｈ＞（检测器响应时问）：默认为＞０．１　ｍｉｎ（２　Ｓ）。（７）点击＜ＯＫ＞　＜Ｒｕｎ　Ｔｉｍｅ　Ｃｈｅｃｋ—　ｌｉｓｔ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　１＞对话框，选中＜Ｄａｔａ　Ａｅｑｕｉｓｔｉｏｎ　＞和＜Ｓｔａｎｄａｒｄ　Ｄａｔａ　Ａｎａｌｙｓｉｓ＞。（８）点击＜ＯＫ＞　（存储检测方法）：点＜Ｓａｖｅ　Ｍｅｔｈｏｄ　ａｓ＞进入对话　框，可输入名称和注释，也可不输，然后点＜ＯＫ　＞结束方法存储。　８）基线调节。（１）点击界面左下角“三箭头”显　示＜Ｏｎｌｉｎｅ　Ｐｌｏｔ＞对话框，观察基线是否平稳（波　动在０．０５个单位之间）＜Ａｄｊｕｓｔ＞（复位），＜Ｂａｌ—　ａｎｃｅ＞（强制使基线归零）。（２）点击＜Ｃｈａｎｇｅ…＞　（调节）：基线走速（Ｘ轴）、吸收单位（ｙ轴）、图表　显示曲线数量，点＜ＯＫ＞结束进样前设置。　９）样品信息。（１）点击＜Ｒｕｎ　Ｍｅｔｈｏｄ＞（运行　方法）＿＋＜Ｓｉｍｐｌｅ　Ｉｎｆｏ…＞　＜Ｓａｍｐｌｅ　ｉｎｆｏ：ｉｎｓｔｒｕ－　ｍｅｎｔ　１＞：　＜Ｏｐｅｒａｔｏｒ　Ｎａｍｅ＞（操作者姓名）、＜　Ｄａｔａ　Ｆｉｌｅ＞中选＜Ｍａｎｕａｌ　Ｆｉｌｅ　Ｎａｍｅ＞：（输入文　件名）（必须每次输入新名，否则覆盖前一次测试　结果），Ｓｕｂｄｉｒｅｃｔｏｒｙ：（文件存储名），Ｓｉｍｐｌｅ　Ｎａｍｅ：（样品名），Ｓｉｍｐｌｅ　Ａｍｏｕｎｔ：（进样量），点　＜ＯＫ＞结束样品信息输入。　１０）开始进样。进样量一般５～２５　。（仪器　配有自动进样器）。　１１）停止采样。峰出完后按＜Ｆ８＞或者＜ｓｔｏｐ＞停　止（也可在＜Ｒｕｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ＞下拉菜单中关闭），自动出　现图表。可直接打印，也可进行峰型优化后再打印。　１２）峰优化。打开＜ｏｆｆｌｉｎｅ＞（离线），点击＜　Ｆｉｌｅ＞一＜Ｌｏａｄ　ｓｉｇｎａｌ＞调出文件（或者点击界面图　标打开）：（１）打开文件保存的所在位置。（２）点击　＜Ｇｒａｐｈｉｃｓ＞＿＋＜Ｓｉｇｎａｌ　Ｏｐｔｉｏｎｓ…＞可以进行优化　处理。（３）选择＜Ａｕｔｏｓｃａｌｅ＞可以进行自动谱图优　化。（４）点击＜Ｉｎｔｅｒｑｒａｔｉｏｎ＞＿＜Ｉｎｔｅｒｑｒａｔｉｏｎ　Ｅｖｅｎｔ　…＞进行人为峰筛选。（５）设置峰高域和峰面积域　进行峰的筛选。（６）退出峰优化。　１３）打印报告：（１）点击＜Ｒｅｐｏｒｔ＞一＜Ｓｐｅｃｆｙ　Ｒｅ—　ｐｏｒｔ…＞进行打印格式和内容设置。（２）选择＜Ｐｒｉｎｔｅｒ　＞为直接打印，选择＜Ｓｃｒｅｅｎ＞为显示到屏幕后再打　印。选中＜Ｆｉｌｅ＞可选择文件存储格式（Ｆｉｌｅ　Ｔｙｐｅ），　一般为．ＴＸＴ格式，其他项为打印内容可选项。（３）　点击＜Ｒｅｐｏｒｔ＞　＜Ｐｒｉｎｔ　Ｒｅｐｏｒｔ＞打印报告¨　。　２．２关机步骤　将手动进样器扳手扳上去，拔出进样器（自动　进样器除外）；停止检测器和泵，退出色谱工作　站；关闭液相色谱仪电源，关闭计算机。