高效液相色谱串联质谱测定猪肉中新型兽药泰拉霉素
畜禽肉中多类兽药残留的快速检测
畜禽肉中多类兽药残留的快速检测黄 立（昆明市食品药品检验所，云南昆明 650032）摘 要：建立了猪肉、牛肉、鸡肉中磺胺类、四环素类、喹诺酮类共15种兽药残留量的快速检测方法。
样品经过Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液-2.5%乙酸乙腈溶液提取，经氯化钠、无水硫酸钠除水盐析后取乙腈相用高含碳量的C18吸附粉吸附净化，再用0.1%甲酸水乙腈（75+25）定容后上机检测。
结果显示，本方法测定三类混合药物的回收率在63.9%～104.0%，RSD在1.1%～12.2%，检测快速、灵敏度高、重复性好，定性定量准确可靠，适用于猪肉、牛肉及鸡肉中磺胺类、四环素类、喹诺酮类药物残留的快速检测。
关键词：液相色谱-串联质谱法；磺胺；四环素；喹诺酮Rapid Detection of Multiple Types of Veterinary Drug Residues in Livestock and Poultry MeatHUANG Li(Kunming Institute for Food and Drug Control, Kunming 650032, China) Abstract: A rapid method was established for the determination of 15 veterinary drug residues of sulfonamides, tetracyclines and quinolones in pork, beef and chicken. The samples were extracted by Na2EDTA-Mcllvaine buffer-2.5% acetic acid acetonitrile solution, and the acetonitrile phase was purified by adsorption with high carbon content C18 adsorbent powder after dehydration salting by sodium chloride and anhydrous sodium sulfate, and then fixed with 0.1% formic acid aqueous acetonitrile (75+25) and detected on the machine. The results showed that the method determines the recovery of the three types of mixed were 63.9%～104.0%, RSD were 1.1%～12.2%, rapid detection, high sensitivity, good repeatability, accurate and reliable qualitative and quantitative, suitable for the rapid detection of sulfonamides, tetracyclines, quinolones drug residues in pork, beef and chicken.Keywords: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; sulfonamide; tetracycline; quinolone合理使用兽药可以提高畜禽养殖效率，节省成本，缩短出栏周期，进而增加收益，但越来越多的人为追求经济效益滥用药物，导致了一些兽药以残留的形式流入人体，从而对身体健康造成威胁[1]。
高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中氯霉素和五种磺胺类药物的残留量
啶、 磺胺噻唑 、 甲氧苄啶和磺 胺嘧啶残留量的分析 方法。方法： 猪 肉加入 乙酸 乙酯后 匀浆 ， 转移有机层 Ｎ 吹干 ， 残 渣用
１ ０ ％ 乙腈 水 溶 液 溶 解 ， 正 己烷 除脂 ， 采用 Ｂ Ｅ Ｈ Ｃ 。 （ ２ ． １ ｍｍ × ５ ０ ｍｍ， １ ． ７ ｍ） 色谱 柱 分 离 ， 以 乙腈 和 水 为 流 动 相 进 行 梯 度洗脱 ， 采 用 电 喷 雾 离子 源 （ Ｅ Ｓ Ｉ ） ， 以 多反 应 监 测 （ ＭＲ Ｍ） 方式检测。结果 ： 在 该 实验 条件 下 ， 氯 霉 素 和 ５种 磺 胺 类 药 物 分别在 ９ ． ６ ～ ３ ８ ４ ｎ ｇ ／ ｋ ｇ和 ０ ． ５ １ ～ ２ ０ ． ８ 浓度 范 围 呈 良好 的线 性 关 系， Ｒ 均 大 于 ０ ． ９ ９ ； 氯霉素检 出限为 ３ ． ２ ｉ ｒ ｇ ／ ｋ ｇ ， 定
Ｌ Ｕ Ｙ ｕ ａ ｎ ， ｗＵ Ｐ ｉ ｎ ｇ 一 ， Ｙ Ａ Ｎ Ｇ Ｓ ｈ ｕ — ｔ ｉ ｎ ｇ ， Ｌ Ｉ Ｙｏ ｎ ｇ — ｊ ｕ ｎ ， Ｌ Ａ Ｎ Ｙ ａ ｎ — ｙ ｕ ， Ｓ Ｕ Ｎ Ｊ ｉ ａ ， ， （ １ ． Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｙ ， Ｇ ｕ ｉ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｇ ｕ ｉ ｙ ａ ｎ ｇ ５ ５ ０ ０ ０ ４， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ；
２ ． Ｇｕ ｉ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｉ ａ ｌ Ｋｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ｓ ， Ｇ ｕ ｉ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｇｕ ｉ ｙ ａ ｎ ｇ ５ ５ ０ ０ ０ ４， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ；
高效液相色谱-串联质谱法检测猪可食性组织中加米霉素残留
高效液相色谱-串联质谱法检测猪可食性组织中加米霉素残留李伟岭;范小平;杨芳;刘波;岳永波;吴鹏飞;罗妍;赵盼;王金阳【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2022(58)4【摘要】为了建立一种可靠、灵敏的检测猪可食性组织中加米霉素残留量的高效液相色谱-串联质谱方法,本试验将猪组织(肌肉、肝脏、脂肪和肾脏)经绞碎、均质后,用乙腈提取,乙腈饱和正己烷去脂,固相萃取柱净化,Kinetex C18色谱柱梯度洗脱,在电喷雾正离子下以多反应监测模式检测,内标法定量。
结果显示,该方法的检测限和定量限分别为3μg/kg和5μg/kg;加米霉素在5~1000μg/kg浓度范围内,峰面积与浓度的线性关系良好;猪肌肉、肝脏和脂肪在5、50、100μg/kg和200μg/kg四个添加浓度的平均回收率为70.20%~90.75%,批间变异系数≤11.94%;猪肾脏在5、150、300μg/kg和600μg/kg四个添加浓度的平均回收率为66.69%~87.46%,批间变异系数≤9.95%。
结果表明该方法灵敏、准确,可满足兽药残留检测的要求。
【总页数】6页(P59-64)【作者】李伟岭;范小平;杨芳;刘波;岳永波;吴鹏飞;罗妍;赵盼;王金阳【作者单位】保定冀中药业有限公司;石家庄冀中药业有限公司;海南省动物疫病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】Q946.92【相关文献】1.鸡组织中泰拉霉素残留的高效液相色谱-串联质谱法检测2.鸡肉组织中6种青霉素类抗生素药物残留检测——高效液相色谱-串联质谱法3.牛可食性组织中加米霉素残留量的液目色谱-串联质谱检测方法的研究4.超高效液相色谱-串联质谱法测定猪组织中泰拉霉素及其代谢物残留量5.高效液相色谱-串联质谱法测定鸡可食性组织中红霉素残留量研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
同位素稀释-固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术同时测定畜禽肉
Ｎａ２ＥＤＴＡ－Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ 的缓冲液活化柱， 用 ３ ｍＬ 水冲洗以上提取液的上样，抽 干后使用甲醇 ３ ｍＬ 与 ５％ 氨水甲醇溶 液洗脱，在 ４５ ℃下进行氮吹到干，之 后加入 １ ｍＬ 乙腈∶水为 １ ∶ ９ 的溶液 进行溶解，并涡旋混合 １ ｍｉｎ。
2 结果
２．１ 色谱条件
青霉素 G 钠盐
本 次 研 究 中， 主 要 选 用 德 国 生 产 的 ５ 种（ＭＣＸ、ＷＡＸ、ＭＡＸ、ＨＬＢ 和 ＷＣＸ）固相的萃取小柱，重点监测其净 化的效果以及保留行为。由于 ＭＣＸ 的 固相萃取柱的 ｐＫａ 值所适合使用的范 围在 ３ ～ １０，而且药物的 ｐＫａ 值范围 非常宽。因此，ＭＣＸ 的固相进行的萃 取小柱对于不同类型药物起到的吸附 作用较明显。 ２．４ 阳性定性确证于样品监测
食品内兽药残留情况越来越严重。因 合液，放于避光处 ２ ｍｉｎ 左右，之后
此，采用安全方法测定畜禽肉中 ４ 类 加 １０ ｍＬ Ｎａ２ＥＤＴＡ－Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ 溶液与乙
兽药残留具有重要意义。
腈（７ ∶ ３）的混合提取液，将其涡旋
1 材料和方法
１．１ 材料
４０ ～ ６０ ｓ，超声提取 １０ ｍｉｎ，经 １２ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离心 １０ ｍｉｎ 后，提取上清液。
完全稀释，作为标准溶液，准备测量。 且峰面积的信号非常强。
１．２．２ 试剂配制
２．２ 萃取溶剂
将 １ ０００ ｍＬ ０．１ ｍｏｌ／Ｌ 柠檬酸溶
因 ４ 类药物酸碱性存在差异，且
易 溶 在 乙 腈 和 甲 醇 当 中， 比 较 整 个 Ｎａ２ＥＤＴＡ－Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ－ 乙 腈 甲 醇、 乙 腈 以 及 Ｎａ２ＥＤＴＡ－Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ－ 甲 醇 复 合 的 提取液的提取效果。 ２．３ 净化条件
高效液相色谱串联质谱法
高效液相色谱串联质谱法（High-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS）是一种分离和分析分子化合物的分析技术，结合了高效液相色谱和质谱分析技术的优点。
在HPLC-MS/MS技术中，样品经过高效液相色谱柱分离后进入质谱仪，通过电离和碎片化反应将分离出来的化合物分离和鉴定。HPLC-MS/MS技术具有灵敏度高、分离效率好、分析速度快、可同时检测多个成分等优点，因此在药物分析、生物分析、环境监测等领域得到广泛应用。
超高效液相色谱-串联质谱法检测畜禽肉中199种药物及代谢物残留
超高效液相色谱-串联质谱法检测畜禽肉中199种药物及代谢物残留王亦琳;叶妮;尹晖;陈超超;张骊;孙红洋;王鹤佳;孙雷【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2024(58)4【摘要】建立了一种可检测猪肉、鸡肉、牛肉和羊肉四种畜禽肉中199种药物及代谢物残留的超高效液相色谱-串联质谱法。
样品经Mcllvaine-Na2 EDTA缓冲液和2%甲酸乙腈溶液提取后,高速离心去除蛋白质等杂质,用captiva EMR-Lipid小柱净化。
以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸溶液为流动相洗脱,在C18色谱柱上分离。
ESI离子源正负离子模式同时扫描,并采用多反应监测模式(MRM)检测,基质匹配标准溶液外标法定量。
结果表明:各药物及代谢物在空白猪肉、鸡肉、牛肉和羊肉基质匹配系列浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.990;在4种基质中的定量限范围在0.5~20μg/kg之间;在定量限~200μg/kg添加浓度上的回收率范围为60%~120%,批内与批间相对标准偏差均小于20%。
该方法具有简便快捷、选择性好、定性准确,重复性好等特点,可进行多种类药物及代谢物残留的同步处理和同时检测。
对提高实际样品检测工作效率,更好的确保动物性食品安全,保护人类健康具有重要意义。
【总页数】12页(P50-61)【作者】王亦琳;叶妮;尹晖;陈超超;张骊;孙红洋;王鹤佳;孙雷【作者单位】中国兽医药品监察所(农业农村部兽药评审中心)【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.动物源食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留检测超高效液相色谱-串联质谱法研究2.高效液相色谱-串联质谱法检测猪肝中苯并咪唑类药物及其代谢物的残留量3.超高效液相色谱-串联质谱法检测动物源食品中氯霉素类药物及其代谢物残留4.复合式提取净化体系结合超高效液相色谱-串联质谱法检测畜禽肉中120种抗生素药物残留5.鸡蛋中酰胺醇类药物及其代谢物残留检测超高效液相色谱-串联质谱法建立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中8类38种兽药残留
高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中8类38种兽药残留摘要：在养殖过程中，滥用抗生素、大量使用合成等药物的现象越来越严重，兽药具有致癌、至畸、至突变等不良效用，危害人类健康。
近年来由于滥用兽药引起的食品安全问题频发已逐渐成为人们普遍关注的一个社会热点问题。
一些化学合成药物在畜牧水产养殖业中使用较多，随便使用这些药物是很容易使水产品受到污染的。
在这种情况下，人们吃了这种受到污染的肉类食物，就会使得这些毒素在人体内积累，会使人体产生一定的抗药性。
随着兽药在我国实际生产中的广泛应用，人们对其危害有了更多的认识，这些肉类食品中所残留的兽药也是目前食品安全中所关注的重要内容。
因此，对畜牧水产养殖业的相关产品进行严格的检测，能够保证肉类食品的质量。
本文建立了高效液相色谱-串联质谱HPLC-MS/MS同时测定水产品中喹诺酮类、大环内酯类、磺胺类、磺胺增效剂、林可胺类、硝基咪唑类、类和多肽类8类共38种限用兽药残留的检测方法。
关键词：高效液相色谱；串联质谱；兽药残留本试验同时测定鳗鱼、鳙鱼和小龙虾中的类药物残留，在检测的过程中，检测的药物种类虽多，但前处理方法简单并不需要特殊的实验装置来辅助实验，检测周期短且成本低，从而为水产品的大量检测，提供了更加简便的方法。
一、实验部分1.1实验所用的仪器和试剂实验仪器：质谱仪、高效液相色谱仪、Waters C3色谱柱、IKAT25数显型高速分散机、低温高速离心机和氮吹浓缩仪。
实验试剂：甲醇、正已烷、甲酸、冰乙酸、无水硫酸钠，以上试剂均为分析纯，乙腈、甲酸为色谱纯。
1.2样品前处理样品的提取及净化：称5.00g样品置于50mL聚丙烯离心管中，加入约5g无水硫酸钠及15mL1%的乙酸乙腈溶液，用高速分散机进行提取，离心（5000r/min，5min），收集上清液。
沉淀再用20mL1%的乙酸乙腈溶液按照上述步骤重复提取一次，离心，合并上清液，用提取液将其定容到25mL，混合均匀，将其放到-80℃的冷冻机中冷冻1小时。
饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定液相色谱-串联质谱法说明书
中华人民共和国国家标准GB/T×××××-202×饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定液相色谱-串联质谱法Determination of tylosin,tylvalosin and tilmicosin in feeds—Liquid chromatography-tandem mass spectrometry编制说明（征求意见稿）主要完成单位：四川省饲料工作总站《饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定液相色谱-串联质谱法》国家标准制订编制说明（征求意见稿）一、工作简况（一）任务来源本标准的制定任务来源于国家标准化管理委员会，计划号合同编号为T-NY-2021-101-03，计划号为20203789-T-469，任务名称为《饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定液相色谱-串联质谱法》。
本标准的技术归口单位是全国饲料工业标准化技术委员会，主要起草单位是四川省饲料工作总站和西南民族大学。
参考国内外相关检测方法，结合试验结果起草本标准。
（二）制定背景大环内酯类药物（MALs）是多由链霉菌产生的弱碱性抗生素，对革兰氏阳性菌和支原体具有良好的抗菌活性，临床上广泛用于治疗畜禽动物敏感菌引起的呼吸道、消化道和泌尿生殖系统感染[1-3]。
MALs 为无色弱碱性化合物，多呈负的旋光性由其整体结构决定，MALs易溶于有一定极性的有机溶剂，如甲醇、乙腈、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等，在水和弱极性溶剂中微溶。
MALs在干燥状态下相当稳定，但其水溶液稳定性差。
在酸性条件(pH＜4)下，苷键易发生水解，氨基糖苷结构较中性糖苷稳定的多，正常水解碱性糖苷的条件往往导致大环结构分解；在pH6.8的水溶液中相对较稳定，此时水溶性下降，抗菌活性最高。
MALs的盐或酯较游离形式稳定。
大环内酯类药物达100多种，发展到现在共有3代，第一代有红霉素、泰乐菌素、北里霉素(吉他霉素)等；第二代有替米考星、阿齐霉素等；第三代有乙酰异戊酰基泰乐菌素（泰万菌素）、泰拉霉素（瑞可新）等。
兽药残留的检测方法
兽药残留的检测方法
兽药残留的检测方法包括：
1. 高效液相色谱法：将样品中的兽药残留物通过柱子分离，然后使用UV或荧光检测器检测。
2. 质谱法：使用质谱仪检测样品中的兽药残留物，可检测出更低浓度的残留物。
3. 酶联免疫吸附试验法：利用特定的抗体对兽药残留物进行检测，可以进行多重残留的检测。
4. 光谱学方法：使用紫外光谱、红外光谱、拉曼光谱等方法对样品中的兽药残留物进行检测。
5. 火焰原子吸收光谱法：对样品进行预处理后，使用火焰原子吸收光谱仪进行检测。
6. 电化学法：利用电化学传感器对兽药残留物进行检测，具有灵敏度高、实时性好等优点。
兽药常用测定方法
兽药的常用测定方法包括：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种分离和检测兽药的常用技术。
它利用高压将样品中的化合物分离出来，然后通过紫外光谱等方法检测化合物的含量。
2. 质谱法（MS）：这是一种高灵敏度的兽药检测方法。
它可以快速而准确地检测出不同种类的兽药，并能够定量分析其含量。
3. 酶联免疫吸附检测法（ELISA）：这是一种快速、灵敏、准确的兽药检测方法，它利用特定的免疫反应来检测样品中兽药的含量。
4. 鉴别形状：通过人的眼、鼻、口等感观器官从兽药的外观、色泽、气味、味道、晶型等对兽药进行初步判断。
5. 检查：主要是通过一些限度的检查，对生产或储存过程中可能产生或引进的杂质进行限量，以此来保证兽药的纯度符合要求。
6. 含量测定：一般采用化学分析或理化分析方法，如容量分析、重量分析、紫外分光光度法、高压液相色谱法等方法，能准确地测定出兽药的有效成分是否符合规定的含量标准。
请注意，这些方法仅供参考，具体测定方法应根据不同的兽药类型和检测需求来确定。
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2009年第2
期
R
C8
色谱柱分离，串联质谱多反应监测
(MRM)模式下分析，内标法定量。方法的线性范围为10~500μg/kg，检出限为5.0μg/kg，在10、20和50μg/kg3
个浓度水平进行添加实验，平均回收率为93.1%~105.5%，批内相对标准偏差为1.5%~4.6%，批间相对标准偏差
为
1.8%~5.6%
。
关键词高效液相色谱串联质谱；猪肉；泰拉霉素；残留
17
2009年第2
期
R
C8(5μm,3.9mm×20mm)
作为分析柱，结果发现泰拉霉素峰形较好。根据泰拉霉素的分子结构的特征，我们选择了ESI(+)作为电离模式。通过流动注射直接进样优化相关参数，质谱图见图1，母离子、子离子以及定性、定量离子对见表1所示。2.3方法的线性范围与检出限、定量限在上述条件下，以基质添加标准曲线内标法定量(标准品色谱图如图2所示)，泰拉霉素浓度为10~500μg/L时，线性关系良好，线性方程为Y=90.835x+0.187，线性相关系数为0.9993。通过回收率，当样品中添加5μg/kg泰拉霉素时，信/噪比（S/N）大于3，当样品中分别添加10μg/kg泰拉霉素时，信/噪比（S/N）大于10，所以本方法确定泰拉霉素的检出限为5μg/kg，定量限为10μg/kg，超过了国内相
关标准对大环内酯类药物检测的灵敏度要求
。
2.4
方法的回收率与精密度
回收率实验进行3次，每个添加浓度每次5个
平行，空白样品和添加样品色谱图见图2，结果见
表2所示。方法的平均回收率为
93.1%～105.5%
，
批内相对标准偏差为1.5%～4.6%，批间相对标准偏
1.4
仪器分析条件
液相色谱条件：SymmetryRC85μm3.9mmx20mm，流动相：乙腈：0.1%甲酸水溶液=70:30；柱温：30℃，进样室温度15℃，进样量：10μL，流速为0.3mL/min。质谱条件：电离模式：ESI（+）；检测方式：多级反应检测（MRM）；毛细管电压：4.2KV；锥孔电压：20V；RF透镜电压：0.2V；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：350℃；锥孔气流速：100L/h；脱溶剂气流速：600L/h；二级碰撞气：氩气。1.5添加回收率实验添加回收率实验添加浓度为10、20和50μg/kg，实验步骤同1.3。2结果与讨论2.1样品的提取和净化泰拉霉素含3个氨基基团，为弱碱性化合物，易溶于酸性溶液和极性溶剂中，在pH6~8的水溶液中较稳定，在pH<4和pH>9条件下均不稳定。对泰拉霉素残留的提取和净化方法的设计主要依据其弱碱性、脂溶性和酸碱不稳定性。本实验比
较了4种提取液：乙腈-0.1%偏磷酸
（70:30v/v）、
甲醇-0.1%偏磷酸（70:30v/v）、乙腈-0.1%磷酸
（70:30v/v）、甲醇-0.1%磷酸（70:30v/v）
对泰拉霉
素的提取效果。结果表明，甲醇-0.1%磷酸
（
70:
30
）提取液对泰拉霉素的提取效果较好，
回收率高
于其他提取液，故本方法选择甲醇-0.1%磷酸
（
70:
30
）为样品提取液。
液-液分配（LLE）和固相萃取（SPE）是大环
内酯类药物的2种主要净化手段，其中LLE操作
较麻烦且回收率较低、重复性较差，所以本研究采
用固相萃取技术净化，并比较了3种SPE净化小
柱：SUPELCOC18小柱、OasisMCX小柱和
PCX
小柱,由于OasisMCX小柱和PCX小柱兼有阳离
子交换和疏水作用机制，基于泰拉霉素的弱碱性和
脂溶性的理化特性，OasisMCX小柱和PCX小柱
的净化效果好于C18小柱。OasisMCX小柱和
PCX
表1泰拉霉素液质联用测定电喷雾离子化条件的设置
药物母离子(m/z)产物离子(m/z)滞留时间(s)碰撞能量(eV)锥孔电压
(V)
泰拉霉素
806.7[M+H]+577.60.032240
404[M+2H]2+158.2*0.032220
罗红霉素
837.6[M+H]
+
158.20.033538
*
定量离子
。
18
2009年第2
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19
2009年第2
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