山豆根中总黄酮的含量测定

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总黄酮测定

总黄酮测定

总黄酮测定蕨菜中总黄酮和多糖的还原力测定一.前言1.项目的意义蕨菜是采自蕨科蕨属中蕨的幼嫩叶。

近年来已成为深受人们喜爱的山野菜。

蕨菜还具有清热化痰、利尿安神等功效,经常食用蕨菜会有一定的保健作用。

蕨菜中所含黄酮类化合物具有抗溃疡、抗过敏、抗菌、抗炎、抗氧化、抗衰老、降血脂、治疗心脑血管疾病等药用保健功能,也是一类具有广阔开发前景的天然抗氧化剂。

文中对蕨菜黄酮的含量测定、抗氧化作用等方面进行了研究,为蕨菜的保健功能研究,更为蕨菜的深度加工与开发提供依据。

2.黄酮的研究进展由于黄酮具有广谱的药理作用,特别是在抗癌、防癌和抗自由基方面的作用,引起人们极大的开发兴趣。

微波、超声波、酶解、浸提和超临界提取等几种黄酮的提取方法可以单独使用,也可以相互辅助使用。

黄酮的分离和鉴定方法主要有高效液相色谱法、紫外分光光度法和颜色判别法。

测定黄酮的活性时,主要是测其抗氧化性能。

近年来,研究黄酮的学者越来越多,相信黄酮会更多地应用到医药、化妆、食品等领域。

3.实验内容首先采用亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定样品中总黄酮含量。

利用黄酮类化合物与铝盐反应生成红色络合物,以芦丁为标准在510nm处测吸光度,进行黄酮含量的测定[然后通过对蕨菜中总黄酮还原力测定[阴离子清除能力的测定[张建平,2021]李进,2021]陈乃富,2021]和DPPH自由基清除能力的测定[李波,2021]及超氧对黄酮的抗氧化能力进行测定。

二、项目实施环节及实施方案 1.材料与方法1.1材料蕨菜(天水市售)1.2试剂磷酸缓冲液、六氰合铁酸钾溶液、三氯乙酸溶液、三氯化铁溶液、DPPH乙醇溶液、无水乙醇、水杨酸-乙醇溶液、硫酸亚铁溶液、水杨酸、30%双氧水、Vc、BHT、Tris-HCl缓冲液、Hcl溶液、邻苯三酚1.3仪器紫外可见分光光度仪,超声波裂解仪、干燥箱、恒温水浴锅、电磨机、离心机、索氏提取器等。

1.4方法通过对蕨菜中总黄酮还原力测定[李进,2021] 和DPPH自由基清除能力的测定[李波,2021]及超氧阴离子清除能力的测定[张建平,2021] 对黄酮的抗氧化能力进行测定。

苦豆子渣中总黄酮含量的测定

苦豆子渣中总黄酮含量的测定

苦豆子渣中总黄酮含量的测定【摘要】建立提取生物碱后的苦豆子渣中总黄酮含量的测定方法,为苦豆子再利用提供依据,本实验采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH分光光度法测定苦豆子渣中黄酮的含量。

研究表明:以芦丁对照品,在一定条件下,芦丁的浓度与吸光度呈线性关系,回归方程为Y=11.403X+0.0021,R=0.9998,方法回收率98.67%~100.33% ,RSD=1.65%(n=9)。

建立的方法简便快速、成本低,可用于苦豆子渣中总黄酮含量的测定。

【关键词】苦豆子渣总黄酮分光光度法苦豆子是豆科槐属的多年生草本植物,广泛分布于我国西北一带,我国对其药用记载较多。

药用根、茎、全草及种子,味苦性寒,有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、治疗乙型肝炎的药理活性等作用[1],其主要活性成分为生物碱。

随着现代药理药效学研究的不断深入,近年研究发现,苦豆子的主要化学成分除生物碱外,还有黄酮类、有机酸、氨基酸、蛋白质和多糖类成分[2]。

目前国内外研究的重点是生物碱,有关苦豆子渣中总黄酮提取及含量的测定的研究未见报道。

据在宁夏地区调查,紫金花集团药业有限公司“十一五”期间,完成国家发改委批准的“年产100吨苦豆子生物碱高技术产业化示范工程项目”和相关系列产品的开发,宁夏盐池县金豆植物生化有限公司等多家企业苦豆子生物碱提取已形成产业化,而提取过生物碱后的苦豆子废渣一般作为饲料或废弃,造成了极大的浪费。

为了更好地综合利用这一药材资源,变废为宝,我们对其苦豆子渣进行了进一步的研究。

这不仅对保障人类健康有重要作用,而且还有着重大的社会、经济和环境效益。

1 实验部分1.1仪器与药品722型可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司),KA-1000台式离心机(上海安亭科学仪器厂),RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂),SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司),HH-Ⅰ恒温水浴锅(国华电器有限公司),JY3002电子天平(上海精密科学仪器有限公司),TG322A微量分析天平(湘仪天平仪器厂),KQ2200型超声波清洗器(昆山市超生仪器有限公司)。

山楂叶总黄酮分光光度法测定—科标检测

山楂叶总黄酮分光光度法测定—科标检测

山楂叶总黄酮的测定—分光光度法—科标检测方法名称: 山楂叶—总黄酮的测定—分光光度法应用范围:本方法采用分光光度法测定山楂叶中总黄酮(以无水芦丁计算)的含量。

本方法适用于蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifidaBge.var.major N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥叶。

方法原理: 本品细粉置于索氏提取器中,依次加入三氯甲烷和甲醇提取,蒸干,加稀乙醇溶解,滤过,续滤液中依次加入水、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、氢氧化钠试液一定量,摇匀,放置,立即置紫外可见分光光度计, 于波长500nm 处测定吸光度,以无水芦丁(C27H30O16)计算总黄酮含量。

试剂:1. 三氯甲烷2 .5%亚硝酸钠溶液3 .10%硝酸铝溶液4.氢氧化钠试液仪器设备:1. 紫外-可见分光光度计2. 索氏提取器试样制备: 对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg ,置50mL 量瓶中,加乙醇适量,超声处理使溶解,放冷,加乙醇至刻度,摇匀。

精密量取20mL ,置50mL 量瓶中,加水至刻度,摇匀,制成每1 mL 中含无水芦丁0.2mg 的溶液。

操作步骤: 1. 标准曲线的绘制精密量取对照品溶液1 mL 、2 mL 、3 mL 、4 mL 、5 mL 、6 mL ,分别置25 mL 量瓶中,各加水至6 mL ,加5%亚硝酸钠溶液1 mL ,摇匀,放置6分钟,加10%硝酸铝溶液1 mL ,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10 mL ,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,以相应试剂为空白,立即照分光光度法,在500nm 波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。

2. 供试品的测定取本品细粉1g ,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色,弃去三氯甲烷液,药渣挥去三氯甲烷,加甲醇继续提取至无色(约4小时),提取液蒸干,残渣加稀乙醇溶解,转移至50 mL 量瓶中,加稀乙醇至刻度,摇匀,作为供试品储备液。

可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量实验讨论

可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量实验讨论

可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量实验讨论
大山楂丸中总黄酮的含量可以采用可见分光光度法来测定。

1. 实验目的:测定大山楂丸中总黄酮的含量。

2. 实验原理:可见分光光度法利用物质对可见光的吸收特性来测定物质的浓度。

总黄酮具有一定的吸收特性,可以通过测量吸光度来计算其浓度。

3. 实验步骤:
a. 准备样品:将大山楂丸样品粉碎并称取适量。

b. 提取黄酮:使用适合的溶剂(如乙醇)将黄酮提取出来。

c. 制备标准曲线:准备一系列不同浓度的黄酮标准溶液,然后使用分光光度计分别测量吸光度。

d. 测量样品吸光度:将提取的样品溶液使用分光光度计测量吸光度。

e. 计算黄酮含量:根据标准曲线的吸光度-浓度关系,计算出大山楂丸中总黄酮的含量。

4. 实验结果:根据测量得到的吸光度值和标准曲线,计算出大山楂丸中总黄酮的含量。

5. 实验讨论:
a. 实验方法的准确性和重复性:可以进行重复实验,计算相对标准偏差或百分相对标准偏差来评估方法的准确性和重复性。

b. 实验条件的选择:实验中需要选择合适的波长和溶剂,并对提取方法进行优化,以获得最佳的测量结果。

c. 样品处理的改进:可以尝试不同的提取方法,如其他溶剂或萃取工艺,以提高黄酮的提取效率。

d. 可行性和适用性分析:可以对其他样品进行类似实验,评估方法的适用性和可行性。

大山楂丸中总黄酮的含量测定

大山楂丸中总黄酮的含量测定

大山楂丸中总黄酮的含量测定【摘要】目的建立大山楂丸中总黄酮的含量测定方法。

方法采用分光光度法,以槲皮素为对照品,对其进行络合显色,在510 rnn波长处测定吸收度,从而测定大山楂丸中总黄酮的含量。

结果线性范围在0.020 004〜0.100 02mg • ml-1 (r=0. 999 3)之间,平均回收率为 96. 02%,RSD= 1.22% (n=5 )。

结论该法简便易行、重现性好、结果可靠,可用于该制剂的质量控制。

【关键词】大山楂丸总黄酮分光光度法Abstract:ObjectiveTo establish ultraviolet spectrophotometry for the content determination of Total Flavones in DashanzhaPill. MethodsQuercetin was selected as reference material, and the samples were determined at 510 nm. ResultsThe linear range for quercetin was 0.020 004 〜0.100 02 mg • ml-1 (r= 0.999 3). The recovery rate was 96.02%; RSD= 1.22% (n=5 ). ConclusionThis method is easy to handle with good accuracy and reproducibility, and issuitable for the quality control of Dashanzha Pill.Key words: Dashanzha Pills; Total Flavones; Spectrophotometry大山楂丸由山楂、神曲、麦芽组成,具有开胃消食的功能,用丁•食积内停所致的食欲不振、消化不良、脘腹胀闷。

野艾蒿中总黄酮含量的测定

野艾蒿中总黄酮含量的测定

野艾蒿中总黄酮含量的测定
野艾蒿中总黄酮含量的测定可以按照以下步骤进行:
1.样品的制备:从野艾蒿的叶子和茎中取约2克样品,粉碎并过筛,
然后用80%的乙醇提取。

2.提取液的制备:将粉碎样品加入50毫升的80%乙醇中,超声提取
30分钟,离心10分钟,将上清液收集。

3. 准备试剂:准备显色液,取苦参碱0.5克,用乙醇溶解到10毫升,并用水稀释到100毫升;准备还原液,取硼氢化钠0.3克,加入10毫升
1mol/L氢氧化钠溶液中,加水稀释到100毫升。

4.测定总黄酮含量:取上清液5毫升,加入5毫升的还原液,振荡均匀,静置15分钟,然后加入5毫升的显色液,振荡均匀,再静置15分钟。

最后使用紫外分光光度计在360纳米处测定吸光度值,并根据标准曲线计
算总黄酮含量。

注意事项:
1.测定过程中应严格控制操作的时间和温度。

2.为避免干扰,需清洗所有用具并使其干燥。

3.测定结果的准确性受到多种影响因素,如野艾蒿样品的来源、生长
环境和时间等,因此需要进行适当的质控。

保健食品中总黄酮的测定方法(精)

[作者简介]肖香兰(1964-,女,主管检验技师,主要从事理化检验研究。

【化学测定方法】保健食品中总黄酮的测定方法肖香兰,罗仁才,张楠(北京市疾病预防控制中心营养与食品卫生所,北京100013[摘要]目的:建立以石油醚作为洗脱剂测定保健食品中总黄酮的方法。

方法:样品经甲醇提取,用聚酰胺粉吸附,经石油醚洗脱杂质后,在波长360n m处,用分光光度法测定保健食品中总黄酮的含量。

结果:采用石油醚作为洗脱剂,总黄酮浓度的含量在0~2010μg/m l范围内与吸光度值呈良好的线性关系(r=019998,方法的检出限为215μg。

测定样品的相对标准偏差在4160%~6149%之间,回收率在86167%~101150%之间。

与用苯作为洗脱剂方法测定结果比较,两者无显著性差异。

结论:该方法操作简便,重现性及稳定性好,线性范围宽,特别是减少了苯对检测人员和环境的污染,可用于保健食品中总黄酮的测定。

[关键词]保健食品;总黄酮;t检验[中图分类号]R15515[文献标识码]A[文章编号]1004-8685(200706-1037-02D eter m i n a ti on of tot a l fl avono i ds i n hea lth foodX iao X iang2lan,L uo Ren2cai,Zhang N an(Beijing Center f or D isease Contr ol and Preventi on,Beijing100013,China[Abstract]O bjecti ve:To establish a method for deter m ining flavonoids in health food1M ethods:The t otal flavonoids in health f ood were deter m ined by s pectr ophot omet after the sa mp les were distilled by methanol and purified by petr oleu m ether1The detec2 ti on wavelength was360n m1Results:Data bet w een the flavonoids content andabs orban had a better linear relati onshi p in the range of0~2010μg/m l(r=0199981The deter m inati on li m its were215μg1The relative standard deviati ons were bet w een 4160%~6149%1The recoveries were in the range of86167%~101150%1Purified by petr oleu m ether instead of benzene,the results had no obvi ous difference1Conclusi on:The method is si m p le,stable and accurate,and it has been app lied successfully t o deter m ine flavonoids in health food1[Key words]Health f ood;Total flavonoids;t detecti on黄酮类化合物也称类黄酮,是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物,多以甙类形式存在,也有一类以游离形式存在。

可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量

可见分光光度法测定⼤⼭楂丸中总黄酮的含量实验五可见分光光度法测定⼤⼭楂丸中总黄酮的含量⼀、⽬的要求1、掌握⽤分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量。

2、掌握可见分光光度计的使⽤⽅法。

⼆、基本原理⼤⼭楂丸由⼭楂、神曲和麦芽组成,主要功能为开胃消⾷,其中⼭楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维⽣素。

黄酮类化合物具有邻⼆酚羟基,或3,5位羟基结构,可与铝盐、铅盐、镁盐等⾦属盐类试剂反应,⽣成有⾊配合物,可⽤可见分光光度法测定其含量。

本实验利⽤黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中,与Al3+产⽣⾼灵敏度的橙红⾊配合物(λmax=510nm),从⽽⽤可见分光光度法(⽐⾊法)测定⼤⼭楂丸中总黄酮的含量。

三、仪器与试药1、可见分光光度计、分析天平、索⽒提取器。

2、⼄醇(A.R)、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。

3、槲⽪素(中国药品⽣物制品检定所)。

4、⼤⼭楂丸(市售品)。

四、操作步骤1、标准液的配制:精密称取槲⽪素对照品20mg,置100ml容量瓶中,加95%⼄醇50ml使溶解,然后加50%⼄醇稀释⾄刻度,即得0.2mg/ml的对照品溶液。

2、标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分别置于10ml容量瓶中,各加50%⼄醇溶液使成5ml,精密加⼊5%亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀,放置6分钟,加⼊10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,再放置6分钟,加⼊1%氢氧化钠溶液4ml,分别⽤50%⼄醇稀释⾄刻度,摇匀,放置15分钟。

以第⼀瓶作空⽩,⽤可见分光光度计在510nm处测其吸收度,作A-C标准曲线(或计算其回归⽅程)。

3、样品液的制备:精密称取120℃⼲燥2⼩时的⼤⼭楂丸6.5g,置索⽒提取器中,⽤95%⼄醇125ml回流提取1.5⼩时,将提取液移⾄250ml容量瓶中,补加蒸馏⽔⾄刻度,摇匀即得。

4、含量测定:精密量取提取液1ml,按上述标准曲线制备⽅法进⾏测定,并由标准曲线或回归⽅程计算样品中总黄酮的含量。

不同种不同药用部位不同产地千斤拔中总黄酮的含量测定

不同种不同药用部位不同产地千斤拔中总黄酮的含量测定【摘要】目的用紫外分光光度法对不同入药部位、不同产地5种千斤拔中总黄酮的含量进行测定,评价其非传统入药部位及不同种、不同产地的药材质量,以期寻找新药用资源和新的药用部位。

方法紫外-可见分光光度法于510 nm波长处测定总黄酮的量。

结果芦丁在9.17~64.19 μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率99.63 %,RSD为1.36 %(n=9)。

不同种千斤拔中,与蔓性千斤拔、大叶千斤拔(《中国药典》收载)比较,球穗千斤拔、宽叶千斤拔根中总黄酮的含量较低,腺毛千斤拔根中总黄酮的含量接近;各个种叶中总黄酮的含量普遍较高,茎中量较低。

不同产地千斤拔根中:大叶千斤拔以购于四川成都(云南产)含量最高,蔓性千斤拔采于湖北宜昌夷陵区最高,球穗千斤拔含量均较低。

结论该方法简便、快速、准确,可用于千斤拔药材质量控制。

不同产地中千斤拔总黄酮含量差异较大,说明产地的海拔高度、气候、土壤等条件、生长年限、贮藏年限等对千斤拔总黄酮含量有明显影响。

从有效成分总黄酮、资源的综合及可持续利用角度考虑,千斤拔各种的叶可以与其根同等入药,其茎的含量也可以考虑使用;腺毛千斤拔可以与药典收载种同等入药。

【关键词】紫外分光光度法;总黄酮;大叶千斤拔;蔓性千斤拔;球穗千斤拔;宽叶千斤拔;腺毛千斤拔;不同药用部位;不同产地Abstract:ObjectiveTo determine total flavones in different species, different medicinal parts and different places of Moghania philippinensis (Merr. et Rolfe) Li, Moghania macrophylla (Willd.) O. Kuntze, Moghania strobilifera (Linn.) Ait., Moghani glutiaosa (Prain)Y.T.Wei and Moghania Latifolia. Benth. MethodsUV method was adopted.ResultsThe method displayed good linearity within the concentration ranges of 9.17~64.19 μg , with average recovery of 99.63 �(n=9) and RSD of 1.36 %.The content of total flavones in Moghania strobilifera(Linn.)Ait. and Moghania latifolia Benth. was far lower than others. Meanwhile the content of total flavones in leaf of every species was higher or equal to that of root, and in stem of them was lower.ConclusionThis method is simple, accurate, replicate and suitable for the determination of Moghania philippinensis (Merr. et Rolfe) Li, Moghania macrophylla (Willd.) O. Kuntze, Moghania strobilifera (Linn.) Ait.,Moghani glutiaosa (Prain) Y.T.Wei and Moghania latifolia Benth. Considering the total flavones, the leaf of them can be medical used for total flavones resources. The content of total flavones in different places is different, and the content oftotal flavones is influenced obviously by its surroundings, collection and storage time. Moghani glutiaosa (Prain)Y.T.Wei can also be medical used.Key words:UV;Total flavones;Moghania philippinensis(Merr. et Rolfe)Li;Moghania macrophylla(Willd.)O.Kuntze;Moghanistrobilifera(Linn.)Ait.;Moghani glutiaosa (Prain)Y.T.Wei;Moghania latifolia Benth;Different medical parts;Different species常见妇科疾病以经前期综合症、阴道炎症、乳腺增生3大疾病最为明显,其中阴道炎症为常见和多发妇科疾病,严重影响患者的生活质量。

酸枣仁中总黄酮的含量测定

酸枣仁中总黄酮的含量测定酸枣仁是一种常见的中药材,具有丰富的药用价值。

其中,总黄酮是酸枣仁中一种重要的活性成分,具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。

本文将对酸枣仁中总黄酮的含量进行测定,以探究其药用价值。

我们需要了解什么是总黄酮。

总黄酮是一类化合物的总称,由黄酮酮、黄酮醇、异黄酮和黄酮苷等多种化合物组成。

这些化合物在植物体内广泛存在,具有丰富的生物活性。

在酸枣仁中,总黄酮的含量较高,因此具有重要的药用价值。

接下来,我们将介绍一种常用的测定酸枣仁中总黄酮含量的方法——色谱法。

色谱法是一种分离和定量化合物的常用方法,可以有效地测定酸枣仁中总黄酮的含量。

我们需要准备样品。

将酸枣仁研磨成粉末,并经过筛网过滤,得到均匀细腻的样品。

然后,我们需要提取酸枣仁中的总黄酮。

将酸枣仁粉末加入适量的乙醇溶液中,进行超声提取。

超声提取是一种快速高效的提取方法,可以有效地提取酸枣仁中的总黄酮。

提取完成后,我们需要对提取液进行浓缩。

将提取液置于旋转蒸发仪中,进行浓缩处理。

浓缩后的样品中含有较高浓度的总黄酮。

接下来,我们需要进行色谱分析。

将浓缩后的样品溶解于适量的溶剂中,然后通过色谱柱进行分离。

常用的色谱柱有C18柱和C8柱等,可以有效地分离酸枣仁中的总黄酮。

在色谱分离过程中,我们需要选择适当的流动相和梯度条件,以实现最佳的分离效果。

同时,我们还需要设置适当的检测波长,以便准确测定总黄酮的峰值。

我们可以通过对色谱图进行分析,计算出酸枣仁中总黄酮的含量。

常用的计算方法有外标法和内标法等,可以根据实际情况选择合适的计算方法。

通过上述的测定方法,我们可以准确地测定酸枣仁中总黄酮的含量。

这对于评价酸枣仁的药用价值具有重要意义。

总结起来,本文介绍了一种测定酸枣仁中总黄酮含量的方法——色谱法。

通过该方法,我们可以准确地测定酸枣仁中总黄酮的含量,进而评价其药用价值。

希望本文对读者了解酸枣仁的药用成分有所帮助,并为酸枣仁的进一步研究提供参考。

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山豆根中总黄酮的含量测定
目的:测定山豆根中总黄酮的含量。

方法:采用超声波提取法提取山豆根中的总黄酮,并以A1(NO3)3、NaNO2、及NaOH为显色剂,芦丁为对照品,分光光度法测定其含量。

结果:山豆根中总黄酮含量为57mg/g 。

结论:该方法可用于测定山豆根中的总黄酮。

标签:山豆根;总黄酮;超声波提取
山豆根为豆科植物越南槐(Vietnamese sophora Root)的干燥根及根茎。

山豆根味极苦,微有豆腥气,具有清热解毒,消肿止痛的功效,常用于咽喉牙龈肿痛、肺热咳嗽烦渴、热解便秘等症。

山豆根含有黄酮类、有机酸、植物色素、脂肪、水分及灰分等成分[1],而黄酮类化合物具有心血管系统维护、抗菌及抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、镇痛、保肝等多种生物活性[2-4]。

实验采用超声波提取法提取山豆根中的总黄酮,以芦丁为对照品,采用紫外可见分光光度法测定其总黄酮的含量。

1仪器与材料
1.1仪器RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);AS3120B超声波清洗仪(北京卓川电子科技有限公司);722-型分光光度计(上海光谱仪器有限公司);BSA223S分析天平(上海赛多利斯仪器系统有限公司)。

1. 2材料乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯;芦丁标准品(中国药品生物制品检定所);山豆根为市售。

2方法与结果
2. 1样品溶液的制备山豆根干燥后打粉过40目筛,精确称取5.0000g于锥形瓶中,加入80ml 60%乙醇溶液,超声提取60min,过滤,旋转蒸发浓缩,定容至250ml。

2.2标准溶液的配制精确称取芦丁标准品10mg,用60%的乙醇溶液定容至100ml容量瓶中,冷藏放置于冰箱。

2.3测定波长的选择取标准溶液1ml ,置于25ml容量瓶中,加入0. 6ml5% NaNO2,摇匀,放置6 min后加入1 ml 10 % A1(NO3)3 ,放置6 min,再加入10ml 4% NaOH溶液,混匀,用60%乙醇稀释至刻度。

同时作空白对照,15min 后测定波长420~700nm区段的吸光度,得知最大吸收在510 nm,因此选定波长为510 nm 。

2.4标准曲线的建立分别取0、1.0、2.0、
3.0、
4.0、
5.0ml标准溶液于25ml 容量瓶中,各加入0.6ml 5% NaNO2,摇匀,放置6min后加入1ml 10% A1(NO3)
3,放置6min,再加入10ml 4 % NaOH溶液,混匀,用60%乙醇稀释至刻度,静置15min,以试剂空白为参比于510nm处测其吸光度,以吸光度A纵坐标,芦丁的浓度c为横坐标,得到回归方程:A=11.83c+0.0169(r=0.9994),表明样品在4~20μg范围内线性关系良好。

2.5精密度考察精密移取标准溶液5份1ml,按“2.4”测定其吸光度,RSD为0.82 %(n=5),说明精密度良好。

2. 6重现性考察精密移取样品溶液5份1ml,按“2.4”测定其吸光度,RSD 为1.19%(n=5),说明重现性良好。

2.7回收率实验移取已知总黄酮含量的样品溶液1ml,加入标准溶液,按“2.4”测定吸光度,计算加样回收率。

结果平均回收率为101.26%,RSD为2.71%(n=5)。

2.8总黄酮含量测定准确吸取样品溶液1ml,共5份,测定样品溶液中总黄酮的浓度为0.114 mg/ml,RSD为0.15%(n=5),并通过计算得出山豆根中总黄酮含量为5.7mg/g 。

3讨论
天然产物有效成分含量较低,难于富集,分离难度大,不同的提取方法对不同药物有效成分的提取率存在差异。

黄酮的主要提取方法有:溶剂法(水提法、碱性稀醇和碱性水提、有机溶剂提取法)、超声波提取法、微波提取法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取分离法。

实验采用超声波法提取总黄酮,利用分光光度计测定了总黄酮的含量,该工艺简单无污染、成本较低,是一条理想的提取黄酮的途径。

参考文献
[1] 王君明,崔瑛.山豆根化学成分、药理作用及毒性研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(4):229-232.
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