组织病理切片制备流程
病理组织切片制作
实验四病理组织切片制作一、实验目的组织切片技术是病理学中不可缺少的一个组成部分。
通过实验，能够使学生了解和掌握病理组织切片的基本方法之一，即石蜡包埋的组织切片法。
二、实验原理根据病变及检查的要求，合理采集病料，经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋后进行切片，在进行染色得到结果。
固定是用化学药品把组织原来的结构保存下来，以便观察。
脱水是除去组织中的水分，以利于透明和浸蜡。
组织的透明是便于透蜡包埋。
包埋的是使石蜡透入组织内部，把软组织变为适当硬度的包埋块，以便切成薄片。
最后使用切片机，将包埋块中组织切成薄片。
三、主要仪器及试材已固定好病料，石蜡，手术刀，手术剪，镊子，脱水框，染色缸，梯度脱水酒精和透明剂一套，烘箱，切片机，毛笔，玻片，蛋白甘油，染色架，酒精灯，三角架，大烧杯，温度计，火柴，切片刀，记号笔或铅笔。
四、实验方法与步骤。
（一）固定采取的病理材料必须立即放入10％福尔马林固定液中。
（二）脱水组织经固定后，尚含有多量水分，而水与透明剂苯、石蜡根本不相融合。
必须先把组织中的水分除去。
但脱水剂必须是与水在任何比率下均能混合的液体，脱水剂常兼有硬化组织的作用。
最常用的脱水剂为酒精、丙酮等。
1．酒精沸点78．4℃，为最常用的脱水剂。
脱水能力强，并能使组织硬化，能较好地与二甲苯透明剂相混合。
最终结果表明，只要脱水环节处理好，都会得到好的切片。
脱水的程序为70％一80％一95％一100％。
各级酒精2—4小时，视材料的大小、厚薄而定。
100％酒精有硬化组织的作用，时间不宜太长，一般不超过3小时。
脑组织、脂肪组织或疏松结缔组织，脱水时间要适当延长。
2．丙酮沸点为56℃。
脱水作用比乙醇强，但对组织块的收缩较大，主要用于快速脱水或固定兼脱水。
脱水时间l一3小时左右。
（三）透明透明对组织有脱酒精及透明两种作用。
当组织中全部为透明剂占有时，光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明状态，此种现象称为透明，具有这种作用的试剂称为透明剂。
中药材病理切片实验流程
中药材病理切片实验流程中药材病理切片实验流程一般包括以下步骤：1. 材料准备：选择需要研究的中药材样本，并从中药市场或植物园等地采集样本。
将样本保持新鲜，并根据需要，根据不同部位（如根、茎、叶、果实）进行切割和清洗。
2. 组织固定：将样本组织固定在合适的固定液中，如10% 确定液或4% 福尔马林。
在室温下浸泡一定时间，通常为24小时以上，以确保组织固定。
3. 组织脱水：将固定的组织样本从固定液中取出，然后按照一定的醇浓度梯度（例如70%，80%，90%，95%，100%）进行脱水处理。
每个醇浓度通常持续15-30分钟。
4. 组织浸渍：将脱水后的组织样本用透明剂（如山梨醇和苯酚等）浸泡，在透明剂中浸泡一定时间以达到透明化的目的。
透明时间视样本的大小和硬度而定，通常为数小时至数天。
5. 组织包埋：将透明化的组织放置在熔蜡中，等待熔蜡凝固，形成包埋块。
此步骤有助于以后制备病理切片。
6. 切片处理：使用切片机将包埋块切割成合适的厚度（通常为3-5微米）的切片。
7. 切片染色：将蜡块切片上的组织片染色，以增强细胞和组织的对比度。
常见的染色方法包括经典的血液学染色（如伊红染色和嗜伊红染色）以及免疫组化染色等。
8. 制片封片：将染色后的切片放置在玻璃片上，并使用合适的封片剂将切片封装，以便保存和观察。
9. 显微镜观察：将封片放置在显微镜下，并使用合适的放大倍数来观察组织和细胞的结构和变化。
10. 图像和数据分析：利用数字图像设备获取切片图像，并使用图像处理和分析软件对图像进行分析和数据提取。
11. 结果解释和讨论：对观察到的结果进行解释和讨论，结合文献和病理知识进行对比和分析。
病理组织制片技术基本流程
病理组织制片技术基本流程病理组织制片技术是病理学中的一项重要技术，它通过将病理标本切片、染色和覆盖玻片，使得细胞和组织的形态结构能够被显微镜观察和分析。
这项技术在医学诊断、研究和教学中起到了关键作用。
下面将介绍病理组织制片技术的基本流程。
1. 标本采集与固定病理组织制片的第一步是标本采集与固定。
医生根据患者的病情，选择合适的组织或细胞标本进行采集。
常见的标本包括切除标本、活检标本等。
采集后，标本需要立即进行固定，以保持组织的形态结构和化学成分的稳定。
最常用的固定剂是10%的中性缓冲福尔马林溶液。
2. 组织处理与包埋固定后的标本需要进行组织处理与包埋。
首先，将固定的标本进行去除固定剂的处理，然后用乙醇逐渐脱水，最后用苯麻油进行透明处理。
透明处理后，标本需要被包埋在石蜡中，以便后续的切片操作。
3. 切片与染色石蜡包埋的标本需要进行切片与染色。
首先，使用组织切片机将石蜡块切割成薄片，通常厚度为4-6微米。
切片后，将切片浸泡在水中，使其展开。
然后，将切片依次浸泡在染色剂中，进行组织染色。
不同的染色剂可以突显不同的细胞和组织结构，例如血液常规染色、免疫组化染色等。
4. 脱脂与覆盖玻片染色后的切片需要进行脱脂与覆盖玻片。
首先，将染色后的切片依次浸泡在醇中，去除多余的染色剂。
然后，使用透明剂将切片与玻片粘结在一起，使其固定。
最后，将覆盖玻片放在切片上，使用压力将其压平，使切片与玻片紧密结合。
5. 干燥与封装覆盖玻片后的切片需要进行干燥与封装。
将覆盖玻片的切片放置在干燥箱中，通过温度和时间控制，将其彻底干燥。
干燥后，将切片放置在干燥剂中，以防止切片吸湿。
最后，将切片放入切片盒中，进行封装，以便长期保存和使用。
病理组织制片技术的基本流程包括标本采集与固定、组织处理与包埋、切片与染色、脱脂与覆盖玻片以及干燥与封装。
这一流程确保了病理标本的形态结构得以保留，并使其能够被显微镜观察和分析。
病理组织制片技术的应用广泛，对于疾病的诊断和治疗具有重要意义，同时也为病理学研究和教学提供了有力支撑。
组织病理切片的制作过程
组织病理切片的制作过程1.取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体(外科手术切除标本、活检标本、尸检标本)或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的U的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2. 0cmX2. OcmXO. 3cm,以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和LI的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1〜0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3〜0. 5cm,这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块：切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锂动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位：要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2.固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4〜20,但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为2. 0cmX2. OcmXO. 3cm o(2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。
病理切片的制作过程
1、7、1 修整组织将手术切取得乳腺肿瘤切成一个平整面，各组织块不宜太大，以便固定剂穿透与组织脱水等操作，通常以10 mm×10 mm×3mm或5mm×5mm×3mm为宜。
找到不同得部位切取2块，以备后用。
1、7、2 组织洗涤组织经修整后，组织中得福尔马林等必须冲洗干净，尤其就是含有重金属得物质存在。
因为残留在组织中得福尔马林，有得不利于染色，有得产生沉淀或结晶影响观察，所以组织修整后应冲洗12h左右。
1、7、3 组织脱水组织经洗涤后，组织中含有大量水分，由于水与石蜡不能互溶，所以必须将组织中得水分除去。
80%乙醇溶液：2h95%乙醇溶液:1h95%乙醇溶液:1h100%乙醇溶液:30min100%乙醇溶液:30min1、7、4 组织透明由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。
当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度得透明状态。
二甲苯Ⅰ：30min二甲苯Ⅱ：10min1、7、5 组织浸蜡浸蜡得目得就是除去组织中得透明剂（如二甲苯等），使石蜡渗透到组织内部达到饱与程度以便组织包埋。
浸蜡时间根据组织得透蜡时间较长，需3h左右。
浸蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在55℃左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。
石蜡Ⅰ：1h石蜡Ⅱ：1h。
石蜡Ⅲ：1h1、7、6 组织包埋将经过透蜡得组织连同熔化得石蜡，一起倒入容器内，然后立即投入冷水中，使其立刻凝固成蜡块得过程。
包埋时，将纸盒放在温箱旁边，用镊子夹取组织平放于纸盒底部，，再用温镊子轻轻拨动组织，从温箱中取出盛放纯石蜡得蜡杯，沿壁倒入包埋用得纸盒中，速度要慢。
待石蜡凝固（约30min）后放入冰箱保鲜层内以备后用。
包埋时应根据组织材料、切片厚度、气候条件等因素，选择不同熔点得石蜡，新得石蜡一般要熬顿几次，以免石蜡固定后有气泡，影响切片。
用于包埋得石蜡得熔点在50~60℃之间。
HE组织切片制备标准操作程序
HE组织切片制备标准操作程序一、Purpose 目的保证病理切片质量，以达到准确的病理诊断。
二、Scope范围石蜡包埋组织切片三、Reagents and instrument试剂，仪器苏木素、伊红、切片机、水浴箱。
四、Process工作流程（一）切片1、将切片刀安装在持刀座上；2、将蜡块固定于支持器上；3.、细心移动刀座或蜡块支持器，使蜡块与刀刃接近，旋紧刀座，观察蜡块面是否与刀座相平，如不平须调节支持器，使蜡块面与刀面平行；4、修块（粗切）：用右手匀速旋转切片机轮，修切蜡块表面至包埋其中的组织块全部切到。
修块粗切片的厚度为15-20微米（注意：对于医嘱再次深切片特别是在原切片中发现了有意义病变而进行的深切片应尽量少修块，以尽量好地获得有关病变的连续性）；5、调节切片厚度调节器（一般为2-4 微米），进行切片。
切出的蜡片应连续成带状，完整无缺，厚度适宜（3-5 微米）、均匀，无刀痕、颤痕、皱褶、开裂、缺损、松解等；6、以专用镊子轻轻夹取完整、无刀痕、厚薄均匀、干净的蜡片，放入漂片机的温水中（40-50℃左右），使切片全面展开；每切完一个蜡块后必须认真清理水面，不得遗留其它病例的组织碎片以免污染。
7、将蜡片附贴于处理过的载玻片上，蜡片应放在载玻片右2/3处的中央，留出载玻片左1/3的位置用于贴附标签；蜡片与载玻片之间无气泡；为防止蜡片滑落，蜡片的一角（远离组织的）可粘在载玻片边缘上；若一片载玻片上捞两片以上的蜡片，必须把蜡片均匀贴附在载玻片上，保持制片的美观。
8、必须立即在置放了蜡片的载玻片一端（待贴标签处），用铅笔准确清楚地标记其相应的病理号（包括次级号），外借白片，需在每张白片上注明对应的病理号。
9、将置放了蜡片的载玻片呈45度斜置片刻；待载玻上的水分流下后，将其插入专用的染色架中，最后置于恒温箱中烘烤（72℃左右，15分钟），然后即可进行染色。
10、切片注意事项（1）切片前蜡块要冷冻，这样容易切片（甲状腺、淋巴结及胃镜等特殊组织，必须控制冰冻时间）。
病理切片制作的基本流程
病理切片制作的基本流程英文回答：The basic process of preparing pathological slides involves several steps. First, the tissue sample or specimen is obtained, either through a biopsy or surgical resection. This sample is then fixed in a solution, typically formalin, to preserve its structure and prevent decay. After fixation, the tissue is dehydrated using a series of alcohol solutions of increasing concentration. This removes water from the tissue, making it easier to handle during subsequent steps.Next, the dehydrated tissue is embedded in a solid medium, such as paraffin wax. This is done to provide support and facilitate the cutting of thin sections. The tissue is placed in a mold and surrounded with liquid wax, which solidifies as it cools. Once the wax has hardened, the tissue block is ready for sectioning.Sectioning involves cutting thin slices of the tissue block using a microtome. The microtome allows for precise control over the thickness of the sections, typically ranging from 3 to 5 micrometers. These sections are then mounted onto glass slides and heated to melt the wax, allowing the tissue to adhere to the slide.After mounting, the sections are stained to enhance the visibility of different cellular components. There are various staining techniques available, such as hematoxylin and eosin (H&E) staining, which is commonly used to visualize nuclei and cytoplasm. Other special stains may be used to highlight specific structures or substances, depending on the type of tissue being examined.Once stained, the slides are coverslipped to protect the tissue and prevent contamination. A coverslip,typically made of glass, is placed over the stained section and secured with mounting medium. The slides are then ready for examination under a microscope.Pathologists use these prepared slides to analyze thetissue and make diagnoses. They examine the cellular structures and patterns, looking for abnormalities or signs of disease. The findings are recorded in a pathology report, which is then used to guide patient management andtreatment decisions.中文回答：制作病理切片的基本流程包括以下几个步骤。
病理组织切片的制作
病理组织切片的制作卢文丽吴中华方肇勤（2007/01/04）一、器材（按一小组，约4-6人）眼科镊：直无勾10cm 、弯无勾10cm各5把；组织镊；12.5cm 2把；眼科剪：直尖10cm 4把；解剖剪：cr/14，4把；普通双面刀片：10片/盒×1盒；染色架：5个；染色缸：1000ml，14-15个；切片盒：50片/盒×3盒或100片/盒×2盒；37度、60度恒温箱：各1个；磨砂载玻片：50片/盒×3盒；盖玻片：100片/盒×2盒；广口瓶：30ml或60ml×20个；滴管及配套吸头：4个；玻璃漏斗：φ90 3个；玻璃搅棒：2支普通粗孔大张滤纸：20张；φ90mm玻璃培养皿：4个；中号普通毛笔：2支；烧杯：500ml 、1000ml 各1个；量筒：100ml、500 ml、1000 ml各1个；组织切片机及配套刀片：4台；摊片用水浴锅：2台；生物切片石蜡：5盒，熔点：56-58℃；电子天平：1台；酒精灯：150ml，4台；脱水篮：1-2个；打火机、标签纸、铅笔各一，卷筒纸、乳胶手套、口罩、医用纱布足量。
二．试剂苦味酸（2.4.6-三硝基苯酚）：30g/瓶×1瓶；37%~40%福尔马林液：500ml/瓶×1瓶；冰醋酸：AR，500ml/瓶×1瓶；无水乙醇：AR，500ml/瓶×10瓶；二甲苯：AR，500ml/瓶×10瓶；hematoxylin苏木色素（苏木精）：10g/瓶×1瓶；酸性品红（曙红丫水溶）：25g/瓶×1瓶；碘酸钠：AR，500g/瓶×1瓶；柠檬酸：AR，500g/瓶×1瓶; 水合氯醛：AR，250g/瓶×1瓶;铵矾（ALNH4(SO4)2·12H2O）或钾矾（ALK(SO4)2·12H2O）：500g/瓶×1瓶蛋白甘油（甘油/鸡蛋清=1/1）：50ml中性树胶：100g/瓶×2瓶。
病理切片的流程范文
病理切片的流程范文病理切片是一种用于疾病诊断的重要方法，它通过将组织标本固定、处理、切片、染色和观察，从而得到组织结构的详细信息。
下面是病理切片的主要流程。
1.标本收集与固定：医生在病患进行手术或活检时，会取得病变组织标本。
标本收集应当严格遵循无菌操作原则，以保持标本的无污染状态。
收集到的组织标本需要立即放入含有适当的固定试剂的容器中，以防止组织腐败和细胞变性。
2.溶解和去水：收集的组织标本被放入一系列浓度不同的酒精中，以逐渐去除其中的水分。
此过程称为溶解和去水。
这一步通常需要一连串的酒精浓度渐变溶解过程，并配合组织处理机器进行多次处理。
3.渗透与包埋：当细胞内的水分被完全去除后，组织标本需要渗透和浸润在石蜡中，以增强其硬度和切片的稳定性。
标本首先被浸泡在组织处理机或真空滤波机中的低温石蜡溶液中，确保组织与石蜡完全接触。
然后，标本被浸入常温石蜡。
待组织，石蜡和溶剂之间的渗透平衡达到后，将标本置于标本夹中，加入液态石蜡，之后快速冷却或冷冻标本以完成固定。
4.切片：固定的组织标本被放入切片机中，使用特制的切片刀或刀片进行切割。
基本原理是标本切割面与刀片之间夹有细的临界介质，使切割更加精确。
切割的过程中，为了获取准备的切片，可以使用不同的切割模式、刀速和刀的旋转速度。
5.切片染色：切片得到后，需要进行染色以便观察细胞和组织结构。
常用的染色方法有血涂、朗格汉斯染色、文澜索尔法、肉眼观察染色法等。
这些染色方法可以突出显示细胞核、胞浆、组织结构和疾病所特有的变化。
6.显微镜观察与诊断：切片样本染色完成后，被放置在显微镜下进行观察和分析。
经验丰富的病理医生会通过观察细胞和组织结构，准确地诊断疾病类型和病情。
需要注意的是，以上流程是一个简单的概述，实际操作中可能会根据具体情况进行调整。
另外，不同的切片技术和方法也可能会在实际操作中进行选择和应用。
总之，病理切片作为一项重要的诊断方法，通过严格的操作和观察，能够为医生提供准确的组织结构和病变情况信息，为疾病诊断和治疗提供重要依据。
病理科组织制片ppt课件
对切片的厚度、均匀性和染色效果进行评估 ，确保其质量和一致性。
制片技术员培训
定期对制片技术员进行培训和考核，确保他 们掌握正确的制片技术和操作流程。
病理诊断准确性
通过对病理医生提供的诊断结果进行复核， 确保制片质量和病理诊断的准确性。
02
病理科组织制片技术
石蜡制片技术
石蜡制片技术是病理科最常用的制片 技术之一，其流程包括取材、固定、 脱水、透明、浸蜡和包埋等步骤。
石蜡制片技术的缺点在于制片过程较 为繁琐，需要耗费较多的时间和人力 。
石蜡制片技术的优点在于能够长期保 存组织，并且可以制作出较为美观的 切片。
冰冻切片技术
冰冻切片技术是一种快速制片 技术，适用于手术中需要快速 病理诊断的情况。
冰冻切片技术的优点在于制片 速度快，能够及时为临床提供 诊断意见。
冰冻切片技术的缺点在于制片 质量不如石蜡制片技术，容易 出现细胞皱缩、变形等问题。
诊断感染性疾病
病理科组织制片技术还可以用于诊断 感染性疾病，通过对感染组织的病理 学观察和分析，确定感染的病原体类 型，为临床医生选择合适的抗生素提 供依据。
在科研中的应用
探索疾病机制
病理科组织制片技术可以用于探索疾病的发病机制，通过对病变组织的形态学 观察和病理学分析，揭示疾病的发生、发展和转归过程，为疾病的预防和治疗 提供科学依据。
包埋
04 将脱水后的组织放入适当的包
埋剂中，使其硬化，以便于切 片。
切片
05 将硬化的组织切成薄片，通常
为5-10微米厚。
染色
06 将切片进行染色，以便在显微
镜下观察时能够更好地分辨不 同的组织和细胞成分。
组织制片的质量控制
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组织病理切片制备流程
组织病理切片按照制备方法的不同分为石蜡切片、冰冻切片和振动切片。
石蜡切片制备过程包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般从取材固定到封片制成玻片标本需要数日。
冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
制作过程不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等手续，避免组织细胞中可溶性物质的分解，并能保存细胞形态的原。
与石蜡切片相比，在抗原完整性的保存上有其不可取代的优势，尤其在免疫组化方面。
因此冷冻切片也是脂肪染色、酶组织化学染色以及某些免疫组织化学染色和原位分子杂交的理想制片方法。
不足是组织细胞的形态略逊于石蜡切片。
振动切片在文献中讨论较少。
制备方法是采用的专用振动切片机，利用刀片振动原理，将新鲜的活体组织，直接固定在切片槽中切片。
该方法能保持样品活性和细胞良好形态，给免疫细胞化学研究及脊髓和脑薄片神经生物学研究提供了良好条件，适合做组织电生理学等研究。
不同切片方法由于制作的工艺流程不同，所需的仪器设备和工具有差别。
一、石蜡切片的制作
根据文献报道石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
1.固定
用适当的固定液浸渍新鲜材料，凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，使组织硬化，尽可能保持活体时的结构。
固定时间从1小时至数天，通常为数小时至24小时。
2.洗涤与脱水
组织在固定后要把渗入里面的固定液洗去，否则留在组织中的固定液有的会妨碍染色，有的会产生沉淀或结晶。
固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不脱尽，苯类不能浸入。
因此，在透明、浸蜡前必须进行脱水。
脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入。
常用用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。
脱水步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。
3.透明
组织脱水后，因乙醇不溶于石蜡，为使石蜡能浸入组织块，必须经过一种既能与酒精相混合，又能溶解石蜡的溶剂的替代过程，通过这种溶剂的媒介作用替换出组织内的酒精，而
达到石蜡浸入组织块的目的。
材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。
目前最好的透明剂是二甲苯。
通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1～2小时，再转入纯透明剂中浸渍。
4.浸蜡与包埋
组织透明后，放入熔化的石蜡内浸渍，使石蜡渗入组织同时取代组织内的二甲苯，这个过程称浸蜡。
浸蜡用的石蜡熔点在56℃，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行。
将熔化好的石蜡倒入包埋框，用加温的镊子将浸蜡后的组织材料块切面朝下放入，待蜡液表层凝固即迅速冷却，完全凝固后即做成含有组织块的蜡块。
5.切片
包埋好的蜡块用刀片修整蜡块成方形或者长方形，在切片机上切成一片接着一片的4~7um的蜡带，用毛笔轻轻托起放在纸上。
6. 展片、捞片和烤片
展片：用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在40～45℃的水面上，借水的张力和水的温度，将略皱的蜡带自然展平。
捞片：待切片在恒温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中1/3和下1/3的中间，倾去载玻片上的余水。
烤片：一般在60℃的温箱内烤片0.5～1小时左右，脱去溶化组织间隙的石蜡。
7.切片脱蜡及水化
干燥后的切片需脱蜡及水化才能在水溶性染液中进行染色。
如果脱蜡不干净，切片不易着色或着色不匀，脱蜡用的二甲苯要经常更换因此。
因此H.E染色前还需用二甲苯脱蜡，再逐级经梯度酒精脱苯、直至蒸馏水复水。
8.染色
苏木精（Hematoxylin）和伊红（曙红，Eosin）染色法是组织学标本及病理切片标本的常规染色，简称HE染色。
H.E染色后还需切片脱水、透明、封固处理。
所需仪器设备：全自动染色机
9.切片脱水、透明和封片
染色后的切片尚不能在显微镜下观察，需经从低浓度到高浓度的酒精梯度脱水、二甲苯透明。
取出切片，擦去多余二甲苯，滴一滴中性树胶，将盖玻片复盖于切片上。