微生物试验理论知识考试复习题(含答案、自整理)

1.细菌简单染色的原理是什么？

在中性、碱性或弱酸性的溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料电离后，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分易与细菌结合使细菌着色。

2.细菌简单染色的步骤？

①涂片

②干燥

③固定

④染色

⑤水洗

⑥干燥

3.革兰氏染色的原理是什么？应该注意哪些事项？

革兰氏阳性菌细胞壁主要结构是肽聚糖，在乙醇洗脱时肽聚糖网孔会收缩，结晶紫和碘复合物被留在细胞壁内，呈现紫色；革兰氏阴性菌细胞壁中类脂较多，在乙醇洗脱时类脂溶解，出现较大缝隙，复合物被洗脱，之后再被番红染成红色。

注意事项：①乙醇脱色时间不宜太长，否则容易出现假阴性，也不宜太短，否则会出现假阳性。

②要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；涂片不宜过厚，以免脱色不完

全造成假阳性；火焰固定不宜过热。

4.如何正确鉴定一株未知菌株的革兰氏染色反应？请简述实验方法。

①找两株已知的而且和未知菌种形态不同的革兰氏阴性菌和革兰氏阴性菌，分别和未

知菌株做混合涂片。干燥。固定。

②初染。

③媒染。

④脱色。

⑤复染。

⑥镜检。当已知的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌正确显色时，观察未知菌什么颜色。

5.简述革兰氏染色的实验步骤。

①制片。取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。

②初染。滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2min，水洗。

③媒染。用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。

④脱色。用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管滴加95%的

乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。

⑤复染。用番红染液复染约2min，水洗。

⑥镜检。干燥后，用油镜观察。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的

为革兰氏阴性菌。

6.影响细菌革兰氏染色结果的因素有哪些？

实验中常出现假阳性或假阴性的结果。

假阳性主要是由于脱色不完全，可能是由于涂片过厚，或者是结晶紫染色过度，或乙醇洗脱时间太短；油镜镜头不能压到玻片标本；

假阴性可能是因为细胞固定过度，造成细胞壁通透性的改变；或者细胞培养时间太长，可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶，也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果；

或者乙醇脱色时间太长。

7.显微镜油镜观察时为什么载玻片和镜头之间要滴加香柏油？使用时应该注意哪些事项。

香柏油的作用是增大折光率，也就是增大显微镜的分辨率。

注意事项：使用前擦镜头，防止上次实验的污染；先用低倍镜观察找到物体再用高倍镜观察；用完要擦掉香柏油。

8.芽孢染色的原理是什么？

芽孢染色法利用芽孢既难以染色而一旦染色后又难以脱色的特点，用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条件下，延长染色时间，使染料不仅进入菌体也进入芽孢，当用对比度大的复染剂番红复染后，芽孢仍保留初染剂的绿色，菌体被染成复染剂的红色。

9.用简单染色能否观察到细菌的芽孢？为什么？

简单染色法观察到的芽孢杆菌是紫色的，芽孢是透明的。芽孢染色后芽孢杆菌是红色的，芽孢是绿色的。因为细菌的芽孢有厚而致密的壁，透性低，不易着色。

10.放线菌的主要形态特征有哪些？镜检时如何区分放线菌的基内菌丝及气生菌丝？

放线菌通常由发达的菌丝体组成，菌丝直径为0.2-1.2μm。一部分长在培养基内，一般没有横隔，起固定和吸收养分的作用，称为基内菌丝或营养菌丝；当基内菌丝发育到一定阶段，可向空中伸展形成气生菌丝。

镜检时，气生菌丝颜色较深，且比基内菌丝粗两倍左右。

11.观察放线菌形态特征的方法有哪些？各有什么优缺点？

插片法和印片法

插片法优点：不会破坏细胞及菌丝体形态；有利于对不同生长时期的放线菌形态进行观察；可观察到放线菌在自然生长状态下的形态特征。

印片法优点：可观察到孢子丝的形态特征。

12.青霉、曲霉、根霉各有什么形态特征？

青霉：菌丝有隔，，分生孢子梗有隔膜，顶端形成扫帚状分生孢子头。

曲霉：菌丝有隔，分生孢子梗顶端的分生孢子头呈杨梅状的球形。

根霉：菌丝无隔，菌丝特化形成假根，孢子梗顶端膨大形成圆球形孢子囊。

13.观察霉菌形态特征的方法有哪些？各有什么优缺点？

载片培养法和水压片法

载片观察法：可以研究丝状真菌生长繁殖全过程；不会因为观察而污染标本片。可以制作成长期标本。

水压片法：制作简单，但不能保存。

14.酵母菌的形态特征？以酿酒酵母为例进行简述。

酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1~5微米或5~20微米。酵母菌

无鞭毛，不能游动。酵母菌具有典型的真核细胞结构，有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微体。

15.如何测量酵母菌的细胞大小？请简述主要实验步骤。

①目镜测微尺的标定

A．放置目镜测微尺，取出接目镜，旋开接目镜透镜，将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜桶内的隔板上，旋上接目镜透镜，将此接目镜插入镜筒。

B．放置镜台测微尺将镜台测微尺，刻度面朝上。

C．校正目镜测微尺，先用低倍镜观察，对准焦距，看清镜台测微尺后，转动接目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微

尺和镜台测微尺某一区间的两刻度线重合，计数出各自所占格数。按比例换算

出目镜测微尺一格的长度。

②菌体大小的测定

移去镜台测微尺，换上酵母菌染色玻片，校正焦距使菌体清晰，转动目镜测微尺，测得酵母菌的长宽各占几小格。

③整理仪器

16.血细胞计数板计数细胞的原理是什么？它有什么优缺点？

原理：将适当稀释的菌悬液放在血细胞计数板载玻片与盖玻片之间的计数室内，在显微镜下进行计数，由于计数室容积一定，所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目计算成单位体积的微生物总数目。

优点：在显微镜下直接进行测定，方便快捷并且仪器损耗较小。

缺点：计数通常计得的是活菌体和死菌体的总和（有时还有微小杂物），这样得出结果往往偏高，因此此法适用于体积较大的单细胞微生物的计数。

17.采用血细胞计数板的误差来自哪些方面？应如何减小误差？

①仪器误差：选择技术室不破碎，划线清晰准确的血细胞计数板，且盖板片应该光整

不破损。

②菌液、仪器等材料处理不当造成误差：仪器应该干燥清洁，菌液稀释液要新鲜，无

污染杂质。

③读数不当造成误差：计数时用计数器帮忙计数，且用两个室计数求得平均值。

④细胞分布不均匀造成误差：取菌液时应该尽量摇匀，操作规范。

18.微生物计数的方法有哪些？各有什么优缺点？

血球计数板法、稀释涂布平板法、显微镜直接计数法、比浊法

血球计数板法：缺：不能区分死菌和活菌。优：在显微镜下直接进行测定，方便快捷并且仪器损耗较小。

稀释涂布平板法：缺：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。优：计数轻松

显微镜直接计数法：计数难度较大。

比浊法：要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。

19.配制培养基时，应注意哪些事项？

①根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基；

②注意各种营养物质的浓度及合适配比，保持合适的渗透压；

③培养基的pH要合适；

④在成分满足微生物培养条件的前提下，尽量选择价格低廉、资源丰富的材料；

⑤培养基配置后要高压蒸汽灭菌杀死。

20.消毒与灭菌的方法有哪些？

1.干热灭菌：灼烧法、热空气灭菌法

2.湿热灭菌：高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、间歇常压蒸汽灭菌法、巴氏灭菌法

3.紫外线灭菌、过滤除菌法等等

21.高压蒸汽灭菌的原理是什么？

随着气体压强变大，水的沸点会升高，可以杀死所有微生物以及芽孢。

22.简述高压蒸汽灭菌锅的使用操作步骤。

这个应该不考。。。。。。实验报告书里也没有，不同锅的操作也不一样。

23.高压蒸汽灭菌时，要注意什么？

①灭菌锅密闭前，应将冷空气充分排空。

②灭菌完毕后减压不要过猛，压力表回归“0”位后才可打开盖或门。

③待灭菌的物品放置不宜过紧。

24.干热灭菌的原理是什么？

干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

25.高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌温度低时间短？

一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量；四是一般活性菌都不具备耐高压的特性，所以，有的活性菌在高温下短时间内可以存活，而在高压下则肌体会被迅速破坏。

26.高压蒸汽灭菌时，为什么要将灭菌锅内的冷空气排除干净？

空气为热不良导体,在灭菌过程中其温度会严重迟滞,造成灭菌局部失败。

27.请简述培养基配制中棉花塞牛皮纸的作用？移液管吸口处塞上脱脂棉的作用是什么？

牛皮纸：防止棉花塞被蒸汽弄湿。

棉花塞：微生物培养时达到通气效果，同时防止空气中的杂菌进入。

脱脂棉：避免使用时将杂菌吹入其中或将微生物吸出管外。

28.分离纯化微生物的方法有哪些？各有什么特点？

稀释分离、划线分离

稀释分离：稀释到合适浓度使微生物在平板上形成单菌落。

划线分离：随着每次划线，携带的菌数不断减少，最后出现单菌落。

29.如何进行活菌计数？要注意什么？

暂时没找到。

30.如何确定平板上某单菌落是否为纯培养？试简述主要的实验方法。

通过观察菌落特征；单个菌落再次划线分离。

纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。

31.什么是无菌操作？

用于防止微生物进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作。

32.透明圈法测定淀粉酶活性有哪些优缺点？

优点：灵敏度高，不需要特殊设备。

缺点：误差可能偏大。

33.糖发酵实验的原理是什么？

加入溴甲酚紫（pH6.8以上呈紫色，pH5.2一下呈黄色），因此当微生物发酵糖产酸时会由紫变黄。气体产生用糖发酵管中倒立的德汉氏小管中有无气泡来指示。

34.乙酰甲基甲醇试验（VP 试验）的原理是什么？

某些细菌利用葡萄糖会产生乙酰甲基甲醇，在碱性条件下，被空气中的氧气氧化成二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用，生成红色化合物。加入α-萘酚可促进反应的出现。

35.甲基红试验（MR 试验）的原理是什么？

细菌代谢糖产酸过程中培养基会变酸，使加入的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色。

36.乙酰甲基甲醇试验与甲基红试验有何异同点？

甲基红实验的最初作用物是由葡萄糖产生的有机酸，VP反应实验的最初作用物是由葡萄糖产生的非酸性或中性末端产物，两个反应的最终产物都呈现红色，但产物不同，甲基红试验是甲基红指示剂呈现红色，而VP试验是二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用生成红色化合物

37.某同学在实验中因操作不慎，将保藏的Bacillus subtilis 菌种被E. coli 污染，请问他应

该如何将Bacillus subtilis 进行纯化？

先将被污染的保藏菌种斜面活化，再取被污染的菌种进行划线分离操作，找形成的单菌落，进行葡萄糖发酵试验，产酸产气的是大肠杆菌，产酸不产气的是枯草芽孢杆菌。