遗传学实验 (1)

实验一细胞凝集反应（2学时验证性实验）

一、实验目的

1、观察血细胞的凝集现象；

2、掌握凝集素促使细胞凝集的原理。

二、实验原理

细胞质膜是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构，蛋白质和脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白和糖脂分子，糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被（又称为糖萼）。许多研究结果表明：细胞间的分子识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被（分枝状寡糖链）有关。凝集素能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”，从而达到细胞凝集的效果。

凝集素（1ectin）是一类含糖的（少数凝集素例外）并能与糖进行专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素促使细胞凝集主要是由于它能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”的结果，且加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应。

三、实验材料及用品

⏹实验材料：

1．土豆块茎。

2.2％的红细胞：以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），用生理盐水洗5次，每次2000 r/min，离心5 min，最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2％红细胞悬液

⏹器材：显微镜、托盘天平、载玻片若干、滴管2支、离心管2支。

⏹试剂：

PBS缓冲液：称取NaCl 7.2g、NazHP04 1.48g、KH2P04 0.43g、加蒸馏水，定容至l000 mL，调pH值到7.2。

Alsever 溶液

葡萄糖 2.05g

柠檬酸钠(Na9C6H5O7.2H2O) 0.89g

柠檬酸（C6H 6O7.H2O） 0.05g

氯化钠 0.42g

蒸馏水 100ml

调PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min，置4℃冰箱保存。

四、实验步骤

①称取土豆去皮块茎2g

②加10 mL PBS缓冲液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素）

③载玻片上滴一滴土豆凝集素

④再滴一滴2％红细胞液，充分混匀

⑤静置20 min

⑥低倍显微镜下观察血球凝集现象

⑦以PBS液加2％血细胞悬液作为对照实验

五、实验作业

1．绘制简图，表示血细胞的凝集过程；

2．图示血细胞凝集的原理。

实验二有丝分裂制片技术和显微观察（2学时验证性实验）

与实验3二选一

一、实验目的

通过对植物组织的取材、预处理、解离、染色、压片等制片步骤的学习，掌握植物制片技术，奠定细胞遗传学的研究技术；通过对植物根尖细胞的观察，掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。

二、实验原理

有丝分裂是植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，使子细胞和母细胞的遗传组成一样，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，常进行着剧烈的细胞有丝分裂。在细胞分裂的适当（分裂旺盛期）时候取材，进行预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，使细胞、染色体分散，便于在显微镜下观察染色体的形态特征和变化特点及进行染色体计数。

三、实验材料及用品

⏹材料：蒜瓣

⏹用具：显微镜、剪刀（或刀片）、镊子、载玻片、盖玻片、滤纸、铅笔、玻璃皿。

⏹药品及试剂：解离液、改良苯酚

解离液：质量分数为15％的盐酸+体积分数为95％酒精（1：1）

15g盐酸，26g水配41ml+ 41ml 95%的酒精

染色液：改良苯酚

甲液：3克碱性品红，溶于70％酒精100ml（可长期保存），

乙液：甲液10ml，加入5％苯酚（石炭酸）水溶液90ml（限2周内使用），染色液母液：B液45ml，37％甲醛6ml，冰醋酸6ml。

改良卡宝品红染色液：染色液母液10ml，

45％醋酸90ml，

山梨醇1克

配制后立即使用着色能力差，两周后着色能力增强。

四、实验步骤

㈠材料准备：

在实验课前2~3天将蒜瓣置于盛有清水的小烧杯上室温下培养，待根长1~2cm时，可取生长健壮的根尖制片观察。

㈡解离:

根尖、茎尖等体细胞需经处理，除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，才便于压片。这种处理过程称为解离，解离时间的长短依植物材料和解离液的不同而不同。时间短细胞不易压散，时间过长，细胞被压破，且影响染色效果。

方法：剪取蒜瓣的根尖2mm～3mm，立即放入盛有解离液的玻璃皿中，在室温下解离3min～5min后取出根尖。

㈢漂洗:

待根尖酥软后，用镊子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10min。

㈣染色:

把蒜瓣根尖放进盛有改良苯酚的玻璃皿中，染色3min～5min。

㈤制片:

用镊子将这段蒜瓣根采取出来，放在载玻片上，加一滴清水，并且用镊子尖把蒜瓣根尖弄碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。然后，用拇指轻轻地压盖玻片，这样可以使细胞分散开来。

注意：制片观察时尽量将所漂洗过的根尖磨碎分散开来！因为只有这样才能清晰观察！

㈥显微观察

制备好的细胞学片子，置于显微镜的载物台上，先用低倍镜（10×10）调焦观察，寻找具有分裂相的细胞后，再转换到高倍镜（10×40）下观察。

七、实验作业

1. 制作细胞有丝分裂各时期图象片子1张

2. 描绘所观察到的细胞有丝分裂过程中各时期的图象，并简要说明染色体的行为特征。

实验三X－染色质的观察（2学时验证性实验）

与实验二二选一

一、实验目的：

掌握鉴别X－染色质的简易方法，识别其形态特征及所在部位。

二、实验原理：

1.概念：人们已知的基因确实有不可逆转的失活或丢失，受永久失活所调节的例子涉及到一个完整的染色体，即X－染色质，失活的染色质叫巴氏小体。

在雌性哺乳动物中，包括人类，女性口腔粘膜细胞中约30%-50%（男性0-2%）的细胞中，XX染色体其中一条就是失活的（但在性细胞中这个染色体则不失活，如果也是失活的，那大家可以想象会发生什么样严重后果）,表现为浓固缩状态。

2.发生的时期：这种现象发生在胚胎早期，染色体失活是随机的，某些细胞中是父性X－染色体失活，而有些细胞则是母性X－染色体失活，这些细胞能产生同期相同X－染色体失活的细胞，这样一个正常女性就是具有两种X－染色体组织类型的嵌合体。巴氏小体在细胞周期中比有活性的X－染色体复制要晚。