亲水作用色谱____郭志谋

HILIC色谱柱介绍

亲水作用色谱（HILIC）是近年来色谱领域研究的热点之一。本文简介了HILIC的起源、定义、分离特点；比较了HILIC和反相色谱（RPLC）的选择特性，讨论了HILIC与质谱联用技术的特点，并对其使用中的注意事项进行了总结。 1.HILIC的概念亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS）的灵敏度。 2.HILIC的分离机制 HILIC的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换（3）偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。 3.HILIC影响保留的主要因素普遍认为HILIC保留行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例，例如乙腈的含量的增加会显著增加样品的保留因子。在HILIC分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强为：四氢呋喃<丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水,流动相中水是最强的洗脱溶剂。一般采用乙腈-水体系作为流动相，其中水相的比例为5%-40%以保证其显著的亲水作用。如图1所示，将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性的减小，待测物在柱上的保留就会增强。 Figure1.HILICretentionasafunctionofpolarmodifier.100mmlengthACQUITYUPLC BEHHILICcolumn.Peaks:1=methacrylicacid,2=cytosine,3=nortriptyline,4= nicotinicacid. 4.HILIC与RP-HPLC的比较传统的反相色谱（RPLC）对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留，然而高比例的水相会导致一系列问题，比如固定相的反浸润和ESI-MS灵敏度的下降。

亲水作用色谱柱的基本性能评价及应用举例

新型亲水作用色谱柱TSKgel NH 2-100 3μm TSK l NH1003 的基本性能评价及应用举例东曹达（上海）贸易有限公司技术服务中心东曹公司生命科学事业部

亲水作用色谱模式的特点亲水作用色谱(HILIC)的分离原理利用样品在流动相和固定相中的分配平衡，样品中的极性官能团与固定相表面进行亲水相互作用特点 1)固定相一般为极性官能团（如氨基、酰胺基、羟基等）修饰硅胶或聚合物固定相般为极性官能团（如氨基酰胺基羟基等）修饰硅胶或聚合物2)流动相类似反相的流动相，一般使用比固定相极性低的溶液。如：乙腈/水≥7/3等 3)极性化合物保留强，适合多肽、糖、核酸等低分子、高极性化合物的分离极性化合物保留强适合多肽糖核酸等低分子高极性化合物的分离4)疏水性杂质不积累，可以最大程度避免色谱柱损坏。

东曹HILIC色谱柱１．TSKgel Amide80（5μm，3μm） TSKgel Amide-80 －硅胶基质（酰胺基型）HILIC色谱柱－极性化合物保留强、分离性能强，但还原糖分离发生峰分裂现象２．TSKgel NH2-60(5μm) －硅胶基质（氨基型）HILIC色谱柱－适合糖类化合物分离，但化学稳定性不高适合糖类化合物分离但化学稳定性不高新型HILIC色谱柱：TSKgel NH2-100 3 μm －氨基型色谱柱耐久性大幅度提高－与Amide-80具有相同或更高的保留性能和更高的分离性能

TSKgel NH-1003μm TSKgel NH2-100 3μm色谱柱及填料基质硅胶平均粒径3μm 孔径10nm 比表面积450m2/g 表面官能团氨基封端处理TMS 封端色谱柱 2.0mm I.D. x 15cm 4.6mm I.D. x 15cm 保护柱 2.0mm I.D. x 1.0cm 3.2mm I.D. x 1.5cm

亲水作用(Hilic)色谱简介,以及和正相色谱相、反相色谱比较

亲水作用（H i l i c）色谱，有时被称为“含水正相色谱”，有时又被称为“反反相色谱”，简单来说，是极性的固定相和极性的流动相组成，参考表1，在固定相方面，看似和正相色谱一样，那么，同一款色谱柱是否既可以用于正相色谱，又可以用于H i l i c色谱？在流动相方面，和反相色谱接近，那两种模式保留行为和流动相对保留的影响规律有什么差异？你对H i l i c色谱是否也疑惑重重？接下来让我们一起揭开亲水作用（H i l i c）色谱的神秘面纱吧。表1 反相、正相、Hilic色谱对比一、Hilic简介 1.1流动相在大多数的Hilic分离中，采用的流动相为含有少量水/缓冲液与有机相混合（典型的是乙腈），水的比例为3%-40%之间。水的比例不低于3%是由于Hilic色谱的保留机理决定的，普遍认为Hilic色谱流动相中的水会被吸附到极性固定相的表面形成水膜，然后分析物在水膜和流动相之间进行液液分配作用，加上极性官能团和固定相之间的氢键作用力，离子官能团之间的静电作用力等，实现被分析物的保留。水膜的作用非常重要，所以Hilic流动相中至少含有3%的水。当水的比例大于40%时，保

留一般很弱（k≈0）。 1.2固定相应用于Hilic色谱的固定相有：纯硅胶柱、氨基柱、二醇基柱、酰胺基柱等。纯硅胶柱有固定相不易流失的优点，在使用CAD、ELSD和LC-MS检测器时，最受欢迎；氨基柱，在Hilic 色谱中的应用，特别适合碳水化合物（糖类）分离；二醇基柱，亲水性很好，可以提供不同的选择性。二、Hilic和正相色谱相比 2.1固定相的区别同样是Silica，NH2，Diol柱，与用于正相色谱中的色谱柱不同，专为Hilic色谱设计的色谱柱，可以用于水/有机物的流动相中，换句话说，Hilic色谱对固定相的耐水性要求更高，否则会因固定相的水解，出现基线噪音大、色谱柱寿命短等问题。所以用于正相色谱中的色谱柱，不一定能用于Hilic色谱。而适用于Hilic色谱的色谱柱，可以用于正相色谱中。典型案例： Athena NH2-RP用于糖类分析，CAD检测时，能改善基线噪音。而国产A/C品牌、进口B品牌氨基柱由于键合相水解，基线噪音大大增加。图1 几款氨基柱流失性对比

色谱分析习题及答案(绝对精华)

色谱分析综合体填空： 1. 氢火焰离子化检测器和热导池检测器分别属于_质量型__和___温度__型检测器。气相色谱仪的心脏是_色谱柱___。 2. 固定液一般是按照__相似相溶___原理选择；在用极性固定液分离极性组分时，分子间作用力主要是__诱导力____，极性愈大，保留时间就愈___长__。 3. 固定液通常是高沸点的有机化合物，这主要是为了保证固定液在使用温度下有____较好的热稳定性____，防止___发生不可逆的化学反应____。 5. 与填充柱相比，毛细管色谱柱的相比β较大，有利于实现快速分析。但其柱容量_较小_。 6. 在HPLC仪中，为了克服流动相流经色谱柱时受到的阻力，要安装_耐高压的六通阀___。 7. 气相色谱分析中，载气仅起输送作用；而液相色谱分析中，流动相还要直接参加__实际的分配过程__，要想提高高效液相色谱的柱效，最有效的途径是__使用小粒径填料_。 8. 欲分离位置异构体化合物，宜采用的高效液相色谱的分离模式是__梯度洗脱___。 9、色谱法中，将填入玻璃管内静止不动的一相称为固定相，自上而下运动的一相称为流动相，装有固定相的柱子称为色谱柱。 10、液相色谱检测器一般可用紫外可见分光光度检测器，荧光检测器；气相色谱检测器可用热导检测器，氢火焰离子检测器，电子俘获检测器等。色谱学分析基础： 1、色谱塔板理论的假设？答、(1) 在每一个平衡过程间隔内,平衡可以迅速达到；(2) 将载气看作成脉动（间歇）过程；(3) 试样沿色谱柱方向的扩散可忽略； (4) 每次分配的分配系数相同。(5)所有的物质在开始时全部进入零号塔板 2、色谱定性的方法都有哪些？答、(1) 用保留时间定性(2) 用相对值保留定性(3) 用保留指数定性(4)用化学反应配合色谱定性 (5)用不同类型的检测器定性⑹色谱和各种光谱或波谱联用 3、内标法定量分析时，内标物选择应满足那些条件？答：①试样中不含有该物质②与被测组分性质比较接近③不与试样发生化学反应④出峰位置应位于被测组分接近，且无组分峰影响 4、色谱分析中，固定相的选择原则是什么？固定相的选择：气－液色谱，应根据“相似相溶”的原则 5、色谱定量分析中为什么要用校正因子？在什么情况下可以不用? 答：各种化合物在不同的检测器上都有不同的应答值，所以尽管往色谱仪中注入相同质量的物质，但得到峰面积却不一样，因此峰面积定量时就必须把由色谱仪上得到的峰面积乘上一个系数，得到此成分的质量，在实际分析中，常用某物质做标准，得到一个相对的校正系数，就叫‘相对校正因子’ 试样中不是所有组分 6、总结色谱法的优点。答：色谱法特点（1）分离效率高（2）灵敏度高（3）分析速度快（4）应用范围广⑸样品用量少⑹分离和测定一次完成⑺易于自动化，可在工业流程中使用 7、色谱流出曲线可解决的问题有哪些？ 8、根据你所学知识，填写下表。色谱分析法基本原理应用领域分析对象缺点气相色谱法液相色谱法气相色谱 1. 气相色谱的基本设备包括那几部分,各有什么作用? 载气系统去除载气中的水、有机物等杂质进样装置：色谱柱：色谱仪的核心部件检测系统 2．试以塔极高度H做指标讨论气相色谱操作条件的选择。 3. 试述速率方程式中A、B、C三项的物理意义。答：A、涡流扩散项B、纵向扩散项C、传质阻力项 4. 为什么可用分辨率R作为色谱柱的总分离效能指标。 5. 能否根据理论塔板数来判断分离的可能性？为什么？ 6. 对载体和固定液的要求分别是什么? 答：载体要求:①具有化学惰性②好的热稳定性③有一定的机械强度④有适当的比表面，表面无深沟，以便是固定液成为均匀的薄膜，要有较大的空隙率，以便减小柱压降。对固定液的要求：应对被分离试样中的各组分具有不同的溶解能力，较好的热稳定性，并且不与被分离组分发生不可逆的化学反应。 7. 试比较红色担体和白色担体的性能,它们各使用在哪些方面? 答；红色担体适宜分析非极性化合物；白色单体适宜分析极性化合物； 8. 固定液可分为哪几类？为什么这样划分？如何选择固定液。答：固定液按分子作用力分为①不易极化非极性固定液②易极化非极性固定液③难成氢键的极性固定液④受质子的极性固定液按极性分类用典型化合物在固定液上的保留性能来表征固定液的选择原则：①“相似相容”原则，②固定液和被分离物分子之间的特殊作用力，③利用混合物固定液④利用协同效应选择

Venusil HILIC丙基酰胺亲水作用液相色谱柱

Venusil HILIC丙基酰胺亲水作用液相色谱柱，键合相为中性的酰胺基团。在处理强极性化合物方面，Venusil HILIC色谱柱比反相C18色谱柱表现出更大的优势，利用亲水作用色谱原理，可保留或分离强极性、水溶性碱性有机化合物。 HILIC是一种亲水作用色谱模式，其洗脱是以化合物亲水性/极性增加的次序排列，典型的流动相是乙腈（40%--97%）－水（或挥发性缓冲盐），所以HILIC色谱具有和反相色谱互补的选择性，同时它可以使用更高挥发性的流动相，增加了HILIC色谱的LC/MS分析灵敏度，降低了分离的压力。同时HILIC色谱摒弃了离子对试剂，极大的方便了制备色谱方法的开发。Venusil HILIC色谱柱与传统的氨基柱和硅胶柱相比，Venusil HILIC色谱柱具有更好的重现性和寿命。Venusil HILIC是是替代氨基柱和硅胶柱的最佳选择。硅胶纯度>99.999%；pH适用范围2.0-8.0；孔径100? 水溶性维生素分析（与硅胶柱比较）另外，Venusil HILIC 由于其出色的亲水性用于测益母草中的盐酸水苏碱已经被中国药典所收录。从化学结构上看，盐酸益母草碱和盐酸水苏碱由于含有较多的极性基团（-OH、-NH2、-COOH）和孤对电子，水溶性特别强，因此普通的C18反相色谱柱已不能满足此类化合物的分析要求，最重要的原因即亲水性成分在C18柱上没有保留。而丙基酰胺键合硅胶（HILIC)克服了传统正相色谱柱在水相条件下不稳定的缺点,其常使用流动相是和反相色谱相同的水相缓冲液(< 40%)及有机溶剂,但是其梯度条件通常是初始为高比例有机相，逐步加大水相含量;极性丙基酰胺键合硅胶的HILIC色谱柱在反相条件下，可以有效的保留极性化合物，是一种崭新的极性化合物HPLC分离解决方式. 可用于奶粉中双氰胺检测！

HILIC色谱柱介绍教学内容

H I L I C色谱柱介绍

亲水作用色谱（HILIC）是近年来色谱领域研究的热点之一。本文简介了HILIC 的起源、定义、分离特点；比较了HILIC和反相色谱（RPLC）的选择特性，讨论了HILIC与质谱联用技术的特点，并对其使用中的注意事项进行了总结。 1. HILIC的概念亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS）的灵敏度。 2. HILIC的分离机制 HILIC的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换（3）偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。 3.HILIC影响保留的主要因素普遍认为HILIC保留行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例，例如乙腈的含量的增加会显著增加样品的保留因子。在HILIC分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强为：四氢呋喃<丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水, 流动相中水是最强的洗脱溶剂。一般采用乙腈-水体系作为流动相，其中水相的比例为5%-40%以保证其显著的亲水作用。如图1所示，将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性的减小，待测物在柱上的保留就会增强。

色谱在药物分析方面的应用

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 色谱在药物分析方面的应用色谱在药物分析方面的最新研究进展张鹏鹏，王凌云，张斌浩(浙江工业大学化材学院工业催化)摘要：现在药学的迅速发展促进针对药物及其代谢产物在过程的不断深入研究中，建立了许多新的、巧妙、精确而有快速的色谱分析方法。包括亲水作用色谱固定相在药分离中的应用，薄层色谱法在药物分析中的应用，液相色谱串联质谱法，脂质体电动色谱。这些方法的诞生使得当代生物医学与中医学理论能够兼容。本文综述了这些色谱方法的具体应用过程及其特点。关键词：亲水作用色谱薄层色谱法串联质谱法脂质体ThelatestchromatographicanalysisresearchindrugresearchPengp engZhang,LingyunWang,BinhaoZahng （ZhejiangUniversityOfTechnology,IndustryCatalysis）Abstract:Nowwiththerapiddevelopmentofpharmaceuticaldrugsand theirmetabolites forthecontinuousin‐depthstudyoftheprocess, scientistshavecreatedmanynew,preciseandrapidchromatographic methods.Includingtheusingofseparatingdrugswithstationarypha seofhydrophilicinteractionchromatography,thinlayerchromatog raphysusingindruganalysis,chromatographytandemmassspectrome 1 / 15

HILIC色谱柱介绍

亲水作用色谱(HＩLIＣ)就是近年来色谱领域研究得热点之一。本文简介了HＩＬIC得起源、定义、分离特点；比较了ＨIＬIC与反相色谱（RＰＬC）得选择特性，讨论了HILIC与质谱联用技术得特点,并对其使用中得注意事项进行了总结.?1、HIＬIC得概念亲水色谱（ＨILIＣ)就是一种用来改善在反相色谱中保留较差得强极性物质保留行为得色谱技术。它通过采用强极性固定性,并且结合高比例有机相/低比例水相组成得流动相来实现这一目得.而这样得流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（EＳI-MS）得灵敏度。?２、HＩLIC得分离机制?HＩLIＣ得分离机理在目前还存在着争议,主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换(3)偶极—偶极相互作用。更多得试验现象则表明HIＬIＣ得保留机理包含氢键作用、偶极作用与静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来. ３、ＨILIＣ影响保留得主要因素普遍认为ＨILIC保留行为受到多种参数得影响，如固定相得官能团、有机改性剂得含量、流速、柱温、流动相缓冲体系得pH值、缓冲盐得种类与浓度。影响样品在固定相上得保留行为得最主要因素都就是流动相中有机相得比例，例如乙腈得含量得增加会显著增加样品得保留因子。在ＨILＩC分离模式中,溶剂洗脱能力由弱到强为:四氢呋喃＜丙酮<乙腈〈异丙醇<乙醇<甲醇＜水，流动相中水就是最强得洗脱溶剂。一般采用乙腈—水体系作为流动相,其中水相得比例为5％-40％以保证其显著得亲水作用.如图1所示,将流动相中得水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性得减小,待测物在柱上得保留就会增强。 Figure１、ＨILＩC ｒｅtenｔion as aｆｕｎｃtｉoｎof polar ｍodｉfier、１00 ｍm lenｇｔh AＣQＵＩTY UPLC BEH HILICｃolｕmｎ、Peakｓ：1= metｈacｒyl ｉc acｉd, 2 = cｙｔosinｅ，3 = nortripｔｙlｉne, 4 = nｉｃｏtinｉcａcid、 4、HILIC与RP－ＨPＬC得比较?传统得反相色谱（RPLＣ）对强极性与亲水性得小分子物质得保留与分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例得水相才能实现其保留,然而高比例得水相会导致一系列问题，比如固定相得反浸润与ＥＳI－MＳ灵敏度得下降。 HIＬIＣ正好可以解决这些问题，它提供了一种与传统RPLＣ互补得保留方式,能够使在RＰＬＣ上保留较弱或没有保留得物质在ＨILIＣ柱上提供合适得保留，如图2所示：

高速逆流色谱仪原理特点及应用

高速逆流色谱仪原理特点及应用高速逆流色谱法于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体，因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。因此，己在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。高速逆流色谱仪原理及特点 HSCCC利用了一种特殊的流体动力学（单向流体动力学平衡）现象。具体表现为一根100多米长的螺旋空管，注入互不相溶的两相溶剂中的一相作为固定相，然后作行星运动；同时不断注入另一相（流动相），由于行星运动产生的离心力场使得固定相保留在螺旋管内，流动相则不断穿透固定相；这样两相溶剂在螺旋管中实现高效的接触、混合、分配和传递。由于样品中各组分在两相中的分配比不同，因而能使样品中各组分得到分离。重现性好。如果样品不具有较强的表面活性作用，酸碱性也不强，那么多次进样，其分离过程稳定性都保持很好、峰的保留相对标准偏差也小于2%，重现性相当好。应用领域：（1）天然产物已知有效成分的分离纯化

（2）化学合成物质的分离纯化（3）中药一类、五类新药的开发（4）中药指纹图谱和质量控制研究（5）抗生素的分离纯化（6）天然产物未知有效成分的分离纯化（新化合物开发）（7）海洋生物活性成分的分离纯化（8）放射性同位素分离（9）多肽和蛋白质等生物大分子分离以及手性分离等应用范围广，适应性好。由于溶剂系统的组成与配比可以是无限多的，因而从理论上讲HSCCC适用于任何极性范围的样品的分离，所以在分离天然化合物方面具有其独到之处。并因不需固体载体，而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象，特别适用于分离极性物质和其它具有生物活性的物质。标签: 色谱仪

高速逆流色谱分离技术

四川大学硕士研究生课程考试试卷姓名唐昌云学号 07 学院华西药学院专业生药学任课教师王曙教授课程名称高等生药学课程成绩考试时间 2012.12.31. 四川大学

高速逆流色谱分离技术的运用 1 发展历史高速逆流色谱(HSCCC)是在1982年，美国国立卫生院的一个教授首先研究和发展起来的一种不同于传统液相色谱法的现代色谱分离制备技术。作为一种新的色谱技术，HSCCC分离系统可以理解为以螺旋管式离心分离仪代替HPLC的柱色谱系统。HSCCC不使用固相载体作固定相, 克服了固相载体带来的样品吸附、损失、污染和峰形拖尾等缺点。由于不需要固定相，HSCCC技术具有进样量大、无不可逆吸附等优于其他色谱技术的优点，此项技术已经被广泛地应用于医药、环境、化工等领域。 2 原理 2.1 色谱分离原理高速逆流色谱分离原理结合了液液萃取和分配色谱的优点，是一种不需任何固态载体或支撑的液-液分配色谱技术，其基本分离原理与其他同类色谱技术相同，主要是利用物质在两相间分配系数的差别进行分配。而HSCCC将两溶剂的分配体系置于高速旋转的螺旋管内，螺旋管的运动形式，是在自身自转的基础上，同时绕一公转轴旋转，形成行星运动。由此加在分配体系上的离心力场不断发生变化，使两相溶剂充分的混合和分配，从而达到洗脱分离目的。因为样品中各组分在两相中分配系数不同，导致组分在螺旋柱中的移动速度不同，因而能使样品组分按分配系数的大小次序被依次洗脱下来的一种色谱分离技术。在流动相中分配比例大的先被洗脱, 在固定相中分配比例大的后被洗脱。 2.2 固定相的保留在高速逆流色谱仪设计方面，其有两个轴，其中一个为公转轴，一个为自转轴，两个轴由一个电动机带动。仪器的公转轴呈水平方向，圆柱形的螺旋管支持件围绕此轴进行行星式运转，同时围绕自转轴进行自转。由于螺旋管柱的行星式运动产生了一个在强度和方向上变化的离心力场，使在螺旋柱中互不相溶的两相不断混合从而达到稳定的流体动力学平衡，两相分离成两层，重相占据螺旋管的每一段的外部，轻相占据每一段的内部，并且两相沿螺旋管形成一个清晰的线性

亲水作用色谱理论简介

高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。 1．液固色谱法使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μM。适用于分离分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异构体。 2．液液色谱法使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。涂布式固定相应具有良好的惰性；流动相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已很少采用。现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。正相色谱法采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。反相色谱法一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的PH值。但需要注意的是，C18和C8使用的PH值通常为2.5~7.5（2~8），太高的PH值会使硅胶溶解，太低的PH值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在PH 1.5~10范围操作。正相色谱法与反相色谱法比较表正相色谱法反相色谱法固定相极性高～中中～低流动相极性低～中中～高组分洗脱次序极性小先洗出极性大先洗出从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。 3．离子交换色谱法固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外，它还受流动相的PH值和离子强度影响。PH值可改变化合物的解离程度，进而影响其与固定相的作用。流动相的盐浓度大，则离子强度高，不利于样品的解离，导致样品较快流出。

亲水作用色谱―四极杆静电场轨道阱高分辨率质谱快速测定水样中氨基脲

亲水作用色谱―四极杆静电场轨道阱高分辨率质谱快速测定水样中氨基脲摘要建立了亲水作用色谱四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速检测水中氨基脲的方法。水样中加入0.1 mol/L NaOH溶液后，以乙腈为提取剂，加入过量Na2SO4，使乙腈与水分层，乙腈提取液再经无水Na2SO4脱水后，采用亲水作用色谱柱Amide色谱柱分离，以0.1%甲酸水溶液及0.1% 甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱，四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱电喷雾正离子、选择离子监测模式检测，同位素内标法进行定量分析。在最优实验条件下，氨基脲在0.2～20 μg/L浓度范围内线性相关系数为0.997，方法的检出限为0.09 μg/L，定量限为0.30 μg/L。以淡水和海水为空白样品，在添加浓度为0.5， 1.0和5.0 μg/kg水平下，氨基脲的加标回收率为82.3%～92.0% ，相对标准偏差小于7.6%。本方法适用于环境水样中氨基脲的快速分析。关键词亲水作用色谱；高分辨质谱；水样；氨基脲 1引言氨基脲（Semicarbazide，SEM）属于联胺类化合物中的一种，它是一种重要的工业原料，可用于制备热敏记录纸上的光色染料，也用于医药、农药等有机合成的中间体[1]。研

究表明，它不仅具有致诱变性和潜在的致癌性，而且还可对神经系统、内分泌系统的功能产生影响[2，3]。在日常生产活动中多种因素容易导致SEM的产生，如某些含SEM工业废水的排放，食品添加剂偶氮甲酰胺在高温加工条件下分解产生SEM[4，5]，消毒水处理食物产生SEM[6，7]，水产养殖业中非法使用呋喃西林药物在动物体内也可代谢成为 SEM[8，9]。由于SEM为水溶性物质，各种途径产生的SEM 最终随着环境进入水体，SEM已逐渐成为环境中一种全新的环境污染物[10]。目前，检测SEM的主要方法有胶体金免疫层析法[11]、酶联免疫分析法[12]、高效液相色谱/串联质谱法[8，13，14]等。胶体金免疫层析法和酶联免疫法通常用于样品的快速筛选，方法易受样品基质中类似物质干扰而产生假阳性；最为常用的分析方法为高效液相色谱/串联质谱法，检测的样品基质包括动物组织、婴幼儿食品、甲壳类水产品等。由于SEM分子小、极性强，难以直接进行分析，因此目前所报道的方法通常是先将样品经过2硝基苯甲醛长时间衍生、衍生液经有机溶剂提取、固相萃取柱净化后，再通过反相液相色谱柱分离SEM衍生物，最后以电喷雾质谱进行检测。该方法灵敏度高，能对样品进行确证检测，但也存在样品前处理十分繁琐、耗时长的缺点。由于SEM极性很强，在常规的反相色谱柱上没有保留，质谱检测时受基质背景干扰严重，因此难以采用液相色谱电喷雾质谱方法直接对SEM进行检

亲水作用色谱

亲水作用色谱（HILIC）在体内药物分析中的研究进展姓名: 李沙沙学号： 201212282939 专业：药剂导师赵永星

亲水作用色谱（HILIC）在体内药物分析中的研究进展摘要近年来亲水作用色谱（HILIC）成为色谱领域研究的热点之一。亲水作用色谱是一种结合亲水固定相与极性有机溶剂-水体系流动相的色谱分离技术，对反相作用色谱中难以保留的极性化合物能够实现有效分离。本文简要介绍了HILIC的分离机制，固定相，联用技术，并综述了其在体内药物分析中的研究进展。关键词亲水作用色谱；体内药物分析；分离机制；固定相 Hydrophilic interation charomatography and its Research Development in Biopharmaceutical Analysis Abstract Hydrophilic interaction chromatography(HILIC) is popular in the analy- sis of hydrophilic solute in recent years. Hydrophilic interaction chromatography(HI LIC) separation system consists of polar stationary phase and mobile phase with high polar organic solvent content and small portion of water phase. It has been shown to be a powerful tool for separating polar analytes which have poor retention on traditi- onal reversed-phase liquid chromatography.This article briefly reviews concept, me- chanism and stationary phase of HILIC, and its recent Research Development in Biopharmaceutical Analysis. Key words HILIC ; Biopharmaceutical Analysis ; stationary phase ; mechanism 体内药物分析是对体液或组织中药物及其代谢物、生物标记物等进行的定性或定量分析。生物样品成分复杂，因此分析物检测手段的选择成为需要密切关注的问题。反相液相色谱（RPLC）是当前分离分析和分离制备中应用最为广泛的色谱模式，其依靠疏水固定相与溶质之间的疏水相互作用实现弱极性和中等极性化合物的高效分离。生物基质中含有其他多种亲水性组分，包括内源性物质以及外源性物质，当目标化合物在反相色谱保留较弱时，可能会与这些成分发生共洗脱。对强极性化合物的保留很弱，甚至不保留，因此强极性化合物在上不能得到很好的分离。目前，用来分离强极性化合物的液相色谱方法主要有离子交换色谱法（IEC）、正相色谱法（NPLC）和亲水作用色谱法（HILC）。亲水作用色谱（HILIC）的概念是由Alpert[1]首次提出，它是指采用极性固定相(如硅胶或衍生硅胶) 和含高浓度极性有机溶剂（如乙腈）和低浓度水溶液流动相的色谱模式，具有和反相色谱正交的选择性所使用的流动相与传统反相色谱相似，弱洗脱剂为有机相，强洗脱剂为水相，可达到与反相色谱相媲美的柱效和

逆流色谱原理简介

逆流色谱原理简介任何熟悉液液萃取（使用分液漏斗）和色谱（例如HPLC）技术的人都很容易理解逆流色谱液液萃取的原理(countercurrentchromatography(CCC))。液液萃取为化学家们分离大量的化学物质提供了一个简单的方法，而且使用的溶剂最少。把样品溶在两相溶剂系统中，振摇使两相充分混合，静置后，两相重新分层。这些步骤是分离样品组分的关键。这种经典的液液萃取在色谱工作者看来，最大的缺点是它在分离过程中只有一个理论塔板数。（事实上，这种情况下没什么理论可言。这一个分离塔板数是源自于工业上的分馏。因此，化学工作者要么设计一合适的单步分离方法去适应自己的需要，要么就用多次液液萃取去提高分离度。通常使用前者，因为后者太麻烦了。（尽管多次液液萃取经常用到，但溶剂系统在不同的提取中通常要改变，以便提高效率。）为了改善分液漏斗，以经过许多的尝试。克雷格逆流分布仪是其中一个最引人注意的突破。这套精妙的仪器，把一系列的分液漏斗有效的排成链，重复的进行系列的步骤：振摇（混合）、静置、分离，再重头开始，这样就提高了塔板数。假如有足够的塔板数，那这套仪器可以达到色谱级的分离。液滴逆流色谱（DCCC）在发展过程中又开发出了液滴逆流色谱（DropletCounterCurrentChromatograph）。这个仪器把一系列垂直的管子用毛细管连接起来。液体固定相留有直管中，把流动相慢慢的泵进去，（如果流动相比较重就从上方泵进去；反之，则从下方）。象所有的色谱那样，组分比较容易溶于流动相中的就移动的快；而比较容易溶于固定相中就滞后了。于是就分离开来了。很显然，每一个直管只有最小可能的理论塔板数。所以，要有显著的效能就要用大量这样的直管。其分离步骤如下：把样品液滴与流动相混合，通过不移动的固定相，期间没有发生振摇。液滴的大小与其他溶剂系统的参数限制了溶质在两质中的分配。静置最终在直管末端形成，在这儿，流过固定相的流动相在通过毛细管进入下一根直管前先聚集起来。如果流速过高就会干扰静置并破坏了分离。通过毛细管，流动相从一个直管流入下一个直管，达到分离的目的。DCCC最大的弱点是可允许的流速太低，因此分离时间长，两相混合差，相对来说，造成效率就低了。离心液滴逆流色谱（centrifugalDCCC，entrifugalplanetarychromatograph,CPC）比DCCC进步的地方就是使用离心加快重力分离。离心液滴逆流色谱更通用的叫法是离心行星色谱，使用很小的直管和毛细管（用多性塑料制成多层的）。一套实用的仪器包含数以千计的直管，可以获得几百个理论塔板数的效能。CPC的缺点和DCCC相似，只是用离心代替了地球重力分离。另外，CPC还多了个缺点，就是它在流动相的进口和出口必须使用旋转流体密封件；而这些密封件性能不好，价格又高，容易损耗，并且限制了泵液的压力，进而限制了流速和离心速度。高速逆流色谱（High-SpeedCountercurrentChromatography,HSCCC）现代的CCC源于Dr.YoichiroItod（国家健康研究中心）的研究：行星离心分离机，及其能支持的许多可能的柱几何学。这些巧妙的仪器运用了鲜为人知的离心分离机定子与转子非旋转连接的方法。（这超出了当前的讨论范围，涉及到如何达到这一目的的方法，任何一本讨论CCC的书对此都有详细的阐述）。功能上，高速逆流色谱有能自转和公转的螺旋盘绕的惰性管（既进行绕自轴旋转的行星式旋转，又同时进行绕公轴旋转。）组成。自轴和公轴（像行星自轴和恒星的公轴）必须同步，这里的讨论只集中于不同HSCCC的共同的地方。这两种旋转造成螺旋盘绕管中作令人昏乱的运动的液体产生混合区和静置分层区。这就为色谱形成造就了非常好的分离环境。

高速逆流色谱原理及应用

高速逆流色谱
High Speed Counter Current Chromatography (HSCCC)

Outline
1. Principle 2. Properties 3. Applications

分配定律：Nernst, 1891 年，Ｋ＝Ｃ1／Ｃ2
两组分K相差较大：一次萃取可得到分离较小：多次萃取

? 1941, Martin & Synge 级联链型萃取，开创了分配色谱技术 ? 1944，Craig 非连续式逆流分溶 (countercurrent distribution, CCD) ? 1966，Ito 离心式螺旋管逆流色谱 (countercurrent chromatography,CCC) ? 1981， Ito 高速逆流色谱 High Speed Counter Current Chromatography (HSCCC) 液液分配色谱的新纪元

CCD法（Countercurrent distribution，反流分布法，逆流分溶法）：是一种多次连续的液-液萃取分离过程

Principle
液－液分配色谱 or 逆流色谱
利用一种特殊的流体动力学现象使互不混溶的两相溶剂(固定相和流动相)在螺旋管中高效地接触、混合、分配和传递其中固定相以一种相对均匀的方式分布在一根聚四氟乙烯管绕成的螺旋管中流动相以一定的速度通过固定相，并按照被分离物质分配系数的不同依次洗脱而获得分离
特殊的流体动力学？