中药化学实验集中提取方法注意事项及操作

第二章中药有效成分的提取与分离

《中药化学》考前辅导大纲

表1 溶剂提取法

利用溶剂法提取时，要从化学成分及溶剂两方面来理解方法的原理与应用，因此要熟悉主要化学类型成分的极性、溶解性及特点，这部分内容请参看表2-4。

根据相似相溶原则选择提取溶剂，相似指的是结构或极性相似，即所选溶剂的极性要与所提取成分的极性相似。常见溶剂的极性大小顺序是：水＞乙醇、甲醇、丙酮＞丁醇＞乙酸乙酯＞氯仿＞乙醚＞苯＞环己烷＞石油醚（注意：丁醇和其后的溶剂与水不完全混溶）。

根据选择的溶剂以及成分的特点，选择提取方法。如含淀粉较多的药材不宜用水煎煮法提取、含挥发性成分的药材不宜用煎煮法提取、亲脂性成分多用有机溶剂提取故采用回流或连续回流提取法。

水蒸气蒸馏法具有挥发性，热稳定性和水不溶性的成分可选用该法。

升华法具升华性的成分选用该法。

分离与纯化一般是利用物质的溶解度、官能团性质及极性特点进行化合物的分离与纯化，常用方法见表2。

表2 中药化学成分分离纯化常用方法

·pH梯度萃取法

pH梯度萃取法适合于酸性强弱不同的游离的黄酮类化合物的分离，将混合物溶于有机溶剂（如乙醚）中，依次用5％NaHCO3（萃取出7，4′－二羟基黄酮）、5％Na2CO3（萃取出7－或4′－羟基黄酮）、0.2％NaOH（萃取出具一般酚羟基黄酮）、4％NaOH（萃取出5－羟基黄酮）萃取而使之分离。

分离操作①装柱色谱柱的装填有干装和湿装两种方法。干装时先在柱底塞上少许玻璃纤维再加入一些细粒石英砂然后将准备好的吸附剂用漏斗慢慢加入干燥的色谱柱中边加

入边敲击柱身务必使吸附剂装填均匀 不能有空隙。吸附剂用量应是被分离混合物量的

3040倍必要时可多达100倍。加够以后在吸附剂上覆盖少许石英砂。湿装时将准备好的吸附剂用适量展开剂调成可流动的糊如干装时一样准备好色谱柱将吸附剂糊小心地慢慢加入柱中加入时不停敲击柱身务必使吸附剂装填均匀不能有气泡和裂隙还必须使吸附剂始终被展开剂覆盖。②洗柱干柱在使用前要洗柱目的是排除吸附剂间隙中的空气使吸附剂填充密实。洗柱时从柱顶由滴液漏斗加入所选的展开剂适当放开柱下端的旋塞。加入时先快加再放

慢滴加速度使吸附剂始终被展开剂覆盖。洗柱时也要轻敲柱身排出气泡。③装样和洗脱

将待分离的混合物用最小量展开剂溶解小心加入柱中。待混合物溶液液面接近吸附剂上的石英砂时旋开滴液漏斗旋塞滴加展开剂。滴加速度以12滴/秒为适度。整个过程中应使展开剂始终覆盖吸附

1.吸附柱色谱色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管 下端用棉花或玻璃纤维塞住 管内装入吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀 以保证良好的分离效果。除另有规定外 通常多采用直径为0.07 0.15mm的颗粒。色谱柱的大小 吸附剂的品种和用量 以及洗脱时的流速 均按各品种项下的规定。

(1) 吸附剂的填装①干法将吸附剂一次加入色谱管 振动管壁使其均匀下沉 然后沿管壁缓缓加入洗脱剂 或在色谱管下端出口处联接活塞 加入适量的洗脱剂 旋开活塞使洗脱剂缓缓滴出 然后自管顶缓缓加入吸附剂 使其均匀地润湿下沉 在管内形成松紧适度的吸附层。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。②湿法将吸附剂与洗脱剂混合 搅拌除去空气泡 徐徐倾入色谱管中 然后加入洗脱剂将附着管壁的吸附剂洗下 使色谱柱面平整。俟填装吸附剂所用洗脱剂从色谱柱自然流下 液面和柱表面相平时 即加供试品溶液。

(2) 供试品的加入除另有规定外 将供试品溶于开始洗脱时使用的洗脱剂中 再沿色谱管壁缓缓加入 注意勿使吸附剂翻起。或将供试品溶于适当的溶剂中 与少量吸附剂混匀 再使溶剂挥发去尽使呈松散状 加在已制备好的色谱柱上面。如供试品在常用溶剂中不溶 可将供试品与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。

(3) 洗脱除另有规定外 通常按洗脱剂洗脱能力大小递增变换洗脱剂的品种和比例 分别分部收集流出液 至流出液中所含成分显著减少或不再含有时 再改变洗脱剂的品

种和比例。操作过程中应保持有充分的洗脱剂留在吸附层的上面。

2.分配柱色谱方法和吸附柱色谱基本一致。装柱前 先将载体和固定液混合 然后分次移入色谱管中并用带有平面的玻棒压紧 供试品可溶于固定液 混以少量载体 加在预

制好的色谱柱上端。洗脱剂需先加固定液混合使之饱和 以避免洗脱过程中两相分配的改变。

注意事项注意事项注意事项注意事项

铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙匀浆配比般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。

点样

尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。

展开剂配制

选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1 ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管时候这不是必须的

展开系统的饱和

一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。温湿度的控制温湿度对薄层影响都很大。不冻结的提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。

显色

喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。