11 胆管癌动物模型研究进展

胆管癌动物模型研究进展顾劲扬丁义涛胆管癌起源于胆管上皮细胞，是仅次于肝细胞肝癌的第２位肝胆恶性肿瘤，约占消化道肿瘤的３％…。近年来，胆管癌的发病率呈现逐年升高的态势，日益受到包括肝胆外科医师在内的消化科专家的普遍关注旧Ｊ。依据胆管癌发生部位的不同町分为肝内胆管癌（Ｉｃｃ）和肝外胆管癌（Ｅｃｃ）两种类型，其中肝外胆管癌更常见，占胆管癌总数的８０％一９０％¨Ｊ。动物模型是研究胆管癌抗肿瘤治疗方法的基本模型和平台，对重新认识肿瘤牛物学特性、提高胆管癌疗效具有不可替代的作用。现对各类胆管癌动物模型的最新进展作一综述。一、药物诱发模型药物诱发模碰是利用一种或多种化学致畸药物反复作用于实验动物，特异性刺激胆管上皮细胞异常增生，从而诱发ＩＣＣ的发生。化学药物诱发模型因技术简单，易于操作，价格相对低廉，是目前较为常用的胆管癌动物模型之一。１．３’－甲基－４二甲氨偶氮苯（３’－Ｍｅ．ＤＡＢ）诱发模型：Ｒｅｄｄｙ等Ｈｏ在使用其诱导大鼠肝癌的过程中，喂养３个月后首次发现大鼠胆管癌形成。ｈ等＂１通过对此类模型的研究结果显示，在胆管癌形成过程中转化生长因子－Ｂ及其受体ＴＧＦＢＲⅡｍＲＮＡ的表达以及端粒酶的激活具有重要的作用。但是，由于此种方法不仅能够诱导胆管癌形成，还会同时促使肝细胞肝癌发生，因此现在已逐渐被摒弃。２．二氧丙基胺（ＢＯＰ）诱发模型：早期学者在使用ＢＯＰ诱导仓鼠胰腺癌发生时，发现其除了诱发胰管肿瘤外，还导致了胆管损伤，从而建立了胆管癌模型。Ｉｋｉ等旧１使用此法建立仓鼠ＩＣｃ模型后，对其研究结果显示在胆管癌发展及肿瘤细胞永生化过程中，端粒酶活性显著增ＤＯＩ：ｌＯ．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉ％ｎ．１００１Ｊ９０３０．２０１０．０ｒ７．０６３作者单位：２１００∞南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科通信作者：丁义涛，Ｅｍｉｌ：ｙｉ饥曲ｎｇ＠ｈｏｔ·Ｉｎａｉｌ．Ⅻ１加，初步揭示了胆管癌的形成机制。３．２－乙酰氨基芴（２．ＡＡＦ）诱发模型：ｃｉｌ．Ｂｅｎ∞等¨１将Ｏ．０２％的２．ＡＡＦ加入食物中喂养雄性ｗｉｓｔａｒ大鼠１２周，诱发了肝内胆管癌模型。此模型肿瘤组织为肝细胞癌和胆管细胞癌的杂合体，肿瘤细胞问含有大量未分化的卵圆样细胞，通过其建立的ＣＣ—６２细胞株兼有肝癌细胞和胆管癌细胞的生物学特征以及形态标记，对原发性肝癌中细胞分化机制的研究具有蚕要意义。４．氨基比林和亚硝酸钠诱发模型：有学者曾用氨基比林和亚硝酸钠混合溶液加入蒸馏水中喂养叙利亚仓鼠，诱发了胆管细胞性肝癌模型，而未见肝细胞肝癌和肝血管瘤的发生哺…。５．二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发模型：ＤＥＮ是目前最广泛用于诱发肝癌模型的化学性药物，对肝脏具有排他性的募集作用。Ｍｉ硒ｒｅｕｖ等¨叫用此法诱发得到肝细胞肝癌、肝母细胞瘤、胰腺癌和胆管癌并存的斑马鱼肿瘤模型。“ｕ等…１利用ＤＥＮ诱发大鼠肝细胞肝癌和肝内胆管细胞性肝癌并存的肿瘤模型，发现在肿瘤形成的不同时期表达碘化钠共输送体水平与人类胆管癌类似，该肿瘤模型经”１Ｉ放疗后，可完全抑制肿瘤生长，为胆管癌的靶向放疗研究提供了合适的动物模型。６．呋喃（Ｆｕ啪）诱发模型：场等¨２１通过此类诱导模型成功的建立了胆管癌细胞株Ｃ６ｌｌＢ，为探索胆管癌形成及发生机制提供了重要的手段。Ｓｉｒｉｃａ等¨３ｊ研究结果显示ｃ．ＥｒｂＢ．２／ｃ．Ｎ即、环氧化酶２以及ｃ—Ｍｅｔ在胆管癌形成过程中表达异常，可作为胆管癌选择性靶向化疗的位点，提出了Ｆｕ枷诱导的胆管癌模型是评估临床前化疗策略及药物疗效的有效模型。７．硫代乙酰胺（ＴＡＡ）诱发模型：ＴＡＡ是目前胆管癌动物模型最常用的诱导药物。Ｙｅｈ等¨４１研究结果显示，吖认诱导的大鼠胆管癌形成过程中，胆管经历了多灶性胆管增生、肠化生、不典型增生、间质结缔组织增生和癌变的病理变化，与人类胆管癌的形成特征相似。·综述·Ｆａｖａ等¨副利用Ｔ从诱导的胆管癌模型研究结果显示瘦素介导的信号通路可促进胆管癌细胞生长，通过调节其信号可以预防甚至治疗胆管癌。化学药物诱发模型从动物给药开始到诱导肿瘤形成的时间较长，诱发成功的肿瘤大小、组织学类型不统一，除了诱发胆管癌外还可能诱发其他脏器肿瘤同时生成，因此不宜用于胆管癌肿瘤治疗学的靶向研究。如何获得更为理想的药物诱发模型还有赖于今后不断探索新的肿瘤致畸药物¨“。二、手术模型自上世纪９０年代起有学者开始尝试通过手术的方法建立ＥＣＣ动物模型。研究结果显示单纯通过手术干预很难建立胆管癌模型，尚需联合化学药物共同作用方可实现，多用于ＥＣＣ发病机制、组织学特征研究。目前比较成熟的手术模型有２种，分述如下：１．胆总管结扎联合二异丙醇驱硝胺（ＤＩＰＮ）注射模型：有学者使用ＤＩＰＮ每周皮下注射叙利亚金仓鼠，连续１０周，然后行简单剖腹术和胆总管结扎术，２０周后发现胆管Ｉ：皮杯状细胞化生和胆管细胞癌形成，诱发率为８９％Ⅲ１。后续研究在此基础上进行了改进，将胆总管结扎时间缩减为２周，解除结扎后发现胆管癌发生率大为降低¨“，表明胆总管结扎对胆管癌发生起到了决定性作用，也为胆管癌的病因学研究提供了思路。２．胆总管异物植入联合二氧丙基胺（ＢＯＰ）喂养模型：日本学者于１９９６年最先创建了该模型【ｌ８‘。具体方法为先通过手术将尼龙线植入仓鼠十二指肠乳头内，然后用含７０ｐｐｍ

ＢＯＰ的水喂养动物

１２周。经此法处理的仓鼠于第４周左右出现类似增生性胆管炎特征，至１２周时４１．７％仓鼠出现ＥＣＣ，９１．７％出现ＩＣＣ。手术模型虽能在一定程度上模拟人ＥＣｃ形成过程，但制作此类模型需要有一定的手术基础，操作相对复杂，诱导成功率不高。故目前已少有学者沿用该模型。三、肝吸虫感染模型早在上世纪，人们就发现在肝吸虫

万方数据病高发的热带地区如泰国等地胆管癌的发病率比其他地区明显增高。ｎａｍｖｉｔ等¨引向仓鼠胃内注入１００个麝猫后睾吸虫囊蚴使其感染，在检测到粪便中虫卵后即用含Ｏ．００２５％ＤＭＮ水喂养ｌＯ周，在第１８周时所有的仓鼠都出现了胆管纤维化和ＩｃＣ。首次成功建立了胆管癌模型并在动物模型Ｉ：证实了麝猫后睾吸虫与胆管癌发生相关。ＢｏｏｎＩｎａ据等ⅢＪ利用该模型进一步研究结果显示ＲＢ基因通路参与了肝吸虫诱导的胆管肿瘤发生过程，并提出其通路上的某些基因可作为分子标记用于肿瘤治疗。四、种植肿瘤模型种植肿瘤模型是指将同种异体或异种动物的肿瘤组织块或细胞株接种于动物体内直至生长成为肿瘤，目前应用最为广泛的胆道肿瘤动物模型，根据其种植部位的不同又分为原位种植和异位种植。１．肿瘤组织块种植：曾有学者使用呋喃诱发大鼠胆管癌模型，将获得的肿瘤组织块植入同种大鼠的皮下。建立胆管癌肿瘤组织皮下种植模型Ｂ“。经研究结果显示植入的肿瘤保持了原有肿瘤肠型分化的特征，且能连续传代，生长迅速。但种植瘤组织块的组织成分较为复杂，往往包括多种非肿瘤细胞，不利于独立观察胆管癌细胞的生物学特性，故仍有待于进一步改进。２．肿瘤细胞株种植：自从无胸腺裸鼠诞生以来，许多学者将胆管癌肿瘤细胞株植入裸鼠体内建立了多种种植瘤模型，用于胆管癌分子机制的研究和抗肿瘤药物的筛选。常见的胆管癌肿瘤细胞株种植模型详见表１。建立方法包括肿瘤细胞株皮下种植和肝内种植。皮下种植的肿瘤易于取材、观察和测量大小，但因肿瘤细胞生长微环境改变，较少出现转移。肝内种植的肿瘤微环境接近常态，故生长较快、侵袭和转移能力较强，是研究胆管癌较为理想的模型之一。胆管癌种植模型特别是肿瘤细胞株种植模型具有操作简便，容易观察，可重复性高，植入的肿瘤细胞株生长速度一致，生物学特征稳定，肿瘤重量和大小易于测定，以及给予抗肿瘤药物治疗易于比较疗效等优点，目前为止广泛应用于与胆管癌有关的各类研究中。五、转基因动物模型近年来，通过人为导入和敲除某砦基因，在一定条件下诱导动物发生胆管表ｌ常见胆管癌肿瘤细胞株种植模型癌，有利于揭示胆管癌发生发展的分子机制。ｘｕ等Ⅲ１构建了抑癌基因ｓＭＡＤ４和ＰＴＥＮ缺失的小鼠，饲养２个月起发现小鼠胆管出现多灶性增生，至７个月时所有小鼠均出现胆管癌。Ｆ础ｉ等＂纠使用四氯化碳处理ｐ５３基因缺失的小鼠，成功获得ＩＣＣ模型。尽管转基因胆管癌动物模型可用于从基因层面探讨胆管癌发病机制和筛选可能的治疗靶点，但其制备过程复杂，技术难度较大，制作成本相对较高，目前大规模应用仍有相当的难度。参考文献Ｂｌｅｃｈ∽ｚＢ，ＧｏｍＧＪ．Ｃｈｏｌ∞西ｏｃｍｉｎｏ－眦：ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｐ砒ｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，明ｄｔｒｅａｔｒ舱ｎｔ．Ｈｅｐａｔｏｌｏ纠，２００８，４８：３０８—３２１．ＷｅｋｄＴＭ，Ｍ棚ｙＩｌＩｌＫＡ，ＨｓｉＩＩｇＡＷ，ｅｔｄ．ｈＩ靴ｔ０ｆｃｌａｓ８击ｃａｔｉ∞０ｆｌｌｉｌａｒｃｈｏｌａｎ西ｏ＿∞ｒｃｉｒｍｍａｓ（Ｋｌａｌｓｋｉｎｔｕ脚叮ｆ弓）∞ｔｈｅｉｎｃｉ－ｄｅｒＩｃｅｏｆｉｒＩⅡａ一彻ｄ仞吐ＩａＩｌｅｐａｌｉｃｃＩｌ０量ａｎｇｉｏ＿ｃａｒｃｉｎ唧ｉｎｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳＩａｔｅｓ．ＪＮａｔＩＣａ渺ｌ嘣，２００１６，９８：８７３名７５．ＢｌｅｃｈａｃｚＢＲ。ＧｏｒｅｓＧＪ．Ｃｈｏｌ∞ｇｉｏｃａｒｃｉ№ｍ．ＣｌｉｎＬｉｖｅｒＤｉｓ．２００８。１２：１３ｌ一１５０．ＲｅｄｄｖＫＰ．Ｂｕ８ｃｈｍ跏ＩＵ，ＣｈｏｍｅｔＢ．ＣｈｏＬａｎｆ；ｉｏｃａｒｃｉｎｏｌＩＩ∞ｉｎｄｕｃｅｄｂｙｆ÷ｅｄｉｎｇ３’一ｍｅｔｈｖｌ４一ｄｉｍｅｔｈｖｌａｍｉｎｏａｚｏｂｅｎｚｅｎｅｔｏｒａｔｓ．ＨｉｓｔｏｐａｔｈｏＩｏｇｙａｎｄｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕ陀．ＡｍＪＰａｔｈｏｌ，１９ｒ７７。８７：１８９－２０４．ＬｕＪＰ，Ｍａ０ＪＱ，“Ｍｓ，ｅｔａ１．Ｉｎｓｉｔｕｄｅｔｅｃ．ｔｉｏｎ０ｆＴＧＦｋｔａｓ．ＴＧＦｂｅｔａｍｃ印ｔｏｒⅡｎｌＩ悄Ａａｎｄｔｅｌｏｍｅ瑾１８ｅａｃｔｉｖｉｔｖｉｎｃｈｏＩ锄ｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉ８．ｗｏｒｌｄＪＧｌｓｈＤ－ｅｎｔｅｍｌ，２００３，９：５９０－５９４．ＩｋｉＫ，ＴｓｕｊｉｕｃｈｉＴ，ＭａｊｉＩｎａＴ，ｅｔａ１．Ｉｎ－ｃｒｅａｓｅｄｔｅｌｏｍｅ糟ｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃｃｈｏｌａｎ商ｏｃｅＵｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＮ·ｎｉｔｒｏｓｏｂｉｓ（２一ｏｘ印ｒｏｐｙｌ）ⅢｉｎｅｉｎｈⅢｓｔｅｍ．ＣａｒＩｃｅｒｋｎ．１９９８，１３１：１８５－１９０．Ｇｉ王．ＢｅｎｓｏＲ．Ｍａｒｔｉｎｅｚ—Ｉ力ｒｅｎｔｅＡ．Ｐｅｌｌｉｎ．ＰｅＴｅｚＡ．ｅｔａ１．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｎｅｗｍｔｃｅＵｌｉｎｅｅｓｔａｂｌｉＢｈｅｄｆ如ｍ２’ＡＡＦ．ｉｎ．ｄｕｃｅｄｃｍｎｂｉｎｅｄｈｅｐａｔｏｃｅＵｕｌａｒｃｈｏｌａｎ西ｏ－ｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ．肌ＭＩｒｏＣｅＵＤｅｖＢｉｏｌＡＩｌｉｍ．２００ｌ，３７：１７－２５．［８］庄大勇，梁平．肝内胆管痈动物模型的建立．中华实验外科杂志，２０００，１７：５７０－５７１．［９］李大江，陈健，陈长宏，等．氨摹比林和亚硝酸钠诱发的肝内胆管癌动物模型．中华实验外科杂志，２００ｌ，１８：９６３母６４．［１０］Ｍｉｚｇｉｒ¨ｖＩＶ，ＲＰｖｓｋｏｙｓＹ．ＴｒａｎｓｐｌａｎｔａＩ＇ｌｅｔｕｍｏｒｌｉｎｅｓ鼬．ｎｅｍｌｅｄｉｎｃｌｏｎａｌ矛ｅｂｒ幽８ＩＩ．Ｃ¨ｃｅｒＲｅ８，２００６．６６：３１２０－３１２５．［１１］ｍＢ，Ｈｅｒｖ６Ｊ，ＢｉｏＩｌｋ—ｓａ护Ｐ，ｅｌａ１．ｓｏｄｉ－脚ｉｏｄｉｄｅ酬瑚ｐ呲ｅｒｉｓ唧ｒｅｓｓｅｄａｌｔＩ－ｅｐｒｅ－∞叩ｌａｓｔｉｃｓｔａｇ瞄０ｆＩｉｖｅｒｃａｒｃｉｎ嚼ｍ器ｉｓａｎｄｉｎｈｕ脚ｎｃｈｏｌａｎ西０ｃａｒｃｉｎｏｍａ’Ｇ鹊ｎ饿帕ｔｅｒ－０ｌｏｇｙ，２００７，１３２：１４９５－ｌ蜘．［１２］ＬａｉＧＨ，ＳｉｒｉｃａＡＥ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍ朋ｔｏｆｖｅｌｃｈｏｌａｎ西ｏｃａＪ＿ｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｍ０‘Ｉｅｌ．ＣａｒｃｉｎｏｇｅｎｅＢｉｓ，１９９９，２０：２３３５—２３４０．【１３］ｓｉｒｉ∞ＡＥ，“ｃＨ，Ｚｈ∞ｇｚ．蹦ａｒｙｃⅢ一Ｆｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｐａｔｈｗａｙｓ，ｃｙｃｌｏ—ｏ。ｙｇｅｎ－ａ∞－２ａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｍｐｅｕｔｉｃ蚰ｔｅ甭∞．ＪＧ粕ｔｒｏｅｎｔｅ｜ｄＨｅｐａ“，２００１，１６：３６３—３７２．［１４］ＹｅｈＣＮ。ＭａｉｔｍＡ。ＬｅｅＫＦ。ｅｔａ１．Ｔｈｉｏａｃ－ｅｔａｒＩｌｉｄｅ—ｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ．ｔｖｐｅｃｈｏＩａｎ—ｇｉｏｃａｒｃｉｎｏ啪ｉｎＩ龇：ａｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｃ印ｉｔｕｌａⅡＩｌｇｔ王ｌｅｍｕｌｔｉ－Ｂｔａｇｅｐｒｏｇｒｅ明ｉｏｎ０ｆｈｕｍａｎｃｈｏｌａｎ西ｏｃａｒｃｉｎｏｎｍ．Ｃａｒ；ｃｉｎｏ髫ｅｎｅ－ｓｉｓ，２００４．２５：６３１击３６．［１５］ＦｈａＧ，ＡＪｐｉｎｉＧ，Ｒｙｃｈｌｉｃｋｉｃ，ｅｔａ１．ｋ删ｎａ１｝崛ｎｃｅｓｃｈｏｌ肌西０‘：ａｒｃｉｎｏｍａｃｅｎ霹口ｗｔｌｌ．Ｃ∞ｃｅｒＲｅｓ，２００８．６８：６７５２柳６１．［１６］Ｋｉｎ锄ｉＹ，Ａ８ｈｉｄａＹ，ｓｅｔｏＫ，ｅｔａ１．Ｉｎｎｕ－ｏｆｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅｂｉｌｅｄｕｃｔｏｂｓｎｌｌｃｔｉｏｎｔｈｅｏｆｃｈｏｌａｎ西ｏｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｄｕｃｅｄｂｙｄｉｉｓｏｐｍｐ粕ｏｌｎｉⅡＤ枷ｎｅｉＩＩｈａＩｎｓｔｅｍ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，４７：１７０一１７６．［１７］鼬ｎ蚰五Ｙ，ＡｓｈｉｄａＹ，ＳｅｔｏＫ。ｄａ１．ｒ１１砖ｅ！ＩＩ如０ｆｉｎｃｏ坤ｌｅｔｅｂｉｌｅｄｕｄｏｈｂｍ商ｏｎ∞ｄｉｉｓｏ．严叩础仃０啪ｉｎｅ—ｉｎｄｕｏｅｄ