应激诱导对体外培养早期胚胎细胞凋亡的影响
专题3--胚胎工程测试题(基础知识填空和高考题汇总)参考
专题3 胚胎工程测试题第一部分：基础知识填空:胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。
经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。
(P59) 胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。
(P61)一、动物胚胎发育的基本过程：1、精子的发生：场所：时间：从开始，直到。
过程：第一阶段：位于曲细精管管壁的精原细胞进行数次，产生大量的，其中部分精原细胞经过染色体复制和其他物质的合成，进一步形成。
第二阶段：初级精母细胞连续进行分裂（即，包括和），形成个细胞。
第三阶段：变形形成精子。
变为精子头的主要部分，发育为头部的顶体，演变为精子的尾，聚集在尾的基部形成线粒体鞘，细胞内的其它物质浓缩为，随精子的成熟过程向移动，直到最后。
哺乳动物成熟的精子外形似，分、和三大部分。
不同种动物精子的，略有不同，与动物的无关。
2、卵子的发生场所：过程：第一阶段时间：场所：过程：卵原细胞大量的卵原细胞卵原细胞初级卵母细胞初级卵母细胞被卵泡细胞包围，形成第二阶段时间：场所：卵巢的卵泡中过程：初级卵母细胞第一极体第三阶段时间：场所：条件：次级卵母细胞受精子激活后进行分裂过程：次级卵母细胞合子+第二极体排卵是指从中排出，而并非卵泡从卵巢中排出。
刚排出的卵子不是成熟的卵子。
（排出的卵子的结构示意图见课本62页图3-4）判断卵子是否受精的重要标志是：在的间隙可以观察到时，说明卵子已经完成了受精。
3、精子和卵子发生的异同（1）相同点：最初阶段均为分裂，不断增加原始生殖细胞的数量，经过分裂才能形成精子或卵子。
精子和卵子在发生上的重要区别是：卵泡的形成和在卵巢内的储备（即间期）是在（即期）完成的。
4、受精：精子和卵子结合形成（即受精卵）的过程（三）受精（1）过程：受精包括阶段和阶段。
在自然条件下，受精是在内完成的。
胚胎工程的应用及前景
3.3 胚胎工程的应用及前景[学习目标] 1.说出胚胎移植的生理学基础和具体操作程序。
2.简述进行胚胎分割的注意事项及其实际意义。
3.说出胚胎干细胞的分类、特点和用途。
[核心素养] 1.科学思维：尝试设计胚胎移植流程图，对繁育良种家畜提出合理化建议。
2.社会责任：了解胚胎工程在畜牧业中的应用，关注人类对胚胎干细胞的最新研究成果。
一、胚胎移植1.胚胎工程技术胚胎工程技术目前在生产中应用较多的是家畜的胚胎移植、胚胎分割和体外生产胚胎技术。
2.胚胎移植的概念、意义、生理学基础及基本程序(1)概念①移植对象：雌性动物体内的早期胚胎或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎。
②移植条件：同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内。
③供体：在胚胎移植中提供胚胎的个体。
④受体：在胚胎移植中接受胚胎的个体。
⑤地位：是胚胎工程的最后一道“工序”。
(2)胚胎移植的意义：充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，大大缩短了供体本身的繁殖周期，增加供体一生繁殖后代的数量。
(3)胚胎移植成功的保障(生理学基础) 胚胎移入的基础 哺乳动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的胚胎收集的基础 哺乳动物的早期胚胎形成后，在一定时间内不会与母体子宫建立组织上的联系，而是处于游离状态移入胚胎存活的基础 受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应保留遗传特性的基础供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但移入受体的供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受任何影响(4)胚胎移植的基本程序供、受体的选择和处理⎩⎪⎨⎪⎧ 选择：遗传性能优良、健康处理：同期发情处理和超数排卵处理(对供体)↓ 配种或进行人工授精 ↓ 胚胎的收集、检查、去向⎩⎪⎨⎪⎧ 收集：冲卵检查：发育到桑椹胚或囊胚阶段去向：直接向受体移植或放入 －196 ℃的液氮中保存↓胚胎移植——方法：手术法和非手术法↓胚胎移植后的检查——检查受体母牛是否妊娠↓产下犊牛归纳总结1.胚胎移植的过程图解2.移植胚胎的可能来源及生殖方式(1)核移植――――→早期胚胎培养无性生殖。
MANF对内质网应激诱导的细胞凋亡的保护作用
ｅ ｒ 、 Ｅ ｃ ｏ Ｒ Ｉ、 Ｂ ａ ｍＨ Ｉ均 购 自美 国 Ｔ ａ Ｋ ａ Ｒ ａ公 司 ； Ｄ Ｎ Ａ 片段 回收试 剂 盒及 质 粒 小 量 抽 提 试 剂 盒 购 自美 国 Ａ ｘ ｙ ｇ ｅ ｎ公 司 ； 质 粒 中抽 试 剂 盒 购 自美 国 Ｐ ｒ ｏ ｍｅ ｇ ａ公
购 自美 国 Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ公 司 ； 胎 牛血 清 购 自杭 州 四季 青 公 司； Ｔ Ｍ、 Ａ ｔ ３和基 因素 （ Ｇ ４ １ ８ ） 购 自美 国 Ｓ ｉ ｇ ｍａ公 司 ； 预染 蛋 白 分 子 量 Ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ购 自加 拿 大 Ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｓ公 司； Ｅ Ｃ Ｌ显 色试 剂盒 购 自美 国 Ｐ ｉ ｅ ｒ ｃ ｅ 公司 ； 活化辣 根 过 氧化 物 酶 （ Ｈ Ｒ Ｐ ） 标 记 的绿 色 荧 光 蛋 白 （ Ｇ Ｆ Ｐ ） 抗 体 购 自美 国 Ａ Ｂ Ｍ公 司 ； ＨＲ Ｐ标 记 的甘 油 醛 一 ３ 一 磷 酸
ｂ ｌ ｏ ｔ 和 细胞 免疫 荧 光 法 证 明 稳 转 细 胞 中 Ｍ Ａ Ｎ Ｆ的 基 因 和 蛋
１ ． １ ． １ 细胞 系 Ｅ ． ｃ ｏ ｌ ｉ Ｄ Ｈ ５ ｃ ￣ 为本 实验室 保存 ；
Ｎ ２ Ａ购 自中 国科 学 院上 海细胞 库 。 １ ． １ ． ２ 主要 试 剂 ３ ＂ ４ Ｄ Ｎ Ａ连 接 酶 、 逆 转 录 试 剂
关键词 中脑 星形 胶质细 胞源性神 经 营养 因子 ； 转染； 内质
网应激 ； 神经保 护
中 图分 类 号 Ｒ ３ ４ 文献标志码 Ａ 文章编号 １ ０ ０ ０—１ ４ ９ ２ （ ２ ０ １ ３ ） １ １—１ ３ ０ ８— ０ ５
司； Ｄ ＭＥ Ｍ高 糖培养 基 、 脂质 体 Ｌ ｉ ｐ ｏ ｆ ａ ｃ ｔ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ ２ ０ ０ ０
中药诱导细胞凋亡的检测设计实验
中药诱导细胞凋亡的检测设计实验利用中药对细胞进行处理，通过检测细胞凋亡的相关指标，评估中药对细胞凋亡的诱导作用。
实验原理：细胞凋亡是一种正常的自我调节现象，在生命过程中起到重要作用。
细胞凋亡的损失和缺陷可以导致许多疾病的发生。
中药的一些成分可以诱导细胞凋亡，因此用中药处理细胞可观察到细胞凋亡的现象，从而评估中药对细胞凋亡的诱导作用。
实验步骤：1. 培养细胞：选择适合的细胞，以适合的条件培养至合适的数量。
2. 中药处理：将细胞分成两组，在其中一组加入适当浓度的中药，并在另一组中加入相同体积的培养基作为对照组。
3. 细胞采集：在处理后的48小时内，收集细胞。
4. 細胞凋亡检測：a. Annexin V-FITC/PI 双染：使用Annexin V-FITC和PI染色液，按照产品说明书称2x10^5个细胞，离心冲洗，去掉上清，加入100uL细胞及AnnexinV-FITC/PI染色液，20°C避光室静置15min。
再加入400uL等体积的PBS，离心冲洗一遍，去掉上清，重复此步骤一遍。
最后在冰箱4°C避光下保存，最好在24小时内进行测量。
b. TUNEL 染色：使用TUNEL染色问剂，依照说明书将细胞固定和染色，配合荧光显微镜观察细胞凋亡的现象。
实验结果：用flow cytometry 或荧光显微镜技术检测细胞的凋亡现象。
用流式细胞仪分析Annexin V-FITC和PI染色液染色的细胞，望文生义，各类细胞的凋亡状态如下：1.双阴性（固绿固红）：正常生长的、未神经死亡、未凋亡的细胞；2. Annexin V-FITC 表达阳性（固绿活红）：细胞凋亡前期，细胞外膜磷脂翻转，可以先看到细胞信号阳性，而PI胞质膜不破裂，不能进入细胞核，故前期的细胞活；3. PI 表达阳性（活绿固红）：细胞凋亡中后期，与初始阶段相比，磷脂翻转后，细胞膜破裂，PI从胞质溢出，可以进入细胞核，染色明显；4. Annexin V-FITC和PI 同时表达阳性（活绿活红）：细胞凋亡后期。
牛卵母细胞体外成熟的培养体系及影响因素研究
较广‘ ， 泛 缓冲系 以 Ｈ ｐｓ ｅｅ 或碳 酸氢盐为好 ， 酸盐缓 冲系较 磷
差。
４ 血 清对体外成熟的影响 ． ２
血 清成 分较为复杂 ． 不同Ｊ清 缸
其 成 分 也 有 明显 区别 进 而 导致 不同 的 培 养 效 果 。 清 内含 有 血
挥 巨大作用。 本文将 就现阶段牛 卵母细胞体外成熟培养体系 及影响因素的研 究情况加 以综述 。
草 食 动 物
牛 巧 母 细 胞 体 夕 成 熟 酌 ＝ 养 体 ｐ 卜 ｌ ：
系及 影响 素酌 研
曹 亮ｌ ＿ ３，聂 旭
１０ ３ ） ５ ￣ ０ ６
牛 卵母 细胞 培养 常用 的基 础 培养 液有
（ ． 阳农业 大 学畜牧 兽 医学 院 ，沈 阳 １ ０ ６ ；．黑龙 江省 家 畜繁 育指导 站 。哈尔 滨 １ ０ ６ ； １沈 １ １２ １ ５ ０ ９ ３黑龙 江省 农 垦总局 动 物卫 生监 督所 。 尔滨 ． 哈
牛 体 外 生 产 Ｏ Ｐ中 ， 应 用 ３ ～３ ℃ 。 Ｖ） 多 ８ ９ ２ 体 外 培 养 气 相 卵 母 细 胞 成 熟 培 养 现 多 用 两 种 气 相 ： 一 种是含 ５ ％的 Ｃ Ｏ 、相对 湿 度 １０ ０ ％的 空 气 ，另 一 种 是 含 ５ ％
４３ 生殖激素 对体 外成熟 的影 响 ．
目前牛 卵母细胞 体外成 熟培 养 （Ｖ Ｊ Ｉ Ｍ 技术 体系 已经建
立 起 来 ， 在 不 断 的探 索 与 完善 当 中 。 国 内外 的 研 究 热 点 主 并
４１ 基础 培 养液 ．
Ｔ Ｍ１９ Ｈ ｍ’ １ ， ａ ｓ Ｆ ２和 Ｃ ｌ ，其 中 Ｔ Ｍ１９应 用 Ｃ ９ ， ａ ｓ ０ Ｈ ｍ’ １ Ｒａ ａ Ｃ ９
内质网应激反应诱导细胞凋亡研究
诱 导肿 瘤 细胞 凋 亡 的 文 献 进 行 综 述 ． 未折 叠或 折 叠错 误 的蛋 白质在 内质 网 （ ｅ ｎ ｄ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｍ ｉ ｃ ｒ ｅ ｔ ｉ ｃ ｕ ｌ ｕ ｍ Ｅ Ｒ） 上过度积 累， 导 致 内质 网产 生 应 激 反 应 从 而激 活保 护 细胞 的 信 号 通路 ， 通 常称 为 未 折 叠 蛋 白反 应
种 信 号 通 路 协 同 或 者 单 一 的 诱 导 肿 瘤 细 胞 凋 亡 仍 需进 一 步研 究．
关键词 ： 细胞 凋 亡 ； 内质 网 应 激 ； 内质 网途 径
中 图 分 类 号 ：Ｒ ３ ６ ３
文 献标 识 码 ： Ａ
文章编号 ： １ ６ ７ ２— ０ ９ ４ ６ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ — ０ ０ ２ １— ０ ４
（ ｕ ｎ ｆ ｏ ｌ ｄ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ Ｕ Ｐ Ｒ ） ． 如 果 内质 网受 到 的 刺 激 不 减 弱 ， Ｕ Ｐ Ｒ反 应 会 恢 复 和 保 持 内质 网上 的
动 态平 衡 或 者诱 导 细 胞 凋 亡 ． Ｕ Ｐ Ｒ反 应 的信 号 网络 包含 三 个 核 心要 素 ， 分 别为肌 醇需要酶 １ （ ｉ ｎ ｏ ｓ ｉ ｔ ｏ ｌ
Ｖ ｏ １ ． ３ ０ Ｎ 。 ． １
Ｆ ｅ ｂ ． ２ ０ １ ４
内质 网应 激 反 应 诱 导 细 胞 凋 亡 研 究
陈文强 ， 于 淼 ， 李 健
（ １ ．哈尔滨商业大学 生命科学 与环境科 学研究中心 ， 哈尔滨 １ ５ ０ ０ ７ ６ ； ２ ．国家教育部 抗肿瘤药物 工程研究 中心 ， 哈尔滨 １ ５ ０ ０ ７ ６ ； ３ ． 哈尔滨商业大学药物所博 士后科研 工作站 ， 哈尔滨 １ ５ ０ ０ ７ ６ ） 摘 要： 了解调节 内质 网应 激反 应诱 导肿瘤细胞凋亡的研究进展． 通过 对 国内外有关 内质 网应激反应
雷公藤红素对体外培养变应性接触性皮炎小鼠淋巴细胞凋亡及Caspase-8表达的影响
雷公藤红素对体外培养变应性接触性皮炎小鼠淋巴细胞凋亡及Caspase-8表达的影响陈保疆【期刊名称】《吉林医学》【年(卷),期】2011(032)016【摘要】目的：为了探讨雷公藤红素对变应性接触性皮炎（ACD）小鼠体外培养淋巴细胞凋亡及Caspase-8表达的影响。
方法：以二硝基氯苯制作ACD小鼠模型,体外培养淋巴细胞,雷公藤红素作用48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及Caspase-8浓度。
结果：不同浓度红素对体外培养ACD淋巴细胞凋亡细胞比率均高于对照组;其中中、高浓度组凋亡细胞比率高于低浓度组且具有统计学意义（P 分别〈0.05和0.01）,对ACD淋巴细胞Caspase-8表达与对照组比较差异均具有统计学意义（P分别〈0.05和0.01）。
结论：雷公藤红素可以通过升高ACD小鼠淋巴细胞内Caspase-8浓度,从而诱导淋巴细胞的凋亡。
【总页数】2页(P3173-3174)【作者】陈保疆【作者单位】天津市泰达医院皮肤科,天津300457【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.凉血止痒合剂对变应性接触性皮炎小鼠IL-10和IFN-γ表达的影响 [J], 杨瑾;杨雪松2.雷公藤多苷对变应性接触性皮炎小鼠干扰素诱导蛋白10 及其受体表达的影响[J], 李艳华;许建;张振刚;于腾;杜琳3.右美托咪定对感染性休克大鼠脾脏及胸腺caspase-3、caspase-8、caspase-9表达及淋巴细胞凋亡的影响 [J], 姬斌;秦培顺;南洋;黄葱葱;李军4.雷公藤红素对体外培养变应性接触性皮炎小鼠淋巴细胞凋亡及Caspase-8表达的影响 [J], 陈保疆5.雷公藤甲素对体外培养的变应性接触性皮炎小鼠Th细胞Fas表达的影响 [J], 陈保疆;王萍;李晓莉;张玉环因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
体外诱导内质网应激的常用方法和机制探讨
体外诱导内质网应激的常用方法和机制探讨敖娜【摘要】Endoplasine retirulum stress( ERs )is the basis of the pathophysiology of many diseases. In the cardiovascular, endocrine and metabolic*, neurological and other systems development and progression of the diseases, it has played an important role. In this context, in vitro induction of ERs is the key for further research. In recent years, lots of ERs indurers have been applied to the researchs, but their mechanisms are different. Understanding and mastering the mechanism and application of some common indurers can help to the studies of diseases which is associated with ERs.%内质网应激(ERs)是多种疾病的病理生理基础,在心血管、内分泌及代谢、神经等多种系统疾病的发生、发展过程中都扮演着重要角色,在此背景下,体外诱导ERs成为进一步研究的关键.近年来各项相关研究应用到的ERs诱导剂很多,其作用机制各不相同.了解及掌握一些常用ERs诱导剂的作用机制及适用范围,对与ERs相关疾病的体外研究有重要意义.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2012(018)022【总页数】4页(P3727-3730)【关键词】细胞;内质网应激;衣霉素;毒胡萝卜素;蛋白酶体抑制剂;非酯化脂肪酸【作者】敖娜【作者单位】中国医科大学附属第一医院内分泌科,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】R34内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERs)是细胞内一种适应性机制，持续或过强的ERs则诱导细胞凋亡，造成组织损伤。
体外培养——精选推荐
体外培养：将活体细胞成分（活体组织、活体器官、活体细胞）甚至活的个体（病原微生物）从体内或寄生体内取出放在类似于体内生存环境的体外环境，让其生长发育的过程。
2、器官培养：将活体器官或器官原基放在体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的过程。
3.器官的体外培养：值整个器官、器官的一部分或器官原基放在体外环境中，让其生存和生长的过程。
4、组织培养：将活体组织放在体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的过程。
5、细胞培养：将活体细胞（分散的细胞）放在体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的过程。
6.体内培养：将活体结构成分，从生物体内或寄生虫体内取出放在另一种生物体内然后进行生长发育的过程。
7.细胞系：原代培养植物经首次培养后获得的种群。
8、细胞株：通过选择法或克隆法，从原代细胞器中或培养物中获得的具有特殊性质或标志的培养物称为细胞株。
9、原代培养：指第一次培养将培养物放置在体外培养环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。
10、传代培养：指培养物长满培养空间，并发生相互接触性抑制现象，需要将培养物分割成小部分，重新将培养物放入另外的培养器皿内进行培养的过程。
11、生长基质：泛指培养物附着的各种介质。
狭义特指在塑料或玻璃表面涂布一层能够促进培养物吸附，帖壁与铺层的生物活性物质。
12、复苏：以一定的复温速率将冻存培养物恢复到常温的过程。
13、动物细胞大规模培养技术：人工条件下（设定PH值，温度溶氧，培养工艺等）在动物细胞生物反应器中高密度大量的培养有用动物细胞，以生产珍贵生物制品的技术。
14、悬浮培养：质细胞在生物反应器中自由悬浮培养的过程。
15、固定化培养：将动物细胞与水不溶性载体结合起来在进行培养的过程。
16、结缔组织：是动物体内主要的支持性组织，由结缔组织和大量间质构成。
17、寄生虫的体外培养：模拟宿主体内环境，对寄生虫某一生活史阶段的虫体或细胞进行离体培养过程。
间充质细胞：各种结缔组织细胞的干细胞。
内质网应激与细胞凋亡
内质网应激与细胞凋亡王在然 杨冀萍中图分类号：R 329.2+8 文献标识码：A 文章编号：1006-351X（2019）06-细胞凋亡（apoptosis）是通过选择性清除破坏、突变或对整个生物体构成威胁的细胞来维持组织平衡的关键机制。
研究显示，内质网（endoplasmic reticulum，ER）未折叠蛋白的聚集和由此引发的细胞应激反应能够诱导细胞凋亡的发生［1］。
本文主要对近年来内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）和细胞凋亡研究进展进行综述。
一、内质网通路与未折叠蛋白反应ER 是真核细胞中重要的细胞器，涉及多重细胞功能，如充当蛋白合成的“加工厂”、有助于钙的储存和调节、脂质的合成和存储、糖代谢、以及细胞间联系等［2-3］。
因其多样的功能ER 被称为动态的具有“营养感知”（nutrient sensing）的细胞器，可利用代谢重组反应协调能量波动、调节代谢和决定细胞命运［4］。
通常情况下，ER 在细胞中保持稳定状态，然而多种应激刺激如氧分压降低、病毒感染、营养缺乏、快速细胞增殖、氧化还原失衡、蛋白质合成水平升高、Ca 2+水平降低等［5］可以引起未折叠或错误折叠蛋白在ER 集聚，引起ERS。
此时机体启动未折叠蛋白反应（unfolded protein response，UPR）清除错误折叠蛋白，重新恢复蛋白质体内平衡，恢复细胞功能［6,7］。
最终错误折叠蛋白是被ER 相关性降解（ER-associated degradation，ERAD）这一过程清除［8-9］。
ERAD 的增加可以减少未折叠蛋白的积累，增加ER 和ER 分子伴侣折叠蛋白的能力，以稳定蛋白质的折叠［1］。
然而，如果ERS 强度过大或长时间持续存在，超过UPR 处理未折叠或错误折叠蛋白的能力，导致ER 运行机能障碍，不能及时恢复内环境稳定，UPR 则可通过激活下游凋亡信号分子，由促生存机制转为促凋亡机制，引起细胞凋亡［10］。