急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义
FCM(流式细胞术检测)原理及临床应用
流式细胞术(flow cytometry FCM)是利用流式细 胞仪对单个生物颗粒(红细胞、白细胞、各类组织细 胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和 生物学特性进行多参数定量分析，并能对特定细胞 群体加以分选的分析技术。
FCM的工作原理
流式细胞仪组成：
1.液流系统 2.光学系统 3.数据处理系统
双标记或多标记分析：目前使用的流式细胞仪 能用一个激光束激发检测三色甚至四色荧光信 号。检测时需注意荧光补偿。
常用免疫荧光染料组合
荧光染料 FITC+PE
激发波长 （nm）
488
发射波长（nm） 525、575
颜色 绿色、橙色
FITC+PeCy5
488
525、675
绿色、红色
FITC+ECD
488
实体瘤以多倍体居多；
G0 期：DNA 合成静止期 G1 期：DNA 合成前期 S 期： DNA 合成期 G2 期：DNA 合成后期 M 期： 细胞分裂期
DNA 倍体 2N 2N
2N-4N 4N 4N
DNA非2倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指 标:
良性肿瘤和正常组织良性增生不出现DNA非2倍体细 胞而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞；
过去认为 FCM测定残存白血病细胞不可靠， 因为现用的 McAb不能鉴别正常血细胞与白血 病细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗 原，但近来有人提出根据白血病细胞的以下特 征， FCM检测的敏感度可明显提高
白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应 的正常血细胞
如小儿ALL，其CDl0+细胞的荧光强度可 高达3-4个对数值，而其 CD45则为弱阳性或 阴性。
525、625
流式 白血病诊断标准
流式白血病诊断标准白血病是一种严重的血液疾病，它由骨髓中白细胞的恶性增殖引起。
白血病可以分为急性和慢性两种类型，根据病变的细胞类型又可分为淋巴细胞白血病和髓细胞白血病。
由于白血病的早期症状通常不明显，因此诊断时常常需要结合多种方法，流式细胞术是其中重要的一种。
下面我将针对流式细胞术在白血病诊断中的应用，制作一份2000字的中文文档。
一、流式细胞术概述流式细胞术是利用细胞表面特异性抗原的单克隆抗体通过细胞表面标记的荧光素标记，然后利用流式细胞仪对荧光素标记的细胞进行检测和分析的一种生物学技术。
这种技术主要应用于白血病的诊断和分类、溶血性疾病、免疫反应细胞数量的统计等。
在白血病的诊断和分类中，流式细胞术可通过检测不同免疫分型的表面抗原，帮助医生确定病变细胞的类型，进而指导治疗方案的制定。
二、流式细胞术在白血病诊断中的应用1. 急性白血病的诊断在临床上，对于急性白血病的诊断，流式细胞术是非常重要的辅助方法。
通过检测患者骨髓或外周血中异常增生的白细胞，可以根据其表面标记来区分不同的白血病亚型。
急性淋巴细胞白血病常表示为T细胞或B细胞的异常增生，而急性髓系白血病则表现为髓系幼稚细胞的异常增生。
流式细胞术通过检测表面抗原CD10、CD19、CD20等，可以辅助医生对急性白血病的类型进行准确诊断。
2. 慢性白血病的诊断对于慢性白血病的诊断，流式细胞术同样发挥着重要的作用。
典型的慢性淋巴性白血病常表现为B细胞的异常增生，而慢性髓细胞白血病则以成熟淋巴细胞或髓系细胞的异常增生为特征。
利用流式细胞术检测CD5、CD23、CD38等表面抗原，可以协助医生对慢性白血病的类型进行明确诊断。
三、流式细胞术在白血病治疗监测中的应用除了白血病的诊断和分类，流式细胞术还可以在治疗过程中进行监测。
通过检测患者骨髓或外周血中的病变细胞，可以评估治疗的疗效和病情的变化。
在白血病治疗过程中，流式细胞术可以帮助医生判断复发情况、指导随访治疗，并且可以在线粒体或溶酶体表面标识物的发生、发展以及功能改变等进行深入研究，这对于指导治疗和预后评估是非常有益的。
急性髓系白血病108例免疫表型特征与临床预后分析
急性髓 系 白血病 １ ０ ８ 例免疫表 型特 征与临床 预后分析
ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｔ ａ ｉ ｙ ｕ ａ ｎ ０ ３ ０ ０ ０ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
【 Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｉ ｍ ｐ ａ ｃ ｔ ｏ ｆ ｉ ｍ ｍｕ ｎ ｏ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｔ ｙ ｐ ｉ ｎ ｇ ｏ ｎ ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｏ ｎｏ ｇ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｍｙ ｅ ｌ ｏ ｉ ｄ ｌ ｅ ｕ ｋ ａ ｅ ｍ ｉ ａ ｆ Ａ ＭＬ ） ．Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｆ ｌ ｏ ｗ ｃ ｙ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ（ Ｆ Ｃ Ｍ） ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｔ ｈ ｅ ｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ｏ ｆ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍ ａ ｒ － ｒ ｏ ｗ ｉ ｎ １ ０ ８ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗ ｉ ｔ ｈ ｐ ｒ ｉ ｍ ａ ｒ ｙ Ａ ＭＬ ． Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ④Ｏ ｆ Ａ ＭＬ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ，ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ ａ ｎ ｉ ｔ ｇ ｅ ｎ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｍ ａ ｉ ｎ ｌ ｙ Ｃ Ｄ ３ ３（ ９ ６ ． ３ ％） ，Ｃ Ｄ １ ３（ ８ ８ ． ０ ％）ａ ｎ ｄ ＭＰ Ｏ（ ８ ８ ． ０ ％）ｉ ｎ ｂ ｏ ｎ ｅ ｍＭ ｌ ｏ ｗ ．Ｎ ｏ ｔ ａ ｂ ｌ ｙ ，Ｃ Ｄ ３ ８ ｗ ａ ｓ ｍ ｏ ｓ ｔ ｃ ｏ ｍ ｍｏ ｎ ｌ ｙ ｓ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ
流式细胞术在我院急性白血病免疫分型中的应用
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． １ １ ７ ４ ８ ／ ｂ ｊ ｍｙ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６ ． １ ７ ０ ３ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ６ ． ０ １ ６
Байду номын сангаас
Ａｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｆｌ ｏ ｗ Ｃｙ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ｉ ｎ Ｉ ｍｍｕ ｎｅ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈｅ Ｃｌ ａ ｓ ｓ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｃ ｕｔ ｅ Ｌｅ ｕｋ ｅ ｍｉ ａ
（ 福建 中医药大学附属三 明市 中西 医结合 医院， 福建 三 明 ３ ６ ５ ０ ０ １ ） 摘要： 目的 探讨本实验室所 用 １ ３种单抗对 白血病免疫分型的应用价值。方法 应 用流式细胞术 （ Ｆ Ｃ Ｍ） 使用 １ ３种单抗
对９ ９例急性 白血病 进行 免疫分型 ， 与形 态学分型相 比较。结果 使 用 １ ３种单 抗从 ９ ９例急性 白血 病 中分 出髓系 白血 病
（ Ａ ＭＬ ） ５ ９例 、 淋 系白血病 （ Ａ Ｌ Ｌ ） ２ ７例 、 混合 型（ Ｍ Ａ Ｌ ） ５例 、 未分化 型 （ Ａ Ｕ Ｌ ） ２例 ， 诊 断率达 ９ ３ ． ９ ％（ ９ ３ ／ ９ ９ ） 。Ａ ＭＬ中各 抗 原表达情况 ： ｃ Ｄ １ ３ ＞Ｃ Ｄ ”＞ ｃ Ｄ ｌ ４ 、 ｃ Ｄ ７ ＞ｃ Ｄ ２ 、 ｃ Ｄ ｌ ９＞ Ｃ Ｄ １ ０＞ Ｃ Ｄ ５＞ Ｃ Ｄ ２ ０ ， 其 中多表达 ｃ Ｄｌ ３ 、 ｃ Ｄ ３ ３ ； Ａ Ｌ Ｌ中各抗 原表 达情 况： Ｃ Ｄ ｌ ９ ＞Ｃ Ｄ ｌ ３ ＞Ｃ Ｄ ｌ ０ ＞Ｃ Ｄ ２ ０ ＞Ｃ Ｄ ３ ３ ＞Ｃ Ｄ ５ ＞Ｃ Ｄ ７ ＞Ｃ Ｄ ２ 、 Ｃ Ｄ …其中 Ｃ Ｄ ｌ ｕ 、 Ｃ Ｄ Ｃ Ｄ Ｃ Ｄ ２ ０ 表达率较高 。免疫分 型与形 态学分型结果相 比较 ， Ａ ＭＬ二者的吻合率 为 ９ ０ ． ５ ％（ ５ ７ ／ ６ ３ ） 、 Ａ Ｌ Ｌ二者 的吻合率 为 ７ ６ ． ５ ％（ ２ ６ ／ ３ ４ ） ； 其 中 １例 Ｍ ０免疫 分 型为 Ｂ ／ Ｍ混合 、 １ 例 Ｍｌ 免疫分 型为 Ｔ ／ Ｍ混合 、 １ 例Ｍ ａ 免疫分 型为 Ｔ ／ Ｍ 混合 、 １ 例Ｌ 。 免疫分型 为 Ｂ ／ Ｍ混 合 、 １例 Ｌ 免 疫分型为 Ｔ ／ Ｂ混合 、 １ 例Ｌ ： 免疫分型为 Ｌ ｙ ＋一 Ａ ＭＬ 、 ２例 Ｌ 免疫 分型 为 Ａ Ｕ Ｌ ； １ 例 形态学 为浆细 胞 白血 病的免 疫分 型为 Ａ ＭＬ 、 １ 例淋单混合型 白血病 Ｃ Ｄ 、 Ｃ Ｄ 。 、 Ｃ Ｄ 。 阳性 。结论 合型和未分化型 白血病 的诊断亦能 明确 。 关键词 ： 流式细胞术 ； 白血病 ； 免疫 分型
成人急性淋巴细胞白血病免疫表型的特点分析
·论著·成人急性淋巴细胞白血病免疫表型的特点分析王晓雪，王萍萍，梁颖，李艳，颜晓菁（中国医科大学附属第一医院血液科，沈阳110001）摘要目的探讨成人急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型的特点和临床意义。
方法应用流式细胞术检测57例初诊成人ALL患者的免疫表型，分析其临床特点和意义。
结果B细胞急性淋巴细胞白血病（B⁃ALL）患者中CD19、CD22表达阳性率明显高于CD10和CD20（P<0.05）。
T细胞急性淋巴细胞白血病（T⁃ALL）中CD7和cCD3表达阳性率高。
早期抗原CD34、CD38在各种分型ALL中均高表达。
HLA⁃DR仅在B⁃ALL中呈较高的阳性表达率。
My+⁃ALL和My-⁃ALL患者比较，基本资料、完全缓解率和复发率均无统计学差异（P>0.05），但My+⁃ALL患者早期抗原CD34和HLA⁃DR抗原阳性表达率明显高于My-⁃ALL患者（P<0.05）。
细胞遗传学分析提示，核型异常组患者复发率高。
高危核型组患者较标危核型组CD20和CD13表达强（P< 0.05）。
结论成人ALL患者免疫分型及染色体核型有着明显的异质化特点，染色体核型异常患者复发率高，可以为临床医生对ALL进行分层诊断和个体化治疗提供依据。
关键词急性淋巴细胞白血病；免疫分型；流式细胞术；细胞遗传学中图分类号R733.7文献标志码A文章编号0258-4646（2015）10-0904-05网络出版地址Immunophenotype Analysis of Adult Patients with Acute Lymphoblastic LeukemiaWANG Xiao⁃xue，WANG Ping⁃ping，LIANG Ying，LI Yan，YAN Xiao⁃jing（Department of Hematology，The First Hospital，China Medical University，Shenyang110001，China）Abstract Objective To study the immunophenotype and chromosome karyotype of57adult patients with newly⁃diagnostic acute lymphoblastic leukemia（ALL）.Methods The immunophenotype and chromosome karyotype of57adult patients with newly⁃diagnostic ALL were determined by using flow cytometer and karyotyping，and then the clinical characteristics and significance were analyzed.Results In patients with B cell acute lymphoblastic leukemia（B⁃ALL），the expression of CD19and CD22were significantly higher than CD10and CD20（P<0.05）.The expression of CD7and CD3were much higher in patients with T cell acute lymphoblastic leukemia（T⁃ALL）.As for the early antigen，patients of all subtypes of ALL showed high expression rate of CD34and CD38.In addition，the HLA⁃DR was only detected in B⁃ALL.There was no difference in comparison with clinical characteristics，total rate of CR and rate of relapse between ALL with and without myeloid antigen expression.The expression rate of CD34and HLA⁃DR was higher in My+⁃ALL（P<0.05）.The relapse rate was much higher in these patients with abnormal karyotype than other pa⁃tients（P<0.05）.Patients with high⁃risk karyotype showed higher expression rates of CD20and CD3than those with standard⁃risk.Conclusion The immunophenotypes and chromosome karyotypes show obviously heterogeneous features，and the patients with abnormal karyotypes have higher relapse rate.These above mentioned methods are applicable for the diagnosis and individualized treatment of ALL patients.Key words acute lymphoblastic leukemia；immunophenotype；flow cytometry；chromosome karyotype急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leu⁃kemia，ALL）是血液系统的恶性肿瘤，成人与儿童相比疾病恶性程度高，患者预后较差，生存期短［1］。
白血病免疫分型
CD11b
CD117
CD45
CD11b
CD5
Side scatter
+
Common B-ALL
急性前B细胞白血病
+
Pre B-ALL
急性B细胞白血病
+
B-ALL
++ +/- + -/+ + --
- -+ -+ +- -/+ +
意义：Common B-ALL 预后相对较好，CD34+B-ALL比CD34预后好，但CD34+患者伴Ph1+预后差。B-ALL预后相对 差，但随化疗方案改进，预后有所改善。
(二）.正常T细胞标志：根据在胸腺内发育阶段分4期
CD7 CD2 CD5 CD34 CD1a CD3c/m CD4 CD8
I期 ： + + + +
-/+
II期： + + + - + -/+
III期： + + + - + +/+ + +
Ⅳ期： + + + - -
+/+ +/- +/-
泛T：CD2，CD5，CD7， cCD3 幼稚T：CD34，TdT，CD1a, CD4/8， 成熟T：CD3，CD4，CD8
流式白血病检测指标
流式白血病检测是一种常用的实验室检测方法，可用于诊断和监测白血病。
以下是一些常见的流式白血病检测指标：
1. 免疫表型：通过检测细胞表面的特定抗原或标记物，确定白血病细胞类型。
例如，在急性淋巴细胞白血病（ALL）中，常见的免疫表型指标包括CD10、CD19和CD20等。
2. DNA细胞倍体性：通过测量细胞中DNA含量的变化，判断细胞是否存在异常的染色体数量或结构。
这对于诊断和分型白血病具有重要意义。
3. 克隆性分析：利用多参数流式细胞术，检测白血病细胞中的克隆性异常。
这可以帮助确定异常细胞的来源和进展情况。
4. 红细胞内吞作用：通过检测红细胞内部存在的白血病细胞或细胞碎片，了解疾病的程度和进展。
5. 骨髓细胞形态学分析：通过观察和评估骨髓细胞的形态学特征，包括细胞形状、大小、核与胞浆比例等，判断是否存在白血病细胞。
这些指标通常结合使用，以获得更准确的白血病诊断和监测结果。
具体的指标选择和解读还需要根据医生的建议和实际情况进行。
1。
流式细胞项目参考值和意义
【参考范围】CD34+细胞在正常外周血中占有核细胞的0.00001～0.0001(0.001％～0.01%），骨髓0.005～0.015(0.5％～1.5%)，脐血0.005～0.035(0.5%～3.5%）。
【影响因素】骨髓或外周血白细胞要用PBS稀释至1×10^6/ml后进行免疫标记，并注意设立相应的同型对照。
【临床意义】1．外周血造血干细胞（PBSC）采集前CD34阳性细胞动员有效性的监测可以指导临床制定采集计划。
一般来说，外周静脉血有核细胞中CD34+细胞达到0.001(0.10%）以上时，可以考虑行PBSC单采术。
否则，应继续动员。
2．各种造血干细胞移植物的CD34+细胞剂量控制BMT、PBSCT的CD34+细胞剂量＞2×10^6/kg，脐血干细胞移植时，CD34+细胞剂量可少至BMT成PBSC的1/10，即2×10^5/kg。
3．化疗强弱的掌握化疗后血象的恢复快慢取决于对造血干／祖细胞损伤的强度。
CD34+细胞的测定可以判断化疗的强度。
要求化疗强度控制在杀伤一定比例而非所有CD34+细胞为度。
4．贫血的鉴别（如再障、缺铁性贫血）如果再障的原因属于细胞受累，则CD34+细胞可以明显降低（<0.01)，缺铁性贫血时，CD34+细胞数量应在正常范围之内。
5．基因治疗CD34+的HSC作为缺陷基因的靶细胞有它独特的优点，因为HSC具有自我更新的能力，因此，缺陷基因导入此类细胞后能维持终身，从而彻底治愈疾病。
显然，CD34+HSC 的精确测定显得非常重要。
【参考范围】CD19+:0.10～0.15(10%～15%）。
【影响因素】1．标本最好用EDTA抗凝，其次用肝素。
2．标本要新鲜采集，不能发生凝血。
3．制备细胞悬液时，使用标准溶血剂以使红细胞充分溶解。
4．血液采集后，应尽快进行免疫荧光染色和固定，最迟不能超过6h。
5．标记后的细胞应尽快上机检测，最迟不能超过72h。
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·论著·作者简介：王桂芝，主任医师，E-mail ：zhanghw1205@163．com 急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义王桂芝，秦文华（中平能化集团总医院病理科，平顶山467000）［摘要］目的探讨急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义。
方法100例急性白血病，采用流式细胞术进行急性白血病免疫表型检测。
结果①用特异性抗体将急性淋巴系白血病分为T 细胞系列急性淋巴细胞白血病（T-ALL ）和B 细胞系急性淋巴细胞白血病（B-ALL ）。
②用特异性抗体使急性髓细胞白血病（AML ）的分型更明确。
③发现急性淋巴细胞白血病（ALL ）中伴髓系抗原表达（My-ALL ）、AML 中伴淋系抗原表达（Ly AML ）和混合型白血病。
结论免疫学分型能反映白血病细胞的特征，提高了诊断的准确性。
［关键词］白血病；免疫表型分型；流式细胞术中图分类号：R733．71文献标识码：ADOI ：10．3969/J．issn．1672-6790．2012．02．011Investigation of immunophenotype in acute leukemia via flow cytometryWANG Gui-zhi ，QIN Wen-hua （Patho-logical Center of General Hospital of Pingdingshan Coal Group ，Pingdingshan ，467000）［Abstract ］Objective To explore immunophenotyping specificities in acute leucocythemia via flow cytome-try．MethodsFlow cytometry was used to have immunophenotyping of acute leucocythemia tested and assist in mak-ing the diagnosis leukemia detection．Results（1）Acute lymphocytic leukemia was divided into T cells in series ofacute leukemia （T-ALL ）and B cell lines acute leukemia （B-ALL ）by using specific antibodies．（2）with specific an-tibodies ，acute myelogenous leukemia （AML ）can be diagnosed more clear．（3）Acute lymphocytic leukemia （ALL ）with myeloid antigen expression （My-ALL ），AML antigen expression from Ly （AML ）and mixed leukemia were found．ConclusionImmunophenotype can reflect the heterogeneity of leukemia cells more distinctly and consequent-ly ，enhance the exactness of diagnosis．［Key words ］Leukemia ，Immunophenotyping ，flow cytometry急性白血病（AL ）长期以来主要通过骨髓细胞形态学和细胞组织化学进行诊断，但仍有患者由于细胞形态不典型、细胞发育幼稚等导致难以明确诊断和分型。
随着国际上白血病诊断手段的迅速发展，至今流式细胞术（FCM ）已被认为是白血病的临床检测的首选方法。
白血病免疫分型是MIC 分型的重要组成部分，是形态学分型的重要补充和进一步深化。
对白血病细胞抗原的分析研究有助于准确判断被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度，为诊断、治疗及预后提供依据。
本研究对AL 患者采用流式细胞术进行免疫表型检测，协助诊断白血病。
1资料与方法1．1临床资料为本院2009年5月至2011年8月收治的100例AL 患者，男58例，女42例；年龄1 75岁，平均年龄36岁。
所有患者均经骨髓细胞形态学检查，组化染色诊断为AL ，同时抽取患者骨髓进行流式细胞术免疫分型。
形态学检查（FAB 分型）初诊急性淋巴细胞性白血病（ALL ）14例，急性非淋巴细胞性白血病（ANLL ）81例，急性粒-淋混合型白血病1例，4例形态学检查难以确诊。
1．2主要试剂选用三色直接标记的荧光抗体，以IgGl-FITC /IgGl-PE /CD45-PC5为阴性对照的抗体组合：CDl3-FITC /CD33-PE /PC5-CD45、CD7-FITC /CD117-PE /PC5-CD45、CD4-FITC/CD8-PE/PC5-CD45、CD20-FITC/CD34-PE/PC5-CD45、CDl9-FITC/CD5-PE/PC5-CD45、CD14-FITC/CD64-PE/PC5-CD45、HLA-DR-FITC /CD11b-PE /PC5-CD45、CD10-FITC /CD22-PE /PC5-CD45、CD38-FITC /CD56-PE /PC5-CD45，胞内抗体组合为cMPO-FITC /cCD79a-PE /cCD3-ECD /PC5-CD45，溶血素及透膜剂。
上述所有试剂及鞘液均购自美国Beckman-Coulter 公司。
1．3主要仪器美国BECKMAN 公司产EPICS XL 型流式细胞仪。
1．4实验方法取患者经肝素或EDTA 抗凝的骨髓1ml，根据骨髓增生程度及外周血白细胞数，部分样本用0．9%氯化钠注射溶液稀释至细胞数（1 10）ˑ109/L备用。
分别经细胞膜表面标记方法及细胞浆标记方法处理后上机行FCM免疫表型检测。
CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色和四色流式细胞术免疫分析。
采用Cell Quest软件对检测结果进行分析：①膜表面抗原≥20%为阳性；②胞浆抗原及CD34、CD117≥10%为阳性；③AL免疫分型标准参照欧洲白血病免疫特征研究组（EGIL）的积分标准。
1．5统计学处理采用SPSS14．0软件对所得结果进行统计，采用χ2检验。
2结果采用CD45/SSC双参数散点图设门方法，区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和幼稚细胞群。
用四色胞内抗体组合cM-PO-FITC/cCD79a-PE/cCD3-ECD/PC5-CD45流式细胞术免疫分析，MPO是髓系特异性抗原，CD79a是B淋巴系特异性抗原，CD3是T淋巴系特异性抗原，来区分T淋巴系、B淋巴系和髓系。
干祖系抗原CD34、HLA-DR、CD38分析分化阶段。
根据异常细胞表达的抗原再具体分析其亚型。
2．1ALL免疫分型2．1．1ALL免疫分型亚型诊断依据CD34、HLA-DR、cCD79a、CD19、CD10、CD20、CD22、CD7、cCD3等淋巴系抗原的表达，诊断为ALL，其中CD34、HLA-DR、cCD79a、CD19、CD20、CD22抗原阳性诊断B-ALL8例（χ2=19．89，P＜0．05）；CD34、HLA-DR、CD5、CD7、cCD3抗原阳性诊断T-ALL6例（χ2= 22．98，P＜0．05），见表1。
2．1．2ALL伴髓系抗原的诊断14例ALL中有2例伴髓系抗原CD13、CD33表达诊断为My+ALL。
2．2AML免疫分型亚型2．2．1AML免疫分型各亚型诊断在86例AML 中，M2占18．6，M3和M4各占17．6，M1占15．1，M5占39．5。
依据CD34、HLA-DR的表达与否，鉴别诊断M3与M2。
依据CD14表达情况，鉴别诊断M4、M5。
其中2例M5不表达CD34而表达CD38（χ2=59．13，P＜0．01），见表2。
2．2．2AML伴淋系抗原的诊断86例AML中有20例伴淋系抗原CD7、CD19表达，诊断为Ly+ AML。
M2的交叉表达现象最多见，其次为M5。
2．2．3急性混合型白血病的诊断急性混合型白血病（BAL）3例占3．0，其中B/M2例，T/M1例，主要表达CD13、CD33等抗原。
3讨论用FCM进行白血病免疫分型是对形态学诊断的补充和有力佐证。
传统形态学检查是诊断白血病的基础，但有局限性，其检测灵敏度低、主观性强。
当遇到形态学难以诊断的白血病，只有靠免疫分型来辅助诊断。
目前白血病免疫分型主要用FCM进行检测，其原理是利用荧光素标记的单克隆抗体作表1ALL免疫分型结果分型例数T淋巴系列阳性CD3CD5CD7CD79aB淋巴系列阳性CD22CD10CD19CD20髓系抗原阳性CD33CD13干-祖细胞阳性CD34HLA-DRALL14T-A LL6656000001064 B-A LL8000856871186表2AML免疫分型结果分型例数淋巴系列阳性CD5CD7CD22CD19髓系抗原阳性CD64CD33CD13CD14CD117干-祖细胞系阳性CD34HLA-DRANLL86M11300000870131312 M2160623016100161614 M31200000121101100 M41100005910371010 M534214000332216152832分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞质或细胞核的免疫表型，从而能高速、多参数、客观地定性、定量地检测白血病细胞，可供检测的标本种类是骨髓、外周血、脑脊液及其他体液［1］。
如采用CD45/SSC双参数散点图设门方法，能清楚地区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和幼稚细胞群。
该方法在AL 免疫分型中的地位已得到充分肯定。
CD45是人类白细胞共同抗原，表达于所有的白细胞膜，但在红细胞和血小板上缺如，其表达强度因白细胞种类、分化成熟程度及增殖状态而异。
CD45表达量顺序为淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、原始幼稚细胞。
SSC反映细胞的颗粒性，SSC由大到小依次为中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞与原始/幼稚细胞、红细胞［2］。
故当CD45与散射光结合时，即能将原始细胞与正常的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞明显区分开。
AL免疫分型的诊断：（1）ALL免疫分型亚型的诊断：按EGIL提出的ALL免疫学分型［3］，本研究依据B细胞系CD19、CD1O、CD20、CD22和T细胞系CD7、CD5、CD3、CD4等的表达情况，将ALL分为T-ALL和B-ALL及T/B双表型。