Waters Alliance e2695 维护保养
Empower3网络版系列高效液相色谱的日常使用与维护保养
1 目的规范本实验室Empower3网络版系列高效液相色谱的日常使用和维护保养，保证仪器的正常运转，确保检测工作的顺利进行。
2 范围适用于本实验室Empower3网络版系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。
3 职责实验员：实验员负责Empower3网络版系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。
仪器维护人员：监督实验员对Empower3网络版系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。
实验室主管：监督本操作规程的实施。
4 内容4.1 系统组成本系统由Waters e2695分离单元、Waters2998二极管阵列检测器、计算机、Waters Empower3色谱工作站和数据库服务器组成。
各部件均有电源插头。
Waters e2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个进样瓶的自动分离单元，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗洗脱，溶剂瓶托盘，显示器，用户界面。
4.2 开机4.2.1 依次打开数据服务器、Waters e2695分离单元、Waters2998二极管阵列检测器、计算机、Waters Empower3色谱工作站的插头电源。
4.2.2 依次打开数据服务器设备电源，登录服务器。
4.2.3 Waters e2695分离单元、Waters2998二极管阵列检测器、计算机的设备开关。
4.2.4 连接Waters e2695分离单元后，约1分钟会进入自动校验，约三分钟内各部件的初始化完成，待主屏幕上方标题区出现“ldle”时，仪器进入待命状态。
4.3 溶剂管路系统的准备4.3.1 流动相脱气待流动相准备齐全，放入流动相托盘中，按【Menu/Status】,进入“Status（1）”屏幕界面。
4.3.2 灌注当色谱仪管路中没有溶剂或系统中有空气时，按干灌注(Dry Prime),注入流动相，否则，进行湿灌注（Wet Prime）以排除气泡。
干灌注：按主控制面板【Menu/Status】,进入“Status（1）”界面，按【Direct Function】，选择【Dry Prime】，择溶剂通道，如Open A，选【Durationlli】按数字键，输入5分钟，按“Continue”，待限定时间结束后，重复操作，使所需要的通道注满流动相。
waters日常维护及操作
保存于聚乙烯瓶中的超纯水
测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm
色谱柱安装及连接的机械因素
连接适当
连接不妥，造成漏液
连接不妥
谱带展宽
色谱泵
色谱泵运行
注意∶
排气后，先设流速为 0 恢复排气时断开的部分，如∶进样器、色谱柱 根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值
色谱泵在停用时,应先用水洗去缓冲盐,然后用纯 甲醇充满泵头及管路,并保存在纯甲醇中
色谱泵
— 用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
紫外检测器
保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗；
使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内； 检测器灯有一定寿命，超过4小时不用时可以不开灯； 尽量避免使用pH>9.5的流动相，以防腐蚀流通池石英 窗，避免使用可能析晶的流动相，防止流通池堵塞。
HPLC常见故障分析
干灌注和湿灌注
按主机上的“Menu/Status” 键，进入Status界面。检查真 空脱气机degasser的模式mode 是否为on。（一般为on）
当溶剂的管子是空的时候，或 不小心走干溶剂的时候执行干 灌注 (Dry Prime) 当需要排除气泡时，或平时更 换流动相时执行湿灌注 (Wet Prime) 。
供电电源的影响
泵不良 – 检修泵
HPLC流路基线噪音问题分析
基线有无规律的尖峰
气泡 - 溶剂脱气 电路接触不良 - 保证清洁, 接线牢固, 接点无氧化 光源灯不良- 检查处理 电噪声 - 去除噪声源
Waters2695操作规程
Waters2695高效液相色谱操作规程[开机程序]1. 状态检查：1）检查仪器外观是否完好2）检查各种线缆连接是否稳固，外表有无损伤痕迹3）确认环境温度在15至35℃之间4）相对湿度在20%至80%之间2．配件安装：无3. 接线要求：1）高效液相色谱主机电源2）连接电脑主机和显示器电源4. 开机步骤：1）打开电脑电源，进入windows系统2）打开高效液相色谱电源，仪器开始自检（约5～6min），待仪器操作面板上出现“Idle”字样表示自检成功，仪器进入待命状态。
[测试步骤]1. 进入软件1）双击电脑桌面上的Empower快捷图标，出现Empower登陆窗口。
输入用户名与密码，默认账号为“system”，密码为“manager”，点击“OK”进入Empower 工作站。
2）选择“运行样品”界面，点击“确定”,然后选择待选定的操作项目以及色谱系统2 编辑仪器方法和方法组1）在“运行样品”界面中，监视区单击方法组编辑向导。
2）选择新建按钮，弹出仪器方法编辑器。
3）通用编辑页面中，可设置单次输送体积，查看脱气选项，确认设置正确，选择等度或者梯度，总流量以及流动相配比等选项。
4）单击2475图标，弹出2475编辑界面，在波长模式中选择相应的波长模式，单波长或者双波长，输入所需的波长，选择相应的采样速率，一般为2点/秒。
5）点击“文件”，选择“另存为”，输入仪器方法名称，点击“保存”，退出。
6）在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击“下一步”。
7）在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择"无处理"、"无报告"），点击“下一步”。
8）输入方法组名称，单击"完成"。
3 运行方法进样1）在“运行样品”界面中，选择相应的仪器方法，点击“监视器”，在监视窗口监视基线至系统平衡，停止系统监视状态，点击停止按钮。
单进样，点击参数编辑快捷方式进入定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数。
Waterse2695高效液相色谱仪操作规程
Waterse2695高效液相色谱仪操作规程1目的指导和规范Waterse2695高效液相色谱仪的操作。
2适用范围该操作规程适用于Watere2695高效液相色谱仪的操作。
3职责检验员应按操作规程进行仪器操作，质量监督员负责监督该操作规程的正确执行。
4操作4.1仪器组成和开机仪器组成本仪器由Waterse2695分离单元、Waters2998二极管阵列检测器、WatersELSD2424蒸发光散射检测器、Empower3色谱工作站和打印机组成。
Waterse2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气，可容纳120个样品瓶的自动分离单元，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘；显示器，键盘用户界面。
开机依次接通Waterse2695分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。
接通Waterse2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约3mn内各部件的初始化完成，待主屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。
4.2溶剂管路系统的准备流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按［Menu/Status】，进入“Status(1)”屏幕，光标选“Degasser”，按［Enter】。
、•^、、灌注当色谱仪流路没有溶剂或系统中有空气时，需进行干灌注(DryPrime)，注入流动相。
否则，进行湿灌注(WetPrime)以驱除气泡。
干灌注：按主机面板上［Menu/Status］,进入“Status(1)”显示，按［DirectFunction］,选择“DryPrime”，选溶剂通道，如OpenA,选“Durationlli按数字键输入5分钟，按”COntinue”，待限定时间结束后，重复操作，使所需的溶剂通道注满流动相。
湿灌注：进入“Status(1)”显示，选溶剂通道，输入100%,按［DirectFunction］，选“WetPrime”，按【OK］,根据面板提示设置流速及时间(默认流速为7.5ml/min,一般不用更改，时间可设置为5min)，按【0K］。
高效液相色谱仪的维护和保养
高效液相色谱仪的维护与保养液相色谱仪应该进行适当的维护保养，维护保养按照维护频率分为日常维护、每周维护及每月维护。
每周维护、每月维护活动均应记录在仪器维护记录本上。
1日常维护1.1溶剂配制所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水。
溶剂必须经过滤膜过滤，过滤水和有机相时应该选用不同的滤膜。
纤维素膜主要用于水溶液，尼龙滤膜和PTFE膜均是通用型滤膜。
常用0.45μm滤膜，如果使用亚二微米颗粒色谱柱，建议使用0.22μm滤膜。
溶剂使用前必须脱气，常用超声脱气20-30min。
1.2开机准备新鲜的纯水和有机溶剂以及方法所需的溶液。
按顺序打开仪器各组件电源→电脑电源→打开工作站。
确认工作站和仪器连接正常，通过工作站或手动打开排气阀，将需要用到的通道分别100%以流速3ml/min~5ml/min排气。
（所需流量参考日常工作的排气流量）（多个泵同时排气容易对泵造成损耗，不建议！）确认各通道排气完成后，关闭排气阀。
用20倍以上的柱体积的有机溶剂冲洗系统。
（注意：有机溶剂冲洗前需确认之前关机时已经移除系统中的缓冲盐）调用运行方法，使用5~10倍柱体积的方法所需流动相比例平衡系统。
平衡系统前用所需方法的流动相比例在排气阀打开的情况下以3ml/min~5ml/min运行一段时间，让泵中的流动相比例快速达到所需的流动相比例。
更换洗针溶剂、更换密封垫清洗溶剂。
1.3试验中注意1.3.1流动相在选择A、B、C、D泵放置流动相时，将盐溶液连接在一个底部梯度阀端口上，有机溶剂连接在一个上部梯度阀端口上。
最好使有机溶剂通道位于盐溶液通道的正上方。
最好不要将纯水溶液作为流动相的一组，如果使用了水相作为流动相的一组，应注意定期更换、过滤溶剂，不应超过2天，避免阳光直接照射。
如果试验允许，可向水相中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠。
1.3.2色谱柱使用流动相前千万注意，流动相与色谱柱内的保存溶剂和系统内存留溶剂的混溶性，避免形成乳化小液滴，从而毁坏柱子。
Waters常见故障分析及日常保养知识
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详细描述
这类故障可能与样品、试剂或仪器内部组件有关。首先检查样品和试剂是否符合 仪器要求，然后检查仪器内部组件是否正常工作，如泵、阀、检测器等。如果问 题依然存在，可能需要进一步检查仪器硬件或联系技术支持进行维修。
仪器显示故障
总结词
仪器显示故障通常表现为仪器屏幕无显示、显示异常或数据显示不准确。
详细描述
详细描述
这类故障可能与硬件问题或软件故障有关。首先检查仪器各 部件是否正常连接，特别是与主机连接的端口和电缆。如果 仪器自检失败并显示错误代码，应参考Waters仪器的用户手 册或联系技术支持获取解决方案。
仪器运行故障
总结词
仪器运行故障表现为仪器在运行过程中出现异常情况，如数据不准确、流路异常 等。
清洗进样阀
根据需要清洗进样阀，特 别是使用高粘度样品后， 以防止进样阀堵塞。
仪器部件更换与维修
更换密封圈
仪器密封圈老化或损坏时，应及时更换以保证仪器密 封性。
更换过滤器
定期更换仪器内部的过滤器，以防止杂质和颗粒物进 入仪器内部。
维修与保养
如遇到仪器故障，应及时联系专业维修人员进行维修 保养，以确保仪器正常运行。
waters常见故障分析及日常 保养知识
目录
• Waters仪器常见故障分析 • Waters仪器日常保养知识 • Waters仪器故障排除方法 • Waters仪器保养建议
01
Waters仪器常见故障分析
电源故障
总结词
电源故障是Waters仪器最常见的故障之 一，可能导致仪器无法正常启动或运行 。
VS
详细描述
电源故障可能由于电源线损坏、电源插头 松动或电源供应不稳等原因引起。当仪器 无法正常启动时，首先应检查电源是否正 常连接，并确保电源插头紧固。如果仪器 在运行过程中突然断电，可能会导致数据 丢失或仪器损坏，因此建议使用UPS（不 间断电源）来保证仪器稳定运行。
Waters高效液相色谱维护与保养ppt课件
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10
第二部分HPLC的组成
输液系统 泵以及流 动相
进样系统 进样阀
分离系统 -色谱柱
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4
术语
• 8、色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器时产 生的响应信号的微分曲线。
• 9、峰底：峰的起点与终点间的直线
• 10、峰高：在峰的两侧拐点处所作切线与峰底 相交两点之间的距离。 11、半峰宽（W1/2）：通过峰高的中点做平 行与峰底的直线，与其峰两侧相交两点间的距 离。 12、峰面积（A）：峰与峰底间的面积，又称 作响应值。
• 13、拖尾峰：后沿较前沿平缓的不对称峰。
• 14、前伸峰：前沿较后沿平缓的不对称峰
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5
术语
• 15、死时间（t0）:不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的时间
• 16、保留时间（tR）：组分从进样到出峰最 大之所需的时间。
• 17、死体积（V0）：不被固定相滞留的组分， 从进样到出峰最大之所需的流动相的体积
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2
第一部分术语
• 1、液相色谱法：就是用液体作为流动相的 色谱法。
• 2、固定相：在色谱法中，静止不动的一相 （固体或液体）称为固定相
• 3、流动相：能运动的一相（一般是气体或 液体）称为流动相
• 4、色谱图：色谱柱流出物通过检测器时所
产生的响应信号对时间的曲线图。纵坐标
为信号强度（通常我们所说的样品浓度），
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8
第一部分术语
22、面积归一法：将所有峰的面积总和定 为1，测量各峰的面积和色谱图上除溶剂 峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积 占总峰面积的百分率。是包含水分在内 的一个计算结果。
Waters e2695高效液相色谱仪操作规程
Waters e2695下效液相色谱仪支配规程之阳早格格创做1 手段指挥战典型Waters e 2695下效液相色谱仪的支配.2适用范畴该支配规程适用于Water e 2695下效液相色谱仪的支配.3工做考验员应按支配规程举止仪器支配，品量监督员控造监督该支配规程的粗确实止.4支配本仪器由Waters e 2695分散单元、Waters 2998两极管阵列检测器、Waters ELSD 2424挥收光集射检测器、Empower3色谱处事站战挨印机组成. Waters e2695分散单元包罗四元梯度洗脱的溶剂输支系统，四通道正在线实空脱气，可容纳120个样品瓶的自动分散单元，柱温箱，内置的柱塞杆稀启垫荡涤系统，溶剂瓶托盘；隐现器，键盘用户界里.4.1.2.1依次交通Waters e 2695分散单元、检测器、估计机战挨印机的电源.4.1.2.2交通Waters e2695分散单元后，约20s仪器开初自检，约3mn内各部件的初初化完成，待主屏幕上圆题目区出现“Idle”时，仪器加进待命状态.确认所有溶剂管路皆充谦溶剂，按[Menu／Status】，加进“Status(1)”屏幕，光标选“Degasser”，按[Enter】.当色谱仪流路不溶剂大概系统中有气氛时，需举止搞灌注(DryPrime)，注进震动相.可则，举止干灌注(Wet Prime)以驱除气泡.搞灌注：按主机里板上[Menu／Status】，加进“Status(1)”隐现，按[Direct Function】，采用“Dry Prime”，选溶剂通道，如Open A，选“DurationIIi按数字键输进5分钟，按”COntinue”，待规定时间中断后，沉复支配，使所需的溶剂通道注谦震动相.干灌注：加进“Status(1)”隐现，选溶剂通道，输进100％，按[DirectFunction]，选“Wet Prime”，按【OK】，根据里板提示树坐流速即时间(默认流速为7．5ml／min，普遍不必变动，时间可树坐为5min)，按【0K】.正在“status(1)”，屏幕下，光标选“Composition”，输进震动相的组成.按【Direct Function]，光标选“Purge Injector”，按【Enter]，隐现“Purge Injector”屏幕，输进“Sam ple Loop Volumes6．0”，光标下移“Compression Check”，按任性数字键，按【OK].正在主屏幕下，按【Diag]，隐现“Diagnostics”屏幕，按【Prime Ndl Wash】，隐现“Prime Needle Wash”屏幕，按[Start]，30s内应睹溶剂从兴液排搁心流出.按【Close】、【Exit】.正在主屏幕下，按【Diag]，隐现”Diagnostics”屏幕，按【Prime Seal Wash】，隐现“Prime Seal Wash”屏幕，按[Start]，30s内应睹溶剂从兴液排搁心流出.按【Close】、【Exit】.待排搁心有火流出，按【Half】、【Close】、【Exit】.挨开样品舱门，隐现"Door is Open"屏幕，将样品盘与出，把样品瓶拔出样品盘后，拆进样品盘，按【Next】直至所有样品盘拆毕，关好舱门.换上考验所需的色谱柱战震动相，加进"Status(1)”隐现，采用流路、设定流速、柱温，按【Enter】开初注进震动相，常常情况下约1 5～30分钟色谱柱可达到仄稳，不妨开初进样，支集数据.5 Empower 3硬件的应用5.1 建数据支集要领5.1.1单打电脑屏幕上的"Empower"快速图标，出现Empower登录界里，输进用户名战暗号.5.1.2单打下档键，采用用户典型战QuickStart界里.5.1.3采用QuickStart界里，面打“决定”，而后采用选定的支配名目以及色谱系统(仅查看数据可采用色谱系统中的“不系统”)，单打“决定”.5.1.4登录Empower的QuickStarlt界里.5.2 编写仪器要领战要领组（以e2695_2998为例）.5.2.1．支集栏单打“要领组编写背导”：5.2.2采用“新建”选项.5.2.3弹出仪器要领编写器.5.2.4单打“2695”，弹出2695编写界里.5.2.4.1 Aliance系统(包罗2695、2795战2695D)通用编写页里中，可采用“单次输支体积”，请针对于分歧的流速选定适合的单次输支体积，以保证最好的流速粗度与准度.5.2.4.2查看脱气选项，确认树坐粗确.5.2.4.3流量选项中树坐“泵模式”、“总流量”以及震动相配比.5.2.5单打2998，弹出2998编写界里.5.2.5.1 3D数据支集：正在通用栏中采用开用3D数据，输进检测波少的范畴；5.2.5.2支集2D数据，面打“2D通道”，最多可共时支集8个分歧波少的通道的数据.5.2.6面打“文献”，采用“另存为”：输进仪器要领称呼，面打“保存”；面打“文献”，采用“退出”.5.2.7正在被选项中采用所需的仪器要领称呼，面打“下一步(N)”.5.2.8正在下推菜单中采用所需的处理要领战报告要领（如果不符合的要领采用“无处理”、“无报告”)，面打下一步.5.2.9输进要领组称呼，单打“完成”.面打加进“仄稳系统／监视基线”界里，采用相映的仪器要领，面打“仄稳／监视器，正在监视窗心监视基线至系统仄稳，停止系统监视状态，面打“进样”.5.3.1．单进样：面打，加进“定义单进样参数”编写界里，输进样品名、功能、要领组等参数，面打“进样”.5.3.2使用背导建坐样品组战样品组要领.5.3.2.1采用“运止样品”，而后单打“样品行列”，加进样品列表.5.3.2.2单打“新建样品组背导”，建坐样品组.5.3.2.3采用创造样品组要领典型为“Lc大概PDA”，而后面打“定义样品板”.5.3.2.4正在“采用尺度进样正在何处开初”中采用符合的选项.查看开初加载样品瓶的位子是可粗确，面打“下一步”.5.3.2.5正在形貌标样中需要树坐一下实量：样品组中的标样数：×；每瓶标样进样次数：X；进样体积：x；运止时间：XX；要领组XXX；面打“选项”：输进下一进样延缓时间X；面打下一步.5.3.2.6样品数：X；每瓶样品进样次数：X；进样体积：X；运止时间：X；要领组X；面打选项：输进下一进样延缓时间X；面打下一步.5.3.2.7正在辨别尺度样界里中，输进标样称呼，删量后缀使用1．正在辨别样品界里中，输进样品称呼，删量后缀使用a.面打下一步.5.3.2.8运止模式选项中采用“只尝试”.查看纲要，面打下一步.【注：弹出组分编写器，输进标样中每个组分的称呼(内标不需要输进含量).不妨直交关关该窗心，正在处理数据的时间再增加】.5.3.2.9面打完成，正在菜单栏中采用文献.5.3.2.10为要领组命名并保存样品组要领.5.3.2.11单打“样品行列”，挨开运止样品窗心，面打运止目前样品组要领键，采用运止.5.3.2.11采用需运止的样品组称呼，面打运止.5.3.2.13样品组运止历程中，正在“正正在运止”栏中正正在运止以及运止完成的样品以红色隐现.(注：以背导建坐的样品组尾止功能普遍为扫除矫正，普遍正在运止样品前简略该止大概改为“仄稳”.)5.4.1 2D数据处理要领5.4.1.1单打“欣赏名目”键，正在“样品组”中采用目标样品组.5.4.1.2正在样品组上面打鼠标左键采用“查看相关→通道”，样品组正在单个通道中隐现.5.4.1.3采用定最矮浓度的标样，面打鼠标左键，采用下推菜单中的查看，会隐现已处理的色谱图形.5.4.1.4面打处理要领背导快速键，采用创造新处理要领，面打决定.5.4.1.5确认处理典型为LC，积分办法可采用为保守，再面打使用处理要领背导，采用决定.5.4.1.6常按鼠标左键，采用色谱图上最窄峰.(注：正在色谱图天区圆不妨搁大某个需要监测的峰.面打鼠标左键齐视图不妨还本色谱图.)5.4.1.7正在色谱图的积分界里采用一段典型基线动做积分的阈值，面打下一步.5.4.1.8常按鼠标左键，正在基线上采用积分的起止时间面.5.4.1.9提议采用最小峰下，采用所要积分的下度最小峰(大概键进相映数值).小于此峰下90％的峰将不被积分.面打下一步.5.4.1.10定量要领采用里积，组分疑息采用含量，矫正典型采用线性.面打下一步.5.4.1.11跨通道内标样界里面打可.5.4.1.12果为采用的是标样，面打峰1不妨瞅到一个下推菜单采用相映的组分称呼大概者键进运止样品相映的称呼.增加组分称呼相匹配的尺度含量，而后面打下一步.5.4.1.13如果是多面矫正样品，跳过增加含量的窗心直交面打下一步.(单面矫正可正在那里增加含量).5.4.1.14采用中标法：5.4.1.15采用简单内标样，需要正在下推菜单中采用大概键进内标相映的称呼，而后面打下一步.5.4.1.16采用多沉内标需要输进所有内目标称呼.5.4.1.17为处理要领命名，面打完成.色谱图界里会隐现该处理要领应用后的色谱结果，包罗积分.5.4.1.18如需为积分要领增加积分事变，鼠标左键面打色谱图窗心，采用增加积分事变.积分事变所示功能会坐刻应用于处理要领中.5.4.1.19编写处理要领的下档功能需要采用快速键.有所有变动均需再次保存处理圆法.5.4.1.20面打峰表底部可预览2D通道战峰.5.4.1.21面打“欣赏名目”键，采用“通道”大概“样品组”标签栏，左键面打目标样品组大概通道并采用处理.5.4.1.22正在处理界里，采用使用指定的处理要领，采用相映的处理要领称呼，面打浑除矫正，采用矫正并定量.5.4.1.23面打决定，数据处理，爆收截止.可正在截止栏中查看.5.4.2.1面打“欣赏名目”键，正在“样品组”中采用目标样品组.5.4.2.2正在样品组上面打鼠标左键采用查看相关通道，样品组中各个数据正在单个通道中隐现.5.4.2.3采用定量最矮浓度的标样，面打鼠标左键，采用下推菜单中的查看.5.4.2.4正在预览界里采用“表面线”标签栏，会隐现已处理的表面图.5.4.2.5从处理大概左键下推菜单中采用提与色谱选项.5.4.2.6键进所需要提与的波少，按回车键，得到该波少的色谱图.5.4.2.7面打处理要领快速键，采用创造新处理要领，确认处理典型为PDA，积分办法可采用为保守，再面打使用处理要领背导，面打决定.5.4.2.8常按鼠标左键，采用色谱图上最窄峰.(注：正在色谱图天区内不妨搁大某个需要监测的峰.面打鼠标左键采用齐视图不妨还本色谱图.)5.4.2.9正在色谱图的积分界里采用一段仄滑的基线动做积分的阈值，面打下一步.5.4.2.10常按鼠标左键，正在基线上采用积分的起止时间面.5.4.2.11提议采用最小峰下，采用所要积分的下度最小峰(大概键进相映数值).小于此峰下90％的峰将不被积分.面打下一步.5.4.2.12定量要领采用里积，组分疑息采用含量，矫正典型采用线性.面打下一步.5.4.2.13跨通道内标样界里面打可.5.4.2.14果为采用的是标样，面打峰1不妨瞅到一个下推菜单采用相映的组分称呼大概者键进运止样品相映的称呼.增加组分称呼相匹配的尺度含量，而后面打下一步.5.4.2.15如果是多浓度面的一组标样，跳过增加含量的窗心直交面打下一步.(简单浓度不妨正在那里增加含量).5.4.2.16采用中标法：5.4.2.17采用内标法简单内标样矫正，需要正在下推菜单中采用大概键进内标相映的称呼，而后面打下一步.5.4.2.18采用多沉内标需要输进所有内目标称呼.5.4.2.19 PDA杂化及匹配选项：5.4.2.20为处理要领命名，面打完成.色谱图界里会隐现该处理要领应用后的色谱结果，包罗积分.5.4.2.21正在“文献”下推菜单中采用“另存为”要领组，将该处理要领存进要领组.(注：3D数据必须用要领组处理.)5.4.2.22如需为积分要领增加积分事变，鼠标左键面打色谱图窗心，采用增加积分事件.积分事变所示功能会坐刻应用于处理要领中.5.4.2.23编写处理要领的下档功能需要采用快速键.5.4.2.24面打“欣赏名目”键，采用“通道”大概“样品组”标签栏，左键面打目标样品组大概通道并采用处理.5.4.2.25正在处理界里，采用使用指定的处理要领，采用相映的处理要领称呼，面打浑除矫正，采用矫正并定量.5.4.2.26面打决定，数据处理，爆收截止.可正在截止栏中查看.6查看截止战视图筛选6.1采用“截止”标签栏，使用视图筛选器从下推菜单中采用即日.6.2采用需查看的截止，左键面打采用查看.6.3查看截止面打快速键，查看每个组分的矫正直线.切换至主窗心面打.7预览截止并创造报告要领7.1面打“预览名目”切换回截止表隐现状态.7.2选中一个大概多个截止，面打鼠标左键采用预览.7.3若采用一个截止，正在预览窗心采用使用一下要领：使用缺省单个报告，单打决定.7.4预览报告并查看数据.面打“编写要领”键建改报告要领.7.5单打色谱图大概峰截止表编写报告属性.7.6面打文献，采用保存，为新建的报告要领命名.面打预览报告.7.7如需将报告保存为PDF要领，面打.8要领组的建坐以上道解了怎么样建坐仪器要领、处理要领战报告要领，推拢不妨得到一个要领组.8.1监视区单打要领组编写背导：8.2弹出新要领组：采用仪器要领界里.采用相映的仪器要领，面打下一步.8.3采用缺省要领界里采用相映的处理要领战报告要领，导出要领缺省.面打下一步.8.4命名要领组，面打完成.8.5正在运止样品时，要领组／报告要领中调用该要领组，不妨自动完成支集、处理、报告数据过程.9数据管造9.1.1正在QuickStart界里，采用菜单“管造一备份目前名目”.9.1.2出现“名目备份背导”，面打下一步.9.1.3出现“名目备份背导一采用手段天’’通过欣赏采用手段天，提议采用正在非支配系统拆置的硬盘分区内.采用完成，单打“决定”关关后，回到名目备份窗心，单打“下一步”.9.1.4出现“名目备份背导一备份隐现”.确认数据的复造已经乐成，再单打“下一步”.9.1.5出现备份数据背导一开初界里.面打完成，中断备份. 9.2.1正在QuickStart界里，采用菜单“管造”，下推菜单中采用“还本名目”.9.2.2出现“还本名目背导”.通过“欣赏”采用被还本的名目天圆的路径，单打“确定”.9.2.3单打下一步.9.2.4如出现类似以下实量的对于话框(名目名test已经被使用.请输进另一个名目名)，则需为还本的名目另起一个名字.9.2.5正在“输进磁盘空间配额’’页中，输进名目名，并注意此处的“表空间配额”应不得小于欲还本的名目本有的配额(数据文献大小)，而后单打“下一步”.9.2.6如果需要，不妨正在此页里中，采用该名目是可属于某个女名目.9.2.7正在“还本隐现’’中，如果出现如下对于话框(还本的名目需要被革新到下一个版本)，单打“决定”.(注：当还本由Millennium大概Empower的先前版本创造的名目时，需要为该名目采用时区.)9.2.8正在“还本隐现”中，等待数据还本中断后，单打“完成”.(注：提示：正在沉拆Empower硬件之后，不妨通过还本名目将相关的名目数据举止还本.) 10名目管造10.1.1加进到Empower3的QuickStart界里.正在菜单中采用“管造一创造新名目”.10.1.2出现“新名目背导”的对于话框，采用新建名手段女名目：10.1.3单打“下一步”，弹出“新建名目背导一表空间”，表空间50MB为默认树坐，可根据需要删减.10.1.4出现“新建名目背导一选项”页.采用用于本名手段选项，如果无法决定适合的树坐，请交受默认选项.单打“下一步”.10.1.5新建名目背导一考察统造：根据需要采用树坐对于您所创造的名目具备考察权力的用户战用户组，大概者交受缺省的选项，而后单打“下一步”.10.1.6新建名目背导一复造所选项：需要采用复造的名目，普遍采用Defaults名目.(注：此页的复造是指从另一个名目复造现有树坐，不妨复造名手段“视图筛选器”、“黑定义字段”、“要领”战“参数”.所以，普遍不允许变动大概使用Defaults名目中的所有数据.)正在建坐了新名目以去，不妨根据需要正在分歧的名目之间举止切换.10.2.1加进Empower3的Quick$tart界里，采用菜单“管造一改变系统／名目”.10.2.2改变系统／名目：根据需要举止采用名目大概者采用系统(如果存留两个大概者两个以上的系统).采用完成后，单打决定.如果采用了“正在该窗心切换名目／系统”，目前的名目／系统会被新选中的名目／系统所代替，如果采用了“为名目／系统挨开新窗心”，则会为选中的名目沉新挨开其余一个QuiekStart的界里.10.2.3正在新的名目／系统的QuickStart界里内即可举止下一步的支配.10.3.1正在QuickStart界里，采用菜单“视图一系统”，查看系统.10.3.2出现系统疑息窗心.正在该窗心中，不妨正在天面栏中查看隐现的天面是可与仪器的树坐相共.别的，可从“仪器”选项卡里的“仄常?”一栏中查看仪器状态，正在仄常状态下，应隐现“是”字样.如有仪器正在“仄常?”一栏出现“可”，可单打“扫描仪器”举止查看.如查看后隐现“是”，即回复仄常.(注：当仪器联机出现过失，大概者出现“仪器堕落”字样的时间，即可通过支集服务器属性去查看仪器状态，推断大概引起该问题的本果.)10.3.3.1正在QuickStart界里，选菜单“管造一新建系统”. 10.3.3.2出现“新建色谱系统背导一输进典型”页里，采用系统典型为“新建系统”.而后单打“下一步”.10.3.3.3出现“新建色谱系统背导一采用系统”页里，正在“可用仪器”组中，选中新系统的组件，而后用鼠标拖拽至左侧“新系统仪器”组中.采用完成，单打“下一步”.如有误选，则如法，将误选的新系统仪器，用鼠标拖拽回“可用仪器”组中.(注：可沉复使用已摆设系统中的仪器，但是一次只可有一个使用共享仪器的系统不妨正在线.)10.3.3.4出现“新建色谱系统背导一考察统造”页里.(注：您创造系统时，您即为系统的所有者.系统创造后，不妨建改系统的属性及变动所有者、考察权力战摆设等仔细疑息.) 11关机11.1使用完成，按确定用适合的溶剂浑洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针战柱塞杆稀启垫，保证2695分散单元已实足浑洗搞洁后，关关电源开关.11.2数据支集完成后，关关所用检测器的电源开关.11.3数据处理并挨印报告后，关关估计机战挨印机电源开关.11.4考查中断，正在仪器使用记录表上备案，仪器管造人员考查签名.12仪器维护与调养12.1屡屡使用前后，查看分散单元上各溶剂瓶中溶剂的量，即时补充各瓶中相映的溶剂.12.2屡屡使用前后，挨开分散单元最底下的分散泵的舱门，查看各管路交心，有无慢冲盐析出的情况.如出现红色盐渍，应拆下其天圆的部件，先后用火战甲醇超声荡涤，并安拆好.12.3随时查看仪器的使用记录.12.4如万古间不使用该仪器，则需每半年依照《下效液相色谱仪功夫核查规程》查看一次，并搞好维护记录.。
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书（入门用前必读）青岛科技大学化工测试中心2015-12-22安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。
注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。
注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。
注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。
小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。
小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。
小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。
目录第一章 WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第一章 WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。
该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。
该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。
建立色谱库后可以实现定性分析。
第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。
2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。
用前均需过0.45μm 滤膜。
2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。
确认流动相管线和相对应的脱气管线。
Alliance2695型高效液相色谱仪标准操作规程
页码：1/4编号：SOP-QA-010201生效日期：年月日标准操作规程STANDARD OPERA TING PROCEDURE题目Alliance2695型高压液相色谱仪标准操作规程Subject颁发部门质量保证部Issue Department起草日期年月日Written by Date审核日期年月日Examined by Date批准日期年月日Approved by Date分发质量保证部、中心化验室、档案室Receiver1 目的：建立Alliance 2695型高效液相色谱仪标准操作规程，以保证Alliance 2695型高效液相色谱仪的正确使用。
2 范围：适用于Alliance 2695型高效液相色谱仪操作的全部行为。
3 责任：中心化验室对本SOP的实施全面负责。
4 内容：4．1 开机4．1．1接通仪器插座电源开关。
4．1．2 先打开2695主机的电源开关，再打开2996检测器的电源开关。
4．1．3待2695主机与2996检测器自检完毕后，打开电脑显示器、电脑主机电源开关，计算机开始自检进入Windows 2000桌面。
4．1．4在电脑屏幕上用鼠标双击Millennium32（M32）图标。
进入Waters高压液相操作系统主窗口。
4．1．5单击M32主窗口上“Login”键，当出现User name提示时，输入使用者代号，在Password提示里输入此代号对应密码。
再按回车键即可激活Millennium32操作窗口。
4．2 硬件操作4．2．1溶剂脱气先打开氦气瓶气体阀门，将分压表调至0．5MPa；按“Menu/Status”键，进入“Status(1)”界面，用“↑”、“↓”、“←”、“→”键在界面上“Sparge”项中，选择A、B、C或D中所选用的溶剂流路号进行脱气处理（如选用A、B两瓶溶剂，则选择A-100%，B-100%，按“Enter”键开始脱气），脱气15～20分钟后，可将脱气量由100%降为30%。
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去除微粒的方法
过滤 – 过滤膜/过滤装置
o 有机滤膜(≤0.5 µ m)/水溶性滤膜(≤0.45 µ m) o 膜片可更换
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进样针擦洗部件
污染后进样残留，更换
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检测器的启动操作
连通流路：
– 色谱柱出口接检测器入口 o 注意接头不要留有空隙 o 连接管路要用细管(≤0.009″)
– 检测器出口用适当的管路(内径,长度)通向废液瓶
用流动相平衡至少30分钟后才能正常工作
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检测器的使用和保养
如长时间不用检测器可以关掉光源灯(UV,FL)
– 仅在4小时以上不用时,才需关灯 – 频繁开关灯也会影响灯寿命
不要让缓冲液长期停滞在检测池内
– 用纯水冲洗 – 保存在纯甲醇中
示差检测器及荧光检测器若与其它检测器串联使用,应将此 两种检测器串在其它检测器的后面
1ml/min的流速冲洗系统45分钟 – 用30%磷酸清洗液洗系统(1ml/min流速)45分钟 (四元泵的
A,B,C,D四路各为25%) – 换成清水洗至出口水pH显中性 – 用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用
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保养与维护
易损件包括: 柱塞密封圈、清洗密封圈、柱塞杆、在线过滤芯、
不用检测器的液晶显示屏时，应将其亮度调暗
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液相系统的清洗
清洗液用30%磷酸水溶液 30%磷酸配制:取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀 清洗步骤如下:
– 取下色谱柱，用两通(Union)连接进样器和检测器 – 用超纯水灌注泵头(四元泵的A,B,C,D四路各为25%)，并以
能排气泡
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自动进样器的洗针液
洗针溶剂根据流动相的不同应有不同：
流动相 缓冲溶液，反相
纯缓冲溶液 非水溶液，反相
正相 GPC 离子交换
洗针溶剂 50% 水 ∶ 50% 甲醇
100% 水 100% 甲醇
流动相 流动相 对离子试剂的水溶液
注意∶
– 洗针溶剂瓶(内放绿色塑料管)不要放在仪器的上部，应放 于与仪器同一水平面的实验台上
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实验样品的制备
标样和样品
– 标样:又称对照品,它作为液相色谱定性和定量分析的参考标准物,一般 是纯度较高的纯物质
– 样品:待测物,一般是成分复杂的混合物
液相色谱对样品(包括标样)制备的要求: – 必须能溶于流动相
o 如样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶解度,以免在进样时样 品在流动相中析出,堵塞管路和色谱柱
高速离心 o 大于：10,000rpm
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色谱泵的维护保养
流动相要过滤 根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值 常用缓冲液时，停泵前要用超纯水灌注泵头，并做Seal wash
清洗柱塞杆 关闭排液阀时，不要太用力拧紧，以不渗液为准 更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互溶，要用一
– 使色谱泵的输液准确 o 输液量均匀准确，并且脉动减小 o 保留时间及色谱峰面积的重现性提高
– 提高检测的性能 o 防止气泡引起的尖峰 o 基线稳定，信噪比增加 o 溶剂的紫外吸收本底降低
– 保护色谱柱 o 减少死体积 o 防止填料的氧化
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流动相脱气的方法
液相色谱对流动相的要求
色谱柱对流动相的要求
– 过滤除去微粒（至少过0.45μ m滤膜，有机系或水系） – 纯度的要求
o 超纯水 o 有机溶剂：色谱纯(溶剂中的杂质含量尽可能低，最好进口品牌)，并
与填料相匹配
– 缓冲液的pH值，在填料的允许范围(一般pH2-8) – 缓冲液（盐）的浓度不要太高(≤100mM) – 流动相对样品的溶解度
加热
– 简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组 成的变化
抽真空
– 同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果
超声波振荡
– 简单，但效果不够理想；超声时间不要太长(1分钟左右即可)
通惰性气体（一般用氦气）
– 可保持在线连续脱气，多用于低压梯度
在线脱气机 （in-line degasser)
– 可保持连续脱气，多用于低压梯度
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流动相的保存
有机溶剂流动相
– 室温下密封,避光保存
缓冲盐流动相
– 当日现配现用 – 低温下密封保存,一般不超过3天
– 防止微生物生长
有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相
– 低温密封保存 – 防止有机相的挥发
选用适宜的容器
种中间溶剂过渡 色谱泵在停用时,应先用水洗去缓冲盐,然后用纯甲醇充满泵头
及管路,并保存在纯甲醇中
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自动进样器的清洗
– 进样针是流路的组成部分,运行中针内壁一直由流动相清洗 – 进样针外壁由软件控制在每次进样前用洗针液清洗 –若进样注射器内出现气泡，用面板操作的Purge Injector功
o 调整有机溶剂和水的比例 o 最好用初始流动相溶样
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液相色谱仪器对流动相的要求
– 脱气 – 避免用含卤素离子的缓冲盐（不锈钢系统） – 溶剂的粘度 – 防止细菌的生长
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流动相的脱气
流动相脱气的目的
Waters Alliance e2695 维护保养
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仪器工作环境
电源 - 容量，稳定性 地线 - 系统统一电源,统一接地 清洁 - 不要轻视灰尘的影响 湿度 - 特别是近海地区 温度 - 空调的影响
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