基因工程中常用的酶分类和性质
taq酶标准
TAQ酶标准一、酶的分类TAQ酶（Thermostable DNA polymerase）是一种热稳定DNA聚合酶，属于DNA聚合酶的一种。
根据酶的来源和性质，可以将酶分为多种不同的类型，包括DNA聚合酶、RNA聚合酶、酯酶、氧化还原酶、蛋白水解酶等等。
每种酶都有其特定的生物学功能和特点，在生物体内发挥着不同的作用。
二、酶的特性TAQ酶具有热稳定性，能够在高温条件下保持活性。
这种特性使得TAQ酶在PCR等高温反应中具有广泛的应用。
此外，TAQ酶还具有高催化效率和高度特异性，能够催化DNA合成等反应，且不易发生误合成。
三、酶的应用TAQ酶在生物学、医学和生物工程领域都有广泛的应用。
在生物学研究中，TAQ酶可以用于基因克隆、DNA序列分析、基因表达等实验中。
在医学领域，TAQ酶可以用于诊断和治疗各种疾病，例如遗传性疾病、癌症、病毒感染等。
在生物工程领域，TAQ酶可以用于基因工程、蛋白质工程等研究中。
四、酶的检测与定量对于TAQ酶的检测和定量，可以使用各种方法，例如活性测定、免疫分析、光谱分析等。
其中，活性测定是常用的方法之一，可以通过测定酶促反应速率来评估TAQ酶的活性。
免疫分析则可以通过检测抗体与TAQ酶的结合情况来定量。
光谱分析可以通过测定光谱变化来定量TAQ酶的浓度。
五、酶的纯化与制备TAQ酶的纯化与制备是保证其质量和应用的关键步骤之一。
通常采用的方法包括离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等。
其中，离子交换色谱是常用的方法之一，可以通过交换TAQ酶上的离子来达到纯化的目的。
亲和色谱则可以利用抗体与TAQ酶的特异性结合来纯化。
此外，还可以使用基因工程技术生产重组TAQ酶。
六、酶的结构与功能关系TAQ酶的结构与功能关系是理解其生物学活性的关键。
TAQ酶是一种球状蛋白，由多个亚基组成，每个亚基都具有催化活性。
结构决定功能，TAQ酶的结构决定了其在高温条件下的稳定性和催化效率。
此外，TAQ酶的结构也与其特异性有关，例如识别和结合DNA模板的能力。
基因工程基因工程工具酶
VS
详细描述
DNA限制性核酸内切酶在基因工程中被 用于切割DNA分子，从而可以将特定基 因从整个DNA链中分离出来。此外，它 还用于分析基因组和检测基因突变。
DNA连接酶
总结词
DNA连接酶是一种能够连接DNA片段的酶，从而可以完成DNA分子的合成和修复。
详细描述
在基因工程中，DNA连接酶被用于将目的基因与载体DNA连接起来，从而形成重组DNA分子。此外 ，它还用于修复DNA损伤和合成DNA探针。
选择适合细胞生长和酶表 达的培养基，优化培养条 件。
基因工程工具酶的纯化
细胞破碎
采用物理或化学方法破碎 细胞，释放出目标酶。
分离纯化
利用各种层析技术、电泳 等方法对目标酶进行分离 纯化。
浓缩干燥
将分离纯化后的酶进行浓 缩和干燥，以便存储和运 输。
基因工程工具酶的质量控制
活性检测
通过生化反应测定酶的活性， 评估其生物催化能力。
基因工程工具酶的伦理问题
基因工程工具酶的使用涉及到 伦理问题，如人类基因编辑和 生物多样性等。
人类基因编辑的伦理问题主要 关注的是对人类基因进行修改 是否符合伦理道德标准。
生物多样性问题则涉及到基因 工程工具酶对自然环境和生物 多样性的影响。
基因工程工具酶的社会影响及讨论
基因工程工具酶的使用给社会带来了 广泛的影响，如医学、农业和生物技 术等领域。
在农业领域，基因工程工具酶可用于 改良作物品种和提高农业生产效率。
在医学领域，基因工程工具酶可用于 治疗遗传性疾病和癌症等。
对于基因工程工具酶的使用，社会各 界存在不同的看法和讨论，需要加强 沟通和合作，以确保其安全、合法和 负责任地使用。
THANKS.
基因工程的工具酶
用衔接物分子连接平末端的DNA片段
衔接物：指用化学方法 合成的一段由若干个核 苷酸组成的、具有一个 或数个限制酶识别位点 的寡核苷酸片段
四、重组DNA实验的一般程序
a. 选用一种对载体DNA只具唯一限制识别位点的限制酶
（如EcoR I）作位点特异的切割，形成全长的具粘性 末端的线性DNA分子 b. 再将外源DNA片段也用同一种酶作相同的消化。 c. 混合，加入DNA连接酶。由于具有相同的（如EcoR I） 粘性末端，能退火形成双链结合体。其中单链缺口经 DNA连接酶封闭之后，便产生稳定的杂种DNA分子。
核酸水解酶类
核酸内切酶 核酸外切酶
DNA聚合酶 RNA聚合酶 DNA连接酶 磷酸酶 核苷酸激酶 核苷酸转移酶 甲基化酶
程常用工具酶 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 核酸酶 核酸修饰酶
分子克隆最常用两个工具酶
“分子 剪刀”
⒈ 限制性核酸内切酶 —— 在DNA上核苷酸的 特定连接处以特定的方式把DNA双链切开。如EcoRI, HpaI
④ 反应体积和甘油浓度：
商品化的限制性内切核酸酶均加50％甘油 作为保护剂，一般在-20℃保存。酶切反应时， 加酶的体积一般不超过总反应的10％，否则甘 油浓度过高，影响酶切反应
⑤ 反应时间：通常为1h；进行大量DNA酶切反 应时一般让酶解过夜
⑥ DNA纯度和结构 DNA样品中所含的蛋白质、有机溶剂、
4. Taq DNA聚合酶
5. 逆转录酶：依赖于RNA的DNA聚合酶
6. RNA聚合酶
大肠杆菌DNA聚合酶I
以一条DNA为模板通过聚合作用把脱氧核苷酸加到 双链DNA分子的 3’-OH 端而合成新的 DNA.
用途：DNA缺口平移中标记DNA探针
基因工程的酶学基础
DNA甲基化对酶活性的影响 •大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶 和Dcm甲基化酶。 •Dam可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上 引入甲基 •Dcm在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5 位置上引入甲基。 •部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切 割，如FbaI和MboI等。
通常有两种方法： ①选用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA 识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化 影响； ②利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA 的制备，如E. coli & nbsp; JM110和链霉菌 等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲除，而 后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细 胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。
CATG
SAGE Tag 5
CATG
SAGE Tag 2
SAGE Tag 4
SAGE Tag 6
•II型限制性内切酶的酶切位点位于识别位点之中或
附近，产生以下4种情况。 ① 5’粘性末端；② 3’粘性末端；③ 平末端和 ④ 非互补的粘性末端 •无论DNA的来源如何，只要是使用同一种限制性内 切酶，所留下的残端都是一样的。 •经酶切后，5’端总是保留一个磷酸根；3’端总是 保留一个OH
第二讲 基因工程的酶学基础
本节内容
•限制性内切酶—主要用于DNA分子的特异切割 •DNA甲基化酶—用于DNA分子的甲基化 •核酸酶—用于DNA和RNA的非特异性切割 •核酸聚合酶—用于DNA和RNA的合成 •核酸连接酶—用于DNA和RNA的连接 •核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA的末端修饰 •其它酶类--用于生物细胞的破壁、转化、核酸纯化、 检测等。
Ⅱ型限制性内切核酸酶的基本特性
1.具有高度特异性的识别位点与酶切位点。 2.辅基： Mg++。 特定识别序列一般长4 - 8对碱基； 大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧；
基因工程常用的工具酶
农作物的产量和质量。
医学领域
基因工程被用于治疗遗传性疾 病、癌症、感染性疾病等，以 及制备疫苗和单克隆抗体。
工业领域
基因工程被用于生产高价值的化 学品、生物燃料和生物材料等， 降低生产成本和提高产品质量。
基础研究
基因工程被用于研究基因的结构 和功能、蛋白质的表达和调控等
常见的限制性核酸内切酶包括EcoRI、BamHI、HindIII等。
DNA聚合酶
DNA聚合酶是催化DNA复制过程中 DNA聚合反应的酶。
常见的DNA聚合酶包括Taq酶和T7噬 菌体DNA聚合酶等。
DNA聚合酶具有合成DNA的功能，可以在 模板DNA的指导下，将脱氧单核苷酸逐个加 到引物RNA的3'-OH末端，形成新的互补链 。
，促进生命科学领域的发展。
02 基因工程常用的工具酶概 述
工具酶的定义与分类
定义
工具酶是指用于基因工程操作的一类 酶，能够催化DNA或RNA的切割、连 接、修饰等反应，是基因工程实验中 必不可少的工具。
分类
根据功能的不同，工具酶可以分为限 制性核酸内切酶、DNA聚合酶、反转 录酶、T4核酸连接酶等。
工具酶在生物制药和农业生产中应用广泛，如基因工程的抗体药物、疫
苗、农作物改良等领域，能够提高产品的产量和质量。
工具酶的来源与生产
来源
工具酶主要来源于微生物、植物和动 物等生物体，其中微生物来源的酶是 最常用的。
生产
工具酶的生产通常采用基因工程技术 ，通过克隆和表达酶的基因来获得相 应的酶蛋白，再经过纯化和复性等步 骤得到高活性的工具酶。
VS
转录激活因子
激活特定基因的表达，实现基因治疗。
基因工程进行同源重组所用的酶
基因工程进行同源重组所用的酶基因工程中的同源重组，说白了就是利用一种巧妙的方式把外来的DNA片段植入到目标基因组里。
为了让这一切顺利进行，得有一些“帮手”出场。
这些“帮手”就是各种酶。
哎，这些酶可不是随随便便就能搞定任务的，它们各有各的“拿手绝活”，各司其职，密切配合，才能把事情搞成。
你可以把它们想象成一群专业的“工匠”，每个都有独门的技术，专门为基因工程这种“建设项目”提供各种服务。
最重要的几个“好帮手”得是限制性内切酶、DNA连接酶、重组酶和同源重组酶。
这些名字听起来都高大上，但是其实每个酶的任务都超级简单明了。
比如，限制性内切酶，别看它名字挺吓人，它其实就是个“剪刀手”，专门在DNA上剪开特定的地方，把你要插入的基因片段从其他的DNA中剪出来。
你可以想象它像个非常挑剔的裁缝，专挑最合适的地方下剪刀，绝不会弄错。
剪出来的基因片段呢，怎么往新地方插进去呢？这就需要DNA连接酶来帮忙了。
DNA连接酶就像个巧妙的“粘合剂”，它能把DNA片段两端的缺口补上，确保新基因和目标基因组紧密结合。
说白了，它就是那种能把两块分开的拼图拼起来的人，拼得又快又稳，永远不出错。
你想啊，没它的帮忙，哪有基因重组的成功？然后，有些更复杂的重组过程，就得靠重组酶和同源重组酶了。
重组酶能帮助DNA片段在特定位置插入，而且这些酶能帮助DNA片段跟原本的DNA链发生交换，找准位置“安家”。
你可以把它理解成一个非常精明的搬运工，它帮你把新的基因片段搬到合适的地方，确保它不仅能插进去，还能在新家里“住”得稳稳当当的。
至于同源重组酶，嘿，它可是个大牛。
它能识别DNA片段和目标DNA序列的相似部分（就是那些相同或者类似的基因序列），并帮助这些片段准确对接。
你要知道，基因工程就像一场大规模的建筑工程，每个砖头都得放在正确的位置，这样才不容易倒塌。
同源重组酶就像是建筑师，它非常有眼光，知道哪些“砖头”最适合放在哪里，确保整个基因组的稳定性。
基因工程中常用的酶及其功能分析
非 专 一性 核 酸 酶 等 ． 中 Ｒ ａｅ降 解 Ｒ Ａ分 子 ， Ｎ ｓ 解 Ｄ Ａ分 子 ． 它 们 都 可 以分 为 两 类 ： 酸 外 其 Ｎｓ Ｎ Ｄ ａｅ降 Ｎ 但 核
切 酶 （ ｘｎ ｃ ａｅ 和 核 酸 内切 酶 （ ｎ ｏ ｕ ｌ ｓ ） ｅｏ ｕ ｌ ｓ ） ｅ ｅ ｄ ｎ ｃ ａｅ ． ｅ （ ）核 酸 外 切 酶 ： Ｄ Ａ两 端 向 中 间 切 割 ， 分 为 ２种 情 况 ： 种 是 切 下 一 条 链 的末 端 ， １ 从 Ｎ 可 一 另一 种情 况 是从 两 端 同 时 向 中 间切 ． （ ）核 酸 内切 酶 ： Ｄ Ａ链 的 内部 进 行 切 割 ， 为 限 制 性 内切 酶 和 非 限 制 性 内 切 酶 ． ２ 从 Ｎ 分 ２种 酶 由于 识
有：
（ ）碱 性 磷 酸 酶 （ ｌａｉ ｈｓ ｈｔ ｅ ： 多 核 苷 酸 激 酶功 能 相 反 ， 除 Ｄ Ａ ’ 磷 酸基 因 ， １ ａｋｌ ｅｐ ｏｐ ａ ｓ ） 与 ｎ ａ 去 Ｎ ５端 防止 在 重
组 中 自身 环 化 ， 而 提 高 重 组 效 率 ； 从 在 —３ Ｐ Ｔ ２ Ａ Ｐ标 记 的 Ｄ Ａ或 Ｒ Ａ的 ５ 端 前 ， 除 Ｒ Ａ或 Ｄ Ａ的 非 Ｎ Ｎ ’ 去 Ｎ Ｎ
物 含 有 错 配 的碱 基 ．
（ ）Ｎ Ｓ Ａ技 术 ： 用 Ｔ Ｒ Ａ 聚合 酶 ， 率 比 Ｐ Ｒ技 术 要 高 得 多 ． ２ ＡＢ 利 ７Ｎ 效 Ｃ 】
４ 修 饰 酶
Ｄ Ａ修 饰 酶 （ Ｎ ｏ ｉｃｔ ｎ ｅｚ ｍ ） 指 对 Ｄ Ａ 分 子 进 行 修 饰 的 酶 ， Ｎ Ｄ Ａ ｍ ｄｆ ａｉ ｎｙ ｅ 是 ｉ ｏ Ｎ 目前 基 因 工 程 中 常 用 的 酶
２ 连 接 酶
基因工程常用工具酶及应用
DNA 连接酶
36
DNA连接酶
连接的部位：磷酸二酯键（梯子的扶手）， 不是氢键（梯子的踏板）。
37
三.RNA酶
主要功能 降解RNA 由于RNA酶分布广泛，如唾液、 皮肤分泌物中都含此酶，在涉及RNA 的实验中谨防RNA酶污染。
38
四.核酸酶SI
• 降解单链 DNA 或 RNA，形成5’-P的单核苷 酸或寡核苷酸片段
5'粘末端
PstI
3' sticky end
3'粘末端
HpaI
blunt end
平末端
14
四.识别位点与切割方式
• 限制性内切酶识别序列一般为6个核苷酸，如
EcoRI，HindIII，BamHI，居多数。 也有少数限制性内切酶，识别序列为4个、5个、 或更多的核苷酸如8个及8个以上，当识别序列核 苷酸数为单数时，则以中间的核苷酸作为对称轴。 如GTNAC（N 代表四种核苷酸）。
某些碱基被甲基化所保护。这种细菌
内部的限制与修饰作用分别由核酸内
切酶和甲基化酶完成，构成了类似免
疫的防御系统。
6
解释 何谓内切酶
-o-o-o-o-o-o-o-o-o-o-o-o-o-o红色为外切酶的作用位点， 蓝色为内切酶的作用位点
7
限制性核酸内切酶的分类
目前已发现的限制性核酸内切酶600余种，可 分为三大类。 Ⅱ类限制性核酸内切酶广泛用于基因工程；
15
• 一般说来，在DNA分子中，识别序列短的 出现概率大，识别序列长的出现概率小。 有N个核苷酸的识别序列出现概率为1/4n。 如识别4个核苷酸Sau 3A，则间隔256 （4×4×4×4）个核苷酸就有一次机会出 现识别位点。如识别8个核苷酸的Not I，则 需间隔65536个核苷酸才有一次机会出现识 别位点。
常用DNA酶的总结
1. T4DNA连接酶:本酶催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，（将已有的两个DNA片段连接成为一条DNA链的酶，常用于基因工程，将目的基因连在质粒载体上，作用于两脱氧核糖核苷酸间的磷酸二脂键），需ATP作辅酶。
本酶不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接，也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。
T4DNA连接酶可连接DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA和双链DNA粘性末端或平头末端。
无论是T4DNA连接酶，还是大肠杆菌DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。
T4 DNA连接酶常用于催化双链DNA 平末端或互补粘性末端之间的连接反应，也能催化双链RNA 5'-磷酸末端和3'-羟基末端间的连接。
还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。
以上反应均需消耗ATP。
粘末端的连接反应: 插入片段和载体的摩尔浓度比特别重要，此比例在2-6之间最好，低于2:1就会导致较低的连接效率，高于6:1则会导致多个插入。
摩尔比请按载体与插入片段DNA浓度及分子大小来计算。
平滑末端的连接反应：平滑末端的连接反应与突出末端相比反应较慢(其Km值约为突出末端的100倍)。
进行平滑末端的连接反应时，可提高DNA浓度，将使用酶量增加到突出末端量的2～5倍左右。
与粘粒或噬菌体进行连接反应：可使载体和插入DNA的摩尔比调整为1:1，同时增大DNA浓度以便取得良好效果。
μg／ul以上)。
反应温度：该酶的最适温度为37℃，由于热稳定性较差，因此长时间反应时通常需在16℃下进行。
若反应1-2小时左右的话也可在室温下进行反应。
抑制剂：T4 DNA连接酶要求Mg 2+，因此螯合Mg 2+的EDTA 的存在会阻碍反应。
将溶解于含有高浓度EDTA缓冲液中的DNA准备作为样品使用时，最好先用灭菌蒸馏水或TE缓冲液进行置换。
2. T4 DNA聚合酶：T4DNAPolymerase，即T4DNA聚合酶，是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以依赖于DNA 模板对5' 端突出末端进行补平；同时可对3' 端突出末端进行削平。
工具酶的种类和用途
工具酶的种类和用途
基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶，连接酶，聚合酶，核酸酶和修饰酶五大类
DNA限制性内切酶
主要用途：DNA基因组物理图谱的组建；基因的定位和基因分离；DNA分子碱基序列分析；比较相关的DNA分子和遗传工程。
连接酶：T4DNA连接酶 T4噬菌体RNA连接酶大肠埃希菌DNA连接
主要用途:1 催化两个具有黏性末端或平末端的DNA片段形成磷酸二酯键，形成新的重组DNA分子；2 接合由复制叉上不连续复制链上产生的缺口；3 缝合DNA损伤修复、遗传重组及DNA链剪接中缺口。
聚合酶：DNA聚合酶RNA聚合酶逆转录酶大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ。
Klenow片段
主要用途：催化以DNA或RNA为模板合成DNA的反应，把脱氧核糖核苷酸连续地添加到双链DNA分子或引物链的3´-OH末端，催化核苷酸的聚合作用。
核酸酶：DNase、RNase、核酸酶S1
主要用途：末端转移酶在Mg2+存在下，选择3′－OH端单链DNA为引物加成核苷酸，在Co2+存在下，选择3′－OH
端双链DNA为引物加成核苷酸，形成多聚核苷酸尾。
常用于核酸末端标记和核酸连接的互补多聚尾（连接器）。
修饰酶
主要在用途：碱性磷酸酶去除5′－P，可防止二分子DNA 片段5′端P基团自身空间障碍，影响DNA分子之间的连接，一般用碱性磷酸酶处理载体DNA除去5′端P基团，在连接酶作用下目的基因的5′端P先与载体3′端OH连接，再通过复制修复另一条链，使二条链完全连接。
该方法大大提高了连接效率。
姚凌愿
1202150138
生物制药1201。
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3’
3‘ A
5’
T4 DNA Ligase
5‘ G G A T C T 3‘ C C T A G A
3’ • 连 接 处 不 再 是 内 切 酶识别序列
5’
• BamH Ⅰ/ Bgl Ⅱ • Sal Ⅰ/ Xho Ⅰ • Spe Ⅰ/ Xba Ⅰ
三、限制酶的识别序列与DNA的切割
（P47） • 1、限制酶的识别序列与DNA的来源无关，不具有种的特
基因工程中常用的 酶分类和性质
• 一、限制性核酸内切酶 • 二、连接酶 • 三、聚合酶 • 四、修饰酶
第一节 限制性核酸内切酶 (Restriction enzyme)
基因的剪刀
----------------限制性内切酶
• 核酸酶（P41-42)：切割相邻的两个核苷酸残基间的磷
酸二酯键导致多核苷酸链共价键断裂的一类水解酶。可分 为核糖核酸酶与脱氧核糖核酸酶。
• 具3’突出未端的粘性未端
5‘ 3‘
5‘ 3‘
GAGCTC CT CGAG
Sac Ⅰ
G A G C T 3’
5’ C
C 5’
3’ T C G A G
3’ 5’
3’ 5’
• KpnⅠ (5’ ··· GGTAC^ C ··· 3’) • PstⅠ (5’ ··· CTGCA^ G ··· 3’) • SacⅠ (5’ ··· GAGCT^ C ··· 3’)
化酶亚基分开
能酶
识别位点 4～6bp 序列
5～7bp
两侧对称或不对称
常为回文
不对称序列
剪切位点 在限制位点
限制位点上游 离限制位点 >1000
24～26bp 处 bp 的非特异位点
限制与甲 活性分开
同时存在
互相排斥
基化
基因工程中最常用的是Ⅱ型酶
二. Ⅱ型酶的命名,书写与剪切方式：
限制酶
来源
剪切方式
因他们发现了限制性酶并应用于分子遗传学而获1978年 度诺贝尔生理学和医学奖。
1962 , Arber, 1968 Smith等发现限制性酶
W. Arber (1929 –) Biozentrum der Universität Basel,
Switzerland
H. O. Smith (1931 －) Johns Hopkins University School
• 按水解断裂核酸分子的不同方式分：
• 核酸外切酶：以核酸的末端为酶解部位逐个降解核苷酸 • 核酸内切酶：从核酸内部水解磷酸二酯键使之断裂
• 限制性核酸内 切酶，简称限制酶
一. 限制与修饰发展史:
1962年 Arber, W. (瑞士) 等 提出限制与修饰假说。 1968 Meselson和Yuan 发现Ⅰ型限制性酶。 1968 Smith和Wilcox 发现了Ⅱ类限制性酶并阐明其 性质。 1971 Nathans等首次制作酶切图谱。
同尾酶
• 来源和识别都不同，但酶切产生相同末 端的内切酶称为同尾酶
• 专指产生粘性未端的内切酶
5‘ G G A T C C
3’ 5‘ A G A T C T
3’
3‘ C C T A G G
5’ 3‘ T C T A G A
5’
BamH Ⅰ
Bgl Ⅱ
5‘ G 3’ 3‘ C C T A G 5’
5‘ G A
5‘
GAT ATC
3’
3‘
CTA TAG
5’
• EcoR Ⅴ (5’ ··· GAT^ ATC ··· 3’) • Hinc Ⅱ(5’ ··· GT(T/C) ^ (A/G)AC ··· 3’) • Hind Ⅱ(5’ ··· GT(T/C) ^ (A/G)AC ··· 3’) • Sca Ⅰ (5’ ··· AGT ^ ACT ··· 3’) • Sma Ⅰ (5’ ··· CCC ^ GGG ··· 3’)
• 具5‘突出未端的粘性未端
5‘ 3‘
5‘ 3‘
G AAT T C C T TAA G
EcoR Ⅰ
G 3’
5’ A A T T C
C T T A A 5’
3’ G
3’ 5’
3’ 5’
• BamH Ⅰ (5’ ··· G ^ GATCC ··· 3’) • EcoR Ⅰ (5’ ··· G ^ AATTC ··· 3’) • Hind Ⅲ (5’ ··· A ^ AGCTT ··· 3’) • Nco Ⅰ (5’ ··· C ^ CATGG ··· 3’) • Nde Ⅰ (5’ ··· CA ^ TATG ··· 3’) • Not Ⅰ (5’ ··· GC^ GGCCGC ··· 3’) • SalⅠ (5’ ··· G^ TCGAC ··· 3’) • XbaⅠ (5’ ··· T^ CTAGA ··· 3’) • XhoⅠ (5’ ··· C^ TCGAG ··· 3’)
• Cla Ⅰ • Nco Ⅰ • Nde Ⅰ • Not Ⅰ • Sac Ⅰ • Xba Ⅰ • Xho Ⅰ
有些内切酶来 源于无菌株名 的细菌
Ⅱ型内切酶识别位点序列中心对称
5‘
G AAT T C
3’
3‘
C T TAA G
5’
EcoR Ⅰ
酶切位点及酶切未端
• 平未端
5‘
GATATC
3’
3‘
CTATAG
同裂酶
• 识别同一序列且在同一位置(有时不)切 割DNA的内切酶称为同裂酶
• Hinc Ⅱ(5’ ··· GT(T/C) ^ (A/G)AC ··· 3’) Hind Ⅱ(5’ ··· GT(T/C) ^ (A/G)AC ··· 3’)
• Sma Ⅰ (5’ ··· CCC ^ GGG ··· 3’) Xma Ⅰ (5’ ··· C ^ CCGGG ··· 3’)
Eco R I Escherichia coli RY 13
G↓AATTC
Pst I Providencia stuartii 164
CTGCA↓G
BseⅡ Bacilus stearothermophilus strain 822
(HpaⅠ)
GTT↓AAC
• EcoRⅠ(E：属名；co：种名；R：株；Ⅰ：发现次 序)
of Medicine,USA
寄主控制的限制与修饰作用：
感染过A菌的噬菌体进入B几乎总是被切成小片断的现象，称限制。 寄主使它再次感染时能够有效生长而没有收到限制的现象，称修饰。
二.限制性内切酶的类型（P44）
限制性酶的类别与活性
Ⅱ型酶
Ⅲ型酶
Ⅰ型酶
蛋白结构 内切酶亚基和甲基 2 亚基的双功 3 亚基的双功能酶