缺氧环境下大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡及Fas、Fas—L的表达
大鼠骨髓间充质干细胞转染GATA-4的表达及鉴定

2 2 8・
医 学研 究 生 学 报 2 0 1 3年 3月 第 2 6卷 第 3 期
J Me d P o s t g r a , V o 1 . 2 6 ,N o . 3 ,M a r c h , 2 0 1 3
论
著
( 基础 研 究)
大 鼠骨 髓 间充质 干 细胞 转染 G A T A 一 4的表 达 及 鉴定
r u s t i n g s t a b l e G A T A- 4 g e n e r e c o n t r u c t i o n c e l l mo d e l t o p r o v i d e e f e c t i v e me a s u r e me n t s f o r t h e t r e a t me n t o f my o c a r d i a l d i s e a s e s ,s u c h a s a c u t e my o c a r d i a c i n f a r c t . Me t h o d s MS C s w e r e i s o l a t e d nd a c u l t u r e d f r o m t h e b o n e ma r r o w o f n e w - b o r n r a t .Ra t MS Cs w e r e i d e n t i —
【 关键词 】 骨髓间充质干细胞 ; G A T A - 4 ; 基 因转移技术 ; 基因治疗
【 中图分类号 】 Q 2 6
【 文献标志码】 A
【 文章编号 】 1 0 0 8 - 8 1 9 9 ( 2 0 1 3 ) 0 3 - 0 2 2 8 - 0 4
E x p r e s i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f r a t b o n e ma r r o w me s e n c h y ma l s t e m c e H s o v e r e x p r e s s i n g G AT A4 g e n e
CD45和CD90鉴定大鼠骨髓间充质干细胞

每3 d 换液 1 次, 去除非 贴壁 生长细胞 , 使 B MS C纯化 。细胞 生 长融合至 8 0 %时 , 用含 乙二胺 四 乙酸 ( E D T A) 的0 . 2 5 %的 胰蛋 白酶消化细胞 , 1 : 3 传代 , 传至第 3代。
1 . 4 C D 4 5和 C D 9 0对 B M S C鉴 定 : 取 生 长 状 态 良好 、 融 合 至 8 0 %的第 3 代 B MS C 。 消化离心吹打成单细胞悬液 。 调 整 细 胞
此免疫原性低 ,综上特点 , M S C移植成为 当今生物治疗 的研
究热点 , 成 为 细胞 治 疗 的重 要 工 具 。 MS C不 仅 存 在 于 骨髓 , 也
存在 于其他组织如 骨髓 、 脂肪 、 肌肉、 心、 肝、 脐 带血 、 羊水及
胎盘等成体组织 中 , 但骨髓取材方便 , 成为 主要 的取材部 位。 MS C在骨髓 中含量很小 , 仅 占骨髓有 核细胞总数 的 0 . 0 0 1 %~
0. 1 %Ⅲ
,
密度为 l x l 0 6 / m 1 . 取 2 0 0 I x 1 分别 加入 4支 E P管 中 . 依次分别
加入适 量 C D 4 5 、 C D 9 0 、 C D 4 5和 C D 9 0 , P B S ,混合 均匀后 , 避
光3 0 a r i n , 用P B S 洗涤 3次 , 用流式细胞仪检测细胞 阳性率 。 连续 3次重复试验。 1 . 5 B M S C多项分化潜能鉴定 : B MS C成脂分化 : 取成取生长 状 态 良好 、 融合 至 8 0 %的 B MS C , 以2 x 1 0 5 / m l 接种 于 6孔板 上, 放入 培养 箱中培养 2 4 h , 更换新鲜完全培养液 , 以后每 隔 3 d换液 1 次, 至 细胞完全融 合 , 加入成脂 诱导 A液 , 培养 3 d , 换 B液 , 诱导 1 d , 如此循环 3 - 5次后 , 用 B液维持 7 d , 每
低氧培养对间充质干细胞生存与生长的影响

低氧培养对间充质干细胞生存与生长的影响张君;汪保和【摘要】Cultruing mesenchymal stem cells ( MSCs) under hypoxia condition could influence their characteristics of survival and growth, such as vitality, proliferation, senesce, dealth, and so on. The mechanism of MSCs resistance/sensitivity to hypoxia impact is complex and multiple. It involves in energy metabolism, HIFs signal pathway and others signal pathways and kinds of molecules of regulation or transduction. Because of the difference of MSCs source, the methods of isolation, the cell surface markers, the way of establishing hypoxia environment and others methodological fac-tors. It seems that the currently available experimental data on hypoxia impact to MSCs are so contradictory. It is necessary to summarize recent researches on the survival and the growth of MSCs under low oxygen conditions in order to lay the foun-dation for establishing the best culture system of MSCs in future and the research of the clinical application of MSCs.%低氧培养能影响间充质干细胞( Mesenchymal stem cells, MSCs)细胞活力、增殖能力、衰老、死亡等生存和生长相关特性,其分子机制复杂多重,涉及能量代谢途径、低氧诱导因子( HIFs)信号通路以及诸多其他信号通路、调控和转导分子。
同种异体骨髓间充质干细胞在大鼠体内心肌缺血微环境中的分化及存活

加 ( P< 0 . 0 5 ) , 于移植后 9 d MS C s 几乎 观察 不到 , T U N E L凋 亡染色示移植 的 MS C s 发生了凋亡。结论 移植 的 MS C s 在 大 鼠体 内心肌缺血微 环境下 向心肌细 胞分化 的过程 中能够
表 达部分 主要心 肌特 异性标 志物 , 但 其不能 长 时间 、 有 效 的 存 活。 关键 词 心 肌梗 死 ; 骨髓间充质干细胞 ; 移植 ; 心肌特异性标 志物 ; MY H; C x 4 3 ; c T n I ; — a c t i n
C A公 司 : M Y H、 C x 4 3 、 c T n I 、 . a c t i n抗 体 购 于 美 国
S a n t a C r u z 公司; 兔抗山羊 I g G - F I T C购 于北京 中杉 金桥生物技术公 司; 山羊抗兔 I g G - C y 3购于北京康
为世 纪生 物科技 有 限公 司 ; T U N E L试 剂盒 购 于美 国
中图分类号 R 5 4 1 . 7
1 . 2 主要仪器及试剂
B X 5 1 型正置光学显微镜购
于1 3 本O l y mp u s 公司; B L - 4 2 0生 物 机 能 实验 系 统 购
于成都泰盟科技有限公 司; H M 3 2 5 石蜡切片机购于 德国M I C R O M公司; 激光显微切割仪购于瑞士 L E I —
心 肌缺血 微 环 境下 , 移 植 的 MS C s 是 向正 常 心 肌 细 胞 方 向分 化还 是 向受损 或异 常 的心 肌细 胞或纤 维瘢
观察大 鼠同种异 体骨髓 间充质干细胞 ( MS C s )
在体内心肌缺血微环境中 , 向心肌细胞分化过程 中主要 心肌 特异性标志物的分化表达 及存 活。方法 采 用左冠 状动 脉 前降支 ( L A D) 结扎术建立大 鼠急性心肌梗死 ( M I ) 模 型( n= 6 2 ) , 将 绿色荧 光蛋白 ( G F P ) 转染 标记 的 MS C s , 于心外 膜下 注射到心肌梗死周边 区; 免疫 荧光染 色观察移 植后 3 、 5 、 7 、 9 d移植的 MS C s 的存活 情况 及其 主要 特异性 标 志物 ( M Y H、 C x 4 3 、 c T n I 、 仪 一 a c t i n ) 蛋 白的表达 ; 应 用激光 捕获 显微切 割技
成体大鼠骨髓间充质干细胞的表型研究

C 2 (99 ,D 04 。%) D 59 .%) n D 420 %)nte r ia psae e s n h asg , e eut D 99 。%) 9 (85 , 4 (96 adC 3 (. C C 2 i h i nl asg l . e sae t sl og c lI t p 3h r s
・ 1 ・ 2
云南 医药 2 1 年第 3 01 2卷第 1 期 rsoe b a tlg u s m— el t npa tt n [1 etrd y uoo o s t c l r s lnai e a o J.
Rh u ao. O0 l ( )b 8— 2 e m t1 2 2,4 5 :4 55
(0 %) D 4 0 9 ;第 6代纠胞 :C 2 (97 ,D 09 . ,D 5 9 . , D 4 0 9 一 匕 3代细胞 的染色体 10 ,C 3 C %) 8 D 99. %)C 9 (9 %)C 4 (97 6 %)C 3 ( . %) 4 述
分析床细胞孩犁均 为 俯体 。结论
通讯作者 :僻宗柳 (9 9~) . j5 女 主任医师 . 教授。研究方向 : 分子生物学。E- i z 7 @13 . - l 1 9 6 』J ma :b 5 ( m
云南 医药 2 1 年第 3 01 2卷第 1 期
反 应 等优 点 ,MS s 为 了组 织 工 程 中种 子 细 胞来 C成 源 的研究 热 点I 2 】 。但 目前对 MS s C 的鉴 定无 统 一 的标
l] S E H N J Z I RJ 6 T P A i E I ,HU E T P i 1 , F B R , .Ma r h g a c p ae o
a t rto v h0 1 n {r e c kai n s n( ne a ( h umai s a e i hi ho d:a t die s n c l o
骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑组织辐射损伤

l4 2 8・
广 东医学
2 1 5月 第 3 卷第 1 0 0年 1 O期
Gu n d n a g o gMeia o r a Ma 00, o.3 。 o 0 dcl u n l J y2 1 V 1 1 N .1
骨髓 间充 质 干 细胞 移植 治疗 大 鼠脑 组织
பைடு நூலகம்
辐射 损伤 木
胡海 燕 ,孟伟
c ie u in o ai e i d lgo p a d c n rlgo p .R t wee s c f e n 2 a o s e s g s r l ln il e ev d i so fs l n mo e ru o t r u s as r a r c d o 8 d yf ra s si e un mao d ad - f n n n o i i n
南 方 医科 大 学 珠 江 医 院血 液科 ( 州 50 8 ) 南方 医科 大 学 基 因工程 研 究所 ( 州 5 0 1 ) 广 12 2 ; 广 15 5
【 要1 目的 研 究阀充质干细胞( S s 对脑组织辐射损伤 的修复作 用, 摘 M C) 为治疗放射 性脑损伤 奠定理论基
础 。方 法 选取 2 4只 雄 性 S 大 鼠随 机 分 为 3组 , D 即对 照 组 、 型 组 和 治 疗 组 。模 型 组 和 治 疗 组 大 鼠均 接 受 直 线 模
加速 器产 生的 x线行一 次性全脑照射 2 y 正常对 照组不接受照射。其 中治疗组 大鼠接 受辐射 2 、 、4d 0G ; 4 h7d 1 、
明显 高 于模 型 组 , MD 而 A水 平 低 于模 型 组 。病 理 结 果 显 示模 型 组 大脑 皮 质 变 薄 , 经 元 细胞 聚 集排 列 , 目显 著 神 数
骨碎补提取物对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化及Cbfα1表达的影响
U Gu o — y an .XU Zh a n— wa n g.XU Wa n. 1 i
( 1 A f i f l i a t e d H o s p i t a l o fS h a n d o n g U n i v e r s i t y f o T r a d i t i o n a l C h i n e s e Me d i c i n e , J i n a n 2 5 0 0 1 4 , P .R .C h i n a )
w e r e d i v i d e d i n t o 5 g r o u p s : t h e s t a n d a r d m e d i u m g r o u p( s e r u m - f r e e c u l t u r e m e d i u m) , c o n d i t i o n e d m e d i u m g ou r p ( d e x a m— e t h a s o n e 1 x 1 0 ~ mo l / L , p - g l y c e r o p h o s p h a t e s a l t 1 0 m o l / L, V i t C 5 0 g / m L ) , t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i c i n e r g o u p 1 ( d r y — n a r i a e x t r a c t 2 0 m /m s L ) , T C M ro g u p 2 ( d r y n a r i a e x t r a c t 2 ms /mL )a n d T C M g r o u p 3 ( d yn r a r i a e x t r a t 0 . 2 m /m s L ) ; t h e
大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的分离、鉴定与培养
大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的分离与鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的分离与鉴定材料试剂(一)主要设备和产地1.手术器械上海手术器械厂2.台式水平离心机Eppendorf,5810R德国3.Nanopure超纯水仪日本SANYO公司4.AA一200型电子天平美国Denver Instrumol/Lent公司5.低温高速离心机ThermoForma公司6.90一2型磁力搅拌器上海沪西分析仪器厂7.电动匀速垂直转轮上海沪西分析仪器厂8.微量移液枪德国Eppendorf公司9.烧杯、容量瓶上海实生公司10.全自动酶标光度仪美国Bio-Rad公司11.6cm/10cm细胞培养皿美国Conring12.2mL冻存管、细胞冷冻储存器美国Conring13.低温高速离心机ThermoForma公司产品14.YJ-875超净工作台苏州工业园区三兴净化科技有限公司15.C02培养箱3111型美国Thermo Forma公司16.CK40-F200型倒置显微镜日本Olympus公司17.10ml注射器美国BD公司(二)试剂和材料1.谷氨酰胺(L-Glutamine)美国Hyclone公司2.75%消毒酒精上海生工3.肝素美国sigma公司4.胰蛋白酶美国Amresco公司5.胎牛血清美国Gibco公司6.α-MEM培养液美国Hyclone公司7.5-6周龄SD大鼠上海斯莱克实验动物有限公司8.Percoll细胞分离液美国GE公司9.DMSO(细胞培养级)美国Sigma公司Rat BMSC的分离与培养分离颈椎脱臼法处死大鼠,75%酒精中浸泡5分钟,超级工作台内依次取下大鼠两条胫骨及两条股骨。
用手术器械将长骨上附着的肌肉组织尽量去除干净,整个过程保持无菌。
用剪刀剪去长骨两端,10ml注射器吸取加入肝素的完全培养液(10%FBSα-MEM),从长骨一端开口处注入,将骨髓腔内的细胞出入到50ml离心管内,直至长骨冲洗的发白,认为骨髓腔内的细胞都被吹入离心管内。
大鼠骨髓间充质干细胞的分离和培养
1. .1实验动物 1
12  ̄ 个月龄S 大鼠一只, D 体质量8 ̄ 0g 0 10 ,泸州医学院实验动物中
心提供。
1. .2主要试剂 1 DME M高 糖培 养 基 ( I C 公 司 ) ,02 %胰酶 ( I C GB O .5 G B O公 司 ),胎牛血清 ( y l e 司)。 H Co 公 n 1. .3主要仪器 1
细胞 、骨 细胞 、软 骨细胞 、脂 肪细 胞等 中胚层 细胞 分化 。 【 关键 词】 间 充质干 细胞 ;骨髓 ;培 养;S 大 鼠 D
中 图分类 号 :Q 6 42
文献标 识 码 :B 源自文章 编号 :1 7- 14 (0 2 1 0 8— 2 6 1 8 2 1)2— o 6 0 9
版) 0 0 4 4 : 7 —3 8 , 1 , ()1 4 1 5 . 2 0 6
poi rt nJ J il hm, 0 ,8 (5: 1 —9 6 rl e i [ .B o e 2 9 4 1 ) 9 79 2 . f a o ] C 0 2 9 [】 S ake nM, ’ e l L ,u e a dK , . a e c t n 9 h clt O R iy A S t r n D e a I i d at i o l h l t 1mp r l a o
骨髓间充质干细胞归巢研究进展
骨髓间充质干细胞归巢研究进展Progressioninhomingofbonemarrowmesenchymalstemcell李培蕾林明(审校)作者单位:350004福州市,福建医科大学附属第一医院心血管内科通讯作者:林明,E—mail:linmin90039@126.com【关键词】骨髓间充质干细胞;细胞移植;归巢[Keywords]Bonemarrowmesenchymalstemcells;Celltransplantation;Homingdoi:10.3969/j.issn.1672-5301.2010.01.023中图分类号R54文献标识码A文章编号1672—5301(2010)01—0065--03骨髓间充质干细胞(BMMSCs),是一种多能干细胞,具有多向分化潜能,可分化为骨细胞、软骨细胞、内皮细胞、心肌细胞…等,并能分泌大量细胞因子,参与组织修复。
因此,BMMSCs成为科研工作者研究的热点和焦点,并取得了不少令人欣喜的成果12—41,但是其到底是怎么归巢到靶器官,仍不是很清楚。
本文就BMMSCs归巢的机制和影响因素进行简要综述。
1骨髓间充质干细胞BMMSC8是来源于骨髓的非造血细胞,可以贴壁生长,形态类似成纤维细胞,有一定的自我更新能力,并可以分化为骨、软骨和脂肪等多种类型的基质细胞。
它有以下特点:①获取方便,培养简单,具有高度扩增能力;②具有多向分化潜能,可以分化为各种细胞如骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞;③低免疫原性,移植后免疫排斥小。
2骨髓间充质干细胞的归巢BMMSCs的归巢就是骨髓间充质干细胞从移植部位到达特定的组织器官。
BMMSCs的归巢机制十分复杂,涉及多种趋化性因子和相应受体,并受很多因素影响。
3骨■间充质干细胞归巢的主要机制3.1SDF一1/CXCR4SDF一1(stromalcellderivedfactor一1)即基质衍生因子一l。
SDF一1首先是在小鼠骨髓基质细胞分泌的细胞因子中发现的,它是一种由68个氨基酸组成的细胞因子。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
0 . 0 1 ) ,并随着缺氧时间延伸 ,A I 显著增加 ( P< 0 . 0 5 ) ,不过 ,缺氧 6 h 、8 h和 1 2 h时 A I 没 有统计学 意义 ( P>0 . 0 5 ) 。 3 . MS C s 在不同缺氧时间点 F a s 、F a s — L蛋 白表达较缺氧前 均显著性增高 ( P< 0 . 0 5 ) ,且随着缺氧时 间延伸 ,表达显著增 加 , 而在 缺氧 6 h . 1 2 h时间点表达没有统计学 意义 ( P> 0 . 0 5 ) 。3 .缺氧 0 . 5 、l 、2 、4 、6 、8和 1 2 h ,A I 与F 凋亡的重要 因素 ,F a s和 F a s — L蛋 白可能在 M S C s 缺氧凋亡的调控中起着 重要作 用。 [ 关键词 ] 骨髓 间充质 干细胞 ; 细 胞凋亡指数 ; F a s 蛋 白; F a s - L蛋 白 [ 中图分类号 ] Q 2 5 5 [ 文献标 识码 ] A
孔宏亮’ 刘 宁宁 张海鹏 池志红4 齐 国先h
( 中国 医科大学 附属第 一医院心脏 内科 , 眼科 , 病理生理学教研室 , ‘ 组织 与胚胎学教研室 ,辽宁 沈 阳 1 l O O O 1 )
[ 摘要] 目的 探讨大 鼠骨髓 间充质 干细胞 ( M S C s )在 缺氧环境下 是否存在 凋亡及 F a s 和F a s - L蛋 白在 M S C s 凋 亡 时是否表达及与细胞凋亡的相关 性。方法 将 接种 的 P , 细胞置 于 9 4 %N 、l %O 和 5 %C O 缺氧箱 中 3 7 ℃孵 育 ,分别 于 0 . 5 h 、l h 、2 h 、4 h 、6 h 、8 h和 1 2 h 取 出进行 缺 口末端标记 ( T U N E L ) 计算细胞 凋亡指数 ( A op p t o t i c I n d e x ,A I ) 和透 射 电镜观察细胞超微结构的改变 ,用 F a s 和F a s - L免疫组 化试剂盒检测 F a s - L和 F a s 蛋 白的表达 。结果 1 .培养的骨髓 单个 核细胞 C D 2 9 、C D 7 1 、C I M4免 疫 细 胞 化学 染 色 均 阳性 ,C D 3 4染 色 阴性 ,5 一 氮 胞 苷诱 导后 表 达 T n T,提 示 其 为 MS C s 。
M ES ENCHYM AL S T EM CEL LS UNDER HYPoXI A CoNDr r I oNS
C h i Z h i h o n g ,Q i G u o x i a n 。 ( 。 D e p a r t m e n t o f C a r d i o l o g y , 2 ep D a r t en m t f o O p h t h a l m o o l y, g T h e ir f s t H o s p i t a l , ’ ep D a r t en m t fP o a t h o p h y s i o o l y, g D e p a r t m e t n fH o i s t o l o g y a n d C y e m o o l g y ,C h i n a Me d i c a l U n i v e r s i t y , S h e n y a n g , L i a o n i n g 1 1 0 0 0 1 , C h i n a ) 【 A b s t r a c t O b i e c t i v 3 T o e l u c i d a t e w h e t h e r b o n e m e s e n c h  ̄ r m l a s t e m c e l l s( MS C s )o f r a t s u n d e r g o a p o p t o .
维普资讯
第 l 6卷第 5期 2 0 0 7年 l 0月
中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志
CHI NE S E J OURNAL OF Y AND Y
Vo l _l 6.N0.5 0c L 2 Oo 7
缺 氧 环 境 下 大 鼠 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 的 凋 亡 及 F a s 、F a s — L的 表 达
2 . MS C s 在 缺 氧前 、缺 氧 0 . 5 、1 、2 、4 、6 、8和 1 2 h时 A 1 分别为 0 . 1 1 4 - 2 . 0 3 % 、1 5 . 4 - 4 3 . 1 9 % 、1 6 . 7 -2 4 . 5 1 % 、1 6 . 9 - 4 0 . 2 5 % 、1 7 . 7 - 4 2 . 5 0 %、1 8 . 3 - 4 3 . 1 5 % 、1 8 . 4± 4 . 2 2 % 、1 9 . 7 - 4 4 . 5 8 % ,缺 氧 不 同时 间 点 A I 较 缺氧前 均显著 性增 高 ( P<
,
s i s u n d e r h y p o x i a a n d wh e t h e r t h e r e e x i s t s t h e e x p r e s s i o n o f F s a a n d F s. a L p r o t e i n s i n a p o p t o t i c MS C s . Me t h o d s T h e p a s s a g e 3 MS C s w e r e c u l t u r e d i n a c h a mb e r wi t h 9 4 % N, ,1 % O, 。5 % CO ,a t 3 7 ℃ . At d i f e r e n t h y p o x i a t i me
APoPTOS I S AND EXPRES S I ON 0F F AS AND F AS—L PRoTE S
Ko n g Ho ng l i a n g。 Li u Ni n g n i n g ,Zh a n g Ha i p e n g ’
,
RAT BoNE