高效液相色谱柱
液相色谱柱几个参数的定义
液相色谱柱几个参数的定义液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种将液体作为流动相进行分离、净化、分析和鉴定样品中化学成分的方法。
液相色谱柱是液相色谱中的核心部件，它通过填充不同类型和性质的固体填料，使样品溶液在流动相作用下发生分离。
液相色谱柱的参数对于分离效果、分离速度和分离选择性等方面都产生重要影响，下面将介绍几个重要的液相色谱柱参数的定义。
1. 柱型（Column Type）：柱型是指液相色谱柱填料的物理形态，包括管状柱、开管状柱、管束柱等。
不同类型的柱具有不同的优缺点，如管状柱具有高分离效果和分辨率，但样品容量较小；开管状柱则具有较大的样品容量，适合分离复杂样品。
2. 柱长度（Column Length）：柱长度是指填充物所占据的柱体长度，通常用毫米（mm）表示。
柱长的选择与实验要求有关，一般柱长越长，分离效果越好，但分离时间也相应增加。
柱长的选择还取决于仪器的型号和分析要求。
3. 内径（Inner Diameter）：内径是液相色谱柱内部流通通道的直径，通常用毫米（mm）表示。
较小直径的柱内液流速度快，分离效果好，但柱内压力较高，适用于高效液相色谱；较大直径的柱则适用于制备液相色谱。
4. 填料（Stationary Phase）：填料是液相色谱柱中的固体物质，用于将样品分离。
填料可以是无机或有机颗粒，也可以是化学修饰后的硅胶、高效液相填料等。
填料的选择取决于样品的性质和分析要求，不同填料具有不同的静相亲水性、反相亲水性等物化特性。
5. 粒径（Particle Size）：粒径是填料表面质量的衡量指标，即填料颗粒的直径。
粒径直接影响分离效果和柱压，通常用微米（μm）表示。
较小的粒径有更大的表面积，提供更好的分离效果，但柱压也相应增加，适用于高效液相色谱；较大的粒径则用于制备液相色谱。
6. 球形度（Sphericity）：球形度是填料颗粒外形的一个参数，它形容填料颗粒的形态规则程度，通常用于判断填料的质量和性能。
液相色谱柱故障判断
柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方， 柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。 （1）压力过高：
这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于 流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。
①首先断开真空泵的入口处，此时，PEEK 管里充满液体，使 PEEK 管低于溶剂瓶， 看液体是否自由滴下，如果，液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法： 用 30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶 剂过滤头正常，再检查；
②打开 Purge 阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白 头堵塞。
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高效液相色谱柱常见的几种故障判断及排除方法
解决方法： 将波长调整至最大吸收波长处； ⑦流动相的 pH 值没有调节好。 解决方法： 加适量的酸或碱调至最佳 pH 值； (2)保留时间漂移 保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西，两次的保留时 间相差不要超过 15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，就无法进行定性，你 要考虑以下原因： ①温控不当。 解决方法： 调好柱温，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。 ②流动相比例变化。 解决方法： 检查四元泵的比例阀是否有故障。 ③色谱柱没有平衡。 解决方法： 在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。 ④流速变化。 解决方法： 重新设定流速。 ⑤泵中有气泡。 解决方法： 从泵中除去气泡。 (3)峰型异常问题 峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件 来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一 个一个加以解决。 ①所有峰均为宽峰。 解决方法： 系统未达到平衡； 溶解样品的溶剂极性比流动相差很多； 色谱柱尺寸及类型选择不正确；
高效液相色谱仪压力不稳定的原因
高效液相色谱仪压力不稳定的原因
高效液相色谱仪压力不稳定的原因可能有以下几点：
1. 柱堵塞：如果色谱柱因为样品残留物、杂质或化合物析出物而被堵塞，流动相的流动受阻，进而导致压力不稳定。
2. 柱温度不稳定：色谱柱的温度不稳定会导致其容积发生变化，从而影响流动相的流速和压力。
3. 氧气混入：如果氧气进入色谱柱或压力传感器，它会与流动相发生反应，生成气泡或沉淀，从而影响压力的稳定性。
4. 流量控制器问题：流量控制器故障会导致流动相的流速不稳定，从而影响压力稳定性。
5. 泵的问题：高效液相色谱仪的泵可能存在泵头漏液、泵的密封问题或气泡存在等问题，都会导致压力不稳定。
6. 检测器问题：检测器的故障，如电压不稳定或检测器部件老化等，也可能导致压力不稳定。
7. 柱床堆结问题：柱床堆结意味着色谱柱中颗粒沉积在一起，导致流通路径堵塞，进而影响流动相的流动速度和压力。
解决高效液相色谱仪压力不稳定问题的方法包括清洗色谱柱、检查柱床状态、检查和更换流量控制器，检查和维护泵和检测器，以及确保流动相纯净和无氧等。
柱后衍生高效液相色谱法
柱后衍生高效液相色谱法
柱后衍生高效液相色谱法（Post-column derivatization high performance liquid chromatography，PC-HPLC）是一种在液相色谱柱后进行衍生化反应的分析方法。
该方法主要用于分析分子量较大、不易挥发的化合物，如氨基酸、肽、核苷酸、糖类等。
PC-HPLC的基本原理是将待测样品先通过液相色谱柱进行分离，然后在柱后加入衍生剂，使衍生剂与待测化合物发生反应，形成稳定的衍生化产物。
最后通过检测衍生化产物的特定性质来定量待测化合物。
PC-HPLC的优点在于可以提高检测灵敏度和选择性，同时可以避免样品中的干扰物干扰检测结果。
但是，该方法需要使用衍生剂，衍生反应的条件也需要优化，因此操作较为复杂。
高效液相色谱法测定片剂中的有关物质
高效液相色谱法测定片剂中的有关物质
高效液相色谱法是一种常用的分离和定量分析技术，可以用于测定片剂中的有关物质。
下面是测定片剂中有关物质的高效液相色谱法的一般步骤：
1. 样品制备：将片剂样品研磨或粉碎，并取适量样品称量到容量瓶中，加入适量的溶剂溶解和稀释，制备成一定浓度的溶液。
2. 色谱柱选择：选择合适的色谱柱，如反相色谱柱、离子交换柱等，根据需要选择合适的柱温和洗脱溶剂。
3. 色谱条件设置：设置适当的流速、波长和柱温等条件。
根据目标物的性质和样品矩阵的特点，选择合适的检测波长和色谱条件，以提高分离效果和检测灵敏度。
4. 样品注射：用自动进样器或手动注射器将制备好的样品注入到色谱柱中。
5. 色谱分离：通过调整洗脱溶剂浓度梯度或使用不同的洗脱溶剂组合，将目标物和其他干扰物逐渐从色谱柱中洗脱出来。
6. 结果分析：根据色谱检测器所得到的响应信号，通过定量分析软件对色谱峰进行峰面积计算，进而根据内标法或外标法进行定量测定。
7. 方法验证：对该方法进行准确性、重复性、线性、灵敏度和选择性等方面的验证，确保测定结果的准确性和可靠性。
需要根据具体的有关物质，选择合适的色谱柱和洗脱溶剂，并进行合适的优化和验证，以确保测定的准确性和可靠性。
高效液相色谱法的原理
高效液相色谱法的原理
高效液相色谱法的原理主要包括样品的注入、流动相的输送、柱填料的分离和检测器的检测四个步骤。
首先，样品通过自动进样器被注入到色谱柱中，样品中的各种成分在色谱柱中的填料上以不同速度进行分离。
然后，流动相以高压输送，使得样品在色谱柱中快速分离。
柱填料的选择对分离效果有很大影响，通常会选择具有不同亲和性的填料来实现对不同成分的分离。
最后，检测器对分离后的成分进行检测和定量分析。
高效液相色谱法的应用非常广泛，例如在药物分析中，可以对药物的成分进行分离和检测，保证药物的质量和安全性；在环境监测中，可以对水体、大气等样品中的有害物质进行分析，保障环境的安全。
此外，高效液相色谱法还可以用于食品、化工等领域的分析。
总之，高效液相色谱法作为一种高效、灵敏的分析技术，其原理简单清晰，应用广泛。
通过对样品的分离和检测，可以快速准确地获得样品中各种成分的信息，为化学、生物、医药、环境等领域的研究和生产提供了重要的技术支持。
希望本文的介绍对您有所帮助。
usp美国药典液相方法色谱柱汇总
usp美国药典液相方法色谱柱汇总USP美国药典液相方法色谱柱类型汇总USP即美国药典，为高效液相色谱柱填料规定了一些指标，并根据类型进行了序列编排，即USP L1---USP L60系列。
USP 填料描述L1 C18烷基化学键合于多孔硅胶或陶瓷微粒，3-10u L2 C18烷基化学键合于多孔硅胶，30-50u L3 多孔硅胶微粒，5-10uL4 硅胶微粒，30-50uL5 氧化铝微粒，30-50uL6 强阳离子交换填料:磺化氟碳聚合物涂于固体球形核粒上，30-50u L7 C8烷基化学键合于3-10u完全多孔硅胶微粒 L8 单分子层丙氨基化学键合于10u硅胶载体， L9 强酸性阳离子交换基团键合于10u无定形多孔硅胶， L10 氰基化学键合于5-10u多孔硅胶颗粒， L11 苯基化学键合于5-10u多孔硅胶颗粒， L12 季铵基化学键合于30-50u固体硅胶小球上，强阴离子交换填料 L13 三甲基硅烷化学键合于5-10u多孔硅胶颗粒， L14 带强碱性季铵基的阴离子交换涂料化学键合于10u硅胶微粒， L15 六烷基化学键合于全多孔硅胶颗粒，3-10u L16 二甲基化学键合于全多孔硅胶颗粒，5-10u L17 强阳离子交换树脂:氢型、磺化交联的苯乙烯二乙烯基苯共聚物，7-11u L18 氨基和氰基官能团键合于5-10u的多孔硅胶颗粒上 L19 强阳离子交换树脂:钙型、磺化交联的苯乙烯二乙烯基苯共聚物，9u L20 二羟基丙烷基团化学键合于多孔硅胶颗粒，5-10u L21 刚性的苯乙烯二乙烯基苯共聚物小球，5-10u L22 阳离子交换树脂:带磺酸基团的多孔苯乙烯聚合物小球，外径约10u阴离子交换树脂:带季铵基团的聚甲基丙烯酸甲酯或聚丙烯酸甲酯多孔胶体，约10u外L23 径L24 基体表面带大量羟基团的聚乙烯构成的半刚性亲水凝胶，32-63u外径该填料应能分离分子量从100-5000道尔顿的化合物，用于分离中性，阳离子型及阴离子L25 型的水溶性聚合物。
高效液相色谱的使用方法
高效液相色谱的使用方法高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种用于分离、分析和测定混合物中组分的技术。
以下是高效液相色谱的使用方法：1. 样品制备：根据需要，样品可以通过溶解、浸提、纯化等方法进行前处理。
确保样品是均匀的，并且符合HPLC分析要求。
2. 选择合适的色谱柱：根据分析目标，选择合适的色谱柱，包括固定相（C18、C8、氨基、芳基等）和柱型（反相、离子交换、排除等）。
色谱柱质量对分离和分析结果至关重要。
3. 准备移动相：根据色谱柱要求和分析目标，选择合适的移动相。
移动相通常由溶剂和缓冲液组成，可以通过改变溶剂的组成和比例来调节色谱条件。
4. 设定色谱条件：根据需要，设定合适的色谱条件，包括流动相速度、柱温、检测波长等。
这些条件将直接影响分离的效果和分析的准确性。
5. 校准仪器：在开始分析之前，校准色谱仪和检测器，确保其准确性和稳定性。
校准通常包括检测器灵敏度、波长、流速等参数。
6. 注样和运行：将样品注入色谱柱，启动色谱仪，使移动相通过柱子，分离出样品中的各组分。
根据需要，通过改变运行时间、流速等参数，调节分离和分析的效果。
7. 数据分析：通过检测器检测样品中各组分的吸光度或荧光强度，并记录数据。
可以使用特定的色谱软件对数据进行处理和解析，以获得准确的分析结果。
8. 数据解释：根据分析结果，对样品中的各组分进行定量或定性的解释。
可以使用标准品进行定量分析，或者与已知数据进行比对，以确认各组分的身份和浓度。
9. 清洗和维护：在完成分析后，及时清洗色谱柱和仪器，以保持其性能和寿命。
根据需要，使用适当的溶剂进行清洗，并使仪器处于良好的工作状态。
总之，高效液相色谱的使用方法包括样品制备、色谱柱选择、移动相准备、色谱条件设定、校准仪器、注样和运行、数据分析、数据解释以及清洗和维护等步骤。
熟练掌握这些方法能够有效地进行高效液相色谱的分离和分析。
色谱柱hp和db
色谱柱hp和db全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：色谱柱是色谱分析中必不可少的设备之一，扮演着分离和分析样品成分的重要角色。
目前市场上常见的色谱柱主要有HP（高效液相色谱柱）和DB（气相色谱柱）两种类型。
它们在不同的分析场景下具有各自的优势和特点，下面我们就来详细介绍色谱柱HP和DB。
HP色谱柱（High Performance Liquid Chromatography Column）是一种针对液相色谱技术的色谱柱。
HP色谱柱具有高效、快速、灵敏和选择性好等特点，被广泛应用于食品、医药、环境等各个行业的分析领域。
HP色谱柱的填料通常是一种多孔的固定相，填料的种类和粒径大小会直接影响到柱的分离效果。
HP色谱柱通常要求在高压下进行分离，因此需要使用高压液相色谱系统进行操作，同时还需要使用高品质的溶剂、梯度和检测器等辅助设备。
HP色谱柱的应用场景非常广泛，比如在医药行业中，HP色谱柱可以用于检测药物的纯度和含量；在环境监测中，HP色谱柱可以用于检测水质和大气中的污染物；在食品行业中，HP色谱柱可以用于检测食品中的添加剂和残留物等。
HP色谱柱的应用范围涵盖了许多领域，并且具有高效、准确、灵敏等优点，是色谱分析中不可或缺的重要设备。
与HP色谱柱相对应的是DB色谱柱（Deactivated Borosilicate)，是一种适用于气相色谱技术的色谱柱。
DB色谱柱具有高分离效率、高分辨率和快速分离的特点，被广泛应用于各种气相色谱分析中。
DB色谱柱的填料通常是一种不活性的硼硅玻璃，填料的粒径大小和孔径大小不仅影响到柱的分离效果，还直接影响到样品的进样量和分析速度。
HP色谱柱和DB色谱柱是色谱分析中常见的两种色谱柱类型，它们在液相色谱和气相色谱分析领域中有着各自的优势和特点。
HP色谱柱具有高效、快速、灵敏和选择性好等特点，适用于液相色谱分析；而DB色谱柱具有高分离效率、高分辨率和快速分离的特点，适用于气相色谱分析。
高效液相色谱测定原理
高效液相色谱测定原理
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析方法，它基于样品在液相中的分配
行为以及在固定相上的吸附和解吸行为。
它能够对样品中的物质进行分离、定量和定性分析。
高效液相色谱的原理如下：
1. 选择性分离：高效液相色谱中，样品混合物被注入装有固定相（柱填充物）的色谱柱中。
不同物质在柱填充物上的吸附和解吸速度不同，因此可以通过调整流动相的组成、温度和流速等参数来实现对样品中物质的选择性分离。
2. 吸附-解吸过程：在高效液相色谱中，样品溶解于流动相中，与固定相表面发生相互作用。
这个过程涉及吸附和解吸，吸附过程发生在固定相表面，解吸过程发生在固定相表面和流动相中物质的分配行为。
通过控制流动相的性质和柱填充物的特性，可以实现对不同物质的选择性吸附和解吸。
3. 柱填充物：高效液相色谱柱的填充物通常是多孔性固体颗粒，如硅胶或石英。
填充物的选择与样品的性质和分离的目的有关。
柱填充物的粒径、孔径和表面性质将影响色谱分离的效果。
4. 检测器：高效液相色谱的结果通过检测器进行检测和记录。
常见的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器、电化学检测器等，根据待分析物的性质和浓度选择适当的检测器。
总之，高效液相色谱是利用样品在液相中的分配和在固定相上的吸附解吸过程进行分离和定量分析的方法。
通过调整柱填充物、流动相和检测器等参数，可以实现对样品中不同物质的选择性分离和定量测定。
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其他无机物填料柱
这类色谱柱仅限于特殊用途，主要有石墨化碳、氧化铝（Al2O3）、氧化锆（ZrO2） 等填料。不需要进行表面改性，其自身表面即可对各类化合物有强保留。可在任意pH （氧化铝除外，不能大于12.0）及高温度（可达100℃）下使用。其中，石墨化碳填料
柱能分离多种化合物，主要用于分离几何异构体；氧化铝柱刚性强，柱床稳定，可分离 多种化合物且多用于制备色谱；氧化锆柱较氧化铝柱有更强的pH适用范围及能耐受更高 的温度，但其应用尚待进一步研究。
2.液相色谱柱的分类与应用范围
分类方法很多，可按键合相类型、用途（分析型与制备型）、基质种类 等进行分类。 硅胶基质柱（4大类）：
目前，分析型液相色谱柱多为硅胶基质柱，细分为： 高纯硅胶柱：以高纯度硅烷化硅胶（ Silica ）为填料，应用范围较广，但只能在 PH2.0-7.5，小于60度的条件下使用。又由于强极性硅羟基（Si-OH)的次级保留效 应较强，所以应用受到局限，已被键合相柱所取代。 反相硅胶柱：是以硅烷化硅胶为基质，表面键合弱极性官能团的固定相。目前多 用C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（phenyl，苯基）等。用于分离大 多数有机化合物，应用范围最广。 正相硅胶柱：是以硅烷化硅胶为基质，表面键合极性官能团的固定相。目前较多 的为：NH2—（氨基）、CN—（氰基）、DIOL（二羟基，也常做HILIC单独分类 列出，多用于分离有机酸、蛋白质等）。多用于分离光学异构体和反相柱子不能 分离的极性比较大的物质 。
③特别说明：如不是特殊情况，按其他办法可行，则最好不要反冲色谱柱和拆卸筛板。
（2）柱效降低：主要特征性现象有柱压基本正常，但出现拖尾峰、秃峰、分叉峰、 前延峰、峰变宽、基线漂移、理论板数降低、分离度降低等。需要进行再生处理，具 体方法如下：
①一般情况下，顺接色谱柱，按如下溶剂顺序及条件冲洗：95%水-5%甲醇（或乙腈） （1.0ml/min，1h以上）→100％甲醇（1.0ml/min，1h以上）→100％乙晴 （1.0ml/min ，1h以上）→ 75％乙晴 - 25％异丙醇（ 0.5ml/min ， 10倍柱体积以上） →100％异丙醇（0.5ml/min，10倍柱体积以上）→100％二氯甲烷（0.5ml/min，10 倍柱体积以上）→100％正己烷（0.5ml/min，10倍柱体积以上，根据实际情况可忽 略）→100%异丙醇（ 0.5ml/min ，20倍柱体积以上）→95% 水-5%甲醇（或乙腈） （0.5ml/min，30min；再升至1.0ml/min，10倍柱体积以上）→检测用流动相平衡2h 或至基线平稳，进样测试。在冲洗过程中，随时关注柱压变化，确保不超过4000psi； 若超出，可通过降低流速，升高柱温来调整，具体操作可咨询具备相关专业知识背景 和实践经验的人士。
高效液相色谱柱
参与者：赖云飞、曾丽华、李菁、吴海霞、刘佳、徐玲霞
目
录
01 02 03 04
高效液相色谱柱的结构 高效液相色谱柱的分类与应用范围
品牌色谱柱厂家、型号
高效液相色谱柱使用注意事项
1.液相色谱柱的结构
液相色谱柱由柱管、压帽、 卡套(密封环)、筛板(滤片)、 接头、螺丝与柱填料等组成
柱管：多用不锈钢制成，如果使用时柱压不高于70 kg/cm2时，也可采用厚壁玻 璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。 压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟 乙烯制成，用于固定筛板。 多孔烧结物（滤片）：封闭色谱柱的两端，固体色谱柱的填料。一般来说，5um 与3um的微粒分别用2um与0.5um孔径的不锈钢滤片。 密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端 压帽与柱外壁的密封。 柱填料：色谱柱担体，常用的填料为硅胶、多孔聚合物、氧化铝等；
液相色谱柱分离机理概述 色谱柱类型
常规反相柱
常规正相柱 离子交换柱
分离机理
相似相溶
相似相溶 样品离子与色谱柱离子达到 置换动态平衡
备注
要关注pH条件
手性柱（Chiral column）
亲水性色谱柱 （HILIC） 氨基酸分析柱
氢键作用、偶级-偶级作用、 一般，AGP、HSA、 π-π作用、静电作用、疏水 BSA等以疏水作用、空 作用、空间作用 间作用为主 。
氢键作用、偶极作用和静电 作用等多种次级效应及相似 相溶 相似相溶
3.品牌色谱柱厂家、型号
实验室常用色谱柱有C8柱、C18柱、氰基柱、苯基柱、氨基柱、手性柱、 离子交换柱； Waters公司的μBondapak系列填料柱(分析柱部份产品节选)
安捷伦公司的Zorbax系列填料柱
YMC公司的pack系列填料柱
当色谱柱使用较长时间之后，就可能发生柱压升高、分离度不好、柱效降低、峰形不 好等情况，这时就需要根据故障原因对色谱柱进行清堵与再生，以延长色谱柱的使用寿 命。具体原因及处理方法如下： （1）筛板堵塞与柱头塌陷：主要现象有柱压严重升高或不稳定、色谱峰拖尾、色谱 峰变宽、色谱峰分叉、秃峰等，需要进行清堵与弹性复原处理。（此方法适合于任 何类型有相同故障的色谱柱的处理，不同的是溶剂要与相应类型色谱柱匹配。）主 要处理方法如下： ①一般情况下，将色谱柱反接，不接检测器，用纯水或水-有机相（多用甲醇、乙腈） （95:5）以0.6ml/min流速冲洗约4h→再正向连接，接或不接检测器，用纯水或水有机相（多用甲醇、乙腈）（ 95:5 ）以 0.6ml/min 流速冲洗约 1h →再提高流速至 1.0ml/min冲洗1h，观察柱压变化。若不凑效，则拧开柱头螺母（色谱柱进口），
特点
属中等级性柱，普适性 好；保留适中，可用于 正相与反相。
适用于在ODS上无保留或分离 时间太长的组分的分离，以及样 CN（氰基） 品中同时含有亲水与疏水性化合 物而在ODS上色谱优化困难的 场合，也可用于氨基酸分析。
NH2（氨基）
OH（二醇基， DIOL） 高纯硅胶柱
主要用于分析单糖类、 烃类化合物
其他品牌：
美国Supelco公司的Supelco柱,瑞典AkzoNobel公司的Kroma-sil填料柱，迪马公司 的Diaቤተ መጻሕፍቲ ባይዱonsil柱以及部分日本岛津公司的产品，此外Merk公司和Mecherey-Nagel公司 也是世界知名的色谱填料和色谱柱生产厂家。
4.高效液相色谱使用注意事项
普通C8 及C18 反相色谱柱（C8 &C18 Reversed-phase chromatography column）
小心取下筛板，用5%左右的硝酸溶液超声处理20min左右，再用纯水超声20min左右。 用小勺清理掉柱进口污染的部分填料，再将用乙醇调和后的相应的硅胶装入柱入口 （也可用已经报废的同类柱中的填料替代），用平面不锈钢小铲压紧填平至略高出柱 管口，但量不宜太多，否则，压得太紧柱压会升高，然后装上清洗过的筛板，注意筛 板安装方向必需与原装相同，最后紧固。
②冲洗与饱和：清堵紧固后，先反向连接色谱柱，不接检测器，用纯水或水-有机相 （多用甲醇、乙腈）（95:5）以0.3ml/min流速冲洗约4h→再换成甲醇以0.5ml/min流 速冲洗约2h→再正向连接色谱柱，接或不接检测器，用纯水或水-有机相（多用甲醇、 乙腈）（95:5）以0.3ml/min流速冲洗约2h→再换成甲醇以0.5ml/min流速冲洗约1h→ 然后用甲醇或乙腈以1ml/min 流速冲洗约1h以上，再根据测试用流动相比例调整水甲醇（或乙腈）比例，以1ml/min流速冲洗约1h，最后用测试用流动相平衡2h，进样 测试即可。
常用液相色谱柱主要应用范围与特点汇总
反相色谱柱
柱填料类型
C18（ODS） C8（辛基） C3，C4 C1 [三甲基单氯硅烷 (TMS)] 苯基，苯乙基
主要应用范围
可分离多种化合物，最适合用 于极性样品或做离子抑制的样 品的分析 与C18相似 多用于肽类与蛋白质
特点
普适性好；保留性强，用途 广 ；可用于正相。 与C18相似，但保留值稍小 保留值更小
离子交换柱：是以硅烷化硅胶为基质，以磺化交联键合强阳/阴离子基团（磺酸盐 /季铵碱）的固定相，又分为强酸性、强碱性、弱酸性、弱碱性等不同规格。用于 分离解离性较强的有机盐类化合物。（注意：不要同离子色谱混淆，离子色谱主 要是分离无机盐类化合物或某些带点离子。）
聚合物基质柱
聚合物基质柱是指采用聚苯乙烯—二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸脂、多孔性微球蛋白 等聚合物凝胶作为主要填料的一类色谱柱。其相对于硅胶柱具有更强的疏水性及更宽泛 的pH范围（1.0～14.0），但柱效较低，目前主要应用于凝胶渗透色谱（GPC）、凝胶 过滤色谱（GFC）及分子排阻色谱（MEC）。主要用于分离蛋白质类等大分子化合物。
（3）当分析复杂样品时间过长，尤其是中药分析，若出现柱压正常而色谱峰形变差， 分离度降低时可尝试如下方法再生：先用5%甲醇（或乙腈）-95%水，将色谱柱反向 连接，以1ml/min冲洗60分钟以上→再用四氢呋喃（或丙酮）以0.5ml/min冲洗60分 钟以上（去除脂类）→再用65%甲醇（或乙腈）-35%水，以流速1ml/min冲洗60分 钟 → 然后用 纯 甲醇或 乙 腈冲洗 3 0 分 钟→ 接 着用与 流 动相同 比 例的水 - 有 机 相 以 1ml/min流速冲洗约30min→最后用流动相平衡2h，进样测试即可。 （4）特别提醒：再生时最好选择不具备在线脱气的独立泵送系统色谱仪器进行，以 防正相溶剂损坏脱气机密封膜或分子筛及比例阀等仪器精密部件。
②若上述方法效果不理想，可按如上溶剂顺序和条件，先反接色谱柱冲洗→再顺接色 谱柱，用 100% 乙腈以 1ml/min 流速冲洗约 2h →再用与流动相同比例的水 - 有机相以 1ml/min流速冲洗约30min→最后用流动相平衡2h或至基线平稳，进样测试即可。 ③特别说明：再生过程必须随时关注柱压变化，柱压过高易导致硅胶变形与开裂及键 合相极性端连接顺序紊乱，同时要保证再生时间足够。