紫杉醇产生菌的紫外诱变
紫杉醇的发酵培养
部分合成法（半合成法）
10 - 去乙酰巴卡亭Ⅲ，可从天然红豆杉针叶中以0. 1 %的含量 分离得到,为化学半合成提供了较丰富的原料。紫杉醇的半合成方法
已比较成熟,国外已用半合成法生产紫杉醇。
离体细胞培养法
细胞系 诱导子 农杆菌Ti 和 Ri 质粒介导 愈伤组织褐化
发酵培养法
发酵培养法
• 首先，看看微生物发酵工程与医药及我 们生活的关系
怎样能获得更多的紫杉醇？
人们想到了一些方法
快速繁殖方法
植物中提取
人们从T.Media“Hicksii”和 T.Media“ Hill ”这两种植物的根中提 取到紫杉醇，含量红豆杉属植物的4 倍，但是大田种植,3 年才能收割一 次，不太理想。 打破休眠 扦插
全合成
巨大的社会效益、经济效益和极为重要的学术价 值吸引了全球范围内的40 多个一流的研究小组 从事紫杉醇的全合成工作.
美国西部山区有一片红豆杉林，山林中有一个小村镇，住 着2000多居民。这个小村镇虽然不大，却以长寿而闻名美国。 小村镇里，寿命最短的人都活到95岁以上，绝大多数人的寿命 都在100岁以上，百岁寿星处处可见！
这则新闻吸引了不少 科学家的目光，纷纷到这 来考察，然而他们并没有 发现这里人的奇异之处， 饮食生活与其他地区人群 并无太大差别。仔细观察 以后，发现这里的居民有 两个与红豆杉有关的生活 习惯，一是他们好采摘红 豆杉树叶泡茶喝;二是经 常到红豆杉树林中散步或 者运动。
补加蔗糖的影响
总糖随时间的变化关系
补加蔗糖量对菌体干重和紫杉醇产量的影响 发酵过程中24 h时补加蔗糖量对菌体生长和紫杉醇产量的影响。结果表明: 在一定范围内, 随补加蔗糖量的增加, 可以促进菌体的新一轮生长和繁殖, 且紫杉醇含量也增加, 而当每升补加蔗糖量为30 g 时, 菌体干重和紫杉醇产 量都开始下降。这可能因为糖浓度提高而对应的提高了渗透压, 导致膜蛋白 部分降解, 使菌体通透性增加, 而使代谢物更多地向胞外释放 , 促进了产物 的合成速率, 提高了产量, 但过高的糖浓度导致发酵液粘度增加, 菌体呼吸 困难, 进而抑制了紫杉醇的生产。
紫杉醇的工厂化生产应用的原理
紫杉醇的工厂化生产应用的原理紫杉醇简介紫杉醇是一种天然存在于紫杉树（Taxus spp.）中的次级代谢产物，被广泛用于药物研究和临床治疗。
紫杉醇具有抗肿瘤、抗炎、抗植物病毒和抗真菌活性等各种生物活性。
工厂化生产紫杉醇的意义工厂化生产紫杉醇具有以下几个重要意义： 1. 提高紫杉醇的产量：紫杉树中紫杉醇的含量较低，通常可达到0.02%-0.05%。
通过工厂化生产，可以大大提高紫杉醇的产量，满足临床需求。
2. 降低生产成本：工厂化生产紫杉醇可以通过精细调控和优化工艺参数，降低生产成本，使药物更加可承受。
3. 保护紫杉树资源：紫杉树是紫杉醇的天然来源，但因过度采伐和生境破坏，其资源面临枯竭的风险。
工厂化生产紫杉醇可以避免对紫杉树资源的过度依赖，确保其可持续利用和保护。
工厂化生产紫杉醇的原理工厂化生产紫杉醇的原理主要包括以下几个方面： 1. 选择高累积紫杉醇的菌株：通过筛选和改良菌株，选择高产紫杉醇的菌株作为生产菌株。
常见的菌株包括紫杉菌属、雷公藤菌属等。
2. 优化培养基配方：通过优化培养基的营养成分和添加物，提供优良的生长环境，促进菌株生长和紫杉醇产量的提高。
培养基的优化可以包括碳源、氮源、矿质盐、生长因子等方面。
3. 改良发酵工艺：发酵工艺是工厂化生产紫杉醇的核心环节。
通过改良发酵条件如温度、pH、氧气供应、搅拌速度等参数，优化发酵过程，提高紫杉醇的产量。
同时，还需要对发酵时间、发酵容器、采样时间等进行合理调整。
4. 高效提取技术：提取紫杉醇的方法包括有机溶剂提取、超临界流体萃取、液相色谱等。
通过优化提取工艺，提高紫杉醇的纯度和提取率，以满足药物质量要求。
5. 生物转化技术：紫杉醇的特定官能团可以通过生物转化反应进行改造，从而得到更多种类的紫杉醇衍生物。
这些衍生物具有不同的生物活性和药理特性，可以用于药物研发和临床治疗。
工厂化生产紫杉醇的前景随着生物技术和合成化学的不断发展，工厂化生产紫杉醇的技术不断完善，产量和纯度得到了很大提高。
运用紫外诱变获得并筛选植酸酶高产菌株
运用紫外诱变获得并筛选植酸酶高产菌株摘要本文介绍了运用紫外诱变技术获得植酸酶高产菌株的方法，并对其进行筛选、鉴定及酶活测定。
通过实验验证，成功选育出一株植酸酶高产菌株，其酶活达到了较高水平。
介绍植酸酶是一种具有解除植物中植酸盐抗营养因子作用的酶。
在动物、人类体内，它能够释放无机磷以提高对磷的利用效率。
因此，植酸酶在生物技术和农业生产中具有极高的价值。
目前，获得植酸酶高产菌株的方法有很多，例如基因工程、长期培养筛选等。
然而，这些方法对设备、时间、技术水平等要求比较高，成本也比较高。
相比之下，运用紫外诱变技术获得植酸酶高产菌株更具优势。
紫外诱变是一种传统的微生物术语。
它是指用紫外线辐射处理微生物，产生突变，从而改变微生物的某些性状的过程。
它有着速度快、操作简便、筛选效果显著等优点。
实验材料和方法实验菌株以原繁压菌作为研究对象。
原繁压菌是一种常见的生物菌株，可用于生物技术、医药、环保等领域。
实验中使用的原繁压菌来自于某生物技术公司。
实验设备和试剂实验设备包括无菌工作台、高压灭菌器、紫外线灯、恒温振荡培养箱、分光光度计等。
试剂包括琼脂、LB培养基、植酸盐、硝酸钠、Na2HPO4等。
实验步骤1.取10微升的原繁压菌液放置于琼脂平板上，待其全面涂布后将其放入无菌工作台上恒温培养。
2.取1平板用紫外线灯辐照1分钟，同时对照组以同样方式处理。
3.将受照试验组培养菌悬浮于LB液体培养基中，恒温振荡培养，选取菌株后进行次级发酵。
4.通过过筛试验及酶活测定鉴定所获得的高产菌株。
实验结果及分析经过实验验证，紫外诱变成功激发原繁压菌中某些菌株的植酸酶高产潜力。
在恒温振荡扩大培养的过程中，筛选和鉴定了一类植酸酶高产菌株。
经过次级发酵，该高产菌株平均比对照组酶活测定提高了50%左右，酶活达到了200u/g左右。
本实验成功地运用了紫外诱变技术获得植酸酶高产菌株。
该方法操作简便，快速，能够筛选出带有目的性的高产菌株。
本实验结果可以为利用微生物生产高附加值产品提供实验参考。
紫杉醇——现代天然药物研究开发的典范
1994年，中国医学科学院药物研究所有关专家会同中国 科学院的专家，在一次保护野生红豆杉资源专题会议上 向林业部建议我国亦应颁布保护这种野生资源的法令。 1995年野生红豆杉被列为国家一级保护植物，相当于 “植物中的大熊猫”，严禁砍伐。
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内生真菌发酵生产紫杉醇的优势
(1) 生产的可重复性，在工业上可用发酵罐大规模进行 生产，内生真菌生长迅速，易于培养，易于缩短生 产周期，可满足市场的需求，降低紫杉醇的价格； (2) 微生物的发酵生产不需要特别的技术； (3) 微生物育种和选育速度会明显高于植物细胞株； (4) 在药厂利用微生物规模化发酵生产的技术比较成熟， 微生物发酵法生产紫杉醇的转产风险明显小于细胞 培养法与化学合成法； (5) 生物多样性丰富：到目前为止，人们已发现了20多 个属内生真菌可以产生紫杉醇，其寄主也不仅限于 红豆杉属植物，从而提供了丰富的研究对象。
O
O O OH
HO
A
B C
反应步骤多达数十步 大量使用手性试剂 反应条件极难控制 制备成本昂贵 具有重要的理论意义 不适合大规模工业生产
HO BzO
H
D
AcO O
2. 化学半合成
• 母核：红豆杉针叶中提取BaccatinIII（R=Ac）和 10-去乙酰基巴卡亭III（10-DAB，R=H） RO • 侧链：化学合成 18
英文名：Paclitaxel, Taxol® 分子式：C47H51NO4 二萜类化合物 M.C. Wani et al. The Isolation and Structure of Taxol, a Novel Antileukemic and Antitumor Agent from Taxus breoifolia. Journal of the American Chemical Society 1971, 93, 2325.
真菌发酵法生物合成抗癌药物紫杉醇的研究
真菌发酵法生物合成抗癌药物紫杉醇的研究真菌发酵法生物合成抗癌药物紫杉醇的研究一、引言癌症是当今世界严重威胁人类健康的重大疾病之一，寻找有效的抗癌药物一直是医学和生物学领域的研究热点。
紫杉醇作为一种重要的抗癌药物，具有独特的作用机制和显著的临床疗效。
传统的紫杉醇提取方法主要依赖于从红豆杉属植物中提取，然而红豆杉生长缓慢，资源有限，这限制了紫杉醇的大量生产。
因此，探索新的紫杉醇生产方法具有重要的现实意义。
真菌发酵法生物合成紫杉醇作为一种有潜力的替代方法，受到了广泛的关注。
二、紫杉醇的结构与作用机制1. 紫杉醇的化学结构紫杉醇是一种复杂的二萜类化合物，其分子结构包含多个手性中心和独特的官能团。
它的基本结构由紫杉烷环和侧链组成，紫杉烷环是一个刚性的四环结构，侧链则连接在紫杉烷环的特定位置上。
这种复杂的结构赋予了紫杉醇独特的物理和化学性质。
2. 紫杉醇的抗癌作用机制紫杉醇主要通过促进微管蛋白聚合，抑制微管解聚，从而稳定微管结构来发挥抗癌作用。
在细胞分裂过程中，微管是构成纺锤体的重要成分，紫杉醇稳定微管的作用会导致纺锤体无法正常形成，进而阻断细胞的有丝分裂过程，使癌细胞停止增殖并最终死亡。
此外，紫杉醇还可能通过其他机制影响癌细胞的生物学行为，如调节细胞信号传导通路、诱导细胞凋亡等。
三、真菌发酵法生物合成紫杉醇的研究进展1. 产紫杉醇真菌的筛选与鉴定研究人员从自然界中广泛筛选能够产生紫杉醇的真菌。
通过对不同环境样本（如土壤、植物组织等）进行分离培养，然后利用高效液相色谱（HPLC）等分析方法检测培养物中是否含有紫杉醇。
经过大量的筛选工作，已经发现了一些能够产生紫杉醇的真菌菌株，如紫杉霉属（Taxomyces）、拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis）等。
对这些产紫杉醇真菌进行准确的分类鉴定，有助于深入了解它们的生物学特性和代谢途径。
2. 真菌发酵条件的优化为了提高真菌发酵生产紫杉醇的产量，需要对发酵条件进行优化。
紫外诱变原理和步骤
紫外诱变原理和步骤嘿，咱今儿个就来唠唠紫外诱变这档子事儿哈！你说这紫外诱变，就好像是给微生物来一场特别的“变身之旅”。
咱先讲讲这原理吧，紫外线这家伙，就像个调皮的小精灵，它能和微生物的遗传物质捣捣乱，让那些遗传物质出现些小差错。
这些小差错呀，就有可能带来新的特性呢！就好比一个人原本走在一条老路上，突然路变了，他就得找新的方向走，说不定就走到一个更有意思的地方去了。
那这紫外诱变具体咋操作呢？听我给你细细道来。
首先呢，得把咱要诱变的微生物培养起来，让它们茁壮成长。
这就像是给运动员准备好赛道，让他们能在上面尽情奔跑。
然后，把这些小家伙们放在紫外线灯下，让紫外线好好地“关照”它们一下。
这时候可就得注意啦，照的时间不能太长也不能太短，就跟炒菜放盐似的，得恰到好处。
接下来呀，把经过紫外线照射的微生物转移到合适的环境中，让它们缓一缓，适应一下这新的变化。
这就好像是运动员跑完比赛后，得休息休息，恢复恢复体力。
然后呢，就等着看这些小家伙们会有啥新变化啦！是不是很有意思呀？你想想看，通过这么一个简单的紫外诱变过程，就有可能让那些小小的微生物变得不一样了。
也许它们会变得更厉害，能生产出更多我们需要的东西；也许它们会有一些新的特性，给我们带来惊喜呢！这就像是在一个大宝藏里挖呀挖呀，说不定啥时候就挖出宝贝来了。
当然啦，这紫外诱变也不是每次都能成功的，有时候可能运气不太好，啥变化也没有。
但那又咋样呢？咱不能因为一次不成功就放弃呀，得继续尝试，说不定下一次就成功了呢！就像咱走路，有时候会碰到绊脚石，但咱不能就坐在那儿不走了呀，得跨过去，继续往前走。
总之呢，紫外诱变就是这么一个神奇又有趣的过程，它让我们看到了微生物世界的无限可能。
咱可以通过它来探索、来发现，说不定就能找到一些对我们特别有用的东西呢！所以呀，别小看了这小小的紫外诱变，它里面的学问可大着呢！你说是不是呀？。
紫杉醇的人工合成方法
紫杉醇的人工合成方法:1 植物组织培养植物组织培养利用植物细胞全能性，可利用红豆杉植株嫩茎、针叶、树皮、形成层、假种皮、胚等作为外植体进行培养，从而形成大量的提取原料。
目前国内外有很多报道，取得了显著成果。
2 微生物生产Stierle等从短叶红豆杉韧皮部分离到一种寄生真菌（Taxomyces andreanae）可以在特定的培养基中产生紫杉醇及其相关经合物，但由于目前产量极低，还未能在生产中得到应用。
通过改变培养条件和应用重组DNA技术，可望提高紫杉醇的产量。
由于根是除树皮外紫杉醇含量较高的器官，人们利用发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）侵染红豆杉植物外植体诱导生根，通过此培养系统进行紫杉醇生产的尝试，因为这一培养系统无需外援激素、发根生产迅速、遗传性状稳定而受到重视。
积极寻找能合成紫杉醇或其类似的微生物，从微生物的合成途径中定位关键酶和克隆相关基因，将比对植物的研究有更大的意义。
3 使用生物工程法来合成利用生物工程的方法大规模生产紫杉醇是使用生物工程手段，培育、筛选出可大量产生紫杉醇的菌株，通过对它们不断地扩充培养，实现在培养基里“无限制地”生产紫杉醇，而无须再去砍伐自然界已所剩无几的红豆杉树。
实例目前已从一棵百年红豆杉的树皮中分离、筛选出一株紫杉醇产生量十分可观的菌种，命名为HQD33，然后利用化学、物理等多种方法多次诱变、优化其基因结构，再利用生物工程的手段进行处理，最终培育构建出在每升培养液中可产出448.52微克紫杉醇的高产菌株。
4 人工半合成为了保护紫杉树珍贵的资源，避免大量采集紫杉树树皮造成资源破坏，应将目标瞄向了利用可再生资源进行紫杉醇的生产。
百时美施贵宝公司在充分保证泰素产品质量的前提下，1994年，他们成功地利用紫杉树的细枝、叶等可再生材料，提取初级原料，再人工半合成生产紫杉醇。
其半合成生产方法获得了美国FDA 的批准。
从此，太平洋紫杉树不再被破坏性采集，泰素的持续生产供应也得到了保障。
《紫杉醇的发酵培养》课件
、食管癌等治疗中表现出显著疗效。
辅助治疗
02
紫杉醇可以与其他抗癌药物联合使用，提高治疗效果，降低癌
症复发率。
靶向治疗
03
通过改进紫杉醇的给药方式和制剂形式，实现肿瘤的靶向治疗
，减少副作用。
紫杉醇在其他领域的应用
化妆品
紫杉醇具有抗氧化和抗炎作用，可用于生产抗衰老和抗炎的 化妆品。
农业
紫杉醇可以作为植物生长调节剂，促进植物生长和发育。
杂质检查
对生产过程中引入的杂质进行检测和控制，保证 产品的安全有效性。
稳定性考察
对紫杉醇在不同温度、湿度、光照等条件下的稳 定性进行考察，为产品的储存和运输提供依据。
05
CATALOGUE
紫杉醇的应用与市场前景
紫杉醇在医学领域的应用
抗癌药物
01
紫杉醇是一种有效的抗癌药物，尤其在乳腺癌、卵巢癌、肺癌
溶氧控制
要点一
总结词
溶氧浓度是紫杉醇发酵过程中的一个重要参数，通过控制 溶氧水平可以影响菌体的代谢途径和产物生成。
要点二
详细描述
在紫杉醇发酵过程中，溶氧浓度的高低直接影响到菌体的 生长和代谢。不同菌种对溶氧的需求不同，但通常要求较 高的溶氧水平才能获得较高的紫杉醇产量。通过增加通气 量、搅拌速度或采用其他溶氧技术，可以提高发酵液中的 溶氧浓度，促进菌体的生长和代谢。同时，需要实时监测 发酵液的溶氧浓度，以确保其在适宜的范围内波动。
《紫杉醇的发酵 培养》ppt课件
contents
目录
• 紫杉醇简介 • 紫杉醇发酵培养基的制备 • 紫杉醇发酵培养的过程控制 • 紫杉醇的提取与精制 • 紫杉醇的应用与市场前景
01
CATALOGUE
【国家自然科学基金】_紫外线诱变_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801
53 54 55 56 57 58 59
发酵 冠毒素 内生真菌 优势细菌 产酸克雷伯氏杆菌 产氢发酵细菌 丙酸盐耐性变株
1 1 1 1 1 1 1
推荐指数 3 3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
科研热词 诱变 紫外诱变 雄甾1,4二烯3,17二酮 锌指蛋白 铜蓝 酵母菌 酯酶同工酶 酒精 菌株 腐霉利 紫外线诱变 管囊酵母 空间诱变 白地霉 生物降解 生物学特性 甜高粱渣水解液 混合微生物 油菜菌核病菌 氯氰菊酯降解菌 正交试验 植物甾醇 抗药性 微生物转化 居瘤胃棒杆菌 大豆疫霉 复合诱变 地霉属 卵孢子发育 化学诱变 分类鉴定 分离筛选 乙醇发酵
2011年 科研热词 诱变育种 诱变 黑曲霉 鲁氏酵母 雨生红球藻 降解菌 镉离子(cd2 ) 诱变处理 紫杉醇 紫外诱导 紫外诱变 紫外线 粗酶性质 筛选方法 碳酸氢铵 生物吸附 生活污水 正交实验 枯草芽孢杆菌 抑制性消减杂交 异淀粉酶 内生真菌 低聚异麦芽糖 产气气杆菌 α -葡萄糖苷酶 α 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2013年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47
科研热词 推荐指数 诱变 4 紫外线 3 铝土矿处理 2 胶质芽孢杆菌 2 紫外诱变 2 生物浸矿 2 高山被孢霉 1 驯化 1 金矿 1 重离子束 1 酵条件优化 1 选育 1 转谷氨酰胺酶 1 诱变育种 1 蛋白活性 1 茂原链霉菌 1 花生四烯酸 1 肺炎克雷伯氏菌 1 耐高温性 1 细菌纤维素 1 纤维素酶 1 紫外诱变育种 1 紫外 1 筛选 1 突变藻株 1 突变菌株 1 甲基磺酸乙酯 1 生物浸出 1 生物柴油 1 烟道气 1 氯化锂 1 木醋杆菌 1 摇瓶发 1 总脂含量 1 常温等离子体 1 小球藻 1 复合诱变 1 土曲霉 1 啤酒酵母 1 吡咯喹啉醌 1 双硫仑 1 单位体积总脂含量 1 单位体积总脂产率 1 乙醛 1 丝状真菌 1 lovastatin 1 leptospirillum ferriphilum yxw1
紫杉醇的研究
2.直接从红豆杉科植物中分离提取
自紫杉醇药效发现以来，红豆杉资源遭到毁灭性开发，有 些种系濒临灭绝。
因此，利用人工种植的红豆杉代替野生红豆杉成为必
然．这要求人工栽培的红豆杉品种紫杉醇含量高、生长迅 速．因此，人工种植该品种生产紫杉醇的成本很高。
3、直接从紫杉醇产生菌中提取
紫杉醇产生菌主要是一些红豆杉的内生真菌．真菌中
also indicating that YW23 better utilizes glycerol.
specific taxadiene titer are plotted
For each strain, the specific taxadiene titers did not vary significantly between 12°C and 27°C, with a slight decrease observed at 32°C.
Slightly increased expression of certain genes in the MEP pathway by
YW23 does not result in improved taxadiene production.
Normally, this situation might indicate a potential bottleneck in precursor supply
The relationship between p value and differential expression.
348 of the 4070 MG1655 genes were differentially expressed (log 2 (YW22/YW23)>±2) at a statistically significant level (p value<0.01). Of these 348 genes, 243 were upregulated in YW22 while 105 were upregulated in YW23.
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北京农业 ２０１２ 年 １ 月下旬刊
生物技术
肿瘤的治疗在很大程度上依赖于抗肿瘤药物的开发。
在此情况下诞生了紫杉醇。
由于紫杉醇具有良好的抗癌活性和独特的抗癌机理，对于紫杉醇的研究正广泛进行着。
紫杉醇是一种复杂的具有抗癌活性的二萜类生物碱，分子式为C 47H 51NO 14，分子量为853.92，目前已在临床上作为乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌的一线用药，治愈率33%，有效率在60%以上[1-3]。
紫杉醇诱变育种，实验表明：寄居在红豆杉属的植物中的一些真菌的次级代谢产物中有紫杉醇存在。
而利用真菌生产紫杉醇属于微生物发酵范畴(见图1)。
诱变育种是方法之一[4-5]。
图 １ 诱变育种产生高产突变株的主要步骤
１ 材料和方法
１．１ 材料 菌种：本实验室分离得到的紫杉醇产生菌，经过几
年常规选育和原生质体诱变以及融合获得的二株原生质体融合株Jl-3、Z35-8 45s 。
培养基：1 000 mLPDA 液体培养基；1 000 mLPDA 固体培
养基；S-7液体发酵培养基。
提取与检测：展开剂为氯仿/甲醇(7/1 V/V)；萃取液为乙酸乙酯；洗液为乙腈；显色剂为含1%浓硫酸的香草醛溶液；照射剂为紫外线照射，波长228 nm ； 配制剂为甲醇。
紫杉醇标准样购自Sigma 公司。
１．２ 实验方法 实验方法流程：孢子悬液的制备 → 紫外线诱变 摇瓶发酵 → 提取。
发酵液中紫杉醇的鉴定：薄层层析法 → 紫杉醇产生菌的形态观察 → 产紫杉醇菌株的再选择。
２ 数据结果
２．１ 形态观察 群体形态： PDA 固体培养基是培养这两株菌的
优良培养基。
菌株J 1-3在平板上生长较快，l 或2 d 在PDA 固体平板上生长的菌落稀疏，平扁丝絮状，菌落呈白色，背面黑色，无渗出物。
Z35-8 45 s 的生长较前种菌株迅速，菌落呈白色，背面呈深粉红色，手感较黏。
28℃恒温培养适合菌株迅速生长。
菌丝形态：初生菌丝无隔，次生菌丝有单孔形隔膜，菌丝多分支，部分内生，部分表生，深褐色，直径约为2.58～6.45 μm ，有时呈螺旋生长，未见到菌核或其他菌丝特化形态生长，无大型子实体产生。
孢子形态：培养两昼夜后镜检观察，圆形，绿色亮点。
２．２ 致死率 需要在诱变前对孢子悬液计数。
从图2和图3可见，两个出发菌株诱变后的致死率随照射时间的增加而增高。
２．３ 诱变率 诱变率是将发生突变的菌株数与存活株数做比
较。
根据数据表3-1和3-2得出，J 1-3菌株紫外诱变率在照射时间90 s 时最大；Z35-8 45s 菌株在照射时间45 s 时最大。
２．４ 正变率 正变率是将发生正变的菌株与发生突变的菌株数作比较。
正变株是指生长速度迅速、产孢子能力强、层析结果与标样一致的菌株。
３ 结论
此实验应用紫外光辐射，对产紫杉醇菌株J 1-3和Z 35-8 45s 进行
紫杉醇产生菌的紫外诱变
栾云鹏
(西南林业大学，昆明 650224)
摘 要 紫杉醇是一种抗癌的特效药，对各类癌症具有显著疗效。
由于紫杉醇原料的不足是限制应用的难点。
在紫杉醇的生产工艺中，利用微生物发酵法具有一定优势。
但是利用此种方法生产的紫杉醇产量较低，所以关键在于高产菌株的筛选。
实验以经初部诱变和生物工程选育的J1-3、Z35-8 45s 作为出发菌株。
经紫外诱变选育，紫外灯为18 W ，照射距离2l cm ，分别在45、90、120 s3点诱变，观察诱变后的致死百分率、突变百分率、正变百分率和层析结果，选育出高产菌株。
关键词 紫杉醇； 紫外诱变； 产生菌； 选育中图分类号 TQ 923 文献标志码 B
Breeding of Fungi Strains Producing Taxol Using Ultraviolet-irradiation Luan Yunpeng
Ａｂｓｔｒａｃｔ Taxol is a new medicament of resisting for cancer. Fermentation with microbe is a very prospective way to produce Taxol. However ，the low Taxol production of the fungi strains limited the wide use of this way in practice. It is important to breed high productive strains. In this experiment the strains Jl-3, Z35-8 45s isolated from Taxus cuspidate and bred by bioengineering methods were used as start strains. The power of UV was 18W, the distance was 2lcm.The irradiation time was 45s \90s \120s respectively. It was observed by dead rate; mutation rate ; plus-mutation rate and the result of TLC.The result prove: J1-3, the optimum irradiation time were 90s for UV induced mutation. Z35-8 45s, the optimum irradiation time were 45s induced mutation. The results of TLC indicated that the taxol yield by these two strain were higher than the start strain.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ
taxol; UV-irradiation; fungi producing; breeding.
作者简介：栾云鹏（１９８０－），助理实验师，从事微生物生理研究。
收稿日期：２０１２－０１－１６
北京农业 ２０１２ 年 １ 月下旬刊生物技术
诱变实验。
结果表明：J 1-3在照射90s 时是最佳时间，Z 35-8 45 s 辐射时间为45 s 最好。
今后，可在此基础继续进行筛选，以得到高产菌株。
３．１ 诱变前后菌落形态 J 1-3诱变前菌落呈白色，背面为浅黄色。
诱变后，菌落有明显变大或变小，背面颜色较浅，5 d 后呈现亮白色。
且生长速度加快。
Z 35-8 45s 诱变前菌落为白色丝状，背面红色。
诱变后，菌落直径明显变大，依然为白色菌丝，背面色红。
３．２ 致死率、诱变株及正变株 随着照射时间的延长，致死率明显上升，证实紫外线的辐射对J 1-3、Z 35-8 45 s 有影响。
正突变率明显较负突变率少，紫外辐射虽然造成原始菌的改变，但是，正向突变的菌株比负向突变的菌株少。
３．３ 层析 与标样具有相同蓝斑、迁移距离相等或相距很小的试样证实是紫杉醇。
红斑可能是紫杉醇的类似物。
而其他颜色
图 ２ Ｊ１－３ 辐射度与致死率变
异系数
图３ Ｚ３５－８ ４５ｓ 辐射度与
致死率变异系数
表１ Ｊ１－３ 诱变率
表２ Ｚ３５－８ ４５ ｓ
表３ Ｊ１－３ 正变率
表４ Ｚ３５－８ ４５ ｓ 正变率
斑点则是杂质。
由于，层析缸中展开液量少、饱和度不够会产生拖尾现象，导致上端凸出，下端凹陷，迁移距离有偏差。
有时，可能是实验真菌的代谢产物复杂，导致斑点与斑点并没有全部分离开。
出现此类情况时，应采用高效液相色谱仪进行再分析，定量和定性。
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