ABO血型鉴定正反定型试验方法

ABO血型鉴定正反定型试验方法

一、试剂和材料：

（一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供）

（二）显微镜、载玻片

（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）

（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血

（五）竹签

二、方法（玻片法）：

（一）正定型：

1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂；

2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；

3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；

4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；

5.判读、解释并记录反应结果。

（二）反定型：

1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；

2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；

3.混匀（同正定型）；

4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；

5.判读、解释并记录反应结果。

6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1

表1 ABO血型正反定型试验结果判定

三、附注：

（一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；

（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；

（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验；

（四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型；

（五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。