柱切换2荧光检测反相高效液相色谱法测定血浆中特布他林浓度
在线二维柱切换—高效液相色谱法测定人血清中多索茶碱浓度
在线二维柱切换—高效液相色谱法测定人血清中多索茶碱浓度目的：建立测定人血清中多索茶碱浓度的方法。
方法：采用在线二维柱切换-高效液相色谱法测定人血清中多索茶碱浓度，一维色谱柱为Waters C18，中间柱为SC2，一维、二维柱流动相均为甲醇-水（70 ∶30，V/V），检测波长为273 nm，柱温为40 ℃，进样量为10 ?L。
结果：多索茶碱在0.5～50.00 ?g/mL质量浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9），检测限为0.01 ?g/mL，定量限为0.5 ?g/mL，日内、日间精密度的RSD分别为1.51%～1.89%和1.52%～1.92%（n=5），准确度为97.91%～104.19%（n=5），提取回收率为91.63%～93.44%（RSD<2.00%，n=3），基质效应RSD≤3.01%（n=6），稳定性的RSD<5.00%（n=6）。
3例患者静脉输注多索茶碱葡萄糖注射液（0.3 g/d）达稳态后，次日给药前静脉血清中多索茶碱的浓度为3.23、3.35、3.68 ?g/mL，RSD为2.28%、2.34%、2.14%（n=5）。
结论：该方法简便、快速、准确，适用于临床多索茶碱的血药浓度检测。
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the determination of doxofylline in human serum. METHODS：Online two-dimensional column switching-HPLC was adopted to determine the concentration of doxofylline in human serum. First- dimensional chromatographic column was Waters C18 column，and middle column was SC2. First-dimensional and second- dimensional column mobile phrase were methanol-water （70 ∶30，V/V）. The detection wavelength was 273 nm，and column temperature was 40 ℃. Sample volume was 10 ?L. RESULTS：The linear range of doxofylline were 0.5-50.00 ?g/mL （r=0.999 9），and the detection limit was 0.01 ?g/mL. The quantitative limit was 0.5 ?g/mL. RSDs of intra-day and inter-day were 1.51%-1.89% and 1.52%-1.92% （n=5）. The accuracy were 97.91%-104.19% （n=5）. Extraction recoveries rate were 91.63%-93.44%（RSD<2.00%，n=3）. RSD of matrix effect were lower than or equal to 3.01% （n=6），and RSD of stability test was lower than 5.00% （n=6）. After 3 patients were given intravenous injection of Doxofylline and glucose injection（0.3 g/d）up to steady state，the serum concentrations of doxofylline were 3.23，3.35，3.68 ?g/mL before medication on the next day （RSD=2.28%， 2.34%， 2.14%，n=5）. CONCLUSIONS：The method is simple，rapid，accurate and suitable for the determination of plasma concentration of doxofylline.KEYWORDS Doxofylline；Plasma concentration；Online two-dimensional column switching-HPLC多索茶堿（Doxofylline）为甲基黄嘌呤的衍生物[1]，主要用于支气管痉挛引起的呼吸困难[2]。
柱切换技术-高效液相色谱法快速检测大鼠血浆中的普萘洛尔对映体
柱切换技术-高效液相色谱法快速检测大鼠血浆中的普萘洛尔对映体武晓玉;王荣;谢华;王剑锋;贾正平;张强;王先华【摘要】A high performance liquid chromatographic ( HPLC) method with column-switching was developed and validated for rapid determination of two propranolol enantiomers in rat plasma. The column of restricted-access media was used as a pre-treatment column and a Chiralcel OD-RH was used as analytical column. The plasma samples were injected directly into the pre-treatment column to remove plasma protein and endogenous constituents as well as to retent the propranolol enantiomers in the column using the mobile phase of borate buffer (pH 8.5)-methanol (95: 5 , v/v) at the flow rate of 1. 0 mL/min. Then the propranolol enantiomers were transferred to the Chiralcel OD-RH column using the mobile phase of isopropanol-ethanol-O. 2 mmol/L borate buffer (pH 8. 5) (30: 30: 40, v/v/v) at a flow rate of 0. 8 mL/min by column-switching technology. The column-switching time was 3.0 min, the used wavelength was 293 nm and the column temperature was set at 25 ℃. The c alibration curve showed excellent linear relationship (r=0.999 5) in the concentration range from 25 mg/L to 500 mg/L for propranolol enantiomers in plasma. The intra-day and inter-day assay precisions and accuracies were well and the relative standard deviations ( RSDs) were less than 5%. The average recoveries (n =6) of the two enantiomers at 3 spiked levels were from 97. 89% to 101. 56%. All the values of the method validation were within the generallyaccepted criteria for biological sample analysis.The results show that the method is convenient, quick, sensitive and accurate. The method was successfully applied in the determination of propranolol enantiomers in rat blood pharma-cokinetics study.%建立了快速检测大鼠血浆中普萘洛尔对映体浓度的柱切换-高效液相色谱法.将自制限进填料柱作为预处理柱,通过直接进样方式,使普萘洛尔对映体在预处理柱上保留,同时除去血浆中的蛋白质等大分子；再通过柱切换技术,使普萘洛尔对映体在键合型纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(Chiralcel OD-RH)分析柱上得到手性拆分.通过条件优化,确定切换前预处理流动相为硼酸盐缓冲液(pH 8.5)-甲醇(95:5,v/v),流速为1.0mL/min；切换后分析流动相为异丙醇-乙醇-0.2 mmol/L硼酸盐缓冲液(pH 8.5)(30:30:40,v/v/v),流速为0 8mL/min;切换时间为3 min；柱温为25℃；检测波长为293 nm.普萘洛尔两对映体在25～500mg/L的质量浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.999 5),3个加标水平(50、100、250mg/L)的平均回收率为97.89％～101.56％,日内和日间精密度均小于5％.该方法简便、快速、灵敏、准确,适于血浆样本中手性药物的药代动力学研究.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2011(029)012【总页数】5页(P1205-1209)【关键词】柱切换;限进填料;高效液相色谱;普蔡洛尔对映体;大鼠血浆;药代动力学【作者】武晓玉;王荣;谢华;王剑锋;贾正平;张强;王先华【作者单位】兰州军区兰州总医院临床药理基地,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院临床药理基地,甘肃兰州730050;兰州大学药学院,甘肃兰州730000;兰州军区兰州总医院临床药理基地,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院临床药理基地,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院临床药理基地,甘肃兰州730050;兰州大学药学院,甘肃兰州730000;兰州军区兰州总医院临床药理基地,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院临床药理基地,甘肃兰州730050【正文语种】中文【中图分类】O658β-受体阻滞剂是临床广泛用于治疗高血压和心绞痛的一类重要药物，普萘洛尔是其典型的代表药物之一，临床常用于治疗多种原因所致的心律失常、心绞痛、高血压、心肌梗死等疾病［1，2］。
高效液相色谱法测定人血浆中芬太尼浓度
•38 •黑龙江医药科学2018年4月第41卷第2期高效液相色谱法测定人血桨中芬太尼浓度①杨明，季方茹，雷力力，张欣然，方洪壮,陈佳慧(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江佳木斯154003)摘要：目的：建立测定人血浆中芬太尼浓度的高效液相色谱法。
方法：本实验采用内标法，舒芬太尼为内标物。
以正己e -无水乙醇（95 :5)为提取溶剂；以采用S i n o ch ro m O D S- B P(4. 6m m x200m m, 5 |x m)色谱柱，甲醇-乙腈-0. 13mol •L-1%乙酸铵水溶液(45 ：4 :31)为流动相（p H= 7. 5),流速为1.0 mL •m i r T1,柱温为室温，检测波长为215n m。
结果：芬太尼的血浆 浓度在31.25 n g.mL—1 ~1000 n g.mL—1范围内线性关系良好（=0.9996),最低定量限为31.25n g.mL—1,方法回收率为 94.2% ~102.3%,萃取回收率70.5% ~77.1%,日内、日间精密度均小于15%。
结论：本方法操作简单、准确度和灵敏度高,适用于临床芬太尼血药浓度检测及药动学的研究。
关键词：芬太尼；高效液相色谱法;血浆浓度中图分类号：R614文献标识码:A文章编号=1008 -0104(2018)02 -0038 -03芬太尼（fentanyl)最早合成于I960年，是人工 合成出的阿片类强效麻醉性镇痛药物，其化学名称 为1-苯乙基-4-(N-丙酰苯胺）哌啶。
其药理 作用与吗啡类似，具有与舒芬太尼和阿芬太尼等芬 太尼类配体相似的特征与优点，广泛应用于术后镇 痛及手术麻醉。
芬太尼的镇痛效力约是吗啡的1〇〇~ 180倍，哌替啶的550 ~ 1000倍，强阿片类药物 如芬太尼、哌替啶、吗啡主要应用于全身麻醉中的诱 导及维持、术后镇痛以及中到重度癌性疼痛及慢性 疼痛的治疗。
芬太尼因其具有时效短（15 ~ 30min)、静脉滴注易于控制给药量、药效强、起效迅 速、毒副作用低、对循环影响小、术后恢复到正常水 平快、安全可靠等众多优点[24]，所以近年来越来越 被人们所重视。
高效液相色谱法测定血浆中布洛芬浓度
高效液相色谱法测定血浆中布洛芬浓度
夏霖
【期刊名称】《江苏药学与临床研究》
【年(卷),期】2000(008)002
【摘要】建立HPLC法测定健康人血浆中布洛芬浓度的方法。
用反相C18柱，甲醇-乙腈-0．02mol/L醋酸钠-醋酸溶液(47：23：30)V／V为流动相，检测波长225nm。
结果布洛芬的线性范围为0．11～53．83μg／ml，γ=0．9999，最低检出浓度0．1μg／ml，平均回收率为100．6％，日问变异系数(RSD%)<7％。
本法操作简单，快速，准确。
【总页数】2页(P14-15)
【作者】夏霖
【作者单位】葛兰素威康苏州制药有限公司苏州215021
【正文语种】中文
【中图分类】R971.1
【相关文献】
1.柱切换高效液相色谱法测定人血浆中布洛芬对映体浓度 [J], 向瑾;余勤;梁茂植;秦永平;南峰
2.高效液相色谱法测定人血浆中布洛芬浓度 [J], 谢宁;陈清霞;林志霞;杨红梅;梁小丽;肖春燕
3.高效液相色谱-质谱法测定人血浆中布洛芬浓度 [J], 薛洪源;刘军;王宇奇;贺文涛;贾丽霞
4.UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中布洛芬的浓度 [J], 王冬;矫健;张婷婷;刘进朋
5.高效液相色谱法测定血浆中布洛芬浓度(Ⅰ) [J], 王宇;柴虹;朱钦德;贾玉蓉;赵萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多西环素分析方法研究进展
多西环素分析方法研究进展内容摘要：对多西环素的分析方法进行总结，为日后研究工作打下基础。
多西环素分析方法研究进展多西环素（Doxycycline）是四环素类抗生素。
体内、外试验均表明它对革兰氏阳性、阴性菌有良好的抗菌作用；对支原体、衣原体和立克次体均高度敏感［1］。
临床上作为首选或选用药物应用于立克次体、支原体、衣原体及回归热螺旋体等非细菌性感染和布氏杆菌病，以及敏感菌所致的呼吸道、胆道、尿路及皮肤软组织等部位的感染。
但多西环素也有很多的副作用，如：诱发低血糖［2］、引起颅内高压［3］、致光敏反应［4］、致肝损伤［5］。
此外，多西环素的血浆蛋白结合率高，肾功能受损的患者服用时，可出现氮质血症，血清半衰期延长，血清浓度升高，故对其进行药物浓度测定是避免或减少不良反应的发生的有效方法。
目前，已报道的测定多西环素的方法主要有高效液相色谱（HPLC）、毛细管电泳法（CE）、质谱法（MS）、微生物法、荧光法、导数光谱法、流动注射法、吸附溶出伏安法、离子对萃取法等。
本研究就已有报道进行小结，为日后研究工作做铺垫。
1适用于分析药品中多西环素的方法1.1荧光分析法多西环素自身发射的荧光强度较弱，发射波长范围较宽，且呈平台峰，不宜直接采用荧光测定法，通常将其转化为具有较强荧光的化合物再进行检测。
姚兵等［6］报道将多西环素等四环素类抗菌素在浓硫酸作用下的降解物与β-环糊精的相互作用形成具有较强荧光的包络物建立了利用转化荧光结构法测定该类抗菌素的新方法，荧光检测限0.50×10-5mol/L，测定的相对标准偏差为2.20%。
1.2分光光度法紫外可见分光光度法由于操作简单、灵敏度高，广泛用于多种药物的制剂分析。
由于多西环素能够与许多显色剂反应，产生的缔合物在可见光区具有良好的吸收，因此可用此法对药物进行测定。
用氯化铜在碱性溶液中与含多西环素的溶液反应，在400nm波长处测定反应产生的黄绿色光的吸收度来测定药物浓度大小，检测范围在0～20mg/ml之间。
反相高效液相色谱法测定血浆中埃索美拉唑浓度
反相高效液相色谱法测定血浆中埃索美拉唑浓度摘要：目的：建立反相高效液相色谱法测定人血浆中埃索美拉唑（esomeprazole，EMZ，）浓度。
方法：血浆样品用二氯甲烷萃取后经 ymcc18（150mm*4.6mm，5μm）色谱柱（柱温：35℃），用流动相甲醇-0.02mol·L-1醋酸铵（NH3·H2O 调Ph7.6）=51：49，以流速1ml·min-1 洗脱分离，用卡马西平为内标，检测波长306nm。
结果：标准曲线线性范围3.9~2000.0ng·ml-1；萃取回收率70.6%~76.7%；加样回收率 89.1~104.6%；日内测定RSD为4.8%~6.6%，日间测定为2.8%~5.6%。
结论：本方法快速、灵敏、准确、简便，适用于EMZ 血药浓度测定及药代动力学研究。
关键词：埃索美拉唑；高效液相色谱法；药代动力学Determination of Esomeprazole in Human Plasma by RP-HPLCHou Bao-lin 1，Zhao Jun-fang 2，Sun Ke-hong 1*，1. Karamay People's Hospital，Xinjiang 834000，China；2. Department of Pharmacy，Karamay Central Hospital，Xinjiang 834000，China；【Abstrac】t：Objectiv：Determination of Esomeprazole in human plasma by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography. Methods：The plasma samples were extracted by dichloromethane after ymcc18（150mm*4.6mm，5 m）chromatographic column（column temperature：35℃），with the mobile phase of MeOH -0.02 mol·L-1 ammonium acetate（NH3·H2O Ph7.6）=51：49，with a flowrate of1ml·min-1 elution，Carbamazepine was used as an internal standard. The effluent was measured at 306nm. Results：The linear range of standard curve3.9~2000.0ng·ml-1；the extraction recovery rate was 70.6%~76.7%；the recoveryrate of sample was 89.1~104.6%；the daily determination of RSD was 4.8%~6.6%；the daytime determination was 2.8%~5.6%. Conclusion：This method is rapid，sensitive，accurate and simple. It is suitable for the determination of EMZ blood concentration and pharmacokinetic study.【Keywords】：esomeprazole；RP-HPLC；Pharmacokinetics埃索美拉唑（esomeprazole，简称EMZ，商品名：耐信）为世界上首次人工合成并用于临床的光学异构体质子泵抑制剂，它对胃食管反流性疾病患者的治疗和已愈合的腐蚀性食管炎的维持治疗均有显著疗效。
反相高效液相色谱法测定人血浆中利培酮及其代谢物的质量浓度
反相高效液相色谱法测定人血浆中利培酮及其代谢物的质量浓
度
肖红;杨竟;张石宁
【期刊名称】《色谱》
【年(卷),期】1999(17)4
【摘要】建立了测定人血浆中利培酮及其活性代谢物９－羟利培酮质量浓度的反相高效液相色谱法。
用ＺｏｒｂａｘＯＤＳＣ１８色谱柱，以Ｖ（甲醇）：Ｖ（水）：Ｖ（１ｍｏｌ／Ｌ醋酸铵）：Ｖ（３ｍｏｌ／Ｌ氨水）＝３００：５０：３：１为流动相，检测波长为２８０ｎｍ，流速为０．８ｍＬ／ｍｉｎ。
利培酮的线性范围为２￣６００μｇ／Ｌ（ｒ＝０．９９６），回收率为（９８．２±３．５）％，日内与日间的标准偏差分别为４．１２％和４．
【总页数】1页(P395)
【作者】肖红;杨竟;张石宁
【作者单位】南京医科大学脑科医院;南京医科大学脑科医院
【正文语种】中文
【中图分类】R971.4
【相关文献】
1.反相高效液相色谱法测定人血浆及尿样中普卢利沙星活性代谢物 [J], 贺娟;陈勇川;戴青;夏培元
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王飞;王峰;李焕德
3.反相高效液相色谱法同时测定人血浆中对乙酰氨基酚/曲马朵及其代谢物的含量[J], 周芬;孙莉;刘丽京;邓艳萍
4.反相高效液相色谱法测定5-氨基水杨酸及其代谢物在人血浆及尿中的浓度 [J], 陆志城;蔡杏春;刘文坚
5.反相高效液相色谱法测定利培酮及其活性代谢物的血药浓度 [J], 孟珺;何光明;刘丽娟
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人血浆中非诺贝特活性代谢物非诺贝酸的高效液相色谱法测定
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人血浆中非诺贝特活性代谢物非诺贝酸的高效液相色谱法测定Fra bibliotek范国荣
(第二军 医大学附属长海医院临床药理室 上海 200433)
林 梅 张正行 安登魁
(中 国药科大学药物分析教研室 南京 210009)
摘要 目的 :建立快速 测定人血浆 中非 诺贝特 活性 代谢 物非诺 贝酸 (fenofibric acid) 的 高效液 相色 谱方法 。 方 法 :以乙腈 -1 mol·L -1 盐酸 (95∶5) 直接沉 淀血浆蛋白 , 色谱柱为配有 Waters 保护柱的 YWG -O DS 10 μm 200 mm ×4.0 mm , 流动 相为甲醇 -水 -10 %磷酸 (76∶24∶1), 检测波 长 286 nm , 外标法峰 高定量 。 结果 :非诺 贝 酸的 保留时间约为 4.4 min , 定量线性范围 0.25～ 18.75 μg·mL -1 , 绝对回收率 大于 85% (n =5), 方法回收 率 大于 90 % (n =5), 日内日间 RSD 小于 10% (n =5)。 结论 :本法简 便快速 、 定量 准确 , 适用于 非诺贝特键 康 人体临床药代动力学研究 。
按 “5” 项下方法配制 0.625 , 2.50 , 12.50 μg ·mL -1低 、 中 、 高 3 种浓度的非诺贝酸血浆样品各 5 份 , 按血浆样品预处理步骤操作并进样分析 , 以 血浆样品非诺贝酸峰高与相应对照品溶液非诺贝酸 峰高之比求算绝对回收率 , 以血浆样品标准曲线非 诺贝酸测得量与非诺贝酸加入量之比求算方法回收 率 ;同 法配 制 0.625 , 2.50 , 12.50 μg·mL -1 低 、 中 、 高 3 种浓度的非诺贝酸对照血浆样品 , 1 日内 按血样处理和色谱分析方法平行操作 5 次 , 测得日 内精密度 ;连续 5 日每日 1 次进行血样处理和色谱 分析 , 测 得 日 间精 密 度 。 结 果 绝 对 回 收 率 大 于 85 %, 方法回收率大 于 90 %, 日内日间精密 度小 于 10 %, 见表 1 。
柱切换高效液相色谱法测定维生素D滴剂、维生素AD滴剂中维生素D的含量
·486·图1 标准品C0管流式信号采集结果Fig. 1 Standard C0 tube flow signal acquisition results3.2 绘制标准曲线以标准品浓度做为横坐标，平均荧光强度（MFI）为纵坐标，通过五参数拟合模型绘制出标准曲线。
曲线R2值均大于0.99（如图2所示）。
3.3 各试验组细胞因子含量应用细胞因子微球检测技术对试验各剂量组以及对照组小鼠血清中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23、TNF-α、IFN-γ、IFN-β、MCP-1、GM-CSF的含量进行同时测定。
与假手术组相比，阳性对照组中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-17A、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、GM-CSF含量显著性高于假手术组（P<0.01），而IL-10、IL-23、IFN-β含量未见明显差异，Journal of Pharmaceutical Analysis Chinese图2 应用LEGENDplex TM软件绘制出IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23、TNF-α、IFN-γ、IFN-β、MCP-1、GM-CSF标准曲线Fig. 2 Using LEGENDplex TM software to draw the standard curves of IL-1α，IL-1β，IL-6，IL-10，IL-17A，IL-23，TNF-α，IFN-γ，IFN-β，MCP-1，and GM-CSF表明本试验系统运行正常。
被测样品植入试验组中，除MCP-1和TNF-α高剂量组显著性高于假手术组（分别为P <0.01和P <0.05），其他组的IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23、TNF-α、IFN-γ、IFN-β、MCP-1、GM-CSF含量没有明显变化（P>0.05）。
反相高效液相色谱-荧光法测定血浆中丙泊酚的浓度
反相高效液相色谱-荧光法测定血浆中丙泊酚的浓度蔡美华;朱玲;王珊娟;王祥瑞;杭燕南【期刊名称】《中国药房》【年(卷),期】2003(014)012【摘要】目的:建立反相高效液相色谱-荧光检测法测定血浆中丙泊酚浓度的方法.方法:采用 Zorbax Eclipse XDB- C18色谱柱( 150mm× 4.6mm, 5μ m),甲醇-乙腈- 0.005mol/L醋酸钠缓冲液( pH4.0) =55∶ 20∶ 25( V/V)为流动相,样品提取分离后用流动相溶解,在 Ex/Em=276/310nm波长处检测.结果 : 本法测定的标准曲线在 0.015 625～8μ g/ml浓度范围内线性关系良好( r=0.9 998),灵敏度为1ng/ml( S/N=3),最低检测浓度为 10ng/ml,绝对回收率在 89.33%～ 93.37%之间,方法回收率在 97.75%～ 103.31%之间,日内、日间变异系数分别为 1.38%～5.02%、 4.45%～ 9.056%.结论:用本方法检测丙泊酚的血药浓度方便、稳定、灵敏度高,可满足临床药动学研究要求.【总页数】3页(P734-736)【作者】蔡美华;朱玲;王珊娟;王祥瑞;杭燕南【作者单位】上海第二医科大学附属仁济医院,上海市,200001;同济大学医学院病理生理教研室,上海市,200331;上海第二医科大学附属仁济医院,上海市,200001;上海第二医科大学附属仁济医院,上海市,200001;上海第二医科大学附属仁济医院,上海市,200001【正文语种】中文【中图分类】R97;R971+.2【相关文献】1.反相高效液相色谱-荧光法测定人血浆中维库溴铵的浓度 [J], 王宏亮;李海波;刘军;石伟东;王淑云;李文志2.反相高效液相色谱荧光法测定人血浆中左氧氟沙星的浓度 [J], 顾继红;高杰3.高效液相色谱-荧光法测定丙泊酚的血浆浓度 [J], 陈宁;赵恒利;徐竞鸥4.反相高效液相色谱荧光法测定人血浆中酒石酸罗格列酮含量 [J], 刘晓;张相林;李凯鹏;常明5.反相高效液相色谱法测定心肺转流术患者血浆丙泊酚浓度 [J], 唐琪;戴智勇;尹桃因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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第32卷2004年9月 分析化学(FENXIHUAXUE) 研究简报ChineseJournalofAnalyticalChemistry 第9期1216～1218
柱切换2荧光检测反相高效液相色谱法测定血浆中特布他林浓度
秦永平3 邹远高 梁茂植 余 勤(四川大学华西医院临床药理研究室,成都610041)
摘 要 采用柱切换技术2荧光检测反相高效液相色谱法测定血浆中特布他林(TB)浓度。使用LunaC
8(2)和
KromasilC18为分析柱(150mm×4.6mm,5
μm)和预处理柱(25mm×4.6mm,5μ
m),流动相分别为pH310,0.033
mol/L磷酸盐缓冲液∶甲醇∶乙腈(92∶7∶1)和水∶甲醇∶乙腈(97∶2∶1),流速均为1.0ml/L。血浆样品经乙腈沉淀蛋白后进样,切换时间为3.2～4.2min。荧光检测,λex为280nm,λem为309nm。以沙丁胺醇作内标,按内标法定量。标准曲线线性范围为0.8～32
μg/L;最低定量限为0.8μ
g/L;TB和内标的保留时间分别为8.7和9.3min;日内
RSD小于4%,日间RSD小于9%,方法回收率在93%～112%。
关键词 特布他林,血药浓度,反相高效液相色谱
2003209211收稿;2004205211接受1 引 言特布他林(间羟舒喘灵,Terbutaline,TB)系一种选择性β2受体激动剂,有选择性松弛支气管平滑肌的作用,临床已广泛用于支气管哮喘、慢性支气管炎等疾病的治疗。反相高效液相色谱测定血浆中TB
浓度的方法已有用质谱1、荧光2和紫外检测3测定的报道。在紫外检测的方法中用硅胶固相萃取柱萃取,其回收率受硅胶活性影响较大,而低浓度(约1
μ
g/L)样品测定时易受杂质峰干扰,影响测定的准
确性和精密度。本实验建立了血清中TB浓度的柱切换2荧光检测反相高效液相色谱测定法,用于24例健康男性自愿者口服硫酸TB干糖浆和胶囊的相对生物利用度样品的测定,结果准确可靠。
2 实验部分2.1 仪器与色谱条件岛津10Avp型高效液相色谱仪,包括SIL10Avp自动进样器、FCV212AH在线柱切换装置、RF210AXL
荧光检测器和CLASS2VP5.0色谱工作站。使用LunaC
8(2)分析柱(150mm×4.6mm,5μm)和大连装
KromasilC18预处理柱(25mm×4.6mm,5
μ
m),分析柱和预处理柱用流动相分别为pH3.0,0.033mol/L
磷酸盐缓冲液∶甲醇∶乙腈(92∶7∶1)和水∶甲醇∶乙腈(97∶2∶1),流速均为1.0mL/min,利用柱切换技术在3.2～4.2
min将预处理柱用分析流动相反冲流出组分进入分析柱,荧光检测,激发波长为280nm,发射波长为309nm,预处理柱和分析柱柱温均为45℃。2.2 试剂与标准溶液硫酸TB及内标用硫酸沙丁胺醇(Salbutamol,SBA)对照品均由中国药品生物制品检定所提供,乙腈、甲醇为色谱纯,其余试剂为分析纯,用于流动相的水为二次蒸馏水。准确称取硫酸TB9.7mg和硫酸SBA9.6mg,分别置于50mL量瓶中,加0.01mol/L盐酸溶解并定容至刻度即成TB(160mg/L)和SBA(160mg/L)贮备液,置于4℃冰箱保存,临用时将TB贮备液用二次蒸水稀释至所需浓度,即得TB工作液,将SBA贮备液用0.1mol/LHCl稀释至所需浓度,即得内标工作液。2.3 标准曲线取6份空白人血浆各4.9mL,加入不同浓度的TB工作液50
μ
L,配制浓度分别为32.0、16.0、810、4.
0、2.0和0.8μg/L的血浆样品,置于-30℃冰箱保存,备用。取上述不同浓度样品各0.5mL,分别加入内标工作液50μL(含SBA2.5ng),混匀后加入1.0mL乙腈,旋涡混合,离心8min(12000r/min),将上层液转入5mL尖底试管内,置60℃水浴通空气流挥干,残渣用0.02mol/L的醋酸0.2mL溶解后,加正己烷1.0mL,旋涡混合5min,离心5min(2000r/min),负压吸弃正己烷层,下层全部转入自动进样器样品瓶,进样140μL。由TB与内标的峰高比(Y)对TB浓度(X)作加权(1/X)
回归得回归方程为
Y=8.770X-0.171(r=0.9992),血药浓度在0.8～32μg/L范围内呈良好的线性关系。
3 结果与讨论3.1 激发和发射光波长选择贺浪冲等2采用荧光检测器采用HPLC法测定血浆中TB浓度,激发波长为223nm。内标SBA用荧光测定的报道较多4,激发波长有用220和275nm。综合以上考虑,本实验采用λex为280nm、λem为309
nm进行测定,杂质峰少,灵敏度高。3.2 样品预处理条件选择最初采用10%三氯乙酸沉淀蛋白,再用碱调pH至中性后直接进样分析。虽然血浆中杂质不干扰测定,但因进样量受限制,预处理柱受样品酸碱度及未沉淀完全蛋白质影响大,柱性能下降快,寿命短。本法在酸性条件下(内标工作液为0.1mol/LHCl配制),加乙腈沉淀蛋白,上清液挥干可使未沉淀蛋白变性,再用正己烷清洗可去除脂溶性杂质,采用本法处理样品后预处理柱性能稳定,寿命长。3.3 预处理柱流动相和切换时间的确定对同一预处理柱分别采用(1)pH3.0～5.0的磷酸盐缓冲液、(2)二次蒸馏水及(3)二次蒸馏水加少量有机溶剂作流动相,将处理后空白血浆样品和TB标准液分别进样,发现使用流动相(1)时,随pH升高血浆杂质峰出峰时间和TB保留时间均缩短,通过柱切换不能去除血浆中TB前、后的较大杂质峰。换用流动相(2),TB和SBA均不出峰,血浆主要杂质峰在6min可出完,但在6min后切换,分析太费时,
且峰形宽。采用流动相(3),血浆中杂质保留时间缩短,但TB及SBA保留时间仍较长。使用本方法预处理流动相时,血浆主要杂质在3min以前出峰,TB和SBA10min内均未出峰,但预处理柱使用分析柱流动相洗脱时,TB和SBA的保留时间均为0.43min。因此选用本实验预处理流动相,反切换时间窗为3.2～412min。有关SBA血浆中浓度测定,已有文献5报道,不再赘述。3.4 血浆样品稳定性考察 取-30℃保存的高(H)、中(M)、低(L1、L
2)浓
度的血浆样品在4、7和13d按标准曲线项下操作,分别测定TB与内标SBA的峰高比,再由当日标准曲线计算出TB浓度(见表1)。由表1可知,
血浆样品在-30℃保存13d,其浓度无明显变化。此外测定了高、中、低浓度的血浆样品未冻融和冻融3次的样品,结果表明:冻融和室温放置样品的测定结果与未冻融和未放置的无明显差异。
表1 血浆样品-30℃放置稳定性考察Table1 Stabilityofplasmasamplestoredin-30℃
编号No.
加入量
Added(μg/L)
测得量Measuredconcentration
4d7d13dH20.0020.2121.9221.66M8.008.197.578.05L12.002.131.931.91
L21.001.170.920.89
3.5 保留时间及最低定量限标准品、空白血浆和样品血浆色谱图见图1,TB及内标SBA的保留时间分别为8.7min和9.3min,
TB的最低定量限为0.8μg/L。3.6 方法的精密度和回收率取含TB高、中、低(L1、L
2)浓度的血浆样品,于同日内连续测定5次,其平均浓度分别为20.42、8100、
3.
97和0.80μg/L,对应的日内RSD分别为2.9、3.3、3.2和4.0%;于一星期内重复测定5次,其平均浓度分别
为20.59、7.82、3.80和1.05
μ
g/L,对应的RSD分别为4.8、3.9、5.6和815%。取用空白血浆配制成的2010、
8.0、2.0和1.0μg/L浓度样品各0.5mL,再按文献5(血样测定)操作测定含量5次,计算方法回收率分别为(102.1±3.0)%、(100.3±3.5)%、(98.7±5.8)%和(102.5±10.4)%。3.7 受试者血样测定取受试者血浆样品0.5mL,加入内标工作液50
μ
L,以TB与内标的峰高比在标准曲线上求出血浆
7121第9期秦永平等:柱切换2荧光检测反相高效液相色谱法测定血浆中特布他林浓度 中TB浓度。测定了24例健康男性青年自愿者口服硫酸TB干糖浆和硫酸TB胶囊的相对生物利用度样品600余个,其平均血药浓度2时间曲线见图2。两种TB制剂均出现双峰,变化趋势基本一致。
图1 标准品(A)、空白血浆(B)和样品血浆(C2服药后2h,D2服药后12h)色谱图Fig.1 Chromatogramofstadard(A),blank(B)andhumanplasmasample(C22h,D212hafteroraladiminis2tration)1.Terbutaline;2.Internalstandardsalbutamol。 图2 健康志愿者单剂量口服TB5mg后的药时曲线Fig.2 Meanplasma(N=24)concentration2timecurvesofterbutalineishealthyvolunteersfolowingasingleoraldosage(5mg)1.胶囊剂(capsules);2.干糖浆(diredsyrups)。
References1 GaoLing(高 凌),WangGuangji(王广基),WangYing(王 颖),SunJianguo(孙建国),HanJun(韩俊),ShengLongsheng(盛龙生).ActaPharmSinica(药学学报),1999,34(7)∶535～
538
2 HeLangchong(贺浪冲).NorthwestPharmJournal.(西北药学杂志),1993,8(2):58～603 ZouYuangao(邹远高),QinYongping(秦永平)LiangMaozhi(梁茂植),HuangYing(黄 英),YuQin(余 勤).Chinese
PharmJournal(中国药学杂志),2000,35(1):473～474
4 GuptaRP.FullerHD.DolovichMB.J.Chromatogr,1994,654:205～2115 QinYongping(秦永平),ZouYuangao(邹远高),LiangMaozhi(梁茂植),YuQin(余 勤),HuangYing(黄 英).Journalof
SichuanUniversity(MedSciEdi)(四川大学学报(医学版)),2003,34(3):576～579
DeterminationofTerbutalineinHumanPlasmabyColumn2SwitchingHighPerformanceLiquidChromatographywithFluorescenceDetection