血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳1
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳[原理]蛋白质由氨基酸组成,是一种两性电解质,在一定pH条件下可带电荷,带电荷的蛋白质在电场中可发生泳动,这种现象叫电泳。
各种蛋白质都有一定的等电点,在等电点时它呈电中性,在电场中既不向阳极也不向阴极移动。
血清蛋白质的等电点一般低于7.3,在pH高于它们等电点的缓冲液中带负电荷,在电场中向阳极移动。
由于各种蛋白质分子大小和所带的电荷量不同,在电场中泳动的速度也不相同,蛋白质分子小,带电荷多者泳动速度较快,反之较慢。
因此,利用醋酸纤维素薄膜为支持物可将血清蛋白质分为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白。
经染色后,则成有色区带,各区带的宽窄及色带深浅表示各种蛋白质含量的多少(图12),可用比色法分别测出各种蛋白质的百分含量(表13)。
醋酸纤维素薄膜电泳由于具有对样品没有吸附现象、电泳时各区带分界清楚、拖尾现象不明显、样品用量少和电泳时间短等优点,已被广泛应用于临床诊断。
临床上常用此法测定血清蛋白质各组分的百分含量,以协助诊断肝脏、肾脏等疾病。
表13 正常人血清蛋白质各组分理化性质血清蛋白组分 pI 分子量迁移率(⨯10-5) 百分含量(万) cm/s/伏 (%)清蛋白 4.6~4.7 6.9 5.9 57~72 α1-球蛋白 5.06 20 5.1 2~5α2-球蛋白 5.06 30 4.1 4~9 β-球蛋白 5.12 9~15 2.8 6.2~12γ-球蛋白 6.85~7.3 15.6~30 1.0 12~20[试剂]1.巴比妥缓冲液(pH8.6, 离子强度0.06) 巴比妥钠12.76g,巴比妥1.66g,置于盛有200ml蒸馏水的烧杯中稍加热溶解后, 移至1000ml容量瓶中, 加蒸馏水稀释至刻度。
2.染色液氨基黑10B 0.5g, 加甲醇50ml, 冰醋酸10ml, 蒸馏水40ml, 溶后备用。
3.漂洗液甲醇或乙醇45ml,加冰醋酸5ml, 蒸馏水50ml,混匀备用。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳PPT课件

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3.醋酸纤膜薄膜电泳分离血清蛋白质原理
• 醋酸纤维素薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作支持物的一种电泳 技术。
• 醋酸纤维素薄膜做区带电泳的支持物优点:
1. 用样量少,分离清晰,对染料无吸附作用; 2.快速简便,应用范围广; 3. 染色后的薄膜可用乙醇和冰醋酸溶液浸泡透明,透明后的 薄膜便于保存和定量分析。
醋酸纤维素薄膜电泳装置示意图
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4.电泳:红正黑负。 电压120 V。 电泳时间约40 ~ 50 min。
5.染色:氨基黑10B, 染色1-2 min. 6.脱色:2个表面皿,装入漂洗液,依次漂去多余染
料,直到背景漂白为止。
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五、结果与分析
1.定性观察:染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
2.定量测定:光密度仪扫描法,洗脱比色法
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六、临床意义
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳在临床上常用于分 析血、尿等样品中的蛋白质,供临床上诊断肝、肾等疾 病参考。
1.肝硬化时清蛋白明显降底,α2和β-球蛋白无显 著变化,而γ球蛋白可显著增加。正常生理情况,清蛋 白与球蛋白之比约为1.5~2.5∶1,而肝硬化时有可能出 现清∶球<1的情况,常称为清、球比例倒置,说明肝 功能严重受损。
2019/12/22
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实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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一、实验目的
1.了解电泳的基本原理; 2.掌握电泳分离蛋白质的原理; 3.熟悉醋酸纤维素薄膜电泳的方法。
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二、实验原理
1.电泳的基本原理 电泳——是带电粒子在电场中向其电性相反的电极 发生移动的现象。 利用电泳技术可进行物质分离、纯化及鉴定。
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影响带电粒子电泳速率的因素: 1. 带电量 F=qE 2. 分子量 3. 形状
实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(doc)

实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(doc)一、实验目的:了解蛋白质在醋酸纤维素薄膜电泳中的电泳特性,掌握电泳操作技能。
二、实验原理:血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于电场作用对蛋白质进行分离的方法。
它是将样品蛋白质通过电泳方式在薄膜上进行分离,通过比较蛋白质的电泳迁移率来判断不同蛋白质的分子量大小。
血清蛋白质主要是血清白蛋白、球蛋白和纤维蛋白,分子量范围从14 kDa到850 kDa 不等。
在醋酸纤维素薄膜电泳中,蛋白质受到电场力的作用下,向电极方向迁移,带电的蛋白质分子在电场力和阻力的作用下进行不断运动,大分子运动缓慢,小分子运动快,不同分子量的蛋白质在电泳中迁移率不同,可以根据迁移率区分出不同的蛋白质成分并计算其分子量。
三、实验步骤:1.制备0.9%琼脂糖凝胶电泳缓冲液:取700ml去离子水,加入1.68g粉末琼脂糖,微弱的加热搅拌至完全溶解后添加1ml 1M Tris-HCl(pH6.8),0.2ml 10%(w/v)SDS,0.1 ml 10%(w/v)溴酚蓝溶液,搅拌均匀,得到电泳缓冲液。
2.制备凝胶:取0.9%琼脂糖凝胶电泳缓冲液120ml,加入3ml 10%(w/v)APS和0.2ml TEMED,充分混合,倒入成型板中,插入2个酯化的平板梳子,待凝胶完全固化后去除梳子。
3.制备血清样品:血清样品先离心5min,将上清离心液保存备用,调整浓度至3mg/ml,加入适量的样品缓冲液,并加入0.1%(w/v)溴酚蓝染料,离心去除蛋白质沉淀,取上清液。
4.醋酸纤维素薄膜电泳:将凝胶放入电泳槽中,加入电泳缓冲液至凝胶表面,将样品用枪头均匀加到凝胶的对侧。
将电泳槽封好,接上电源,电压保持在120 V,电泳时间约为1.5小时。
电泳完成后取出凝胶。
5.染色:将凝胶放入染色液中,室温下摇晃染色1h,去除染色液,在清水中冲洗几次,静置清水中至少30min。
6.成像:将凝胶放在扫描仪上进行成像,选择合适的波长进行成像。
实验五.血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳分离共21页文档

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区带电泳(zone electrophoresis)是由于在支持物上 电泳时各组分因迁移速度不同分布成区带而得名。区带电泳 按其支持物性状(物理性状)不同可以分为四类:
1、滤纸和薄膜电泳:如醋酸薄膜电泳、聚酰胺薄膜电泳 2、粉末电泳:支持介质是淀粉、纤维素粉、硅胶粉等,粉 末与适当的溶剂调和,铺成平板。 3、细丝电泳:如尼龙丝、人造丝电泳。此为微量电泳。 4、凝胶电泳:最常用的支持介质有:聚丙烯酰胺、琼脂糖 凝胶,凝胶可制作成平板或柱子。
用镊子轻压,使它全部浸入缓冲液内,待膜完全浸透(约半 小时)后取出,夹在清洁的滤纸中间,轻轻吸去多余的缓冲 液,同时分辨出光泽面和无光泽面,并用铅笔在无光泽面上 作记号。
2、制作“滤纸桥”。 (二)点样:
将此血清涂在薄载玻片的一端截面上,然后轻轻与距纤 维薄膜一端2cm处接触,样品即呈一条带状渗透在纤维薄膜上。 切不可用力过大把薄膜弄破。将薄膜平贴在滤纸桥上,点样 端放在阴极,加盖密封平衡十分钟。
粒的泳动速度;当颗粒的泳动方向与电渗方向相反时,则降 低颗粒的泳动速度。
A
B
/////////////////////
/////////////////////
----
++++++++++
-
++++++++++
----+来自A支持物B支持物8
5、焦耳热:在电泳过程中,电流强度与释放出热量(Q) 之间的关系可列成如下公式:
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血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法分离
实验目的:掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质 的原理和方法。
生化试验教材实验二:血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳

实验误差分析和注意事项
误差来源
实验误差可能来源于电泳操作、染色操作、读数等方面。
注意事项
实验过程中应注意保持操作规范,避免交叉污染,同时注意观察实验现象,及 时处理异常情况。
05 实验结论
总结实验结果
实验结果显示,血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳可以将血清蛋 白分为白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白等区 带,分离效果良好。
α1球蛋白增加常见于慢性肝炎、 肝硬化或肝癌等疾病。
β球蛋白增加
β球蛋白增加可能与急性感染、 组织损伤或免疫系统疾病等有 关。
白蛋白减少
白蛋白减少可能提示肝功能异 常、营养不良或肾病综合征等。
α2球蛋白增加
α2球蛋白增加可能提示骨髓瘤、 巨球蛋白血症或妊娠等。
γ球蛋白增加
γ球蛋白增加常见于慢性肝炎、 肝硬化或自身免疫性疾病等。
和疾病状态。
通过醋酸纤维素薄膜电泳分离血 清蛋白质,可以对不同蛋白质成 分进行分析和鉴定,有助于临床
诊断和治疗。
02 实验原理
血清蛋白质的组成和性质
血清蛋白质是由多种蛋白质组成的混合物,包括白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、 β-球蛋白和γ-球蛋白等。这些蛋白质具有不同的电荷和分子量,是电泳分离的基础。
通过实验,我们观察到了不同蛋白质的迁移率和分布情况, 为后续的蛋白质分析和鉴定提供了基础数据。
实验结论与实际应用的联系
本实验所采用的醋酸纤维素薄膜电泳技术在实际应用中具 有广泛的应用价值,例如在临床医学中用于检测和诊断某 些疾病,如肝病、肾病等。
通过本实验,我们了解了醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理 和操作方法,为今后在相关领域的研究和应用奠定了基础 。
03 实验步骤
实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(共享)

实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(共享)一、实验目的本实验旨在掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作的技能,通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳分析,了解蛋白质电泳分析中常用的方法和技术,并且能够初步理解血清蛋白质电泳图谱的含义和影响因素。
二、实验原理1. 蛋白质分离原理蛋白质分离是利用蛋白质之间在电场中的运动迁移率的不同分离的。
蛋白质在电场中的运动迁移率取决于蛋白质分子的大小、形状、电荷性质等的不同。
2. 醋酸纤维素薄膜电泳原理醋酸纤维素薄膜电泳是一种以醋酸纤维素膜为电泳区间的蛋白质电泳方法。
其原理为,蛋白质在正常向电场中发生运动,随着蛋白质运动迁移,逐渐进入膜孔中,受到膜孔的限制,蛋白质停止迁移。
大分子的蛋白质分子无法进入膜孔,小分子的蛋白质可以进入膜孔,分子大小的差异导致了蛋白质的分离。
醋酸纤维素膜孔的大小通常小于3纳米,蛋白质要进入膜孔需要满足一定的条件,如形状、电荷、大小等,因此通过醋酸纤维素膜孔的筛选效果,可以将蛋白质分离出不同性质和大小的蛋白质组分。
三、实验步骤1. 操作前准备:① 气泡清除:取适量蒸馏水,通入空气,将水搅动形成气泡,并将其排出,重复多次,以去除气泡。
② 涂膜:取新的醋酸纤维素膜,利用毛刷刷上适量真空脱泡机中的真空润湿液,边刷边使薄膜平铺,直至全部涂膜结束。
2. 样品制备① 取0.5 mL 的实验样品,放入1.5 mL 的离心管中,室温下放置5 min,使蛋白质沉淀和分散。
② 在超净工作台或洁净室内操作,将样品香磨匀,取样板,向上转移液体吸头轻轻吸取一下,将液体加入样品槽中。
3. 电泳操作① 将准备好的醋酸纤维素膜,贴在电泳仪的隔板上,并将隔板安装在电泳槽内。
② 将电泳槽中的电泳缓冲液(TGE)加热并耗尽气泡之后,轻轻将样品槽放入电泳槽中,注意不能与电泳膜接触,最后慢慢加入样品针头的样品。
③ 大致运行5-10min 后,可观察到样品在膜上积累。
④ 电泳完成后,将电泳槽内的醋酸纤维素膜取出,将其在甲醇以及蒸馏水中洗涤3次,最后在蒸馏水中洗涤一次。
试验九血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

实验九血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、原理醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状结构,有强渗透性,对分子移动无阻力,厚度为120um。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白、a-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。
分子量小、等电点低,在相同碱性pH缓冲体系中,带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。
例如,以醋酸纤维薄膜为支持物,正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳1 h左右,染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快,其余依次为α1-、α2-、β-、γ-球蛋白。
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量,也可直接进行光吸收扫描,自动绘出区带吸收峰及相对百分比,临床医学常用它们间相对百分比的改变或异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
二、操作(一)仪器与薄膜的准备1.醋酸纤维素薄膜的润湿与选择。
2.电泳槽的准备在两个电极槽中,各倒人等体积的电极缓冲液,在电泳槽的两个膜支架上各放两层滤纸条,使滤纸一端的长边与支架前沿对齐,另一端浸入电极缓冲液内。
当滤纸条全部润湿后,用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱逐气泡,使滤纸的一端能紧贴在膜支架上。
滤纸条是两个电极槽联系醋酸纤维素薄膜的桥梁,故称为滤纸桥。
3.电极槽的平衡(二)点样用竹夹子取出薄膜,将无光泽面向上平放在滤纸上。
点样区距阴极端1.5 cm 处,点样时,先用玻璃棒取血清,均匀涂在点样器表面(该点样器是由载玻片一端磨成具有斜面而成},再将点样器轻轻印在点样区内,如图所示,使血清完全渗透至薄膜内,形成一定宽度、粗细均匀的直线。
此步是实验的关键,是获得具有清晰区带的电泳图谱的重要环节。
实验四血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳

• 4. 染色
取出纤维薄膜——放于培养皿染色液中染 色10min.
• 5. 漂洗
取出纤维薄膜——放在漂洗液中漂洗数 次——漂洗到可见色带清晰的电泳图谱。
• 6. 定量测定
• 2 点样:
• 取出2块载玻片——分别滴一滴血清蛋 白A和血清蛋白B——然后用盖玻片的平边 取样(注意均匀)——然后轻轻的在纤维 薄膜的铅笔横线上点样(注意要轻)
• 3 电泳:
• 在电泳槽中搭建好滤纸桥——倒入缓冲 液(注意两边液面高度一致)——将纤维 薄膜架于桥上(点样端靠近负极,点样面 朝下)——接好导线——调节电泳仪参 数——电泳30min
• 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄 膜作为支持物的电泳方法。
• 醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成,ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ它具有均一的泡沫样的结构,有强渗透 性,对分子移动无阻力,作为区带电泳 的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、 样品用量少,应用范围广,分离清晰, 没有吸附现象等优点。
二 实验步骤
• 1. 浸泡
用镊子取醋酸纤维薄膜1张——分别 光泽面和粗糙面——然后在粗糙面离 边缘2cm处用铅笔轻轻的画一条与边 缘平行的直线(为了点样方便)—— 然后将薄膜放在巴比妥缓冲液中浸泡 20min——用镊子取出纤维薄膜——y 用滤纸吸干——平置于载玻片上(粗 糙面朝上)
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血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的
1.掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2.定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、原理
采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法,叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素,是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构,有强渗透性,厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前,醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
三、操作方法
一、仪器和薄膜的准备
1.醋酸纤维素薄膜的润湿的选择:将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内,使它漂浮在液面。
若迅速润湿,整条薄膜色泽深浅一致,则表明薄膜质地均匀;若润湿时,薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等,则为薄厚不匀的薄膜。
实验中应选用质地均匀的薄膜。
因为,纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。
例如,膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。
将选用的薄膜用镊子轻压,使它全部浸入缓冲液内,待膜完全浸透(约半小时)后取出,夹在清洁的滤纸中间,轻轻吸去多余的缓冲液,同时分辨出光泽面和无光泽面。
2.制作“滤纸桥”:剪裁尽寸合适的滤纸条。
取双层附着在电泳槽的支架上,使它的一端与支架的前沿对齐,而另一端浸入电泳槽的缓冲液内。
然后,用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡,使滤纸紧贴在支架上,即为“滤纸桥”。
按照同样的方法,在另一个电泳槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。
二、点样
在薄膜无光泽的一面点样。
点样区距负极端1.5㎝处。
点样时,先用血色素吸管将2~3微升的血清均匀地涂在点样器表面,再用点样器“印”在薄膜的点样区内(见图4-1)。
注意。
应使血清均匀分布在点样区,形成具有一定宽度、精细匀称的直线,切不可用力过大把薄膜弄破。
事先可在滤纸上练习点样,掌握点样技术,这是获得具有清晰区带的电泳图谱的重要环节之
三、电泳
将已点样的薄膜使无光泽面向下贴在电泳槽支架的“滤纸桥”上,参照图4-2。
平衡10min,仔细检查电泳装置的线路是否正确,然后,通电。
打开电源开头,调节电压和电流强度,先旋动仪器粗调旋钮,再旋动细调旋钮。
调节到薄膜每厘米宽的电流强度为0.3mA,通电10~15min后,再将电压和电流强度提高到薄膜每厘米长度电压为10V左右,薄膜每厘米宽的电流强度为0.4~0.6mA。
在电泳过程中,应注意控制电压和电流强度,防止过高或偏低。
待电泳区带展开约3.5㎝时,则并闭电源,一般通电时间为60min左右①。
电泳时间的长短,应以获得血清各组分的最佳分离效果为标准。
因为,使用不同型号电泳仪进行实验,有时所需电泳时间差异较大。
另外,电泳时产生大量的
热,为了获得重复性强、区带清晰的电泳图谱,应使用冷却装置降温。
在炎热的夏季,更为必要。
四、染色
电泳完毕立即取出薄膜,直接浸入染色液中,染色5min。
然后,用漂洗液浸洗,每隔10min左右换一次漂洗液,连续更换三次,可使背景颜色脱去。
将膜夹在干净的滤纸中,吸去多余的溶液。
操作中,要注意控制染色和漂洗的时间,防止背景过深或某些区带太浅。
五、结果判断
一般的染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
从正极端起,依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。
六、透明
将染色后漂洗干净的薄膜用吹风机吹干,再浸入透明液的甲液中,浸泡2min 后立即浸入透明液的乙液中,浸泡1min(要准确),然后迅速取出薄膜,将它紧贴在玻璃板上,不要存留气泡。
大约2~3min内的薄膜完全透明,放置10~15min 后,用吹风机将膜吹干。
在水笼头下将玻璃板上透明的薄膜润湿后,用单面刀片从膜的一角撬起,并划开一端,再用手捏住撬起的膜轻轻撕下,可以容易地从玻璃板上取下透明的薄膜。
用滤纸吸干,浸入液体石腊中,约3min后取出。
再用干净的滤纸吸干,压平,则成为色泽鲜艳而又透明的血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱,可长期保存不褪色。
七、定量
未经透明处理的血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱可直接用于定量测定。
一般采用洗脱法或光密度计法,测定各蛋白质组分的相对百分含量。
1.洗脱法:将电泳图谱的各区带剪下,分别浸入盛有0.4mol氢氧化钠溶液的试管中,清蛋白管加入4ml,其余每管各加2ml,摇匀,放入37℃恒温水浴上浸提30min,每隔10min,充分摇动一次,以便将色泽完全洗脱下来。
该溶液颜色较稳定,在室温下24小时内颜色强度无显著变化。
然后在620nm波长处比色,测定各管的光密度值为O.DA、O.Dα1、O.Dα2、O.Dβ、O.Dγ。
按下列方法计算血清各部分蛋白质所占百分率。
(1)先计算光密度值总和(简写为T):
T=2×O.DA+O.Dα1+O.Dα2+O.Dβ+O.Dγ
(2)再计算血清各部分蛋白质所占百分率(即相对百分含量):
正常值:清蛋白54.0~73.0;α1球蛋白2.8~5.1% ;α2球蛋白6.3~0.6%;β球蛋白5.2~1.0%;γ球蛋白12.5~0.0%。
2.光密度计法:将干燥的血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱放入自动扫描光密度仪(或色谱扫描仪)内,通过反射(使用未透明的薄膜时)或透射(用已透明的薄膜时)方式,在记录器上自动绘出血清蛋白质各组分曲线图,横坐标为膜的长度,纵坐标为光密度(或光强度),每一个峰代表一种蛋白质组分。
然后,用求积仪测量出各峰的面积,计算每个峰的面积与它们总面积的百分比就代表血清中各种蛋白质组分的百分含量。
或将曲线图上各峰沿曲线剪下,称量各峰的重量,计算每个峰的重量与它们总重量的查分比也可以代表血清中各种蛋白质组分的百分含量。
在使用具有电子计算机附件的自动扫描光密度仪时,可以由显示部分或打字带上获得血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱上每条区带所代表的蛋白质组分的含量
试剂和器材
(一)试剂
(1)新鲜血清——无溶血现象。
(2)巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6,0.07M,离子强度0.06):称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g,溶于少量蒸馏水后定容1 000ml。
(3)染色液①:称取氨基黑10B 0.5g,加入蒸馏水40ml,甲醇50ml和冰乙酸10ml,混匀,在具塞试剂瓶内贮存。
(4)漂洗液①:取95%乙醇45ml,冰乙酸5ml和蒸馏水50ml。
混匀,在具塞试剂瓶内贮存。
[易挥发、密封]
(5)透明液①[易挥发、密封]
甲液—取冰乙酸15ml和无水乙醇85ml,混匀,装入试剂瓶内,塞紧瓶塞,备用。