半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用
克隆技术在植物保护中的应用
克隆技术在植物保护中的应用随着科技的不断进步，克隆技术逐渐成为了植物保护领域中的重要手段。
克隆技术通过复制优良基因，提高植物品质和抗病能力，为植物保护提供了全新的解决方案。
本文将从克隆技术在无性繁殖、基因提取以及疫情防控等方面进行探讨。
一、克隆技术在植物无性繁殖中的应用无性繁殖是指通过植物器官的分裂、分化，形成新个体，而不需要雌雄交配的过程。
在传统繁殖方法中，种植者需要依赖于种子繁殖植物。
然而，种子繁殖存在着遗传变异的问题，种植者无法保证下一代的质量和稳定性。
克隆技术通过植物组织培养、植株分割等手段，实现了无性繁殖的高效快速。
例如，通过离体培养可以将植物应用于组织工程和育种项目中，提高植物的生长速度和产量，从而实现植物无性繁殖的优化和控制。
二、克隆技术在植物基因提取中的应用植物基因提取是研究植物基因组和遗传变异的重要手段。
克隆技术可以通过复制植物细胞、组织或器官中的特定基因，帮助研究人员准确提取并分析植物的遗传信息。
通过克隆技术，研究人员可以得到大量无差异的基因材料，为植物基因组学研究提供了重要的工具。
此外，克隆技术还可以帮助研究人员实现对植物基因的修改和改良，为研究植物的遗传特性和育种提供了新的可能性。
三、克隆技术在植物疫情防控中的应用植物在生长和发育过程中，容易受到各种病毒、细菌和真菌的侵袭，导致疾病的发生和传播。
疫情的防控一直是植物保护工作者的重点关注。
克隆技术在植物疫情防控中有着重要的应用价值。
通过克隆技术，研究人员可以复制和繁殖具有抗病特性的植物，提高植物的抗病能力。
此外，克隆技术还可以用于培育病毒抗性的基因型，有效防止病毒在植物中的传播。
通过克隆技术在植物疫情防控中的应用，可以减少植物疾病对农作物生产的损害，提高农业生产的质量和效益。
综上所述，克隆技术在植物保护中的应用为植物繁殖、基因提取以及疫情防控等方面提供了新的解决方案。
通过克隆技术，可以提高植物的遗传质量、抗病能力以及农作物的产量和质量。
PCR 技术在植物生物学研究中的应用
PCR 技术在植物生物学研究中的应用作者：李冬洁来源：《种子科技》 2018年第8期摘要：随着PCR技术的研究进展，其在许多领域都有了广泛的应用。
介绍了PCR技术的基本原理和分类，并分别从植物病原物检测、内参基因筛选、转基因植物检测和抗病基因检测等方面，综述了PCR技术在植物生物学研究中的应用概况和发展前景。
关键词：PCR技术；植物生物学；应用1 PCR技术的原理和分类1.1 PCR技术的原理PCR是聚合酶链反应的缩写，是一种在生物体细胞外将待检DNA序列在酶促作用下进行扩增的方法。
PCR的技术过程主要由高温变性、低温退火和适温延伸3个反复循环的步骤构成，并在特异耐热酶——Taq DNA聚合酶的催化下完成。
其基本原理是用寡聚核苷酸引物结合在模板DNA分子上进行特异核苷酸序列扩增[1]。
1.2 PCR技术的分类1.2.1 实时荧光定量PCR技术1995年，美国PE 公司研制成功了实时荧光定量PCR （RT-PCR）技术，应用到分子生物学、植物生物学及其他研究领域。
该技术是在传统PCR技术的基础上，将核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测等技术融合在一起的，具有实时性和准确性等特点，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[2，3]。
1.2.2 多重PCR技术多重PCR技术是指在同一个PCR反应体系中加入多对特异性引物，与PCR体系内的多个模板反应，能同时检测多个目标DNA分子的技术。
因具有高效快捷、试验成本低、进程快等优点而得到广泛应用，但在植物生物学研究方面的应用还相对较少[4]。
1.2.3 单分子PCR技术单分子PCR技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR反应。
该技术与传统PCR技术相比，其基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。
2 PCR技术在植物生物学中的应用2.1 PCR技术在植物病原物检测中的应用病原物在分离鉴定上是非常困难的，特别是专性寄生菌难以人工离体培养，而且病原物毒性类型鉴定费时且毒性表达受环境条件的影响很大。
植物遗传工程中的基因克隆与转化技术
植物遗传工程中的基因克隆与转化技术植物遗传工程是指通过改变植物的遗传物质，以达到改良、改变或创新植物性状的目的。
其中基因克隆与转化技术是植物遗传工程中的关键技术之一。
基因克隆指的是通过将特定基因从一个生物体中分离并扩增形成DNA片段，使其能够在其他生物体中稳定表达。
转化技术则是将克隆的基因导入到目标植物体内，使其能够在植物表达并产生相应的功能。
一、基因克隆技术基因克隆技术是植物遗传工程中的关键环节。
首先需要从源生物体中分离出目标基因。
常用的方法有PCR扩增、限制酶切片段分离等。
通过PCR扩增技术，可以快速、高效地扩增目标基因，提供足够的DNA片段用于后续的克隆工作。
限制酶切片段分离则是利用特定的酶将目标基因从源DNA片段中切割出来。
接下来，克隆基因需要被插入到适当的载体中，常用的载体包括质粒和病毒等。
将基因插入载体后，需要通过转化技术将其导入目标植物体内。
二、转化技术转化技术是将克隆的基因导入到目标植物体内的关键步骤。
常见的转化技术主要有基因枪法、农杆菌介导法和化学法等。
基因枪法是通过将DNA微粒射入植物细胞，使基因得以导入的方法。
此方法简单、高效，对不同植物都适用，因此被广泛应用于植物遗传工程中。
农杆菌介导法则是利用农杆菌将目标基因导入植物细胞。
这种方法克服了基因枪法的一些限制，可以导入更长的DNA片段，但受适用植物种类的限制。
此外，化学法也是一种常用的转化技术，通过利用化学物质使植物细胞的细胞壁通透性增强，从而实现目标基因的导入。
三、应用前景与挑战基因克隆与转化技术在植物遗传工程中具有广阔的应用前景。
通过基因克隆和转化技术，可以实现对植物农艺性状的改良，提高植物的抗病虫害能力、耐逆性和产量，从而促进农业的可持续发展。
此外，利用基因克隆和转化技术还可以为植物生物制药、环境修复等领域提供解决方案。
然而，基因克隆与转化技术在应用过程中也面临一些挑战。
首先，对于目标基因的选择和定位仍然是一个复杂的问题。
PCR相关技术在植物病毒检疫检测中的应用
PCR相关技术在植物病毒检疫检测中的应用
顾青雷;刘昊;张绍红
【期刊名称】《生物技术通报》
【年(卷),期】2011(000)003
【摘要】PCR和建立在PCR基础上的分子生物学技术以其灵敏、快速、简便等优点广泛应用于植物病毒的检测.阐述反转录聚合酶链式反应、免疫捕捉反转录PCR,PCR一单链构型多态性、实时荧光定量PCR、差异显示PCR和巢式PCR等相关技术的原理及其在植物病毒检测中的应用现状,以期为我国植物病毒的检疫检测提供有益参考.
【总页数】5页(P78-81,90)
【作者】顾青雷;刘昊;张绍红
【作者单位】张家港出入境检验检疫局,张家港,215600;张家港出入境检验检疫局,张家港,215600;张家港出入境检验检疫局,张家港,215600
【正文语种】中文
【相关文献】
1.高通量检测技术在植物病毒检疫中的研究应用及前景 [J], 易汪雪;陈舜胜;杨翠云;于翠
2.PCR相关技术在动物疫病检疫检测上的应用 [J], 张彩凤
3.高通量检测技术在植物病毒检疫中的研究应用及前景 [J], 易汪雪; 陈舜胜; 杨翠云; 于翠
4.荧光定量PCR检测技术在动物检疫中的应用进展 [J], 李波;蒋慧娴;杨瑾;任志彬;
商建成
5.PCR及相关技术在出入境检验检疫中的应用 [J], 袁源;葛勇;周启生
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pcr技术在植物生物学中的应用研究
张宝华（朔州师范高等专科学校，山西朔州 036000）摘 要：PCR技术是近年来兴起的一项新型技术，具有成本低、效率快、可以对大样本进行分析鉴定等特点，在各个领域都得到了广泛的应用。
本文主要对PCR技术的基本原理和分类进行了简单的阐述，并对PCR技术在内参基因筛选、抗病毒基因检测以及植物病原物检测等方面的应用进行分析，对PCR技术的发展前景进行简单的总结。
关键词：植物生物学；应用；PCR技术中图分类号：Q943.2 文献标志码：AApplication of PCR in Plant BiologyZhang Bao-hua(Shuozhou Normal College, ShanXi shuozhou 036000)Abstract: As a new technology emerging in recent years, PCR technology has the characteristics of low cost, fast efficiency, and can analyze and identify large samples, and has been widely applied in various aspects. In this paper, the basic principle and classification of PCR technology were briefly described, and the application of PCR technology in internal reference gene screening, antiviral gene detection and plant pathogen detection was analyzed, and the development prospect of PCR technology was simply summarized.Key words: Plant biology; Application; PCR technology1 PCR技术原理PCR指的是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），而PCR技术就是一种将待检验的DNA序列于生物体细胞外在酶促作用下进行扩增的技术方法。
水稻基因克隆技术及其应用
水稻基因克隆技术及其应用一、概述水稻是世界上最重要的粮食作物之一，其基因克隆技术的发展为水稻的育种和生产提供了重要支持。
本文将介绍水稻基因克隆技术及其应用。
二、水稻基因克隆技术1. 基本原理基因克隆是指将一个DNA分子从一个生物体中剪切出来并插入到另一个生物体中。
在水稻中，基因克隆可以通过PCR扩增、限制性内切酶切割和连接等步骤完成。
这些步骤需要特定的试剂和设备，如PCR仪、电泳仪等。
2. 具体操作具体操作包括以下几个步骤：（1）DNA提取：从水稻中提取DNA，一般采用CTAB法。
（2）PCR扩增：利用特定引物扩增目标基因序列。
（3）限制性内切酶切割：将PCR产物和载体进行限制性内切酶切割，以便于连接。
（4）连接：将PCR产物和载体连接起来形成重组DNA分子。
（5）转化：将重组DNA分子转化到大肠杆菌或农杆菌等载体中，以便于其在细胞中表达。
3. 技术优势水稻基因克隆技术具有如下优势：（1）可以精准地克隆目标基因序列，避免了传统育种方法的不确定性和耗时性。
（2）可以通过基因编辑技术对目标基因进行精准修改，实现快速育种。
（3）可以将外源基因导入到水稻中，使其获得新的特性，如抗病性、耐旱性等。
三、水稻基因克隆技术应用1. 水稻抗病育种利用基因克隆技术，可以将抗病相关基因导入到水稻中，从而提高其抗病能力。
例如，在日本和中国，已经成功利用这一技术培育出多个抗癌瘤菌、白叶枯等重要病害的水稻品种。
2. 水稻耐旱育种水稻作为一种耐旱能力较差的作物，其产量受到干旱的严重限制。
利用基因克隆技术，可以将与水分调节相关的基因导入到水稻中，从而提高其耐旱能力。
例如，美国的一项研究表明，利用基因克隆技术导入抗旱基因后，水稻的产量可以提高50%以上。
3. 水稻品质改良水稻的品质受到多个基因的调控，利用基因克隆技术可以精准地调节这些基因的表达，从而改良水稻的品质。
例如，在日本和韩国等地已经培育出多个高蛋白、高淀粉、高营养价值等优质水稻品种。
大分子聚合酶链式反应技术在植物病原体检测中的应用
大分子聚合酶链式反应技术在植物病原体检测中的应用近年来，植物病原体的检测成为了农业生产中非常重要的一环，而大分子聚合酶链式反应技术（PCR）则是检测病原体的一种重要手段。
在这篇文章中，我们将探讨PCR技术在植物病原体检测中的应用。
一、 PCR的基本原理PCR技术是通过体外扩增DNA分子的手段来检测病原体的。
具体而言，PCR 过程中，通过引入一对引物来定位被检测的DNA分子，然后通过热循环的方式不断复制出大量的DNA分子，从而实现DNA分子的扩增。
PCR技术相对于传统的检测方式，具有高灵敏度、快速、准确的特点。
这使得PCR技术在病原体检测中得到了广泛应用。
二、 PCR技术在植物病原体检测中的具体应用1. PCR技术在病原体种类鉴定中的应用通过PCR技术，可以根据特定引物的选择来判定被检测样品中所含的病原菌种类。
例如，可以通过选择适当的引物，来鉴定样品中是否存在快速生长的革兰氏阴性菌。
并且，由于PCR技术的高灵敏度和高效性，可以检测出非常微小的DNA 片段，从而有效地避免了病原菌的漏检情况。
2. PCR技术在病原体数量检测中的应用除了在病原菌种类的鉴定中，PCR技术在病原菌数量检测中也具有广泛应用。
该检测方法可以通过对PCR扩增产物进行定量分析，进而实现病原菌数量的精确检测。
对于一些必须要进行数量检测的实践应用场景，PCR技术在这方面的应用是非常有价值的。
3. PCR技术在病原体检测中的其他应用此外，PCR技术还可以在诊断样品中不同的病原体菌株进行区分，为农业生产的全面提高和保障提供有力的技术支持。
三、 PCR技术在植物病原体检测中的优势相对于常规的检测方式，PCR技术在植物病原体检测中具有独特的优势。
首先，PCR技术具有非常高的检测灵敏度，可以检测出较低浓度的病原体。
其次，PCR技术不会受到样品中非目标DNA的影响，可以使得检测结果更加准确。
再者，PCR技术的操作也非常方便，并且操作流程相对简单，因此可以很好地节省实验人员的时间成本和样品成本。
植物基因克隆的策略及方法
植物基因克隆的策略及方法首先，PCR是植物基因克隆的重要策略之一、PCR（聚合酶链反应）是一种体外复制DNA片段的方法，可以在短时间内扩增大量的特定DNA序列。
通过PCR可以快速准确地克隆植物基因。
PCR的基本原理是利用DNA 聚合酶酶学合成原理，在DNA片段两侧设计引物，将其与DNA片段的两侧结合，在适当的条件下进行DNA的聚合酶链反应，从而扩增目标基因。
PCR方法主要包括加热解性、引物连接、扩增和酶切等步骤。
其次，限制性酶切也是植物基因克隆的重要方法。
限制性酶切是指利用特定的限制性酶将DNA分子切割成特定序列的片段。
通过限制性酶切，可以将目标基因从植物DNA中剪切出来，然后进行进一步处理。
限制性酶切的基本原理是将特定的限制性酶加入反应体系中，该酶能识别和切割DNA的特定序列，从而将目标基因从DNA中剪切出来。
限制性酶切方法主要包括选择合适的限制性酶、反应条件的优化、酶切产物的回收和检测等步骤。
连接是植物基因克隆的另一种重要方法。
连接是指将目标基因连接到特定的载体DNA上，以便在目标植物中稳定地表达。
连接方法主要包括两个步骤：首先，需要处理载体DNA和目标基因的末端，以便它们能够相互连接；其次，利用DNA连接酶将载体和目标基因连接起来。
连接步骤中的处理涉及到DNA末端的修饰和处理，可以通过多种方法如限制性内切酶切割、引物扩增、酶切等进行。
最后，转化是植物基因克隆的最后一步。
转化是指将连接好的目标基因插入到目标植物的基因组中，使其能够在植物体内稳定表达。
转化的方法有多种，包括农杆菌介导的转化、基因枪转化、电穿孔转化等。
其中，农杆菌介导的转化是最常用的方法之一、农杆菌介导的转化是利用农杆菌作为载体将外源DNA导入到目标植物细胞中，通过农杆菌的自然寄生习性以及在植物细胞中特定的植物基因的活性表达，实现目标基因的稳定表达。
总的来说，植物基因克隆的策略和方法包括PCR、限制性酶切、连接和转化。
通过这些方法，可以快速准确地克隆植物基因，实现对植物遗传特性的改变和优化，为农业生产和植物遗传研究提供有力的技术支持。
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云南大学学报(自然科学版) 1998,20(5):377～379CN53-1045/N ISSN0258-7971 Journal of Yunnan U niversity半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用①杨明挚1) 陈善娜1) 鄢 波2) 黄兴奇2) 刘继梅1)(1)云南大学生物系,昆明,650091;2)云南省农科院生物技术所,昆明,650223)摘要 常规PCR方法在分离克隆已知序列的基因中发挥着重要的作用,但要求目的基因片段与引物间的同源性几乎是100%,一旦引物序列与目的基因间存在有差异,便往往会导致扩增的特异性不强,扩增效率不高,给克隆带来很大的困难.在常规PCR基础上,若所分离的基因在不同植物间存在保守序列,依据这一序列再合成一对引物,进行半套式PCR则能大大提高扩增的特异性及扩增效率.对于较长的基因片段而言还能同时完成亚克隆.本文依据南瓜GPA T(甘油-3-磷酸酰基转移酶)基因cDNA序列及比较拟南芥菜、豌豆间在该基因内的保守区段序列合成相应引物来分离克隆黑子南瓜及西瓜GPA T基因的cDNA片段为例来说明半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用.关键词 半套式PCR,基因克隆,应用分类号 Q7811 材料和方法111 材 料 ①植物材料:黑子南瓜(Cucurbita f icilia)及西瓜(Cit rull us lanat us)购自云南省种子公司.②试剂与酶:cDNA合成试剂盒购自GIB2 COBRL公司;dN TP,Taq DNA多聚酶,反应缓冲液及其他分子生物学试剂购自Q IGEN,Beohringer Mannheim和华美公司.1.2 方 法 ①植物材料的培养:将黑子南瓜及西瓜种子于25℃下避光萌芽,待子叶张开后于光下培养半天,取正在转绿的子叶或用液氮冷冻后置-70℃保存.②RNA的提取:取011g植物材料于液氮中研磨成粉末状,用Tripure TM分离试剂盒提取总RNA,-20℃保存.③cDNA第一链的合成:按G BCOBRL公司合成试剂盒的操作说明进行.以总RNA为模板,Oigo(d T)为引物在Mulv逆转录酶的作用下合成cDNA第一链,于-20℃保存.④引物合成:黑子南瓜与南瓜同属不同种,估计应有较高的同源性;依据南瓜GPA T基因cDNA 序列从该基因两端合成如下引物:PA:5′2A TG2GCG2G A G2CTT2A TC2CA G2G′2 3′,PD:5′2CTA2CCA2A GG2TTG2TG A2CAA2A G A 2G AC23′.比较已发表的南瓜[1],豌豆[2],拟南芥菜[3]等几种植物该基因序列,发现该基因内部存在有保守性区段,依据这些区段合成另一对引物(引物的合成委托Cybensyn公司完成):PB:5′2G A(A G)2CCI2TT(CT)2G A(CT)2TA(CT)2TAA23′,PC:5′2CA T2(A G)TG2(CT)TT2(CT)TT2I(GC)(A T)2(A G)TA2IAC2(A G)CA2IA T23′.其中“I”为次黄苷嘌呤.⑤以合成的cDNA第一链为模板,用引物PA和PD在不同复性温度下进行PCR反应,条件为94℃,40s;复性温度分别为50℃,53℃,55℃,40s;72℃,90s;40循环.⑥将上述最佳扩增产物(或经一定程度的回收纯化后)分别再配以保守区段引物即PA和PC;PB和PD进行半套式PCR,条件为93℃,60s;52℃,30s; 72℃,60s;36循环.⑦用同样的方法及引物扩增西瓜GPA T基因的cDNA片段.2 结 果(1)以黑子南瓜cDNA第一链为模板,用引物①国家自然科学基金和云南省应用基础研究基金、云南省教委基金、云南省农业生物技术重点实验室开放基金资助项目. 1998-04-20收稿PA,PD在不同复性温度下扩增黑子南瓜GPA T 基因cDNA片段,1.0%琼脂糖凝胶电泳检测.复性温度为50℃,53℃时在1.2Kb处有扩增带,但扩增效率及特异性差.53℃时相对好些.复性温度为55℃时几乎看不到特异性扩增带(见图1).(2)以图1中泳道3的扩增产物为模板,用引物PA和PC;PB和PD分别进行黑子南瓜GPA T 基因的半套式PCR,1.2%琼脂糖凝胶电泳检测分别在0.7和0.8Kb处有特异性扩增带,与预期结果相符(见图2).(3)用同样的方法及引物,扩增西瓜GPA T 基因;用PA,PD直接扩增在1.2Kb处均看不到预期的扩增带,以PA,PD扩增产物为模板,PA, PC和PB,PD分别进行半套式二次PCR,经1.2%琼脂凝胶电泳检测在预期大小附近也看到了扩增带,但非特异性扩增较多(见图3). 图1 不同复性温度下黑子南瓜基因扩增结果1.复性温度为50℃时的扩增结果;2.λDNAHindⅢ/ECORI标准分子量;3.复性温度为53℃时的扩增结果;4.复性温度为55℃时的扩增结果Fig.1 Amplification of figleaf gourd GPA T gene using PCR in different renaturation temperatures1.PCR result in renaturation temperature is50℃;2.λDNA Hind/ⅢECORI Marker;3.PCR result in53℃of renaturation tempre2ture;4.PCR result in55℃of renaturation tempreture图2 用引物PA与PC,PB与PD分别半套式扩增黑子南瓜GPA T基因片段结果1.PA,PC扩增结果;2.λDNA HindⅢ/ECORI标准分子量;3.PB,PD扩增结果Fig.2 Using PA,PD PCR result as plate,Half nested PCR amplification of figleaf gourd GPA T gene fragments using PA,PC and PB,PD as primer Respectively 1.PA and PC amplification result;1.λDNA HindⅢ/ECORI Marker;3.PB and PD amplification result图3 半套式二次PCR扩增西瓜GPA T基因结果1.PA,PC二次扩增结果;2.λDNA HindⅢ/ECORI标准分子量;3.PB,PD二次扩增结果Fig.3 Half nested PCR amplification result of watermelon GPA T gene using Primer PA,PC and PB,PD respectively1.PA and PC amplification result;2.λDNA HindⅢ/ECORI Marker;3.PB and PD amplification result3 讨 论黑子南瓜与南瓜同属而不同种,亲缘关系较近.用南瓜引物PA,PD扩增黑子南瓜GPA T基因时在较低的复性温度下有预期的扩增带,但要进行纯化和克隆比较困难,当复性温度为55℃时就几乎看不到任何扩增带了.但在此基础上经半套式二次PCR后预期大小的两段GPA T基因就分别被特异873云南大学学报(自然科学版) 第20卷性地扩增出来了,且具有较高的扩增效率.分别纯化这俩cDNA 片段并进行克隆就简单多了.经序列分析表明确属该基因,与南瓜GPA T 基因的核苷酸及递推的氨基酸序列分别具有98%和96.5%的同源性(资料未给出).西瓜与南瓜同一科不同属,亲缘关系相对较远;用南瓜引物扩增西瓜GPA T 全基因在多种条件下均看不到预期的扩增带,但经半套式二次PCR 后,在预期分子量附近也看见有扩增带,显示了该方法的灵敏性.但非特异性扩增较多,也说明该方法适用的限度,须在已知基因与目的基因片段间有很高同源性的情况下方能发挥良好作用(特别是与引物系列间的同源性).但比常规PCR 要求的要低得多.半套式二次PCR 能提高扩增效率和特异性,是由于其对目的基因片段进行了两次筛选.第一次扩增时,由于引物与目的基因的不完全吻合,在较低的复性温度下将与引物有同源性的许多片段都进行了扩增,其中也包含了目的基因片段,第二次半套式PCR 时,其中一个引物来自该基因的保守区段,对目的基因有特异性;另一引物由于第一次扩增的结果与目的片段100%吻合,这样目的基因片段便得以筛选并扩增出来.但由于PCR 反应的复杂性,各种反应条件需作适当摸索方能达到最佳效果.参 考 文 献1 Ishizaki O ,Nishida I ,Agta K ,et al.Cloning and nucleotidesquence of cDNA for the plastid glycerol 232shosphate acyl 2transferase from squash.FEB ,1988,238(2):4242 Weber S ,Wolter F P ,Back F ,et al.Purification and cDNASequencing of an oleot 2selective acyl 2ACP :Sn 2G iycerol 232Phosplate acyltransferase from pea chloroplasts.Plant Mol Biol ,1991,17:10673 Nishida I ,Tasaka Y ,Shiraishi H ,et al.The gene and RNA for the Precursor to the Plastid 2located glycerol 232Phos 2phate acyltransferase of Arabidopsis thaliana.Plant Mol Bi 2ol ,1993,21:267Utilization of Half Nested PCR in Plant G ene CloningYang Mingzhi 1) Cheng Shanna 1) Yan Bo 2) Huang Xinqi 2) Liu Jimei 1)(1)Department of Biology ,Yunnan University ,650091,Kunming ,PRC ;2)Yunnan Provincial Laboratory of Agricultural Biotechnology ,650223,Kunming ,PRC )Abstract The normal PCR playing a very important role in cloning of a sequence known gene.But highhomologous (almost 100%)between primers and target gene sequence must be required.Otherwise ,low effi 2ciency and specifity of amplification may be.If homologeous regions exist among different plants in this gene ,then prepare another pair of primers from these regions ,using half nested PCR ,the amplification efficiency and specifity will be greatly improved.Here we indicate the applification of half nested PCR technique in plant gene cloning by isolation and cloning of figleaf gourd (cucurbita f icif olia )and watermelon (Cit rull us lana 2t us )glycerol 232phosphate acyltransferase (GPA T )gene using a pair of primers from squash and another pair of primers from the homologeous region of this gene as example.K ey w ords half nested PCR ,gene cloning ,utilization973第5期 杨明挚等:半套式PCR 技术在植物基因克隆中的应用。