洋葱多糖纤维素酶法提取及其抗氧化性研究
植物源功能活性多糖的提取及其研究进展
2022年7月 热带农业科学第42卷第7期Jul. 2022 CHINESE JOURNAL OF TROPICAL AGRICULTURE Vol.42, No.7收稿日期 2022-04-06；修回日期 2022-04-20基金项目 科技部对发展中国家科技援助专项（No.KY202002005）；国家木薯产业技术体系（No.CARS-11-HNZZW ）。
第一作者 谭婉碧（1997—），女，硕士研究生，研究方向为食品加工与安全，Email ：*******************。
通讯作者 张振文（1975—），男，博士，研究员，研究方向为农产品贮藏与加工，E-mail ：***************。
植物源功能活性多糖的提取及其研究进展谭婉碧1,2 王琴飞1 余厚美1 何毅2 张振文1（1. 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/国家薯类加工技术研发分中心 海南海口 571101；2. 武汉轻工大学 湖北武汉 430000）摘 要 植物源多糖广泛存在于植物的根、茎、叶、花、果实等器官中，不同植物源多糖的单糖组成、比例和结构存在差异。
植物源多糖的主要生理功能包括抗氧化、降血糖、降血脂、提高免疫力等。
文章总结归纳了热水浸提法、酸碱提取法、酶提法、超声波提取法4种主流多糖提取方法的优缺点，概述目前研究较多的9类植物多糖研究进展，并对其组成和功能进行论述；总结分析多糖提取存在的问题，展望其发展趋势，旨在为今后植物源多糖的研究提供参考。
关键词 植物源多糖；提取工艺；生物活性；多糖组成中图分类号 TS201.2 文献标识码 A DOI: 10.12008/j.issn.1009-2196.2022.07.015Research Progress, Extraction and Functional Activity of PlantPolysaccharidesTAN Wanbi 1,2 WANG Qinfei 1 YU Houmei 1 HE Yi 2 ZHANG Zhenwen 1(1. Tropical Crops Genetic Resources of Institute, CATAS/National Potato Processing Technology Research and Development Sub Center, Haikou, Hainan 571101, China; 2. Wuhan Polytechnic University, Wuhan, Hubei 430000, China) Abstract Plant polysaccharides are widely found in various organs, such as roots, stems, leaves, flowers, and fruits, and there are differences between the monosaccharide composition, proportions, and structures of different plant polysaccharides. Most active polysaccharides showed the effects on antioxidant, hypoglycemic, hypolipidemic, improving immunity and so on. In this paper, the advantages and disadvantages of four mainstream extraction methods included hot water extraction, acid-base extraction, enzyme extraction and ultrasonic extraction were summarized, the research progress of nine kinds of plant polysaccharides, their composition, functions and existing problems were analyzed. The market prospects of develop-ment and application were prospected. The purpose is to provide reference for the research of plant derived polysaccharides in the future.Keywords plant polysaccharide; extraction technology; bioactive functions; polysaccharide composition自1902年，德国科学家Fischer 首次开展多糖研究以来，至今已有一百多年的历史；在1968年，日本学者千原昊郎首次验证活性多糖具有抗肿瘤功能[1]，多糖的生理活性开始得到普遍关注，并在近20年来成为研究热点，研究的内容包括活性多糖的分子量、结构和生物活性等[2-4]。
沙葱及其提取物的抗氧化、抗炎和免疫调节作用
沙葱（Allium mongolicum Regel），学名蒙古韭，蒙古语中被称为“胡穆利”，广泛分布于我国新疆北部、甘肃、宁夏、陕西、内蒙古中西部荒漠草原和沙地[1]，其营养价值高，风味独特，富含蛋白质、脂肪、矿物质和维生素等营养物质，并含有多糖、黄酮类化合物和精油等多种活性成分[2]。
研究发现，采用不同提取方法可获得沙葱中不同的活性成分，水提法获得的主要活性成分为多糖，醇提法主要获得黄酮类化合物，蒸馏法主要获得精油，但不同方法获得的沙葱提取物均具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抗炎和免疫调节[3-7]等生物功沙葱及其提取物的抗氧化、抗炎和免疫调节作用■敖长金（内蒙古自治区高校动物营养与饲料科学重点实验室，内蒙古农业大学动物科学学院，内蒙古呼和浩特010018）摘要：沙葱是生长在沙漠、荒地等干旱地区的天然优质牧草，主要分布在我国的内蒙古中西部、西北部分省（区）以及蒙古国的西南部。
沙葱含有多糖、黄酮类化合物和精油等多种生物活性成分，具有杀菌、抗氧化、抗炎和免疫调节等诸多生物学功能。
文章综述了沙葱提取物对动物机体抗氧化、抗炎和免疫调节的作用及其相关机理，以期为沙葱提取物的进一步开发和应用提供理论基础和思路。
关键词：沙葱；提取物；活性成分；抗氧化；抗炎；免疫调节doi:10.13302/ki.fi.2021.11.001中图分类号：S816.7文献标识码：A文章编号：1001-991X（2021）11-0001-06 Effects of Allium mongolicum Regel and Its Extracts on Anti-Oxidant,Anti-Inflammation andImmunomodulation in AnimalsAO Changjin(Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed Science of Colleges and Universities of Inner Mongolia,College of Animal Science,Inner Mongolia Agricultural University,Inner Mongolia Hohhot010018,China) Abstract：Allium mongolicum Regel is a natural high-quality forage which growing in arid areas,such as deserts and wastelands.It is mainly distributed in the central and western of Inner Mongolia,Ningxia, Shanxi,Gansu,and the southwest of Mongolia.Allium mongolicum Regel contain many bioactive ingredi⁃ents,such as polysaccharides,flavonoids and essential oils,which have bioactive functions,such as anti-microbial,anti-oxidant,anti-inflammation and immunomodulatory.In this paper,the anti-oxidant,anti-inflammation and immunomodulatory effect and mechanisms of extracts from Allium mongolicum Regel on animals were reviewed,which provided theoretical basis and ideas for the development of plant extracts.Key words：Allium mongolicum Regel;extract;active component;anti-oxidant;anti-inflammation;immu⁃nomodulation作者简介：敖长金，教授，博士生导师，研究方向为动物营养与畜产品品质、动物营养与免疫。
植物多糖提取、分离纯化及鉴定方法的研究进展
植物多糖提取、分离纯化及鉴定方法的研究进展陈红1杨许花1查勇2宋礼3高丹丹1*（1西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州730124；2日照市产品质量监督检验所，山东日照276800；3甘南牦牛乳研究院，甘肃合作747000）摘要：植物多糖又称植物多聚糖，是广泛存在于生物体中的一种物质，具有抗肿瘤、提高免疫、抗病毒等生物活性，现已广泛运用于食品、保健品和医药等行业。
多糖的生物活性与其组成、结构有关，植物多糖分离纯化和结构鉴定是多糖生物活性研究和应用前提。
该文主要综述了近年来植物多糖的提取、分离纯化及鉴定的方法，以期为植物多糖的研究提供参考。
关键词：植物多糖；提取；分离纯化；结构中图分类号TS255.1文献标识码A文章编号1007-7731（2021）22-0032-04 Research Progress in Extraction,Purification and Identification of Plant PolysaccharidesCHEN Hong1et al.（1College of Life Science and Engineering,Northwest Minzu University,Lanzhou730124,China）Abstract：Plant polysaccharide,also known as plant polysaccharide,is a kind of substance widely existing in biolog⁃ical organism，it have a variety of biological activities,anti-tumor,immune,antiviral,and other functions,are widely used in food,health products and pharmaceutical industries.The bioactivity of polysaccharides is related to the com⁃position and structure of polysaccharides.Therefore,the isolation,purification and structure identification of plant polysaccharides are the premise of their bioactivity research and application.This paper reviews the methods of ex⁃traction,purification and identification of plant polysaccharides in recent years,in order to provide theoretical basis for the study of plant polysaccharides.Key words：Plant polysaccharidde;Extraction;Separation and purification;Construction植物多糖又称植物多聚糖，是广泛存在于生物体中的一种物质，它是一类由醛糖或酮糖经糖苷键连接而成的天然高分子聚合物，是生物体内重要的大分子物质，是维持正常生命活动的基本物质之一。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述多糖是一类广泛存在于动植物组织、细胞膜和微生物中的生物大分子，包括淀粉、纤维素、壳多糖、低聚糖等。
多糖在食品工业、医药工业、生物学研究等领域中有着广泛的应用。
因此，准确测定多糖含量是非常重要的。
目前，多糖含量测定的方法较多，本文将就其中常用的几种方法进行综述。
一、显色法显色法是测定多糖含量的一种简单、快速、经济的方法，可用于多种类型的多糖测定，包括淀粉、纤维素和壳多糖。
目前较为常用的显色法有三种：碘溶液显色法、酚硫酸显色法和亚硫酸还原显色法。
1.碘溶液显色法碘溶液显色法是测定淀粉和其他含碘能力的多糖的一种显色方法。
将待测物溶解于适当的溶液后加入碘溶液，多糖与碘发生空间结合，形成蓝黑色的复合物，比较准确地测定多糖含量。
测定过程：将待测样品溶解于适量的溶液中，加入适量的碘液，快速均匀搅拌，停留一段时间后读取吸光度。
测定时要注意，碘液应无色，且溶液的pH应在中性范围内，若PH超过范围会影响显色结果。
2.酚硫酸显色法酚硫酸显色法是测定纤维素含量的一种经典方法。
此法中，棕红色的多糖酚硫酸复合物会与多糖发生结合，从而产生蓝色的复合物。
本方法操作简单，准确性高，但对硫酸和酚的用量要求较高。
测定过程：取一定量的待测样品加入酚硫酸溶液，并适当加热。
混合搅拌直至均匀，并冷却。
最后度光密度，多糖含量与光密度成正比。
亚硫酸还原显色法在测定多糖含量时具有灵敏度和准确性。
此法中，亚硫酸会还原多糖羟基上的羟基，从而产生醛基，醛基与邻近的氨基酸或蛋白质结合，形成紫色复合物。
测定过程：将待测样品适当溶于适量的溶液中，加入亚硫酸溶液，并充分混合，之后再加入苯胺溶液混合反应，最后测定吸光度，获得样品中多糖的含量。
二、光化学检测法光化学检测法是一种新的多糖含量测定方法，在光学和化学技术的基础上，通过样品与化学反应后的荧光强度进行多糖含量测定。
光化学检测法可用于测定淀粉、葡聚糖、甘露聚糖等糖类物质的含量。
测定过程：将待测样品加入适当的试剂中进行混合均匀，之后将其迅速放入反应器中，启动荧光检测仪测定荧光强度。
13-2019年安徽省大学生生命科学竞赛获奖名单
学校名称 团队编码 指导教师姓名
团队成员
项目名称
35 安徽工程大学 30692
孔芳
周小天,邵佳雯,姚婷,刘静
ARTP诱变选育高效石油降解菌及固定化研究
奖项 是否推荐国赛 二等奖
36 淮北师范大学 30707 薛涛,朱艳芳 刘晓,马晨晨,高荣荣,韩磊,陈颖
高温胁迫诱导半夏基因组甲基化的变异分析
二等奖
37
2019年安徽省大学生生命科学竞赛获奖名单
序号
学校名称 团队编码 指导教师姓名
团队成员
项目名称
1 淮南师范学院 30227
施翠娥
宋文龙,高健,郭琛,许婷婷,沈倩
人工蝉花培养的关键技术研究
奖项 是否推荐国赛
一等奖
推荐
2
宿州学院
30886 曹稳根,王晴 张颖,史晔瑶,荣柳,郑伊健,刘慧慧
王枣子总黄酮的超声提取及生物活性研究
一等奖
推荐 推荐 推荐 推荐 推荐
8
宿州学院
33149 王文婷,吴萧 史文静,鲁洋,高烨,张锦,肖慧敏
9 安徽中医药大学 33357
何宁
司巧云,门奥旭,孟冬冬,王凯旋,唐世 华
10 安徽工程大学 34343
孟娜
黄嘉宏,温正坤,贾 瑞,徐书春,黄茜
青麦仁中功能性成分提取及其抗氧化活性的研究 眼用尼莫地平的脑内递药特性研究
乳酸在肺癌细胞耐药性中作用机制的研究
二等奖
30 淮北师范大学 30282
吴晓敏
李慧,郝杨,丁润,罗洁
基于PDB卷曲库研究模式蛋白结构侧链对其折叠驱动力的影响 二等奖
31 安徽农业大学 30371 樊霆,陈海燕 吕京杰,彭正,魏惠婕,陈明雨,倪烜
洋葱的实验报告
洋葱的实验报告引言洋葱是一种常见的蔬菜，在厨房中被广泛使用。
除了被用作调味品和食材外，洋葱还具有许多健康益处。
本实验旨在探究洋葱的化学成分、营养价值以及与人体健康相关的实验结果。
实验目的1.分析洋葱中的化学成分2.探究洋葱的营养价值3.了解洋葱与人体健康的关系实验步骤1. 洋葱的化学成分分析洋葱含有挥发性油脂、糖类、有机酸、无机盐和挥发性硫化合物等成分。
为了分析洋葱的化学成分，我们采用了以下步骤： - 提取洋葱的挥发性油脂：将洋葱切碎并加入无水醋酸钠溶液中，通过蒸馏的方法提取洋葱中的挥发性油脂。
- 检测洋葱中的糖类和有机酸：使用层析色谱法检测洋葱中的糖类和有机酸的含量。
- 分析洋葱中的无机盐：通过火焰原子吸收光谱法分析洋葱中的无机盐含量。
- 检测洋葱中的挥发性硫化合物：采用气相色谱法检测洋葱中的挥发性硫化合物的种类和含量。
2. 洋葱的营养价值分析洋葱富含维生素C、维生素B6、叶酸、纤维素和矿物质等营养物质。
为了分析洋葱的营养价值，我们采用了以下步骤： - 分析洋葱中维生素C的含量：使用分光光度计测定洋葱中维生素C的含量。
- 检测洋葱中的维生素B6和叶酸：采用高效液相色谱法检测洋葱中维生素B6和叶酸的含量。
- 分析洋葱中的纤维素含量：使用纤维素酶法测定洋葱中的纤维素含量。
- 检测洋葱中的矿物质：采用原子吸收光谱法检测洋葱中的矿物质含量。
3. 洋葱对人体健康的影响洋葱具有抗氧化、抗菌、降血压和降血糖等功效，对人体健康有积极影响。
本实验中，我们采用以下方法来研究洋葱对人体健康的影响： - 测定洋葱提取液的抗氧化活性：使用自由基清除法或DPPH方法测定洋葱提取液的抗氧化活性。
- 测定洋葱提取液的抗菌能力：通过对不同类型的细菌进行抗菌实验，评估洋葱提取液的抗菌能力。
- 检测洋葱对血压的影响：采用血压测定仪测定洋葱提取液对血压的影响。
- 检测洋葱对血糖的影响：使用血糖仪测定洋葱提取液对血糖的影响。
生吃洋葱的功效与作用
生吃洋葱的功效与作用生吃洋葱的功效与作用洋葱是一种常见的蔬菜，被广泛用于烹饪中。
它不仅味道鲜美，而且具有许多健康功效。
尤其是生吃洋葱，既能保留洋葱的原汁原味，又能更好地发挥其营养价值。
本文将重点介绍生吃洋葱的功效与作用。
一、抗菌消炎洋葱中含有丰富的硫化物，这些物质具有抗菌、杀菌的作用，能够有效预防和治疗感染性疾病。
其中最重要的活性物质是辣素，它能够刺激呼吸道黏膜，引起流泪和流鼻涕，从而起到排毒和抗菌的效果。
此外，洋葱中还含有大量的维生素C和抗氧化物质，可以增强人体的免疫力，对抗病毒和细菌。
二、促进消化洋葱中含有丰富的纤维素，可以促进肠道蠕动，增加排便频率，预防便秘。
同时，洋葱还含有天然酶类物质，可以帮助分解食物，促进消化吸收。
生吃洋葱可以更好地发挥其促进消化的作用，因为生洋葱中的活性酶没有被破坏，能够更好地发挥酶的作用，增加食物的消化速度。
三、降血糖洋葱中的含硫化合物和多糖体能够促进胰岛素分泌，降低血糖水平。
此外，洋葱中还含有一种叫做磺脲的活性物质，可以降低血糖，改善胰岛细胞功能，对于预防和治疗糖尿病具有重要的意义。
生吃洋葱可以更好地发挥降血糖的作用，因为加热会破坏洋葱中的一些活性物质，降低其功效。
四、抗氧化洋葱中含有丰富的抗氧化物质，如大蒜素、芥子油等，可以中和自由基，减轻氧化应激对身体的损害。
此外，洋葱还含有一种叫做化学酸的活性物质，具有明显的抗氧化作用，可以清除体内的有害物质，保护细胞免受损害。
生吃洋葱可以更好地发挥抗氧化的作用，因为加热会破坏洋葱中的一些抗氧化物质。
五、抗癌洋葱中所含的硫化物具有抗癌作用，可以阻止癌细胞的生长和扩散。
此外，洋葱中的磺脲和生物类黄酮等物质也具有抗癌作用，可以抑制肿瘤的生长。
生吃洋葱可以更好地发挥抗癌的作用，因为加热会破坏洋葱中的一些抗癌物质。
六、护肤美容洋葱中的维生素C和抗氧化物质可以促进胶原蛋白的合成，减少皱纹和皮肤松弛。
生吃洋葱可以更好地发挥护肤美容的作用，因为加热会破坏洋葱中的一些维生素C和抗氧化物质。
洋葱提取物抗氧化作用的研究
是 一 种 集 营养 、医疗 和保 健 于 一身 的特 色 蔬 菜 ， 其 含 有 的具 有抗 氧 化 作用 的有 效成 分 ， 望 被开 有 发 成一 种 可用 于饲 料和食 品中 的绿 色抗 氧化 剂 。
饲 料 中的 油 脂 及 富 油 食 品极 易 发 生 氧 化 反 应 和水 解 反应 ， 终 导 致饲 料 和食 品的酸 败 。酸 最 败 的饲 料 和食 品不 仅风 味 和 品质 遭 到破 坏 、 养 营
市 嘉 定 粮 油 检测 仪 器 厂 ） 分 样 筛 （０目 ， 江省 ， ４ 浙 上 虞 市 五 四仪 器筛 具 厂 ） ，循 环 水 式 多 用 真 空泵 （Ｈ — Ｉ Ｓ Ｂ Ｈ Ａ型 ， 南 省 太 康 县 教 材 仪器 厂 ） 格 兰 河 ，
（ 波辅 助法 提取 ）９ ％乙醇 、氢 氧 化钾 、酚 酞 、 微 ，５ 水 、 化钾 、 碘 可溶 性 淀 粉 、 硫代 硫 酸 钠 、 氯 甲烷 、 三 冰 乙酸 、 乙醚 （ 为分 析 纯 ） 饱 和 碘化 钾 溶 液 ， 均 ， 酚
抗 氧 化 剂 按 其 来 源 可 分 为合 成 抗 氧 化 剂 和
洋 葱 精油 的抗 氧 化效 果通 过 其对 猪 油 、 生 花
维普资讯
以 肉质鳞 片和鳞 牙 构 成鳞 茎 的 ２年 生 草本 植 物 ，
酞 溶液 ， 代硫 酸钠 标 准溶 液［（ ａ ００ ｍｏ 硫 ｃＮ ２ Ｏ ） ．１ ｌ Ｓ ＝ ／
Ｌ ， 粉指 示剂 的配制按 照 相应标 准 进行 。 ］淀
１１ 试 验 仪 器 ．． ３
数 显 恒温 水浴 锅 （ Ｈ— Ｈ Ｓ型 ， 苏省 金 坛 市 医 江 疗 仪 器 厂 ） 电热恒 温 干 燥 箱 （ Ｈ ９ ４ Ａ 型 ， ， Ｄ Ｇ一 ２ ６ 上
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西北植物学报,2010,30(11):2345-2350Acta Bot.Boreal. Occident.Sin.文章编号:1000 4025(2010)11 2345 06洋葱多糖纤维素酶法提取及其抗氧化性研究李 晋1,徐怀德1*,李钰金2,陈 佳1(1西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西杨陵712100;2泰祥集团山东海洋食品营养研究院,山东荣成264309)摘 要:以洋葱为原料,采用中心组合设计对洋葱多糖的纤维素酶法提取技术进行优化,并研究了其抗氧化性。
结果表明:提取温度53、时间100m in、pH5.0、纤维素酶用量0.3%、料水比1!40(W/V)时,洋葱多糖提取率最高,可达9.39%,比传统热水浸提法高4.06%。
酶法提取的洋葱多糖对DPP H自由基和羟自由基的清除作用明显,具有较好的还原力,表明洋葱多糖具有较好的抗氧化活性,是值得开发的生物活性产物。
关键词:洋葱多糖;纤维素酶;提取;抗氧化性中图分类号:Q946.3文献标识码:ACellulose assisted Extraction and AntioxidantActivity of Onion PolysaccharidesLI Jin1,XU H uai de1*,LI Yu jin2,CH EN Jia1(1College of Food Science and Engin eering,Northw est A&F U nivers ity,Yangling712100,Ch ina;2Ocean Food Nu trition Res earch Institute of Sh andong T aixiang Grou p,Rongchen g,S handong264309,Ch ina)Abstract:The onion w as used as raw material,the optimum conditions of po lysaccharides ex tr actio n from onio n w ith cellulase w as inv estig ated by response surface methodolog y and identified temperature53,re actio n tim e100min,pH5.0,enzy me0.3%,solid liquid ratio1!40(W/V).U nder these co nditions the po l y sacchar ides extractio n rate w as9.39%,w hich w as4.06%hig her than that extracting w ith w ater.Antiox i dant activ ity o f o nion polysaccharides w as also studied.T he o nion poly saccharides has str ong scaveng ing effects on1,1 diphenyl 2 picr ylhydr azyl radicals and hy dro xy l radicals.M oreover,onion poly saccharides have certain reductive capability.T he onio n polysaccharides sho w ed high anti o xidantive activity in vitr o, w hich is a kind of valuable pro duct o f biolo gical activity.Key words:onio n po lysaccharides;cellulase;ex traction;antioxidant activity洋葱(A llium cep a L.)为百合科葱属植物,被誉为∀菜中皇后#,它是中国特色的农产品资源和调味品[1]。
中国是全球洋葱产量最大的国家,2009年仅甘肃酒泉洋葱产量就达到100万吨,成为中国最大的优质洋葱出口生产基地。
近年来市场上洋葱制品有脱水洋葱、洋葱油、洋葱酱等[2,3]。
洋葱富含营养物质[4],含有丰富的硫化合物、多糖、黄酮、甾体皂苷和前列腺素类等生理活性物质。
多糖由于具有降血脂、降血糖、抗衰老、抗肿瘤等诸多功能,成为近年来的研究热点[5]。
马钊等[6]研究了洋葱多糖的热水浸提技术,张强等[7]对洋葱多糖的热水浸提技术和抗氧化活性进行了研究。
酶法提取具有提取效率高、温和,能更好保留多糖的活性等优点[8]。
王文平等[9]用纤维素酶从野木瓜中提取水溶性多糖,邹东恢等[10]用复合酶从香菇中提取多糖,但未见酶法辅助提取洋葱多糖的研究报道。
本收稿日期:2010 06 03;修改稿收到日期:2010 10 24作者简介:李 晋(1985-),女,在读硕士研究生,主要从事天然产物提取分离。
E mail:huanqiu1985@*通讯作者:徐怀德,副教授,硕士生导师,主要从事软饮料、果品蔬菜贮藏与加工和天然产物提取研究。
E mail:xu huaide@s oh 试验采用纤维素酶法辅助热水提取洋葱多糖,并研究了洋葱多糖的抗氧化性能,为洋葱产品的进一步开发提供理论依据。
1 材料和方法1.1 材 料实验材料黄皮洋葱(A llium cep a L.)由山东海洋食品营养研究所提供。
1.2 试剂和仪器纤维素酶(西安沃尔森生物公司提供,60000 U/g)、重蒸酚、浓硫酸、无水乙醇、柠檬酸、磷酸氢二钠、丙酮、无水乙醚、葡萄糖、水杨酸、邻苯三酚、铁氰化钾、三氯乙酸、牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G 250和DPPH(1,1 二苯基 2 三硝基苯肼)等均为分析纯。
ALC 210.3型电子天平购自赛多利斯艾科勒公司;H H S6双列六孔型电热水浴锅购自北京科伟有限公司;KDC 40低速离心机购自科大创新股份有限公司中佳分公司;SH B III循环水式多用真空泵购自郑州长城科贸有限公司;UV 1700型紫外 可见分光光度计;DH G 9070A型热恒温鼓风干燥箱购自上海精宏实验设备有限公司;PH S 3C精密pH 计购自上海精密科学仪器有限公司;R 200型旋转蒸发仪;FWl00型高速万能粉碎机和KQ B30型气流烘干器购自北京科伟有限公司。
1.3 方 法1.3.1 洋葱多糖的制备 新鲜洋葱去皮、切碎烘干,粉碎过40目筛。
取洋葱粉50.0g,用200mL 80%乙醇回流脱脂2次,每次2.5h。
抽滤,收集滤渣烘干备用。
准确称取脱脂洋葱粉2.0g置于三角瓶中,加入40倍体积的磷酸盐缓冲溶液和纤维素酶搅拌均匀,55恒温酶解2h,然后灭酶10m in,将酶解液冷却离心,过滤得洋葱多糖提取液,提取液浓缩后加入三倍体积95%乙醇溶液,4下静置过夜,离心取沉淀分别用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤,沉淀于40干燥,得洋葱多糖粗品。
1.3.2 标准方程的建立 苯酚 硫酸法[11 14]:准确称取10mg干燥至恒重的葡萄糖于250mL容量瓶中,加双蒸水至刻度。
分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8m L,各以双蒸水补至2.0m L,然后加入6%苯酚1m L及浓硫酸5mL,冷却至室温后于490nm波长处测吸光度,以2.0mL水按同样步骤操作作为空白对照。
以葡萄糖浓度(m g/L)为横坐标,吸光度值为纵坐标制标准曲线,得到回归方程:y=0.0158x-0.0033,r=0.9995。
1.3.3 多糖提取率的计算 将洋葱多糖粗品用双蒸水溶解,定容至一定体积,用苯酚 硫酸法测定490nm处的吸光度值,参照上述标准方程推算出葡萄糖的浓度,按下列公式计算洋葱多糖提取率(%)。
洋葱多糖提取率Y=C∃VW∃1000%100式中,C.提取液中葡萄糖的浓度(m g/L);V.稀释总体积(L);W.洋葱干粉的质量(g)。
1.3.4 洋葱多糖提取工艺的中心组合设计[15 17] 根据预试验以及单因素试验结果,选取提取温度、提取时间、pH、纤维素酶加酶量4个因素,使用Design Expert7.0.0进行二次回归中心组合试验设计,对得到的试验数据采用回归分析技术、拟合二次多项式试验模型,以期得到最佳的综合因素水平,对洋葱多糖的提取条件进行优化。
因素水平及编码值见表1。
1.3.5 洋葱多糖抗氧化活性的测定 (1)多糖样品制备 将1.3.1部分得到的多糖粗品用双蒸水溶解,定容至一定体积,苯酚 硫酸法测定,计算出多糖含量,再根据需要配制成不同浓度的多糖溶液,备用。
(2)清除DPPH自由基能力测定[18,19] 将不同表1 中心组合试验因素水平编码表T able1 Coded levels o f var iables of the centr al com posite ex perimental desig n(CCD)水平Levels因素Factors温度X1Temperature/时间X2Tim e/hpHX3加酶量X4E nzyme/%+265 3.0 6.00.5+160 2.5 5.50.4055 2.0 5.00.3-150 1.5 4.50.2-245 1.0 4.00.1j50.50.50.1注: j=(Z2j-Z1j)/2;Z j表示因素的零水平,Z1j和Z2j分别表示因素Z j的下水平和上水平。
Note: j=(Z2j-Z1j)/2;Z j sh ows the z ero level of factors,Z1j and Z2j sh ow the low and high level of Z j,r espectively.2346西 北 植 物 学 报 30卷浓度的多糖溶液各取2m L于试管中,再加入2mL 浓度为0.04mg/mL的DPPH溶液,混合均匀,置暗(A i)处反应20m in,3500r/min离心分离10 min,取上清液在波长517nm处测其吸光度为A i;另各取2mL上述不同浓度的多糖溶液于试管中,分别加入无水乙醇2mL,反应20m in,3500r/m in 离心分离10min,取上清液在波长517nm处测其吸光度为A j;以2m L0.04mg/mL DPPH和2mL 无水乙醇反应做为参比,其吸光度记为A0。
E(DPPH)(%)=[1-(A i-A j)/A0]%100(3)清除羟基自由基(∃OH)能力测定[19 23] 在试管中依次加入6mmo l/L FeSO4溶液2m L、不同浓度洋葱多糖溶液2mL、6mmo l/L H2O2溶液2 mL摇匀,静置10m in,再加入6m mol/L水杨酸溶液2mL,摇匀,静置30m in后于510nm处测得不同浓度洋葱多糖的吸光度A i,用蒸馏水代替水杨酸时测得吸光度A j,空白对照组用蒸馏水代替多糖提取液,测得吸光度为A0。