胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定
水果蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定
水果、蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定1 主题内容与适用范围本标准规定了水果、蔬菜汁中类胡萝卜素的分离提取方法及提取物中类胡萝卜素总量的测定方法。
本标准适用于水果、蔬菜汁中类胡萝卜素总量的测定。
2 原理果蔬滤液通过溶剂萃取,分离提取类胡萝卜素,在特定波长下用分光光度法测其吸光度。
该吸光度与类胡萝卜素含量成线性关系,通过换算即可得知类胡萝卜素之含量。
3 试剂和溶液本标准所用试剂除特殊规定外,均使用符合国家标准的分析纯试剂,均采用蒸馏水。
3.1 石英砂(Q/HG 22--467)；3.2 萃取剂,2/1(v/v)氯仿(GB 682)-甲醇(GB 683)混合。
4 仪器设备4.1 抽滤器；4.2 无灰分滤纸；4.3 分液漏斗：250mL；4.4 容量瓶,100mL；4.5 移液管,20mL；4.6 烧杯,50mL；4.7 分光光度计,使用的测量波长为440±10nm。
5 分析步骤注：由于类胡萝卜素本身性状的不稳定性,即见光易氧化分解,建议所有操作应避光进行。
5.1 试样的制备5.1.1 液体样品：混合均匀后取样。
5.1.2 固体样品：捣碎机捣碎后,纱布挤汁。
5.2 用移液管吸取20mL样液置50mL烧杯中。
5.3 过滤：在烧杯(5.2)中加入3g石英砂,摇动后用布氏漏斗过滤(布氏漏斗预先铺有无灰滤纸,纸上铺有2g石英砂),然后再用5mL水冲洗滤渣3次。
5.4 萃取：在250mL的分液漏斗中倒入滤液(5.3),再加入20mL萃取剂(3.2),振摇后静置,收集下部分有机相,再用20mL萃取剂提取两次,将三次萃取所得有机相合并,用萃取剂定容为100mL。
注：对果胶含量大的果蔬,萃取时,将三次合并的有机相重新倒回原分液漏斗,继续用20mL萃取洗涤一次,然后用萃取剂定容至100mL。
5.5 测定：在440±10nm波长下测定提取液的最大吸光度A。
6 结果的计算和表示类胡萝卜素总量用mg/L表示,按下式计算：类胡萝卜素(mg/L)＝A×20式中：A——测定的最大吸光度；20——换算系数。
胡萝卜素的提取
β-胡萝卜素和番茄红素的提取、分离与测定［摘要］β—胡萝卜素是一种抗氧化剂，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素。
番茄红素（Lycopene）是类胡萝卜素的一种，对防治癌症、提高免疫力、延缓衰老有特效，有植物黄金之称，被誉为“21世纪保健品的新宠”。
因此，提取、分离、鉴定这些活性成分成为研究和开发这些天然生物资源的重要环节。
本实验用常规天然有机化合物的提取方法获得β-胡萝卜素和番茄红素样品，再用柱色谱法将其分离，用薄层色谱检测分离效果，最后用分光光度法分别对其鉴定。
［关键词］β-胡萝卜素、番茄红素、提取、分离、测定实验基本原理β-胡萝卜素和番茄红素分子中的碳骨架是由8个异戊二烯单位连接而成的，它们是四萜类化合物。
它们的分子中都有一个较长的π-π共轭体系，能吸收不同波长的可见光，因而，它们都呈现一定的绿色，β-胡萝卜素是黄色物质，番茄红素是红色物质，所以，又把它们叫做多烯色素。
β-胡萝卜素和番茄红素的结构式分别如下:（番茄红素）（β-胡萝卜素）胡萝卜素是最早发现的一种多烯色素。
后来，又发现了许多在结构上与胡萝卜素类似的色素，于是就把这类物质叫做胡萝卜素类化合物，或者叫做类胡萝卜素。
这类化合物大都难溶于水，易溶于弱极性或非极性的有机溶剂，因此又把这类化合物叫做脂溶性色素。
胡萝卜素广泛存在于植物的叶、花、果实中，尤以胡萝卜中含量最高。
胡萝卜素有α、β、γ三种异构体，在生物体中以β-异构体含量最多，生理活性最强。
在动物体中，胡萝卜素在酶的作用下可转化为维生素A，因此，胡萝卜素又被叫做维生素A原。
胡萝卜素在人和高等动物体内就有重要的生理功能，是人和高等动物生存不可缺少的营养物质。
番茄红素是胡萝卜素的开链异构体。
番茄红素在成熟的红色植物果实如番茄、西瓜、胡萝卜、草莓、柑橘等中含量丰富，其中含量最高的是番茄。
由于番茄红素不具有维生素A原活性，因此长期以来不被人们所重视。
但近年来研究表明，番茄红素是一种优越的天然色素和生物抗氧化剂，具有极强的清除自由基的能力，它可以预防前列腺癌、乳腺癌和消化道（结肠、直肠与胃）癌的发生，在预防心血管疾病、动脉硬化等各种与衰老有关的疾病及增强机体免疫力方面具有重要作用。
DB33T 2333-2021 饲料中β-胡萝卜素的测定 高效液相色谱法
CC ICS 65.020.01CCS B 20DB33饲料中β-胡萝卜素的测定高效液相色谱法Determination of β-carotene in feeds — High performance liquid chromatography浙江省市场监督管理局 发布DB33/T 2333—2021前言本标准按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本标准的某些内容可能涉及专利。
本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由浙江省农业农村厅提出。
本标准由浙江省畜牧兽医和饲料标准化技术委员会（ZJQS/TC33）归口。
本标准起草单位：浙江省动物疫病预防控制中心（浙江省兽药饲料监察所）。
本标准主要起草人：施杏芬、吕伟军、阮鑫、张志健、裘丞军、吴望君、商小金。
IIDB33/T 2333—2021饲料中β-胡萝卜素的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了饲料中β-胡萝卜素的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料中β-胡萝卜素的测定。
本标准配合饲料、浓缩饲料、精料补充料的定量限为 1 mg/kg，添加剂预混合饲料定量限为 2 mg/kg。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 20195 动物饲料试样的制备3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理试样中β-胡萝卜素经碱溶液超声皂化，生成全反式β-胡萝卜素，经石油醚萃取，减压浓缩后，用高效液相色谱法测定，外标法定量。
5 试剂或材料5.1除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
5.2水：GB/T 6682-2008，一级。
高效液相色谱定量分析新鲜加工过的水果中的主要类胡萝卜素
高效液相色谱定量分析新鲜加工过的水果中主要类胡萝卜素的含量概念一、类胡萝卜素（carotenoid）不溶于水而溶于有机溶剂。
叶绿体中的类胡萝卜素含有两种色素，即胡萝卜素（carotene）和叶黄素（lutein），前者呈橙黄色，后者呈黄色。
功能为吸收和传递光能，保护叶绿素。
类胡萝卜素是一类重要的天然色素的总称，属于化合物。
普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类和细菌中的黄色、橙红色或红色的色素。
二、番茄红素(lycopene)番茄中的红色素，是胡萝卜素的母体化合物。
番茄红素是成熟番茄的主要色素,是一种不含氧的类胡萝卜素。
番茄红素是植物中所含的一种天然色素。
主要存在于茄科植物西红柿的成熟果实中。
它是目前自然界中被发现的最强抗氧化剂。
番茄红素清除自由基的功效远胜于其他类胡萝卜素和维生素E，它可以有效的防治因衰老，免疫力下降引起的各种疾病。
三、β-胡萝卜素(β-carotene)β-胡萝卜素是类胡萝卜素之一，也是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。
许多天然食物中如绿色蔬菜、甘薯、胡萝卜、菠菜、木瓜、芒果等，皆存有丰富的β—胡萝卜素。
β-胡萝卜素是一种抗氧化剂，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素。
β-胡萝卜素在进入人体后可以转变为维生素A，不会有因过量摄食而造成维生素A累积中毒现象。
另外，在促进动物的生育与成长也具有较好的功效。
四、毛细管柱色谱法(capillary column chromatography)开管柱气相色谱(open tubular gas chromatography)，又称高分辨气相色谱(high resolution gas chromatography)，是气相色谱的重要分支。
用内壁上涂附有固定液的空心的毛细管柱进行组分分离的色谱法。
与填充柱色谱法相比，其分离效率高、分析速度快、样品用量少。
HPLC法定量分析芒果和木瓜中类胡萝卜素的含量摘要：采用高效液相色谱法定量分析芒果、木瓜样品及一些加工产品的主要类胡萝卜素,使用外标法和标准加入校准技术。
新鲜蔬菜中β-胡萝卜素的提取、分离、测定
新鲜蔬菜中β-胡萝卜素的提取、分离和测定
班级：临五一班（2小班）姓名：任依梦学号：5117119051
【实验目的】
●掌握从新鲜胡萝卜中提取、分离β-胡萝卜素的方法
●掌握应用紫外-可见吸收光谱法测定β-胡萝卜素的紫外光谱图
●了解共轭多烯化合物π→π*跃迁吸收波长的计算方法及共轭多烯化合物的紫
外吸收光谱特征
【实验原理】
简介胡萝卜素是维生素A的前体，具有类似维生素A的活性，有α、β、γ异构体，其中以β-胡萝卜素生理活性最强。
β-胡萝卜素的结构如下：
β-胡萝卜素是长链多烯化合物，它的π-π*跃迁吸收带处于可见光区，因此纯β-胡萝卜素是橘红色晶体。
提取胡萝卜素不溶于水，可溶于有机溶剂，故可用有机溶剂来提取。
分离采用柱层析法将提取液中β-胡萝卜素分离出来。
测定经分离提纯的β-胡萝卜素含量可以直接用紫外-可见分光光度法测定。
【实验步骤】
1.β-胡萝卜素的提取
20g新鲜胡萝卜+40mL1：1丙酮-石油醚混合溶剂研磨5min（研钵）萃取（分液漏斗）
2.柱层析
在层析柱中加入少许浸有石油醚的脱脂棉→加入一半层析柱高的石油醚→加入20g中性氧化铝→在氧化铝上面加一圆形滤纸→加入β-胡萝卜素提取液→用9:1（体积比）石油醚-丙酮溶液洗脱，进行层析
3.β-胡萝卜素的紫外-可见吸收光谱的测定
将层析分离得到的橙黄色试样稀释后加到1cm的比色皿中，以石油醚作空白试剂，用分光光度计测定400~600nm范围内的吸收
【实验结果】
β-胡萝卜素的吸收曲线。
食品中β-胡萝卜素的测定 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品中β-胡萝卜素的测定1范围本标准规定了食品中β-胡萝卜素的测定方法。
本标准适用于食品中β-胡萝卜素的测定。
2原理试样经皂化后，使β-胡萝卜素完全变为游离态。
用石油醚萃取后，反相色谱法分离，外标法定量。
3试剂和材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。
3.1试剂3.1.1α-淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。
3.1.2氢氧化钾（KOH）。
3.1.3无水硫酸钠（Na2SO4）。
3.1.4抗坏血酸(C6H8O6)。
3.1.5石油醚：沸程30 ℃～60 ℃。
3.1.6甲醇(CH4O)：色谱纯。
3.1.7乙腈(C2H3N)：色谱纯。
3.1.8三氯甲烷(CHCl3)：色谱纯。
3.1.9正己烷(C6H14)：色谱纯。
3.1.10甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]：色谱纯。
3.1.11乙醇：体积分数为95 %。
3.2试剂配制3.2.1氢氧化钾溶液：称固体氢氧化钾250 g，加入200 mL 水溶解。
临用前配制。
3.3标准品3.3.1β-胡萝卜素标准品，CAS：7235-40-7。
3.3.2α-胡萝卜素标准品，CAS：7488-99-5。
3.4标准溶液的配制3.4.1β-胡萝卜素标准储备液（500 g/mL）：准确称取β-胡萝卜素标准品50 mg（精确到0.1mg），用正己烷定容至100 mL 棕色容量瓶中。
注：β-胡萝卜素标准储备液需要-10 ℃以下避光储存，使用期限不超过3个月。
标准储备液用前需校正，具体操作见附录A。
3.4.2β-胡萝卜素标准中间液（100 μg/mL）：从β-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0 mL 溶液于50 mL 棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度。
3.4.3β-胡萝卜素标准工作液：从β-胡萝卜素标准中间液中分别准确移取0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL 溶液至5 个100 mL 棕色容量瓶。
高效液相色谱法测定(“胡萝卜素”相关文档)共10张
时要对待测样品进行哪些预处理？ • 4、色谱图中β-胡萝卜素吸收峰峰高、峰
面积与样品中β-胡萝卜素浓度和纯度有 何关系？
•
m12：标样样品进称样体质积量中（βg或-胡m萝L卜）素；含量（mg）；
• V1：样品进样质量（μL）；
• V2：样品定容体积（mL）。
实验注意事项
• 1、样品的预处理； • 2、流动相的过滤脱气处理； 2、高效液相色谱的特点？
m1：标样进样体积中β-胡萝卜素含量（mg）； β-胡萝卜素含量测定原理 式中 m：10g(mL)样品中β-胡萝卜素含量（mg）；
-
含量（mg）；
• m1：标样进样体积中β-胡萝卜素含量（ ）； β式-胡中萝m卜：素1含0g量(m测L)定样原品理中β-胡萝卜素含量（mg）；
2β、-胡理萝解卜和素掌含握量高测效定液原相理色谱法的原理和方法；
mg
2V、2：理样解品和定掌容握体高积效（液m相L色）谱。法的原理和方法；
• m2 或mL）； ：样品称样质量（g 式β-胡中萝m卜：素1含0g量(m测L)定样原品理中β-胡萝卜素含量（mg）；
V452微：米样的品滤定膜容过体滤积，（装mL入）进。样瓶中。
• A1：标样峰面积值； 2式、中理解m：和1掌0g握(m高L效)样液品相中色β谱-胡法萝的卜原素理含和量方（法m；g）；
mβ-1胡：萝标卜样素进含样量体测积定中原β理-胡萝卜素含量（mg）；
• A2：样品峰面积； β3、-胡掌萝握卜高素效含液量相测色定谱原仪理的操作。
色谱条件
• 色谱柱：C18柱； • 流动相：甲醇； • 流速：1.5ml/min； • 紫外检测波长：440nm； • 进样量：20微升。 • 样品进样前需要用0.45微米的滤膜过滤，
高效液相色谱法胡萝卜素的测定
C（μg/ml）
h2(峰面积)
曲线方程
A = a×C+ b
a =
b =
r =
样品
V1(取样量ml)
V2（进样量μL）
N(稀释体积ml)
h1(峰面积)
C(由标准曲线读出的胡萝卜素的浓度μg/ml）
X（β-胡萝卜素的含量g/L）
计算公式
X=(N×C×1000)/(V1×1000×1000)
平均值
精密度
标准规定
结论
□（均）符合规定□（均）不符合规定
注：如部分参数未用到，请在相应栏目内划“/”。
检验者：校对者：审核者：
日期：日期：日期：
2.β-胡萝卜素标准使用液：分别吸取β-胡萝卜素标准溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于10ml容量瓶中，各加移动相至刻度，摇匀后，即得β-胡萝卜素标准系列，分别含β-胡萝卜素5、10、20、30、40、50μg/ml。
供试品溶液的制备
吸取10.0ml液体食品试样于250ml分液漏斗中，加入石油醚+丙酮（80+20）20ml提取，然后静置分层，将下层水溶液放入另一分液漏斗中再提取，直至提取液无色为止。合并提取液，于旋转蒸发器上蒸发至干（水浴温度为40℃）。将上述试样提取液残渣，用少量石油醚溶解，然后进行氧化铝层析。氧化铝柱为1.5cm（内径）*4cm（高）。先用洗脱液丙酮+石油醚（5+95）洗氧化铝柱，然后再加入溶解试样提取液的溶液，用丙酮+石油醚（5+95）洗脱β-胡萝卜素，控制流速为20滴/min，收集于10ml容量瓶中，用洗脱液定容至刻度。用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液供液相色谱分析用。
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新疆农业科学2004，41（专刊）：103～105
Xinjiang Agricultural Sciences
胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定
陈洁1，解晓霞2，庞咏梅2，丁海燕2，王先云3
（1.乌鲁木齐神内生物制品有限公司，新疆乌鲁木齐830001；2.新疆冠农天府果蔬食品有限责任公司，新疆库尔勒841000；3.乌鲁木齐市绿金啤酒花有限公司，新疆乌鲁木齐830001）
摘要：在GB12291-90的基础上，利用萃取剂（氯仿:甲醇（v/v）=2:1）对胡萝卜粉中的类胡萝卜素进行提取，并以萃取剂作为空白，确定其提取液的λmax为458nm。
关键词：胡萝卜粉；类胡萝卜素；快速测定
生产加工胡萝卜制品的企业多以胡萝卜浓缩汁、胡萝卜原浆及胡萝卜系列饮料为主，还有利用生产浓缩汁排出的废料—胡萝卜渣经烘干、磨粉而制得的胡萝卜粉制品。
胡萝卜粉中富含了大量的类胡萝卜素、膳食纤维、果胶等物质，具有很高的经济价值。
胡萝卜制品中的类胡萝卜素含量的高低成为评价该产品质量高低的重要指标之一。
在检测该指标的众多方法中，多以层析法、色谱法居多，简易快速的方法很少，尤其是胡萝卜粉这类干制品，目前还没有完整的试验方法。
实践工作中，依据GB/T12291-90的原理并借此基础，总结出一套快速、简易且较准确的方法以适宜生产检验的需要。
1材料与方法
!.!材料
胡萝卜粉（原料胡萝卜经破碎、榨汁后的湿渣再经烘干、磨粉制得，细度为80目过筛率大于60%）。
!."仪器
723分光光度计、AE200电子分析天平、50ml具塞量筒（或具塞比色管）、直径为7.5cm的波纹漏斗、直径为12.5cm的快速滤纸、100ml棕色容量瓶、四孔漏斗架。
2检测方法
类胡萝卜素性状不稳定，见光易氧化分解，故操作时应避光。
".!萃取
准确称取试样约0.2g（精确至0.1mg）于50ml具塞量筒中，以少量水浸润样品，待粉样被充分浸透、膨胀后，加入20ml萃取剂振摇数次，在振摇过程中注意旋盖放气，勿将样液溅出，于暗处放置2min 左右，取出再振摇1～2min，静置1min，待过滤。
将直径15cm的快速滤纸置于波纹漏斗中（滤纸应高出漏斗边沿1～2mm），先用少量萃取剂润湿滤纸，使之与漏斗紧密贴切，再用少量萃取剂清洗漏斗，弃去滤液。
将前述待过滤的萃取液转入漏斗（转移时，尽量将试样移入漏斗底部），随即用装有萃取剂的洗瓶快速洗涤具塞量筒3～4次至筒壁完全干净，并自上而下快速以螺旋状洗涤漏斗，致使试样全部集中于漏斗底部，盖上滤纸，待滤液完全滤干后，再用洗瓶洗涤样品，反复洗涤过滤数次（每次滤液完全滤净后再进行下一次的洗涤和过滤），直至被萃取的试样呈白色为止，全部滤液收集于棕色容量瓶中，以萃取剂定容至刻度，摇匀待比色。
"."波长
以萃取剂作空白，用1cm比色皿，在430～490nm波长内测定吸光值。
以波长为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，以选择最大吸收峰。
可见λ在456～458nm内吸光值达到最大，记录该波长下的吸光值A。
图1
3组6个样品的试验结果及每一个样品所对应的标准曲线。
表1
表16个样品试验结果及样品所对应的标准曲线
波长（λ）A1A2A3A4A5A6
4300.6930.6950.7170.7284310.7010.7010.7260.7384320.7080.7120.7300.7454330.7120.7170.7420.7544340.7190.7210.7520.7624350.7240.7280.7520.7674360.7280.7300.7570.7724370.7300.7350.7590.7754380.7350.7400.7670.7804390.7420.7470.7720.7854400.7450.7500.7770.7904410.7540.7590.7850.7990.7010.8274420.7620.7670.7900.8070.7100.8334430.7720.7770.8010.8150.7190.8424440.7830.7880.8120.8270.7260.8514450.7960.7990.8210.8390.7380.8634460.8070.8100.8330.8480.7470.8764470.7150.8180.8450.8600.7590.8864480.8300.8360.8570.8730.7670.8964490.8420.8480.8730.8860.7770.9074500.8540.8570.8830.9000.7900.9174510.8630.8700.8930.9100.8010.9324520.8730.8760.9000.9170.8120.9434530.8830.8860.9140.9280.8210.9514540.8890.8960.9170.9360.8270.9594550.8960.9000.9170.9390.8330.9634560.9000.9030.9210.9390.8360.9674570.9000.9030.9210.9390.8390.9674580.9000.9030.9210.9390.8390.9674590.8960.9030.9140.9360.8360.9634600.8890.8960.9100.9280.8330.9594610.8860.8890.9030.9210.8270.9554620.8760.8830.8960.9140.8210.9474630.8700.8730.8860.9070.8120.9364640.8600.8630.8760.8930.8040.9244650.8510.8540.8660.8830.7930.9174660.8420.8450.8540.8730.7850.9074670.8330.8360.8450.8630.7770.8964680.8210.8270.8360.8540.7670.8834690.8120.8180.8270.8450.7590.8734700.8070.8070.818
0.836
0.752
0.863
4710.7990.8014720.7930.7964730.7880.7934740.7850.7904750.7850.7884760.7850.7904770.7850.788478
0.788
0.790
・401・新疆农业科学
41卷
续表1
波长λA1A2A3A4A5A6 4790.7880.790
4800.7880.796
4810.7900.793
4820.7900.793
4830.7900.790
4840.7850.785
4850.7770.780
4860.7720.775
4870.7640.767
4880.7520.754
4890.7380.740
4900.7210.724
图1430～490nm波长测定吸光值
!."结果表示及计算类胡萝卜素含量
用mg/kg表示，按下式计算：
类胡萝卜素含量（mg/kg）=A・400 m
式中：A：测定的最大吸光度
400：换算系数
m：试样称取量，g
!.#允许差
连续两次测定，其结果相对偏差不得超过5%。
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5
1
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专刊陈洁等：
胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定。