类胡萝卜素的测定方法
植物叶绿素类胡萝卜素测定方法
叶绿素、类胡萝卜素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量;根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C 和液层厚度L成正比,即A＝αCL式中：α比例常数;当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm 时,α为该物质的吸光系数;各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得;如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和;这就是吸光度的加和性;今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A,并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度;在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰,所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰;二、材料、仪器设备及试剂一材料：新鲜或烘干的植物叶片;二仪器设备：1分光光度计；2电子顶载天平感量；3研钵；4棕色容量瓶； 5小漏斗；6定量滤纸；7吸水纸； 8擦境纸；9滴管;三试剂：195%乙醇或80%丙酮v丙酮：v乙醇=2：1的95%水溶液；2石英砂；3碳酸钙粉; 暗中2h,,25ml三、实验步骤1取新鲜植物叶片或其它绿色组织或干材料,擦净组织表面污物,剪碎去掉中脉,混匀;2将取好的样品放入25ml容量瓶中,加混合浸提液无水乙醇:丙酮=5:520ml,放在黑暗条件下,浸泡至叶片发白,用浸提试剂定容至25ml,摇匀备用;3把叶绿体色素提取液倒入1cm光径的比色皿内,以浸提试剂为空白测定吸光度;选择波长663 646 和470nm;四、实验结果计算叶绿素a 的浓度 = OD 633 – OD 646叶绿素b 的浓度 = OD 646– OD 663类胡萝卜素浓度=÷229 单位 mg/L Cmg/L 提取液总量ml叶绿体色素含量mg/g= ____________________________ 烟叶重量g1000注意事项：操作避光研磨时间短些。
高效液相色谱法测定15种蔬菜中的胡萝卜素
2、重复性和精密度
此外，该方法具有较好的重复性和精密度，能够满足实际测定的要求。通过 本研究的开展，为准确评估蔬菜的营养价值提供了科学依据。
谢谢观看
2、样品中胡萝卜素的测定结果
表1 15种蔬菜中胡萝卜素的含量（mg/100g）
3、样品中水分含量的测定结果
3、样品中水分含量的测定结果
采用烘干法测定了15种蔬菜中的水分含量，结果如表2所示。由表可知，不同 蔬菜中的水分含量也存在显著差异。其中，生菜和芹菜中的水分含量较高，分别 为94.7%和92.5%；红薯和土豆中的水分含量较低，分别为79.3%和78.6%。其他 蔬菜中的水分含量介于上述两者之间。
采用高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素，需对方法进行重复性和精密度 评估。实验结果表明，该方法的重复性和精密度均较好，能够满足实际测定的要 求。
2、重复性和精密度
结论 本次演示介绍了高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素的方法及注意事项。 该方法具有分离效果好、分析速度快、灵敏度高等优点，能够准确测定蔬菜中类 胡萝卜素的含量。通过对不同种类蔬菜中类胡萝卜素含量的测定，发现叶菜类蔬 菜中类胡萝卜素含量较高，而根茎类蔬菜中类胡萝卜素含量较低。
2、实验方法
（2）色谱条件：采用高效液相色谱仪进行分离分析，色谱柱为C18柱（5μm， 4.6mm×250mm），流动相为甲醇-丙酮（1:1），流速为1ml/min，检测波长为 450nm，柱温为30℃。
2、实验方法
（3）标准曲线绘制：精确称取适量胡萝卜素标准品，用甲醇-丙酮（1:1）混 合溶剂配制成不同浓度的标准溶液。分别进样分析，以峰面积（A）对胡萝卜素 浓度（C）绘制标准曲线。
3、高效液相色谱法测定类胡萝 卜素
3、高效液相色谱法测定类胡萝卜素
鉴定胡萝卜素的方法
鉴定胡萝卜素的方法
首先，最常见的鉴定胡萝卜素的方法之一就是紫外-可见分光光度法。
这种方
法是利用不同波长下胡萝卜素的吸收特性来进行鉴定。
通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以得到胡萝卜素的含量。
这种方法简单、快速，且准确度较高，因此被广泛应用于食品加工和质量监控领域。
其次，色谱法也是一种常用的鉴定胡萝卜素的方法。
色谱法是利用样品在色谱
柱中的分离和吸附特性来进行鉴定。
通过比较待测样品与标准物质在色谱图谱上的保留时间和峰面积，可以准确地确定胡萝卜素的含量和种类。
这种方法需要专业的设备和操作技能，但其分析结果准确可靠，因此在科研领域得到了广泛应用。
另外，光谱法也是一种常见的鉴定胡萝卜素的方法。
光谱法是利用样品在特定
波长下的吸收、发射或散射特性来进行鉴定。
通过测定样品在紫外、可见、红外等光谱范围内的吸收特性，可以得到胡萝卜素的含量和结构信息。
这种方法操作简单，且对样品的要求较低，因此在食品行业得到了广泛应用。
最后，生化分析法也是一种重要的鉴定胡萝卜素的方法。
生化分析法是利用生
物学试剂和生化技术来进行鉴定。
通过测定样品在特定生化反应条件下的变化，可以准确地确定胡萝卜素的含量和种类。
这种方法需要专业的实验室设备和操作技能，但其分析结果准确可靠，因此在科研领域得到了广泛应用。
综上所述，鉴定胡萝卜素的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据具体的需求和条件选择合适的方法进行鉴定。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的科研工作者和食品从业人员有所帮助。
水果蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定
水果、蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定1 主题内容与适用范围本标准规定了水果、蔬菜汁中类胡萝卜素的分离提取方法及提取物中类胡萝卜素总量的测定方法。
本标准适用于水果、蔬菜汁中类胡萝卜素总量的测定。
2 原理果蔬滤液通过溶剂萃取,分离提取类胡萝卜素,在特定波长下用分光光度法测其吸光度。
该吸光度与类胡萝卜素含量成线性关系,通过换算即可得知类胡萝卜素之含量。
3 试剂和溶液本标准所用试剂除特殊规定外,均使用符合国家标准的分析纯试剂,均采用蒸馏水。
3.1 石英砂(Q/HG 22--467)；3.2 萃取剂,2/1(v/v)氯仿(GB 682)-甲醇(GB 683)混合。
4 仪器设备4.1 抽滤器；4.2 无灰分滤纸；4.3 分液漏斗：250mL；4.4 容量瓶,100mL；4.5 移液管,20mL；4.6 烧杯,50mL；4.7 分光光度计,使用的测量波长为440±10nm。
5 分析步骤注：由于类胡萝卜素本身性状的不稳定性,即见光易氧化分解,建议所有操作应避光进行。
5.1 试样的制备5.1.1 液体样品：混合均匀后取样。
5.1.2 固体样品：捣碎机捣碎后,纱布挤汁。
5.2 用移液管吸取20mL样液置50mL烧杯中。
5.3 过滤：在烧杯(5.2)中加入3g石英砂,摇动后用布氏漏斗过滤(布氏漏斗预先铺有无灰滤纸,纸上铺有2g石英砂),然后再用5mL水冲洗滤渣3次。
5.4 萃取：在250mL的分液漏斗中倒入滤液(5.3),再加入20mL萃取剂(3.2),振摇后静置,收集下部分有机相,再用20mL萃取剂提取两次,将三次萃取所得有机相合并,用萃取剂定容为100mL。
注：对果胶含量大的果蔬,萃取时,将三次合并的有机相重新倒回原分液漏斗,继续用20mL萃取洗涤一次,然后用萃取剂定容至100mL。
5.5 测定：在440±10nm波长下测定提取液的最大吸光度A。
6 结果的计算和表示类胡萝卜素总量用mg/L表示,按下式计算：类胡萝卜素(mg/L)＝A×20式中：A——测定的最大吸光度；20——换算系数。
高效液相色谱定量分析新鲜加工过的水果中的主要类胡萝卜素
高效液相色谱定量分析新鲜加工过的水果中主要类胡萝卜素的含量概念一、类胡萝卜素（carotenoid）不溶于水而溶于有机溶剂。
叶绿体中的类胡萝卜素含有两种色素，即胡萝卜素（carotene）和叶黄素（lutein），前者呈橙黄色，后者呈黄色。
功能为吸收和传递光能，保护叶绿素。
类胡萝卜素是一类重要的天然色素的总称，属于化合物。
普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类和细菌中的黄色、橙红色或红色的色素。
二、番茄红素(lycopene)番茄中的红色素，是胡萝卜素的母体化合物。
番茄红素是成熟番茄的主要色素,是一种不含氧的类胡萝卜素。
番茄红素是植物中所含的一种天然色素。
主要存在于茄科植物西红柿的成熟果实中。
它是目前自然界中被发现的最强抗氧化剂。
番茄红素清除自由基的功效远胜于其他类胡萝卜素和维生素E，它可以有效的防治因衰老，免疫力下降引起的各种疾病。
三、β-胡萝卜素(β-carotene)β-胡萝卜素是类胡萝卜素之一，也是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。
许多天然食物中如绿色蔬菜、甘薯、胡萝卜、菠菜、木瓜、芒果等，皆存有丰富的β—胡萝卜素。
β-胡萝卜素是一种抗氧化剂，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素。
β-胡萝卜素在进入人体后可以转变为维生素A，不会有因过量摄食而造成维生素A累积中毒现象。
另外，在促进动物的生育与成长也具有较好的功效。
四、毛细管柱色谱法(capillary column chromatography)开管柱气相色谱(open tubular gas chromatography)，又称高分辨气相色谱(high resolution gas chromatography)，是气相色谱的重要分支。
用内壁上涂附有固定液的空心的毛细管柱进行组分分离的色谱法。
与填充柱色谱法相比，其分离效率高、分析速度快、样品用量少。
HPLC法定量分析芒果和木瓜中类胡萝卜素的含量摘要：采用高效液相色谱法定量分析芒果、木瓜样品及一些加工产品的主要类胡萝卜素,使用外标法和标准加入校准技术。
胡萝卜素和番茄红素的提取分离和测定
β—胡萝卜素和番茄红素的提取分离与测定一，实验目的1、学习柱色谱法、薄层色谱法的原理及其方法。
2、掌握从胡萝卜或番茄中分离提纯胡萝卜素和番茄红素的原理和方法。
3、学会用色谱法从胡萝卜或番茄中提取胡萝卜素和番茄红素并鉴定之。
4、初步了解胡萝卜素和番茄红素的来源以及生产方法。
二，实验原理：胡萝卜素是最早发现的一个多烯色素。
后来，又发现了许多在结构上与胡萝卜素类似的色素，于是就把这类物质叫做胡萝卜色素类化合物，或者叫做类胡萝卜素。
这类化合物大都难溶于水，易溶于弱极性或非极性的有机溶剂，因此又把这类物质叫做脂溶性色素。
番茄红素是胡萝卜素的开链异物体。
番茄红素在成熟的红色植物果实如番茄、西瓜、胡萝卜、草莓、柑桔等中含量最高，其中含量最多的是番茄。
β-胡萝卜素和番茄红素的分子式均为C40H56，分子量为536.85，β-胡萝卜素的熔点184℃，番茄红素的熔点174℃。
β-胡萝卜素和番茄红素是不饱和碳氢化合物，难溶于甲醇、乙醇，可溶于乙醚、石油醚、正已烷、丙酮，易溶于氯仿、二硫化碳、苯等有机溶剂。
根据β-胡萝卜素和番茄红素的上述性质，故可利用石油醚、乙酸乙酯等弱极性溶剂将它们从植物材料中浸提出来。
然后，根据它们对吸附剂吸附能力的差异，用柱色谱进行分离，用薄层色谱检测分离效果。
并根据它们在可见光区有强烈吸收的性质，用紫外-可见分光光度法进行测定，β-胡萝卜素的最大吸收峰为451nm，番茄红素的最大吸收峰为472nm。
1、柱色谱法柱色谱（柱上层析）常用的有吸附柱色谱和分配柱色谱两类。
前者常用氧化铝、硅胶作固定相。
在分配柱色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。
吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。
当待分离混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。
当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，于是形成不同层次，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或者将柱吸干，挤出后按色带分割开，再用溶剂将各色带中的溶质萃取出来。
类胡萝卜素含量方法
（一）检测原理：类胡萝卜素含量测定(酶标仪96T)叶绿体中所含色素主要有两大类，叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为色素蛋白复合体，其含量多少及其组成决定了植物对不同光的吸收、利用效率，常常作为研究光合生理的重要指标。
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，在649nm和665nm处测定叶绿素提取物的吸光值，在470nm处测定类胡萝卜素；然后利用经验公式计算出样品中叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素总含量及类胡萝卜素含量。
（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求试剂一粉剂×1瓶4℃保存乙醇（自备）1000mL×1瓶4℃保存抽提Buffer配制：（体积比）乙醇：丙酮=95:5（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、天平、10mL玻璃试管、锡箔纸、无水乙醇，丙酮。
（四）测定步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备（1）取新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉。
（2）称约0.1g剪碎，用蒸馏水洗干净，然后加入1mL抽提Buffer，少量试剂一（约50mg），叶绿素对光敏感，务必在黑暗或弱光条件下充分研磨（难磨叶片可以添加少量石英砂助磨），然后转移至10mL玻璃试管。
（3）用抽提Buffer冲洗研钵，将所有冲洗液及研钵中所有的绿色物质转入10mL玻璃试管，用抽提Buffer补充至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。
2、上机检测分别取200μL浸提液和200μL抽提Buffer于96孔板，记为测定管和空白管，分别于665nm 和649nm和470nm处读取吸光值A，△A665=(A测定-A空白)665，△A649=(A测定-A空白) 649，△A470=(A测定-A空白)470。
类胡萝卜素的测定方法
类胡萝卜素的测定方法（高效液相色谱法）本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。
本方法最低检出量为：α-胡萝卜素为5ng/mL，β-胡萝卜素为 4.3ng/mL，γ-胡萝卜素为3.5ng/mL，番茄红素为2.7ng/mL，斑蝥黄素为1.0ng/mL。
1. 方法提要样品以丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离，在450nm 波长条件下进行HPLC分析检测，通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。
2. 仪器（1）高效液相色谱仪。
（2）冷凝回流皂化装置。
（3）旋转蒸发仪。
（4）离心机（5000r/min）。
3. 试剂本方法所使用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为重蒸馏水。
（1）丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂：取相同体积的丙酮、石油醚混匀。
（2）50% KOH甲醇-水溶液：称取250g氢氧化钾，用50mL适量水溶解后，用甲醇定容至500mL容量瓶，备用。
（3）无水硫酸钠（Na-2SO4）。
（4）二丁基羟基甲苯（BHT）。
（5）无水乙醇（C2H5OH）。
（6）流动相使用液：按乙腈+二氯甲烷+甲醇（85+10+5）比例准确量取各溶剂，并充分混匀，经.45μm微孔膜过滤后使用。
（7）类胡萝卜素标样：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素。
（8）标准溶液：准确称取α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素一定量，先分别用少量的乙酸乙酯溶解，再用甲醇配制成60~80ng/L的标准储备液（于-30℃冻箱保存），使用时再配成3.5~16.5mg/L的标准使用液。
4. 测定步骤（1）样品处理：a. 皂化提取法（如牛奶等脂肪含量较高的样品）：取250L鲜牛奶于2℃、5000r/min冷冻离心30min，取上层油脂于250mL皂化瓶中，加入50mL乙醇、40mL 50% KOH甲醇溶液、0.1g BHT，65~75℃回流皂化30min，用石油醚反复提取皂化液，多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水，定容至25mL容量瓶中，备用。
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类胡萝卜素的测定方法（高效液相色谱法）
本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。
本方法最低检出量为：α-胡萝卜素为5ng/mL，β-胡萝卜素为 4.3ng/mL，γ-胡萝卜素为3.5ng/mL，番茄红素为2.7ng/mL，斑蝥黄素为1.0ng/mL。
1. 方法提要
样品以丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离，在450nm 波长条件下进行HPLC分析检测，通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。
2. 仪器
（1）高效液相色谱仪。
（2）冷凝回流皂化装置。
（3）旋转蒸发仪。
（4）离心机（5000r/min）。
3. 试剂
本方法所使用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为重蒸馏水。
（1）丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂：取相同体积的丙酮、石油醚混匀。
（2）50% KOH甲醇-水溶液：称取250g氢氧化钾，用50mL适量水溶解后，用甲醇定容至500mL容量瓶，备用。
（3）无水硫酸钠（Na-2SO4）。
（4）二丁基羟基甲苯（BHT）。
（5）无水乙醇（C2H5OH）。
（6）流动相使用液：按乙腈+二氯甲烷+甲醇（85+10+5）比例准确量取各溶剂，并充分混匀，经.45μm微孔膜过滤后使用。
（7）类胡萝卜素标样：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素。
（8）标准溶液：准确称取α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素一定量，先分别用少量的乙酸乙酯溶解，再用甲醇配制成60~80ng/L的标准储备液（于-30℃冻箱保存），使用时再配成3.5~16.5mg/L的标准使用液。
4. 测定步骤
（1）样品处理：
a. 皂化提取法（如牛奶等脂肪含量较高的样品）：取250L鲜牛奶于2℃、5000r/min冷冻离心30min，取上层油脂于250mL皂化瓶中，加入50mL乙醇、40mL 50% KOH甲醇溶液、0.1g BHT，65~75℃回流皂化30min，用石油醚反复提取皂化液，多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水，定容至25mL容量瓶中，备用。
b. 直接提取法（如番茄等脂肪含量较低的样品）：适量新鲜成熟番茄匀浆后称取5~10mg于小烧杯中，加入0.1g BHT，用丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂提取3次，合并、收集
上层有机相，反复水洗后，用无水硫酸钠脱水，定容至25mL容量瓶中，备用。
取上述提取液20mL减压蒸干，用1mL甲醇溶解，经0.45μm微孔膜过滤后待测。
（2）色谱分离条件：
色谱柱：μ-Bondapak C18(3.9mm×150mm)。
流动相：乙腈+二氯甲烷+甲醇（85+10+5）。
流速：0.6mL/min。
检测器波长：150nm(0.64AUFS)。
进样量：20μL。
柱温：18℃。
（3）样品测定：准确吸取样品处理液和类胡萝卜标准混合使用液10μL注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液出峰的保留时间定性，以其峰面积或峰高计算样液中各类胡萝卜素的含量。
5种类胡萝卜的标准色谱图见图2-19，番茄样品色谱图见图2-20。
5. 结果计算
根据各标准样品的保留时间和峰面积或峰高，分别对样品中各类胡萝卜素进行定性与定量。
6. 准确度与精密度
在不同食品中进行不同浓度加标回收实验、精密度与重复性实验，α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素5种类胡萝卜素的回收率分别为：89.8%~95.5%、90.4%~98.7%、89.7%~95.3%、90.8%~96.4%、92.6%~101.1%。
相对标准差（RSD）分别为：2.5%~7.6%、1.8%~8.1%、8.9%~9.1%、4.0%~6.3%、2.9%~4.1%。
其线性相关系数（r）依次为0.9980, 0.9986, 0.9993, 0.9995, 0.9988(n=7)。
7. 注释
（1）类胡萝卜素见光、遇氧容易被破坏，所以标样最好随配随用，或配制高浓度储备液冲氮低温冻藏，使用时配制一定低浓度的工作使用液。
样品的整个提取、分析过程应在黄色弱光中操作。
（2）在处理大量试样或放置时间较长时，要加抗氧化剂（BHT、BHA）。
（3）在反复提取皂化液时会发生乳化现象，有时难以分离。
可滴加无水乙醇，以达到分离效果。
（4）本方法较适合于羟基类胡萝卜素的分析测定，对氧合羟基类胡萝卜素的分离、分析效果较差。