实验六__乳粉中还原糖含量的测定
实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法20111017
10mL6MHCl
冷却,用 I2-KI检测 沸水浴0.5h NaOH中和, 加水定容 到100mL
4.3、用3,5-二硝基水杨酸法测还原糖、 总糖含量
管号 样液/mL 水 DNS试剂/mL 空白对照 0 1.0 2.0 还原糖 样液管 1.0 0 2.0 总糖样液管 1.0 0 2.0
沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温 蒸馏水/mL 9.0 9.0 9.0
浓度（mg/ml）
1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 -0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
A540
葡萄糖标准曲线（DNS法）
4、操作步骤
4.1、制定标准曲线
管号 0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL
蒸馏水/mL DNS试剂/mL
0
1.0 2.0
0.2
0.8 2.0
0.4
0.6 2.0
0.6
0.4 2.0
0.8
0.2 2.0
1.0
0 2.0
沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温 蒸馏水/mL 葡萄糖浓度/mg/mL A540 9.0 0 9.0 0.2 9.0 0.4 9.0 0.6 9.0 0.8 9.0 1.0
还原糖含量测定
冷却
立即用流动冷水冷却至室温
蒸馏水(ml)
21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5
吸光值(A540)
将以上各管上下颠倒几次使溶液混匀后， 按顺序倒入比色杯中，在540nm波长条件 下进行比色测定：用0号管溶液调零点，分 别记录各管吸光值；然后以葡萄糖浓度为 横坐标，吸光值为纵坐标，绘制出标准曲线。
2、测定样品中还原糖和总糖含量。
（1）提取样品中的还原糖：
准确称取1g食用面粉放置于100ml三角瓶 中，加少量蒸馏水调成糊状，再加入50ml 蒸馏水，摇匀，置于50℃水浴条件下20分 钟，使还原糖浸出；在4000rpm、5分钟条 件下进行离心，得到的上清液倒入100ml容 量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，上下颠倒 几次将溶液混匀，作为还原糖待测液。
待水解液冷却至室温后加入1滴酚酞指示 剂，用6mol/L NaOH中和至微红色，在 4000rpm、5分钟条件下离心，得到的上 清液转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定 容至刻度，上下颠倒几次混匀溶液，作为 总糖待测液。
（3）显色和比色，按下表操作
管号 样品量（ml） 蒸馏水（ml） DNS试剂(ml) 加热
在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨 酸试剂（DNS）共热，3,5-二硝基水杨酸被 还 原 为 3- 氨 基 -5- 硝 基 水 杨 酸 （ 棕 红 色 物 质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。 在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质 颜色深浅的程度成一定的比例关系，在 540nm 波 长 下 测 定 棕 红 色 物 质 的 吸 光 值 ， 查对标准曲线并计算，就可以分别求出样 品中还原糖和总糖的含量。
（2）提取样品中的总糖：
准确称取0.1g食用面粉放置于100ml三角 瓶中，加入10ml 6mol/L HCl及15ml蒸馏 水，沸水浴30分钟（注意不能把水烧干）。 用滴管吸取1~2滴水解液于白瓷板上，加1 滴I-KI溶液，如显示出蓝色说明水解不完全， 可适当延长沸水浴时间；若不显蓝色，则 说明水解完全。
还原糖的测定实验报告
1. 了解还原糖的性质和鉴定方法。
2. 掌握使用斐林试剂检测还原糖的原理和操作步骤。
3. 学习通过比色法计算还原糖的含量。
二、实验原理还原糖是指含有游离醛基或酮基的糖类，它们能够还原斐林试剂中的Cu²⁺离子为Cu⁺离子，生成砖红色的Cu₂O沉淀。
斐林试剂由斐林A液（含CuSO₄的碱性溶液）和斐林B液（含NaOH的碱性溶液）组成，两种试剂混合后，Cu²⁺离子与还原糖反应生成Cu₂O沉淀。
三、实验材料与试剂1. 试剂：- 斐林A液：称取硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）0.1g，溶于100mL水中，加入5mL浓NaOH溶液。
- 斐林B液：称取NaOH 2g，溶于100mL水中。
- 标准葡萄糖溶液：准确称取葡萄糖1.0000g，溶于1000mL水中，配制成1mg/mL的标准溶液。
- 样品溶液：取一定量的待测样品，用蒸馏水溶解并定容至一定体积。
2. 仪器：- 烧杯- 试管- 滴定管- 移液管- 移液器- 恒温水浴锅- 移液管1. 准备标准溶液：准确移取1mL标准葡萄糖溶液，加入9mL蒸馏水，配制成0.1mg/mL的标准溶液。
2. 配制斐林试剂：将斐林A液和斐林B液等体积混合，立即使用。
3. 取一支试管，加入2mL样品溶液。
4. 加入2mL斐林试剂，混合均匀。
5. 将试管放入恒温水浴锅中，加热至沸腾，保持沸腾状态5分钟。
6. 取出试管，观察沉淀颜色。
7. 重复步骤3-6，制作标准曲线。
8. 根据标准曲线，计算样品溶液中还原糖的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：以标准葡萄糖溶液浓度为横坐标，沉淀颜色深浅为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品溶液中还原糖含量的计算：根据样品溶液的浓度和沉淀颜色深浅，在标准曲线上找到对应的还原糖含量。
六、实验讨论1. 实验过程中，斐林试剂需现配现用，以免Cu²⁺离子被还原成Cu⁺离子，影响实验结果。
2. 样品溶液的浓度应控制在一定范围内，以免沉淀颜色过深，影响准确度。
还原糖浓度测定实验报告
一、实验目的1. 掌握还原糖的测定原理和方法。
2. 学习使用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖浓度。
3. 培养实验操作能力和数据分析能力。
二、实验原理还原糖是指具有还原性的糖类，如葡萄糖、果糖、半乳糖等。
在碱性条件下，还原糖可以将3,5-二硝基水杨酸还原成棕红色的化合物，该化合物在540nm波长处有最大吸收。
在一定浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系。
因此，通过测定样品在540nm波长处的光吸收值，可以计算出还原糖的浓度。
三、实验材料1. 试剂：3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、苯酚、亚硫酸钠、酒石酸钾钠、葡萄糖、蒸馏水。
2. 仪器：可见分光光度计、电子天平、真空干燥箱、数显恒温水浴锅、离心机、移液器、枪头、500mL容量瓶、试管、500ml烧杯、1000ml烧杯。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）配制葡萄糖标准溶液：准确称取0.1g葡萄糖，溶解于100mL蒸馏水中，配制成1mg/mL的葡萄糖标准溶液。
（2）取6个试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL的葡萄糖标准溶液。
（3）向每个试管中加入1.0mL 3,5-二硝基水杨酸溶液，摇匀。
（4）将试管置于水浴锅中，加热煮沸5分钟。
（5）取出试管，冷却至室温。
（6）使用可见分光光度计，在540nm波长处测定吸光度。
（7）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品还原糖浓度的测定（1）准确称取一定量的样品，溶解于蒸馏水中。
（2）取6个试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL的样品溶液。
（3）按照标准曲线绘制步骤，测定吸光度。
（4）根据标准曲线，计算出样品中还原糖的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制根据实验数据，绘制标准曲线如图1所示。
图1 葡萄糖标准曲线2. 样品还原糖浓度的测定根据标准曲线，计算出样品中还原糖的浓度为X mg/mL。
六、讨论1. 实验过程中，样品的称量、溶液的配制、吸光度的测定等步骤要准确无误，以保证实验结果的准确性。
直接滴定法测定食品中还原糖的含量-精品文档资料
直接滴定法测定食品中还原糖的含量、还原性糖综述还原糖是指具有还原性的糖类。
在糖类中，分子中含有游离醛基和酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。
还原糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等。
非还原糖有蔗糖、淀粉、纤维素等，但它们都可以通过水解生成相应的还原性单糖。
所以糖类的测定是以还原糖的测定为基础的。
二、直接滴定法测定还原糖的试验方法一）实验原理将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。
根据样液消耗量可计算还原糖含量。
当称样量为5g 时，该法的检出限为0.25g/100g二）实验材料、仪器与试剂实验材料：苹果仪器：分析天平、研钵、电炉、铁架台、锥形瓶、烧杯、玻试剂：1）碱性酒石酸铜甲液：称取15g 硫酸铜（CuSO4?5H2）O及0.05g 次甲基蓝，溶于水中并稀释至l000mL。
2）碱性酒石酸铜乙液：称取50g 酒石酸钾钠及75g 氢氧化钠，溶于水中，再加入4g 亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至lOOOmL贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3）乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸，加水溶解并稀释至l00mL。
4）10.6%亚铁氰化钾溶液：称取l0.6g 亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至l00mL。
5）葡萄糖标准溶液：准确称取l.0000g 经过96±2C干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至lOOOmL。
此溶液每毫升相当于 1.0mg 葡萄糖。
三）实验步骤1 ）样品处理：称取约 5.00g 试样，置于250mL容量瓶中，加50mL水，混匀，慢慢加入 5 mL乙酸锌溶液及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀，静置30mi n,用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，取续滤液备用。
DNS比色法测定还原糖和总糖
乳粉中还原糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料乳粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取95℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。
②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
③乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
④亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
四、实验器材比色管：25ml×9 烧杯：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；5ml×2；10ml×1恒温水浴锅天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支比色管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
食品中还原糖的测定实验报告
食品中还原糖的测定实验报告实验目的，通过实验测定食品中还原糖的含量，了解食品的营养成分，为食品质量的评价提供依据。
实验原理，还原糖是指具有还原性的糖类物质，如葡萄糖、果糖等。
在酸性条件下，还原糖能够与费林试剂发生还原反应，生成红色沉淀。
通过比色计测定沉淀的光吸收值，可以计算出还原糖的含量。
实验步骤：1. 样品制备，取不同种类的食品样品，如水果、果酱、饼干等，分别制备成样品提取液。
2. 提取还原糖，将样品加入酸性乙醇中，进行提取，得到含有还原糖的提取液。
3. 进行费林试剂反应，取一定量的提取液，加入费林试剂，混合均匀后，在水浴中加热，观察是否生成红色沉淀。
4. 测定光吸收值，将反应后的样品溶液置于比色皿中，使用比色计测定其光吸收值。
5. 计算含量，根据测定的光吸收值，利用标准曲线计算出还原糖的含量。
实验结果：通过实验测定，不同食品样品中还原糖的含量差异较大。
水果中的还原糖含量较高，果酱次之，而饼干等加工食品中的含量较低。
这与食品的制作工艺、原料成分等有关。
实验结论：通过本次实验，我们成功测定了食品样品中还原糖的含量，并且得出了不同食品样品中还原糖含量的差异。
这对于我们了解食品的营养成分，评价食品质量具有一定的指导意义。
同时，也为我们提供了一种简单、快速、准确的测定方法，为食品质量监测和评价提供了技术支持。
实验注意事项：1. 实验中需注意操作规范，避免溶液外溅，保持实验台面整洁。
2. 在进行测定时，需保持仪器的准确性，避免外界干扰。
3. 对于不同食品样品的提取液制备，需注意样品的选择和制备方法，保证提取液的准确性。
4. 实验中需严格按照操作步骤进行，确保实验结果的准确性和可靠性。
总结：本次实验通过测定食品样品中还原糖的含量，为我们了解食品的营养成分提供了重要依据。
同时，实验方法简单、快速、准确，具有一定的实用性和推广价值。
希望本实验能够对大家有所启发，为食品质量监测和评价提供技术支持。
实验 食品中还原糖含量的测定
实验食品中还原糖含量的测定一、实验目的1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点；2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
二、实验原理试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），还原糖将溶液中的二价铜还原成氧化亚铜。
以后稍过量的还原糖使次甲蓝指示剂褪色，表示终点到达。
根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。
反应方程式如下：CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4COONa COONa ︱∣CHOH CHO╲∣ +Cu(OH)2= ∣ Cu +2H2OCHOH CHO╱∣ ∣COOK COOKCOONa COONa∣ CHO ∣ CHOH CHO╲∣ CHOH ∣2∣ Cu +(CHOH)4 +2H2O=2 ∣ + (CHOH)4+Cu2O↓CHO╱∣ CHOH ∣∣ CH2HO ∣ CH2OHCOOK COOK亚甲蓝氧化型+还原糖——→亚甲蓝还原型(蓝色) （无色）三、实验试剂1、盐酸(1+1)：量取50mL盐酸，加水稀释至100mL。
2、碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜 ( CuSO4•5H2O) 及0.05g次甲基蓝，溶入水中并稀释至1000mL。
3、碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
4、乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
5、亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
6、葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经过96℃±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1000mL。
此溶液每mL相当于1.0mg葡萄糖。
四、实验仪器1、分析天平；2、可调电炉；3、50mL小烧杯；4、250mL容量瓶；5、100mL量筒，1个/2组；6、250mL锥形瓶3只；7、25mL酸式滴定管1支/组； 8、5mL移液管4支/2组；9、10mL移液管1支/2组； 10、干燥滤纸3张，漏斗1个/组；11、小玻璃棒1根/组； 12、玻璃珠：9颗/组；五、操作步骤（一）试样处理称取约2.50g~5.00g试样，置于250mL容量瓶中，加50mL水，摇匀后慢慢加入5mL乙酸锌溶液，混匀放置片刻，加入5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀、静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
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实验六乳粉中还原糖含量的测定—直接滴定法
一、目的要求
1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点；
2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
二、实验原理
将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀。
稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。
根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。
反应方程式如下：
CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4
COONa COONa
︱∣
CHOH CHO╲
∣+Cu(OH)2= ∣Cu +2H2O
CHOH CHO╱
∣∣
COOK COOK
COONa COONa
∣CHO ∣CHOH
CHO╲∣CHOH ∣
2∣Cu +(CHOH)4 +2H2O=2 ∣+ (CHOH)4+Cu2O↓
CHO╱∣CHOH ∣
∣CH2HO ∣CH2OH
COOK COOK
亚甲蓝氧化型+还原糖——→亚甲蓝还原型
(蓝色) （无色）
三、实验试剂
1、碱性酒石酸铜甲液：称取7.5g硫酸铜 ( CuSO
4•5H
2
O) 及0.025g次甲
基蓝，溶入水中并稀释至500mL。
2、碱性酒石酸铜乙液：称取25g酒石酸钾钠及37.5g氢氧化钠，溶于水中，再加入2g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
3、乙酸锌溶液：称取10.95g乙酸锌，加1.5mL冰乙酸，加水溶解并稀释至50mL。
4、亚铁氰化钾溶液：称取5.5g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至50mL。
5、乳糖标准溶液：称取约1.4g经过96℃±2℃干燥2h的乳糖，以水稀释至1000mL。
此溶液每mL相当于1.4mg乳糖。
四、实验仪器
1、分析天平；
2、牛角匙；
3、50mL小烧杯；
4、250mL容量瓶；
5、100mL量筒，1个/2组；
6、250mL锥形瓶3只；
7、25mL酸式滴定管1支/组； 8、5mL移液管4支/2组；
9、10mL移液管1支/2组； 10、干燥滤纸3张，漏斗1个/组；
11、小玻璃棒1根/组； 12、玻璃珠：9颗/组；
13、可调电炉；
五、操作步骤
（一）试样处理
称取约1.2g左右的试样，置于250mL容量瓶中，用50mL水分次溶解样品并洗入250mL容量瓶中，摇匀后慢慢加入5mL乙酸锌溶液，混匀放置片刻，加入5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀、静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
（二）标定碱性酒石酸铜溶液
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒，从滴定管滴加约9mL乳糖，控制在2min内加热至沸，趁沸以每2s1滴的速度继续滴加乳糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗乳糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份（先粗测一次），取其平均值，计算每10mL （甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于乳糖的质量或其他还原糖的质量（mg）。
A = C•V
式中：A—10mL （甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于乳糖的质量(mg)；
C—乳糖标准溶液的浓度，mg/ mL；
V—标定时消耗乳糖标准溶液的体积，mL。
（三）试样溶液预测
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒，控制在2min内加热至沸，准确沸腾30s，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。
当样液中还原糖浓度过高时应适当稀释，再进行正式测定，使每次滴定消耗样液的体积控制在与标定碱性酒石酸铜溶液时消耗的还原糖标准溶液的体积相近，约在10mL左右。
（四）试样溶液测定
吸取5.0mL 碱性酒石酸铜甲液及5.0mL 乙液，置于150mL 锥形瓶中，加水10mL ，加入玻璃珠3粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL 的试样溶液至锥形瓶中，使在2min 内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。
六、数据记录与计算
试样中还原糖(以葡萄糖计)的含量为：
式中：
X —试样中还原糖(以乳糖计)含量，g/100g ；
A —10 mL 碱性酒石酸铜溶液 (甲、乙液各5 mL) 相当于乳糖的质量，mg ； m —试样质量，g ；
V —测定时平均消耗试样溶液体积，mL ；
V 0—试样液总体积，mL ；
10010000
⨯⨯⨯=V V m A X。