叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定分光光度法
叶绿素含量的测定分光光度法叶绿素是植物和一些原生生物中重要的光合色素之一，它在光合作用中起到接收和转换光能的关键作用。
测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的光合效率和健康状况，以及研究光合作用的机制和调控。
分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法，本文将介绍该方法的原理、实验步骤和数据分析。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量的原理是基于叶绿素对光的吸收特性。
叶绿素分子可以吸收特定波长的光，特别是蓝光和红光，而对绿光的吸收较弱。
利用分光光度计测量叶绿素溶液在不同波长的光下的吸光度，可以通过比较吸光度与叶绿素浓度的标准曲线，计算出待测样品中叶绿素的含量。
二、实验步骤1. 制备叶绿素提取液：将适量的鲜叶片（去除茎和大的叶脉）放入离心管中，加入少量酒精，并用研钵捣碎，使叶绿素释放到酒精中。
然后用酒精将研钵中的残渣洗入离心管中，最后用酒精将叶绿素完全溶解。
注意，酒精的使用要避免火源。
2. 离心沉淀：将叶绿素提取液离心10分钟，以沉淀残渣和悬浮物。
3. 分光光度计测量：取离心后的叶绿素提取液，用分光光度计在特定波长下（如645 nm和663 nm）测量其吸光度。
记录吸光度值。
4. 制备标准曲线：取不同浓度的叶绿素标准溶液，用同样的方法测量其吸光度，记录吸光度值。
5. 计算叶绿素含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
三、数据分析1. 标准曲线的绘制：将各个标准溶液的叶绿素浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标，绘制曲线。
利用标准曲线可以通过待测样品的吸光度值，反推出其叶绿素的浓度。
2. 计算待测样品中叶绿素的含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
四、注意事项1. 实验中应尽量避免阳光直射，以免光线对实验结果的干扰。
2. 操作时应注意安全，避免酒精接触到火源。
3. 叶绿素提取液的制备应充分溶解，避免残渣和悬浮物的影响。
叶绿素含量的测定
植物生理学实验报告实验题目：叶绿素含量的测定姓名班级学号一、实验原理和目的根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。
叶绿素(丙酮)在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。
叶绿素(95%乙醇)在665nm、649nm，类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰，根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量二、实验器具和步骤植物材料：女贞实验器具：分光光度计；电子天平；研钵；试管；小漏斗；滤纸；吸水纸；移液管；量筒；剪刀试剂：95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉步骤：1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml 95％乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。
静置3～5min2. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。
直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至10 ml ，摇匀4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。
以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度5. 计算公式：叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。
Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245单位：mg/L三、实验数据和作业2、计算叶绿素含量计算公式：叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。
Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245单位：mg/L由上面的公式进行代入计算，有：Ca=13.95*1.820-6.88*0.953=18.83236Cb=24.96*0.953-7.32*1.820=10.46448C类=（1000*1.948-2.05*18.83236-114.8*10.46448）/245=2.8901则：叶绿素含量=（29.29684*10*0.001*1）/0.1=2.9297四、数据分析实验中可能清洗研钵和滤纸不是特别干净可能造成误差五、思考题为什么提取叶绿素时干材料一定要用80％的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？答：因为叶绿素存在于叶绿体内囊体上与其上的蛋白质组成色素蛋白复合体，要分离叶绿素和蛋白质必须有水，叶绿素的头部为极性的，有亲水性。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定是指测定植物体内叶绿素的含量，主要有荧光法、比色法和HPLC法。
1. 荧光法：是利用叶绿素对荧光的强烈敏感性，用来测定叶绿素的一种方法，是生物体叶绿素含量测定最常用的一种方法。
其原理是根据叶绿素在紫外光照射下产生的荧光强度，可以分析出叶绿素的含量。
2. 比色法：是利用叶绿素和其他物质的吸收光谱差异，从而计算叶绿素含量的一种方法。
其原理是，在不同浓度的叶绿素溶液中添加相应量的比色剂，当叶绿素的浓度达到一定时，会产生色谱变化，根据色谱变化的大小，可以计算出叶绿素的浓度。
3. HPLC法：也称为高效液相色谱法，是一种新型的分析技术，用于测定叶绿素的含量。
其原理是将叶绿素以溶剂溶解后，通过高效液相色谱仪将叶绿素从溶剂中分离并测定叶绿素的含量。
叶绿素测定的原理
叶绿素测定的原理叶绿素是一种存在于植物、藻类和一些细菌中的绿色色素，它聚集在叶绿体中，起着光合作用的关键角色。
叶绿素测定的原理基于叶绿素吸收和反射光谱特性的不同。
叶绿素吸收光谱显示在蓝光和红光区域吸收高，而在绿光区域反射和几乎不吸收。
这是因为叶绿素a和b分子的结构中含有大量的酞咯环和烯丙基它们在不同区域的光谱产生显著的吸收峰。
此外，叶绿素a和b之间的差别在绿光区域更大，这是为什么植物呈现绿色的原因。
1.色度法：色度法是最常用的叶绿素测定方法之一、它通过提取叶片中的叶绿素，并利用叶绿素与乙醇或酸性溶液的反应形成叶绿素酸钠的溶液。
然后，通过测量叶绿素酸钠溶液的吸光度或荧光强度来确定叶绿素的含量。
2.光谱法：光谱法利用不同波长下叶绿素的吸收峰的特性，通过测量叶片或细胞所吸收或反射的光的强度来测定叶绿素的含量。
这种方法可以根据不同的吸收峰来计算叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总量的含量。
3.高效液相色谱法：高效液相色谱法是一种精确测定叶绿素含量的方法。
它通过将提取的叶绿素样品分离，并用激光或紫外光检测器来检测叶绿素的浓度，从而确定叶绿素的含量。
4.光电导比色法：光电导比色法是一种快速测定叶绿素含量的方法。
它利用叶绿素溶液的电导率与其浓度之间的关系，通过测量叶绿素溶液的电导率来计算叶绿素的含量。
叶绿素测定的原理主要基于叶绿素分子的吸收和反射光谱特性的不同。
通过测量叶绿素吸收或反射的光的强度，可以计算出叶绿素的含量并评估植物的光合作用效率和叶绿素含量的变化。
这种测定对于研究植物的光合作用效率、光合产物的积累以及植物在环境胁迫下的适应性具有重要意义。
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，叶绿素含量的测定无论是在生理上，还是在选育品种以及抗性研究等方面都很有必要。
叶绿素含量的经典测定方法是光电比色法，即用光电比色计以无机有色溶液为标准进行比色测定。
该方法不仅要配制无机标准溶液，而且不能对溶液中不同色素分子进行定量测定；分光光度法则不需配制标准溶液，又可对溶液中不同色素分子进行定量测定，已得到广泛应用。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量，就是利用叶绿素 a和叶绿素b吸收光谱的不同，测定各特定峰值波长下的光密度，再根据色素分子在该波长下的消光系数，计算出浓度。
叶绿素 a、叶绿素b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663nm、 645nm处，同时已知叶绿素a和叶绿素b在663nm处的消光系数分别为82.04和9.27；在645nm处的消光系数分别为16.75和45.60。
这样叶绿素a和叶绿素b的浓度与他们在663nm、645nm处的光吸光密度的关系可用下式表示：D663=82.04C a+9.27C bD645=16.75C a+45.60C b式中D663和D645分别为叶绿素溶液在波长663nm、645nm处的光密度；C a、C b分别为叶绿素a和叶绿素b的浓度，单位g.·L-1。
解方程可得到：计算：C a=12.7D663-2.59D645C b=22.9D645-4.67D663C a+b=20.3D645+8.04D663C a ,C b分别为叶a和叶b的浓度，C a+b为叶a和叶b的总浓度，单位为mg·L-1所测材料单位重量或单位面积的叶绿素含量可按下式进一步计算：叶绿素含量（mg·L-1或mg·dm-2）= C*VA*1000式中C：叶绿素浓度（mg·L-1）；V：提取液总体积（ml）；A：叶片鲜重（g）或面积（dm2）二、丙酮乙醇混合液法提取叶绿素：药品：丙酮：乙醇按1：1体积混合成浸提液仪器：分光光度计-1-1-1方法：丙酮乙醇混合液法1．将丙酮、无水乙醇按1：1比例配成混合浸提液。
叶绿素的测定
叶绿素含量的测定（参考李合生）一、实验原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
二、材料、仪器设备及试剂25ml容量瓶14个，分别标号0~6和0Y~6Y（标有Y的装子叶,带0的表示实验组）；80%的丙酮；剪刀；手术刀；注射器；长方形硬纸盒三、试验方法与步骤1、叶绿素的提取取一个实验组，从每个培养皿中取出等量个数的材料，用手术刀将根茎叶分开，再单独取叶或茎剪碎，称取叶0.1g左右，茎段0.2g左右；记录各组的质量，然后分别放入对应的容量瓶中，等到所有实验组的叶和茎都装入容量瓶后，再用注射器吸取适量80%的丙酮，加入容量瓶中，并定容至刻度线，摇匀后立即放入预先准备的纸盒中（内用报纸垫着），依次逐个加入。
等所有的都加完后，把纸盒放在暗处，提取24小时以上，备用。
2、分光光度计测定其OD值打开分光光度计，设置470、663、646nm三个波段，测量次数设为3，间隔10s。
预热30min。
预热结束后，用80%的丙酮较零，取出遮光下的溶液，从容量瓶中直接倒到比色杯中开始测量，每组试剂测3次。
注：之前先测两个实验组，若值偏大，可适当用80%的丙酮稀释，并记录好稀释倍数四、结果计算叶绿素a Ca=12.21*A663-2.81*A646叶绿素b Cb=20.13*A646-5.03*A663类胡萝卜素Cx=（1000*A470-3.27*Ca-104*Cb）/229叶绿素色素含量=色素浓度*提取液体积*稀释倍数/样品鲜重（mg/g）注：A663、A646、A470分别指在663、646、470nm波长下的吸光度。
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叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度 A 与其中溶质浓度 C 和液层厚度L 成正比，即A＝α CL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、 b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、 b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、 b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、叶绿素 b 的 80% 丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。
已知在波长663nm 下叶绿素a、叶绿素 b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04 和 9.27；在波长 645nm 处的吸光系数分别为16.75 和 45.60。
根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca+9.27Cb（ 1）A645=16.76Ca+45.60Cb（ 2）式（ 1）（ 2） A663 nm 和 A645nm 为叶绿素溶液在 663nm 和 645nm 处的吸光度， C a C b分别为叶绿素 a、叶绿素 b 的浓度，以 mg/L 为单位。
解方程（ 1）（ 2）组得C a=12.72 A 663— 2.59 A645(3)C b=22.88 A645— 4.67 A 663(4)将 C a+C b相加即得叶绿素总量C TC T＝C a十 C b＝ 20.29A645— 8.05 A 663(5)从公式（ 3）、（ 4）、（ 5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a、 b 浓度另外，由于叶绿素 a 叶绿素 b 在 652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为 30.5 ），也可以在此波长下测定一次吸光度（ A652）而求出叶绿素 a、叶绿素 b 总量所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算：A6521000C T＝(6)34.5有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法一、引言叶绿素是植物体内的一种重要的生物色素，对于植物的光合作用和生长发育有着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物生理生态学、环境保护等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的叶绿素含量测定方法。
二、材料与仪器1. 乙醇：纯度为95%。
2. 醋酸：纯度为99%。
3. 氯仿：纯度为99%。
4. 石油醚：纯度为95%。
5. 甲醛：纯度为37%。
6. 碳酸钠：分析纯。
7. NaOH溶液：浓度为0.1mol/L。
8. 蒸馏水：去离子水或超纯水均可。
9. 离心管、比色皿、移液管等实验器具。
三、方法1. 乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%乙醇中，放置在室温下静置20-24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
2. 醋酸法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入80%醋酸中，放置在室温下静置24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的80%醋酸；（5）用分光光度计在652nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
3. 氯仿-甲醛法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%甲醛中，在水浴中加热至90℃保持10分钟；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的氯仿，并振荡混合均匀后静置10分钟；（5）用分光光度计在649nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
4. 石油醚-乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入石油醚中，放置在室温下静置2-3小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
5. NaHCO3-NaOH法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入NaHCO3-NaOH缓冲液中，在冰箱中保持暗处理2小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，并用蒸馏水稀释至一定浓度；（5）用分光光度计在665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
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叶绿素含量的测定
叶绿素的含量与植物光合作用及氮素营养有密切的关系，在科学施肥、育种及植物病理研究上常有测定的需要。
一、目的
掌握叶绿素a、b含量测定的基本原理和方法。
二、原理
叶绿素a、b分别在663nm和645nm波长处有最大的吸收峰，同时在该波长处叶绿素a.、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据Lambert－Beer定律，列出浓度C与吸光度A之间的关系式：
A663 = 82.04 C a + 9.27C b (1)
A645 = 16.75 C a + 45.6C b (2)
（1）、（2）式中的A663、A645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时测得的吸光度。
C a、、C b为叶绿素a 、b的浓度，单位为mg·L－1。
82.04 、9.27为叶绿素a 、b在波长663nm下的比吸收系数。
16.75 、45.6为叶绿素a 、b在波长645nm下的比吸收系数。
解（1）、(2 )式联立方程，得：
C a=12.70 A663– 2.69 A645 (3)
C b=22.9 A645– 4.68 A663 (4)
C T =C a + C b= 20.21 A645 + 8.02A663 (5)
C a、C b为叶绿素a 、b的浓度, C T为总叶绿素浓度，单位：（mg · L－1），.
利用上面( 3 )、（4）、（5）式可以分别计算出叶绿素a 、b及总叶绿素浓度。
三、材料、仪器设备及试剂
1. 材料：菠菜叶、芥菜叶或其他植物叶片
2. 仪器设备：电子分析天平；分光光度计；恒温水浴锅；25ml刻度试管；剪刀；试管；试管架；玻棒等。
3. 试剂：80﹪乙醇。
四、实验步骤
1. 叶绿素的提取
从植株上选取有代表性的叶片数张（除去粗大叶脉）剪碎后混匀，快速称取0.2g (可视样品叶绿素含量高低而增减用量)，置于25ml刻度试管中，加80﹪乙醇10ml左右，加塞放入60～80℃水浴中保温提取叶绿素（或常温下放在暗处浸提12～24h），至叶片全部褪绿为止，冷却后，用80﹪乙醇定容至刻度，此液即
为叶绿素提取液。
2. 测定
取光径为1cm的比色杯，加入叶绿素提取液距比色杯口1cm处，以80﹪乙醇作为对照，分别于663nm及645nm波长下测定吸光度(A)值。
五、结果计算
将测定得到的吸光度A663、A645值分别代入上面(3)、(4)、(5)式计算出C a 、C b及C T (即叶绿素a 、b 及叶绿素总量浓度)。
再按下式计算出叶绿素a 、b及叶绿素总含量。
C a ×提取液总量(ml)
叶绿素a 含量(mg ·g－1Fw)= ————————————
样品鲜重(g)× 1000
C b ×提取液总量(ml)
叶绿素b 含量(mg ·g－1Fw)= ————————————
样品鲜重(g)× 1000
C T ×提取液总量(ml)
叶绿素总含量(mg ·g－1 Fw)= ————————————
样品鲜重(g)× 1000
最后计算出叶绿素a / 叶绿素b的比值，并加以分析。