免疫酶组织化学技术
免疫酶技术的原理及应用
免疫酶技术的原理及应用1. 什么是免疫酶技术？免疫酶技术是一种利用抗体-抗原相互作用进行生物分析的方法。
它通过利用抗体与特定抗原结合的高度特异性，将酶标记的抗体用于检测和定量目标分子，广泛应用于医学、生物学和生物化学等领域。
2. 免疫酶技术的原理免疫酶技术的原理是基于抗原与抗体之间的高度特异性结合。
一般来说，免疫酶技术包括以下几个步骤：2.1 抗原的制备首先，需要获得目标分子的抗原。
抗原可以是蛋白质、多肽、病毒、细胞表面蛋白等。
通常，抗原会被纯化并加工成适合免疫动物生产抗体的形式。
2.2 抗体的制备接下来，需要制备与目标分子结合的特异性抗体。
通常，抗原会被免疫动物（如兔子、小鼠等）注射，形成抗体。
2.3 酶标记的抗体制备为了便于检测和定量目标分子，可以将酶标记与抗体结合，形成酶标记的抗体。
常用的酶标记包括辣根过氧化酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。
2.4 抗原-抗体结合反应将样品中的目标分子与酶标记的抗体一起孵育，使抗原与抗体发生特异性结合。
这样，目标分子就被标记上了酶，成为可检测的复合物。
2.5 酶的作用和检测添加适当的底物和辅助试剂后，酶会催化底物的反应，产生可测量的信号。
常见的底物有TMB（3，3′，5，5′-四甲基苯基二氨基甲烷）、BCIP（溴硝基硼邻萘酚磷酸盐）等。
3. 免疫酶技术的应用免疫酶技术在医学、生物学和生物化学等领域有广泛的应用。
以下是免疫酶技术的一些常见应用：3.1 免疫诊断免疫酶技术在临床诊断中被广泛应用。
例如，ELISA（酶联免疫吸附测定法）通过检测血清中特定抗原或抗体的浓度，可以用于诊断疾病，如各类感染病、自身免疫性疾病等。
3.2 蛋白质检测和定量免疫酶技术可以用于检测和定量蛋白质。
例如，Western blotting可以检测特定蛋白质在混合蛋白中的表达情况，通过与标准曲线比较，可以定量目标蛋白的含量。
3.3 免疫组织化学免疫组织化学是一种在组织切片上检测特定蛋白质表达的方法。
免疫组织化学技术
免疫组织化学技术免疫组织化学技术又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。
概述免疫组织化学（简称免疫组化）技术中根据标志物的不同，可分为免疫荧光组织化学技术、酶免疫组织化学技术、免疫金（银）组织化学技术、亲和免疫细胞化学技术、免疫电子显微镜技术等。
免疫组织化学的基本过程包括：①抗原的提取与纯化；②免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；③将标志物与抗体结合形成标记抗体；④标本的处理与制备；⑤抗原抗体免疫学反应以及标志物呈色反应；⑥观察结果。
标本的处理标本的主要来源标本的来源主要有以下几种：1.活体组织各种实验动物和人体活检组织。
标本应取材于病变组织及病变与正常组织交界处，大小适中，应减少对组织标本的损伤与挤压。
2.各种体液、穿刺液标本量少，可直接涂片或经离心后取沉淀物涂片。
3.培养细胞悬浮培养的细胞经离心沉淀后做细胞涂片，盖玻片上的单层培养细胞直接固定，吹干后保存备用。
标本的固定与保存使细胞内蛋白质凝固，保持细胞形态和结构；保存组织细胞抗原性；防止标本脱落；除去妨碍抗体结合的类脂，便于保存；抑制组织中细菌的繁殖，防止组织的改变。
蛋白质类：可用乙醇或甲醇固定；微生物：可用丙酮或三氯化碳固定；多糖类：用10%福尔马林（甲醛溶液）或以微火加热固定；去除黏液物质：透明质酸酶等；去除类脂质：有机溶剂（乙醚、丙酮等）。
冷冻切片可使抗原达到最大限度的保存。
石蜡切片是研究形态学的主要制片方法。
抗原的保存与修复使组织抗原决定簇重新暴露，是免疫组织化学技术中的重要步骤。
常用方法有：1.酶消化法无花果蛋白酶为轻度消化酶；胰蛋白酶为中度消化酶；胃蛋白酶为强消化酶。
2.盐酸水解法操作中应注意掌握盐酸浓度、水解温度及水解时间，以最大限度暴露抗原而又不破坏抗原性为目的。
3.微波法将石蜡切片置于缓冲液中，凭借微波辐射产生的高热效应及高速分子运动能量解开交联蛋白，暴露被掩盖的抗原决定簇。
免疫组织化学技术(immunohistochemistry)
免疫组织化学技术（immunohistochemistry）由于免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高及能将形态研究与功能、代谢研究有机地结合在一起的显著特点，所以，这门新技术从一诞生起就显示出了强大的生命力和广阔的应用前景。
此方法经不断改进和发展已日趋成熟，应用范围逐渐扩大。
目前已有近十种技术方法及几百种标记抗体，技术方法逐步规范化，标记抗体逐步商品化，现今它已被广泛地应用于生物学和医学研究的许多领域，取得了令人瞩目的成就。
一、 免疫组织化学技术的原理和应用范围（一） 免疫组织化学技术的基本原理免疫组织化学技术是用显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。
即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。
通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。
组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
免疫学的基本原理决定了免疫组织化学技术具有高度特异性，因此，免疫组织化学技术从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。
只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。
ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，所以免疫组织化学技术又具有敏感性高的特点。
免疫组织化学技术
免疫组织化学技术第一篇：免疫组织化学技术基础免疫组织化学技术是一种利用免疫学原理对细胞或组织进行化学定位的技术。
该技术可以用于鉴定细胞或组织中某种特定抗原的存在及分布情况，从而为病理诊断、学术研究和药物研发等提供有力的支持。
一、免疫组织化学技术的原理免疫组织化学技术的原理是利用抗体与其靶分子间的特异性结合反应，来实现对目标物的检测和定位。
抗体可以识别并结合到人体或动物体内的大部分蛋白质，包括生物芯片检测、ELISA检测、Western blotting等技术所用的基质和抗原。
在免疫组织化学技术中，针对某种抗原的特异性抗体先与组织样本中的特异性抗原发生特异性结合，然后通过检测抗体所标识的色素或荧光物等发射的信号，加以可视化。
例如，用特异性抗体和明胶酶-抗明胶酶复合物在组织样本上进行化学染色，从而定位并可视化样本中的抗原。
二、免疫组织化学技术的步骤1. 样本制备：第一步是样本的制备，包括切片、固定和脱水等处理。
固定组织样本是为了保持其形态和结构，因此往往使用福尔马林等固定剂进行固定。
在制片时，细胞或组织切割成相对较薄的切片，一般为5-10 μm。
切割后，通常漂洗去除固定剂，然后脱水，通常采用乙醇浓度逐渐递增的方法进行。
最后，将切片放置于有机媒介中，如去石蜡等。
2. 抗原修复：切片离体后，抗原结构可能会发生改变，因此需要进行抗原修复。
抗原修复可以通过热处理、酶解或酸解等方式进行。
热处理方法包括水浴、压力釜等；酶解包括蛋白酶和肝素酶等；而酸解则是利用酸将组织溶解并解离抗原。
3. 抗体标记：抗体标记是免疫组织化学技术的核心步骤。
选择具体的抗体，可以选择单克隆或多克隆抗体等。
接着，抗体常被标记为一种检测信号(如与酶或荧光物质结合)。
免疫荧光技术通常是通过荧光标记的二抗或荧光标记的可溶解复合物来可视化。
荧光地染色颜色有多种不同的方式，如荧光素-醌染料、荧光素-异硫氰酸染料等，可以根据不同的研究目的选择不同的荧光染色方法。
酶免疫组织化学染色技术 -回复
酶免疫组织化学染色技术-回复酶免疫组织化学染色技术（Enzyme ImmunoHistoChemistry, E-IHC）是一种常用于组织学研究和病理诊断的方法。
该技术基于免疫学原理，采用酶标标记抗体和细胞色素底物，通过酶的催化作用来检测组织中特定抗原的分布和表达水平。
本文将一步一步回答与酶免疫组织化学染色技术相关的问题。
第一步：样本处理样本处理是酶免疫组织化学染色技术的重要步骤，它的目的是保持组织结构和细胞膜完整性，同时保留目标抗原的免疫原性。
1. 固定化：将组织样本进行固定化处理有助于保持细胞和组织的形态学结构。
最常用的固定剂包括甲醛和乙醇。
甲醛能够形成甲醛-蛋白质交联，从而固定并保持组织中的抗原。
乙醇可以用于去除水分和酮糖，提高抗体的渗透性。
2. 残胶和抗原修复：许多抗原在标本固定过程中会损失其免疫原性，需要进行抗原修复。
常用的修复方法包括热处理、酶消化和酸碱处理等。
热处理通常使用高温蒸煮或压力加热，可使蛋白质水平解离，恢复抗原性。
酸碱处理则通过改变组织的PH值，使抗原解离。
第二步：抗体选择抗体是酶免疫组织化学染色技术的核心。
选择合适的抗体对于获得可靠的结果至关重要。
1. 一抗和二抗：酶免疫组织化学染色一般采用间接法。
首先，使用一抗与目标抗原特异性结合。
随后，使用标记有酶的二抗来识别和结合一抗，从而可视化目标抗原。
常用的二抗有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。
2. 选择合适的抗体：选择抗体需要考虑目标抗原的特异性和抗体的亲和性。
在选择抗体时，可以参考文献报道、试剂公司提供的抗体说明书和其他研究人员的建议。
第三步：酶标标记酶标标记是酶免疫组织化学染色技术的另一个关键步骤。
酶标标记抗体在靶抗原区域内催化底物，从而产生特定的染色反应。
1. 酶标物质的选择：常用的酶标物质有HRP和AP。
HRPHRP常用于DAB法（diaminobenzidine）和AEC法（aminoethyl carbazole）等反应体系中，可产生棕色至棕黑色反应。
免疫组化技术简介及相关临床应用
＋－－ ＋
淋巴结边缘区Ｂ细胞淋巴瘤 － － － －
结外边缘区Ｂ细胞淋巴瘤
－－－
－
（黏膜相关淋巴组织淋巴瘤）
垂体腺瘤的免疫组化鉴别诊断
泌乳素细胞腺瘤
LTH GH ACTH PSH/LH FSH CgA
＋－ －
－
－－
NSE KER
＋
＋
生长激素细胞腺瘤
－＋ －
－
促皮质激素细胞腺瘤 － － ＋
－
－－
－
＋
－－
20世纪80年代该项技术在国外开始应用 于诊断疾病，国内比国外约晚10年，即90 年代开始运用于疾病的病理诊断。
最近20多年来，该项技术得到飞速发展，特别 是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石蜡 切片上，因而大大促进了它在临床病理学上的应 用。
从开始发展至今，该项技术一直在基础医学和 临床研究中发挥重要作用,为疾病尤其是肿瘤性疾 病的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了强 有力的手段。
原暴露有一定的影响，但可进行抗原修 复，是免疫组化中首选的组织标本制作 方法。
常用染色方法
免疫组织化学技术按照标记物的种类不 同可分为： 1，免疫荧光法，标记物为荧光素，通 过荧光显微镜观察； 2，免疫酶法，以酶标记抗体，抗原抗 体反应后显色，通过光镜或电镜观察，目前 最常用； 3，其它如亲和组织化学法、免疫铁蛋 白法、免疫胶体金法及放射免疫自显影法等。
有如下基本特点：
1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确 4、形态与功能相结合
所用抗体及标本类型
所用抗体类型
常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗 体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分 泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免 疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的 抗原直接免疫动物后，从动物血中所获 得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所 产生的抗体混合物。
免疫组织化学检验技术—酶免疫组织化学检验技术(免疫学检验课件)
（二）技术类型 1.直接法
形成抗原一抗体一酶复合物 2.间接法
形成Ag-Ab1-Ab2﹡E复合物 3.酶标抗体三步染色法 为间接法的改良法
形成Ag-Ab1-Ab2﹡E-Ab3﹡E复合物
（三）方法评价
三、非标记抗体酶免疫组化染色法
（一）原理 该技术首先用酶免疫动物，制备效价高、特
异性强的抗酶抗体（Ab3），将酶与Ab3结 合形成复合物，然后利用第二抗体（Ab2） 作桥，Ab2既可与 Ab3的Fc段结合，又可与 结合在组织抗原上的第一抗体（Ab1）的Fc 段结合，经酶催化底物的显色反应，达到对 抗原的检测。
4.APAAP法 APAAP法就是以碱性磷酸酶代替HRP建立
的碱性磷酸酶（AP）- 抗碱性磷酸酶（AAP） 法，简称APAAP法。技术要点与PAP法相似。
（三）方法评价
该技术既可检测抗原，又可检测抗体。由于 酶不是标记在抗体上，而是经抗原（酶）抗 体反应与抗酶抗体结合，避免了酶标抗体的 缺点，提高了方法的敏感性。尤其是双桥 PAP法，是当今免疫组化技术中敏感性较高 的方法。
通过桥抗体（Ab2）将特异性识别组织抗原 的抗体（Ab1）与PAP复合物的抗酶抗体连 接起来Ag-Ab1-Ab2-PAP
3.双桥PAP法 该法是PAP法的改良，通过两次连接桥抗体
和PAP，形成Ag-Ab1-Ab2-PAP-Ab2PAP复合物，在抗原抗体复合物上结合了比 PAP法更多的酶分子，大大增强了方法的敏 感性。
酶标记抗体免疫组织化学染色法 非标记抗体酶免疫组织化学染色法
二、酶标记抗体的免疫组化染色法
（一）原的共价键作用将酶直接连接在抗体 （或抗抗体）上，酶标抗体（或抗抗体） 与组织内特异抗原或抗原抗体复合物反应 后，通过酶对底物的催化作用，生成不溶 性有色产物并沉淀在特定位置，达到对抗 原定性、定位、定量检测的目的。
免疫组织化学、免疫荧光染色
免疫组织化学（Immunohistochemistry，简称IHC）和免疫荧光染色（Immunofluorescence，简称IF）是两种常用的免疫细胞化学技术，用于在组织切片或细胞涂片上检测特定蛋白质或抗原的存在和分布。
这两种技术都依赖于抗体与抗原之间的特异性结合反应。
免疫组织化学是一种使用酶标记抗体来检测抗原的方法。
在这个过程中，首先将组织切片与特定的初级抗体（针对目标抗原的抗体）孵育，然后洗涤以去除未结合的抗体。
接下来，将切片与带有酶标记的次级抗体（针对初级抗体的抗体）孵育。
再次洗涤后，加入酶的底物，它会在酶的作用下产生颜色沉淀，使得抗原的位置在显微镜下可见。
常用的酶包括过氧化物酶和碱性磷酸酶。
这种方法的优点是可以产生永久性的记录，因为颜色沉淀是稳定的。
免疫荧光染色则涉及使用荧光染料标记的抗体来检测抗原。
在这个过程中，初级抗体和次级抗体都带有荧光标记。
当这些抗体与抗原结合时，它们发出的荧光可以在荧光显微镜下观察到。
这种方法的优点是可以同时使用多种颜色的荧光染料来检测多个不同的抗原，而且荧光信号通常比免疫组织化学的颜色反应更强。
两种技术都有其应用范围。
免疫组织化学常用于病理学诊断，因为它可以用于存档的组织样本，并且结果可以用常规显微镜观察。
而免疫荧光染色则更适合于研究目的，特别是在活细胞成像和多标记实验中，因为它可以提供更丰富的信息和更高的灵敏度。
总之，免疫组织化学和免疫荧光染色都是强大的工具，它们使得科学家能够在细胞和组织水平上可视化蛋白质的表达和定位。
选择哪种技术取决于实验的具体需求和可用的设备。
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● 4-氯-1-茶酚（4CN）～蓝色，易弥散，不能久保
存 ● 3.3，5.5-四甲基联苯胺(TMB) ～黄色
AKP底物：
AKP 常 用 的 底 物 为 α- 萘 酚 AS-B1磷酸盐
偶联试剂：固兰BB～蓝色 固红TR～红色
第三节 酶标记抗体法
酶标记抗体法（Enzayme Labelled antibody）是将酶通过共价键结合在
（二）碱性磷酸酶（AKP）
从小牛肠粘膜或大肠杆菌中提取
● ● ●
组织穿透能力较弱 内源性AKP较高 左旋物为葡萄糖，终产物稳定
●
体内无内源性GOD 分子量大，穿透力较弱
●
二、底物及其特点
酶＋底物→酶 底物→酶＋ 产物（显色）
·
HRP的底物： HRP的底物为低浓度的H2O2， 供氢体为胺类及酚类化合物。
HRP---多聚合物---特异性
抗体。
步骤：一步法
特点：快速，简便，特异性强，
敏感性高 但商品化种类不全， 价格昂贵
二、EnVision法
Enhanced Labelled Polymer System
原理：HRP ---多聚合物---第二 抗体
组织抗原 一抗 二抗 酶 多聚骨架
第一步
第二步
EnVisionTM方法
原理：HRP标记在第二抗体上，
抗原---特异性抗体---第 二抗体 HRP复合物
●
步骤：二步法
组织抗原 第一抗原 第二抗体 过氧化物酶
间接法
特点：敏感性较直接法高，一
种标记抗体能用于相应
动物制备的多种特异性 抗体，检测多种抗原。
但较直接法费时，非特
异染色稍重。
第四节 酶 抗 酶 法
●
制备抗酶抗体 制备PAP复合物
第八节 抗原定位及非特异染色
组织细胞
＊固定问题
＊脱蜡不彻底 ＊内源性过氧化物 ＊内源性生物素
抗原
＊抗原弥散 ＊抗原异常表达 ＊共同抗原决定簇
特异性抗体
＊非特异吸附 ＊抗体不纯 ＊交叉反应
第二抗体
＊ IgG交叉反应 ＊ 二抗不纯
标记物
＊质量 ＊纯度 ＊标记水平
底物溶液
＊ DAB ＊ H2O2
抗体分子上，制备成酶标记抗体，通 过抗体去寻找相应抗原。
一、直接法 原理：HRP标记在特异性抗体
（第一抗体）上，抗原--抗体 HRP复合物
●
组织抗原 第一抗体 过氧化物酶
直接法
步骤：一步完成
特点：方法简便、省时，专一
性强，非特异染色轻， 但敏感性差，一种标记 抗体只能检测一种抗原。
二、间接法
★ 酶在PH中性液内较稳定。 ★ 组织中不应存在与底物作用的内源性酶。
符合上述条件：
辣根过氧化物酶 碱性磷酸酶
葡萄糖氧化酶
（一）辣根过氧化物酶（HRP）
★ 分子量（40000），不会遮盖抗原的结合部位
★ 稳定，易获得较高纯度酶
★ 具有较高活性及特异性 ★ 可溶性佳，生成的产物不扩散 ★ 组织中内源性酶较少 ★ 可作用于多种底物，产生不同颜色 ★ HRP穿透力强，易进入细胞内
特点：敏感性高，特异性强， 方法简便
第六节 多聚合物酶法
HRP---多聚合物---抗体 一、Epos法 Enhanced staining polymer one-step
多聚合物酶法
组织抗原 一抗
HRP
多聚骨架
EPOS 方法
原理：采用一种具有惰性的多聚
化合物作为骨架，将特异
性抗体和HRP，同时标记 在多聚合物分子上，形成
特点：
敏感性高：（1 mole复合物中含70mole HRP和 10 mole第二抗体） 特异性强： 复合物内无内源性Avidin和Biotin 的干扰。
第七节 基本操作步骤
1. 抗原修复
2. 内 源 性 过 氧 化 物抑制 3. 正常血清封闭 4. 第一抗体 5. 第二抗体 6. 酶标记体 7. DAB- H2O2显色
●
组织抗原 第一抗体 第二抗体 第三抗体（抗酶抗体） HRP
酶桥法
一、PAP法
原理：抗原---特异性抗体---第
二抗体（桥抗体）--PAP复合物 步骤：三步法
组织抗原 第一抗原 第二抗体 PAP复合物 HRP
PAP法
特点： 敏感性较高，背景染色较轻
但特异性抗体与PAP必须为 同一种属动物
二、双PAP法： 原 理 ： 在 PAP 的 基 础 上 再 重 复 第二抗体和PAP复合物 抗原---特异性抗体---第二抗体（桥抗 体）---PAP ---第二抗体--- PAP复合物
HRP显色反应： HRP＋H2O2 电子供体 HRP
＋H2O＋电子供体（氧化型）
电子供体被氧化后，迅速改变
颜色，通过聚合等反应，生成不溶 性有色颗粒，并就地原位沉淀。
HRP常用的电子供体：
● 3.3-二氨基联苯胺(DAB)～棕色 ● 氨乙基卡巴唑(AEC)～红色，易溶于有机溶剂， 易扩散，用水溶性封固剂。
ABC法
免疫酶特点：
信号定位准确 标本可长期保存 阳性标记与病变关系 方法简便，易推广
第二节
一、酶及其特点
酶选择标准：
酶 和 底 物
★ 该酶用细胞化学易于被检出，能被光镜 或电镜观察。 ★ 酶反应产物须稳定，不扩散，具有良好 定位。
★ 酶易于纯化，获得纯制品。
★ 酶与免疫球蛋白结合后，不丧失其活性。
第二抗--- Avidin Biotin HRP
● ●
组织抗原
第一抗体
第二抗体 HRP 生物素
卵白素
ABC法
步骤：三步法
特点：敏感性较高，特异性强， 应用范围广
●
某些脏器存在内源性生物素
干扰
●
Avidin与核酸及细胞膜中磷脂 有非特异反应
SABC法 Streptavidin biotin Peroxidase
操作
＊复染
＊抗体稀释度 ＊孵育时间 ＊ PAS洗涤
第九节 免疫酶方法评价
免疫酶组织化学技术
第一节 基 本 原 理
抗原＋抗体（特异性）
＋酶标记抗体，通过酶与 底物作用生成有色反应物，
定位组织或细胞内抗原的 一门技术。
免疫酶组化
免疫学 (抗原抗体反应)
+
酶细胞化学 (底物显色反应)
特异性
敏感性
定位性
可视性
PAP法
免疫酶组织化学基本组成： 抗原 ↓ 抗体 ↓ 放大系统 ↓ 显色系统
组织抗原 第一抗原 第二抗体 PAP复合物 HRP
双PAP法
组织抗原 第一抗原
第二抗体 PAP复合物
HRP
双PAP法
步骤：五步法 特点：敏感性较高
缺点：但步骤多，费时，非特 异背景重
三、APAAP法
原理：抗原---特异抗体---第二 抗体--- APAAP复合物 步骤：三步法
APAAP法
特点：非特异背景较轻，不受内 源性酶的干扰。 但产物易溶于有机溶剂
第五节 卵白素---生物素
Avidin为一种硷性糖蛋白，由四个相同
亚基组成 Biotin小分子维生素 Avidin和Biotin具有较高亲和力
一 、ABC法
Avidin Biotin Complex 原理：酶标记Biotin形成酶素化 Biotin
酶素化Biotin＋Avidin --- ABC 复合物 抗原---特异抗体--- Biotin标记
Complex SABC法已代替ABC法
二、LSAB法
Labelled Streptavidin Biotin Method
原理： ● Biotin标记第二抗体
LSAB法
●
HRP标记Avidin 抗原---特异性抗体---Biotin标记
第二抗体---Avidin HRP复合物
●
步骤：三步法