提取酵母质粒
酵母双杂方法(改)
培养基（1）细菌培养基LB培养基（1 L）：5 g酵母提取物，10 g氯化钠，10 g胰蛋白胨，pH 7.0；SOB培养基（1 L）：5 g酵母提取物，0.5 g氯化钠，20 g胰蛋白胨，2.5 mL 1 M氯化钾，pH 7.0，高压灭菌后在每100 mL的小份中加1 mL 1 M氯化镁。
（2）酵母生长培养基100 mL YPD培养基：1 g酵母提取物，2 g胰蛋白胨，0.02 mL 10 M NaOH，双蒸水95 mL，固体加2 g琼脂粉。
高压后加入5 mL 40%葡萄糖；100 mL YPDA培养基：基本配方同上。
高压后加入0.8 mL 100×Ade和5 mL 40%葡萄糖；100 mL SD/-Leu培养基：0.7 g无氨基酵母氮源，0.07 g四缺物, 0.02 mL 10 M NaOH，双蒸水95 mL，固体加2 g琼脂粉。
高压后加入0.8 mL 100×Ade，5 mL 40%葡萄糖，0.2 mL 500×Trp和0.2 mL 500×His。
100 mL SD/-Trp培养基：0.7 g无氨基酵母氮源，0.07 g四缺物, 0.02 mL 10 M NaOH，双蒸水95 mL，固体加2 g琼脂粉。
高压后加入0.8 mL 100×Ade，5 mL 40%葡萄糖，1 mL 100×Leu和0.2 mL 500×His；100 mL SD/-Trp/-Ade培养基：基本成分同上。
高压后加入5 mL 40%葡萄糖，1 mL 100×Leu和0.2 mL 500×His；100 mL SD/-Trp/-His培养基：基本成分同上。
高压后加入0.8 mL 100×Ade，5 mL 40%葡萄糖和1 mL 100×Leu；100 mL SD/-Trp/-Leu培养基：基本成分同上。
高压后加入0.8 mL 100×Ade，5 mL 40%葡萄糖和0.2 mL 500×His；100 mL SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基：基本成分同上。
质粒抽提原理和详细操作步骤
质粒抽提,实验室必备技能之一质粒质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA 分子。
质粒抽提从细菌中分离质粒DNA的方法包括3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。
采用强碱液、加热或溶菌酶（主要针对革兰氏阳性细菌）可以破坏菌体细胞壁，十二烷基磺酸钠（SDS）和 TritonX-100（一般很少使用）可使细胞膜裂解。
经溶菌酶和SDS或 Triton X-100处理后，细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上，同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多，易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。
当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA变性，而共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA，简称cccDNA）的两条链不会相互分开。
当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性，而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起，而质粒DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。
质粒抽提最常用的方法是碱裂解法，它具有得率高、适用面广、快速和纯度高等特点。
当然，碱裂解法也有缺陷：容易导致不可逆的变性。
要降低不可逆的变性，就要控制好碱裂解的时间。
碱裂解法抽提质粒需要用到以下三种溶液溶液Ⅰ50 mmol/L 葡萄糖，25 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0），10 mmol/L EDTA（pH 8.0），在15 psi 压力下蒸汽灭菌15 min，4℃保存。
溶液Ⅱ0.2 mmol/L NaOH（从10 mmol/L 贮存液中现用现稀释），10 g/L SDS（室温保存）。
溶液Ⅲ5 mol/L乙酸钾 60.0 mL，冰乙酸 11.5 mL，无菌水28.5 mL，4℃保存，使用时置于冰浴中。
下面介绍一下碱裂解法小提质粒的具体操作：01柱平衡：向吸附柱中加入500 μl平衡Buffer，12000 rpm离心30-60 s，倒掉收集管中的废液；注意：吸附柱平衡后可最大限度激活硅基质膜，提高质粒的得率；吸附柱平衡后应立即使用，长时间放置会影响其吸附效果。
vazyme质粒提取原理
vazyme质粒提取原理
Vazyme质粒提取原理
质粒提取是分子生物学实验中常用的一项技术，用于从细菌或酵母等生物体中提取质粒DNA。
Vazyme质粒提取试剂盒是一种高效的质粒提取方法，采用纯化酶和离心柱的组合，能够快速、简便地提取高质量的质粒DNA。
Vazyme质粒提取试剂盒的原理基于离心柱纯化技术。
首先，将待提取的细菌培养物经离心分离得到菌落，然后用缓冲液洗涤去除细胞外DNA和细胞壁碎片等杂质。
接下来，加入裂解液将细菌细胞裂解，释放出质粒DNA。
裂解液中的蛋白酶A能够迅速降解细菌蛋白质，同时蛋白酶K能够去除DNA酶活性，保护质粒DNA的完整性。
在裂解液中加入乙酰酸钠，能够使DNA与蛋白质发生离解，从而使DNA在裂解液中保持可溶性。
此时，加入乙酸酰胺使DNA重新沉淀，然后用洗涤缓冲液洗涤沉淀，除去杂质。
接下来，使用洗涤缓冲液进行洗涤，去除残留的盐离子和污染物。
最后，用纯化缓冲液溶解DNA沉淀，得到高质量的质粒DNA。
Vazyme质粒提取试剂盒具有操作简单、纯化效果好、提取质粒DNA 纯度高等特点。
通过这种方法提取的质粒DNA可用于后续的克隆、测序、PCR等分子生物学实验。
与传统的提取方法相比，Vazyme质粒提取试剂盒能够更快速、更高效地提取质粒DNA，节省实验时间，
提高实验效率。
Vazyme质粒提取试剂盒是一种高效、简便的质粒提取方法，能够快速提取高质量的质粒DNA。
通过这种方法，科研人员可以更方便地进行后续的分子生物学实验，为科学研究提供有力支持。
提取质粒的原理
提取质粒的原理质粒是一种环状的DNA分子，存在于细菌、酵母等微生物细胞中，具有自主复制和传递的能力。
质粒在基因工程中扮演着重要的角色，可以被用来携带外源基因并在宿主细胞中表达。
因此，提取质粒是基因工程实验中必不可少的步骤之一。
本文将介绍提取质粒的原理及其相关技术。
提取质粒的原理提取质粒的原理基于细胞裂解和质粒分离的过程。
一般来说，提取质粒的步骤包括以下几个方面：1. 细胞裂解首先需要将含有质粒的细胞进行裂解，使质粒从细胞内部释放出来。
细胞裂解的方法有多种，包括机械破碎、超声波破碎、化学裂解等。
其中，化学裂解是最常用的方法之一，其原理是利用化学试剂破坏细胞壁和细胞膜，使细胞内部的物质释放出来。
常用的化学试剂包括SDS、EDTA、蛋白酶K等。
2. 分离质粒细胞裂解后，需要将质粒从其他细胞组分中分离出来。
质粒的分离方法有多种，包括离心、柱层析、电泳等。
其中，离心是最常用的方法之一，其原理是利用离心力将不同密度的物质分离开来。
在离心过程中，质粒会沉积到离心管底部形成沉淀，其他细胞组分则会在上层形成上清液。
此时，可以将上清液倒掉，留下质粒沉淀。
3. 纯化质粒分离出的质粒可能会受到其他杂质的污染，因此需要进行纯化。
质粒的纯化方法有多种，包括酚-氯仿法、硅胶柱层析法、离子交换柱层析法等。
其中，酚-氯仿法是最常用的方法之一，其原理是利用酚和氯仿的不同溶解度将DNA、RNA和蛋白质分离开来。
在酚-氯仿法中，质粒会在上层形成一个白色的粘稠物质，其他杂质则会在下层形成。
提取质粒的技术提取质粒的技术有多种，包括常规提取法、快速提取法、自动提取法等。
其中，常规提取法是最常用的方法之一，其步骤如下：1. 细胞裂解将含有质粒的细胞进行裂解，使质粒从细胞内部释放出来。
常用的化学试剂包括SDS、EDTA、蛋白酶K等。
2. 分离质粒将裂解后的细胞进行离心，分离出质粒沉淀。
3. 纯化质粒将分离出的质粒进行酚-氯仿法纯化。
4. 洗涤质粒将纯化后的质粒进行洗涤，去除残留的酚和氯仿。
酵母质粒的提取注意事项
酵母质粒的提取注意事项1. 实验前准备在进行酵母质粒提取实验之前，需要准备好所需材料和试剂。
常用的材料包括酵母培养物、细胞裂解液、酶切酶、离心管、离心机等。
试剂方面，需要注意购买高质量的试剂，并按照说明书的要求保存和使用。
2. 细胞培养与处理在进行酵母质粒提取实验之前，需要进行酵母菌的培养和处理。
首先，将酵母菌接种到含有所需培养基的琼脂糖平板上，培养一夜，然后挑取单个菌落转移到液体培养基中，继续培养至所需菌量。
此外，在进行酵母菌细胞处理时，需要注意细胞浓度的控制，避免浓度过高或过低对实验结果产生影响。
3. 细胞裂解与质粒提取酵母菌细胞裂解是酵母质粒提取的重要步骤。
一般情况下，细胞裂解可通过化学方法、机械方法或酶解方法实现。
其中，酶解方法常用于酵母菌质粒提取，具有操作简单、效果较好的特点。
在进行细胞裂解时，需要注意裂解液的选择和浓度，以及裂解时间和温度的控制，以确保细胞完全裂解，质粒DNA充分释放。
4. 质粒DNA纯化与保存在进行质粒提取后，需要对提取得到的质粒DNA进行纯化和保存。
纯化可以通过酚/氯仿法、硅胶柱纯化法或商用质粒纯化试剂盒等方法实现。
在选择纯化方法时，需要根据实验要求和样品特点进行选择，并根据说明书的要求进行操作。
纯化后的质粒DNA应及时保存，可以用TE缓冲液稀释保存在-20°C或-80°C的冰箱中，以避免质粒DNA的降解和损失。
5. 实验操作注意事项在进行酵母质粒提取实验时，还需要注意以下几点操作事项：- 实验室操作要严格遵守无菌操作的要求，以避免外源性DNA的污染。
- 实验过程中注意个人防护，佩戴手套、口罩和实验服，避免实验中的化学品对身体造成伤害。
- 实验前应仔细阅读所用试剂的说明书，了解其性质和使用方法，按照要求准确称取和调配试剂。
- 实验中的离心操作要注意离心管的放置位置和离心速度的选择，以避免样品的溢出和离心管的破裂。
- 实验后要及时清洗实验台面和相关器材，保持实验环境的整洁和无菌。
抽取质粒的基本原理
抽取质粒的基本原理
抽取质粒的基本原理是利用纯化和分离的方法从细胞中提取质粒DNA。
质粒是细菌或酵母等微生物细胞内自主复制的环状DNA分子。
抽取质粒的基本步骤如下：
1. 培养细胞：首先，需要培养含有目标质粒的细菌或酵母菌株。
这可以通过选择性培养基以及加入适当浓度的抗生素来实现，使只有含有目标质粒的细胞能够生长和存活。
2. 收获细胞：将培养好的细胞离心，以去除培养基和细胞代谢产物。
3. 细胞裂解：将细胞用适当的裂解剂（如SDS、尿素等）处理，以破坏细胞壁和细胞膜，使细胞内容物释放出来。
此时，目标质粒DNA也被释放出来。
4. 质粒分离：通过高速离心，将裂解后的细胞内容物离心分离，将含有目标质粒DNA的上清液分离。
5. DNA纯化：将分离得到的上清液经过一系列的纯化步骤，如酚/氯仿提取、等渗乙醇沉淀等，将目标质粒DNA纯化。
6. 检测和测定：最后，对纯化得到的质粒DNA进行质量和浓度的检测和测定，
以便后续实验的使用。
需要注意的是，抽取质粒的详细步骤可能因实验目的和使用的技术方法而有所不同，但上述基本原理是大致相同的。
6分钟提取质粒
6分钟提取质粒
"6分钟提取质粒" 通常指的是在分子生物学实验中，从细菌中提取质粒的过程，该过程可以在相对较短的时间内完成。
提取质粒是为了获取质粒中的目标基因、DNA片段或其他重要的遗传物质。
以下是一般的质粒提取步骤，这个过程可以在大约6分钟内完成：
1. 培养菌株：
- 开始前，先在培养基中培养含有目标质粒的大肠杆菌（E. coli）菌株。
2. 离心：
- 将培养好的菌液进行离心，将菌体沉淀。
3. 去除培养基：
- 弃去上清液，保留含有大肠杆菌的菌体沉淀。
4. 溶解：
- 使用缓冲液溶解菌体，使DNA释放。
5. 加入溶解剂：
- 加入一些溶解剂，如碱性SDS（十二烷基硫酸钠），破坏膜脂，释放DNA。
6. 快速离心：
- 进行瞬时离心，将膜脂等杂质快速沉淀。
7. 取上清：
- 取上清液中含有的质粒DNA。
8. 沉淀：
- 加入醋酸等溶液，使DNA沉淀。
9. 洗涤：
- 对DNA沉淀进行洗涤，去除残余的盐和其他污染物。
10. 溶解：
- 最后，用适当的缓冲液溶解沉淀的质粒DNA。
这样的质粒提取方法通常使用快速、高效的离心和溶解步骤，使得整个过程可以在相对较短的时间内完成。
实际提取时间可能因具体实验方案和使用的提取试剂盒而有所不同。
酵母高纯度质粒大量快速提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
酵母高纯度质粒大量快速提取试剂盒（离心柱型）目录号：PL19目录编号包装单位PL1901 10次适用范围：适用于大规模高纯度酵母质粒制备试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次（PL1901）RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl破壁酶4℃1g（常温运输）溶液YP1 4℃75 ml溶液YP2 室温75 ml溶液YP3 室温110 ml去蛋白液PD 室温100 ml漂洗液WB 室温25 ml x 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液YP1（终浓度100µg/ml）置于4℃保存。
如果溶液YP1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液YP1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液YP2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞并结合破壁酶特异消化酵母细胞壁，能在1小时内从酵母培养液中分离出高纯度质粒DNA。
酵母收集后,加入破壁酶去除细胞壁后,然后碱裂法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
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1.接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mL YNB(补加氨基酸营养物)培养基中，30℃振荡培养
过夜。
2.第二天取一滴菌液于进行显微镜下观察,目镜用16,物镜用40倍观察细胞壁破碎前的状
态,其成杆状,流动性比较下.
3.取10ml的培养酵母菌液,5000g离心3min,弃上清液.加入5ml的1倍TE悬浮.
4.将悬浮液倒入高压破壁仪的样品管中,利用高压破碎机进行破碎细胞壁,压力加到
20Mpa,停留15s,降压,反复来回压3次.取出细胞液,取一滴于显微镜下观察,如果细胞呈不规则的球状时,而且其流动性比较大,说明其细胞壁已经破碎成为原生质体.
5.取2个EP管,每管加入1.5ml上述的细胞液,12000g离心5min,收集原生质体.弃取上清
液,每管加入300ul10%的SDS溶液,混匀冰浴5min,进行破原生质体.
6.然后加入150ul的tris饱和酚,和150ul的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1),混
匀,12000g,离心10min.
7.将水相移到另一EP管中,加入等体积的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1), 混
匀,12000g,离心10min.
8. 将水相移到另一EP管中,加入1/10体积的3M KAC溶液和2倍体积的无水乙醇,放入
-20℃冰箱中
9.1h,12000g离心10min,倒出乙醇,等干燥后加入1ml的70%的无水乙醇,混匀,12000g,离
心10min.
10.弃去乙醇,等室温干燥后,每管加入20ul的TE溶液(如要去处RNA酶,加入1ul的
100mg/ml浓度的RNA酶),放入-20℃冰箱即可.
11.跑电泳进行检测是否从酵母菌中提出质粒了.
我给你介绍两个必叫简单点的酵母破壁方法，非常实用，我作过很多实验，这两个方法是我自己总结出来的，希望对你有用，好久没有来DXY了，很想念这里阿！
酵母的细胞壁比较厚,不易破，而且细胞壁中含有的一些成分容易影响以后的实验，所以破壁的步骤非常关键！其他步骤只要你按照说明就可以了。
1. 酚氯仿剧烈振荡方法破壁：培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后，用70ulTE 缓冲液重旋！加入50ul玻璃珠（sigma公司），加入80-100ul酚氯仿，剧烈振荡5-10分种后，使用氯仿抽取去除酚和蛋白，然后按照其他步骤沉淀就可以得到你的质粒，DNA的提取也可以使用这种方法。
2.反复冻融破壁：培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后，加入200ul缓冲液[2% Triton X-100, 1% SDS, 100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA (pH 8.0)]，使用液氮和96-98度沸水反复冻融3-5次，然后使用酚氯仿抽提蛋白！其余步骤参考其他文献
3.下面两个文献对你会有所帮助！请参考！不错的方法！
For yeast plasmid extraction we use the following method:
Buffer A: 100 mM NaCl 10 mM Tris-HCl (pH 8) 1 mM EDTA 0.1 % SDS
1. Culture the plasmid-harboring cells overnight in 1 - 2 ml of medium. Cells with 1 - 4 OD600/ml are needed.
2. Pulse 5-10 sec at 15'000 rpm (maximum speed) (in an Eppendorf tube).
3. Throw away the supernatant.
4. Resuspend in 200 µl of buffer A, keep
cells on ice.5. Add glass beads just before the solution surface, mix with a vortex during 1 minute and sonicate.6. Add 200 µl of phenol.7. Vortex another minute.8. Centrifuge at 15'000 rpm for 1 minute.9. Throw away the phenol phase.10. Add 200 µl of phenol and reextract the same way.11. Take the water solution (about 200 µl) which contains the plasmids and treat with Glassmilk: add 600 µl of NaI solution and 5 µl Glassmilk suspension, put the tubes on the wheel for 5 min., then pellet the Glassmilk/DNA complex (pulse 5 sec), remove the supernatant and set aside, then wash the pellet 3 times with 300 µl New Wash, then pulse for 5 sec to remove the New Wash.12. Elute the DNA into water (20 µl) or TE buffer.
When not using the GeneClean-kit, another protocol can be applied:Steps 1 to 9 remain the same as above. Then:
10. Add 200 ml phenol/chloroform 1:1 and vortex.11. Centrifuge at 15'000 rpm for 1 minute.12. Throw away the phenol phase.13. Add others 200 µl of chloroform and reextract the same way.14. Take the water phase and adjust the volume to 400 ml with water.15. Add 40 ml 3M NaCl.16. Add ca. 1 ml of ethanol 100 %.17. Put the tube at -20 0C for about 10 min..18. Centrifuge at 4 0C for 10 min. at maximum speed.19. Throw away the supernatant.20. Wash the pellet once with ethanol 80 % and once with ethanol 100 %.21. Dry the pellet by putting the tube upside down on a Kleenex.22. Resuspend the pellet in 50 ml TE buffer.。