不连续凝胶电泳示意图
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不连续凝胶电泳示意图
（三）聚丙烯酰胺胶体的制备
制胶模 1 梳形样品槽模板 2 长玻璃板（后面） 3 短玻璃板（前面） 4 U形橡胶框
（四）聚丙烯酸胺凝胶电泳的特点与用途 • 1、电渗作用比较小 • 2、凝胶孔径可调 • 3、电泳分辨率高 • 4、化学稳定性和热稳定性好 • 5、机械强度高
二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
（二）按有无固体支持物分类
1、按有无固体支持物可以分为 两2、类支：持自物由电泳电根泳据和所支用持的支物持电物泳不。
同又可分为纸电泳、醋酸纤维薄膜 电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺 凝胶电泳（PAGE）、SDS－聚丙 烯酰胺凝胶电泳
第二节 常用电泳分离技术ห้องสมุดไป่ตู้
一、聚丙烯酰胺凝胶电泳
（一）基本原理 1、凝胶的聚合及孔径 2、电泳效应 （1）连续性电泳系统的凝胶浓度一致，凝胶中的pH值
第八章 电泳分离技术
第一节 电泳的基本理论及分类
一、原理
（一）概念及原理 1、电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身
带相反电荷的电极移动的现象。
2、原理
电泳技术就是利用在电场作用下，由于 待分离样品中各种分子带点性质以及分子本 身大小、性状等性质的差异，使带电分子产 生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、 鉴定或提纯。
选择聚丙烯酰胺凝胶浓度参考值
样品 蛋白质（酶） 核酸（RNA）
分子量范围
<104 (1～4)×104 4×104～1×105 1×105～5×105
>5×105
<104 104～105 1×105～2×106
适宜的凝胶浓度 (T%)
20～30 15～20 10～15 5～10 2～5
15～20 5～10 2～3.6
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳
溶液的离子强度 电渗现象 环境因素
聚丙烯酰胺凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶
两单体构成的人工合成凝胶 丙烯酰胺（Acr） N，N-亚甲基双丙烯酰胺（Bis）
作为电泳介质的优点 自由调节孔径；韧性好；性质稳定； 无电渗作用；无色透明。
合成聚丙烯酰胺凝胶的两种方法
化学合成系统 过硫酸铵（AP） 四甲基乙二胺（TEMED）
实验结果的分析
相关理论
表-1 血清中各蛋白质的相关特性
种类
分子量(万） PI
分 布(%)
清蛋白
6.9
6.1
55
1-球蛋白 2.1~30.8 7.3
5.0
2-球蛋白 4.1~72.5 6.8
9.0
-球蛋白
1.2~25 7.6
13.0
-球蛋白
15.6
8.0
11.0
-球蛋白
-球蛋白 2-球蛋白 1-球蛋白 清蛋白 前清蛋白
光学合成系统 核黄素 四甲基乙二胺（TEMED）
聚丙烯酰胺凝胶浓度与交联度
凝胶总浓度T=[(a+b)/m]×100% 交联剂百分比C=[b/(a+b)] ]×100%
a为Acr克数，b为Bis克数， m为缓冲液体积（ml) a:b＜10 凝胶变脆、硬、呈乳白色 a:b＞100易断裂 （一般a:b=30左右，根据T可适当调整））
蛋白质聚丙烯胺凝胶电泳
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（圆盘电泳）
电泳的概念
带电粒子（胶体颗粒、离子等）在电场 的作用下在特定的介质中向与其电荷性 质相反的电极方向定向泳动的现象。
广泛应用于生物大分子的分离和鉴定
电泳的基本原理
利用物质的两个差异来分离物质
电荷差异
电荷性质 电荷数量
聚丙烯酰胺凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶
两单体构成的人工合成凝胶 丙烯酰胺（Acr） N，N-亚甲基双丙烯酰胺（Bis）
作为电泳介质的优点 自由调节孔径；韧性好；性质稳定； 无电渗作用；无色透明。
合成聚丙烯酰胺凝胶的两种方法
化学合成系统 过硫酸铵（AP） 四甲基乙二胺（TEMED）
实验结果的分析
相关理论
表-1 血清中各蛋白质的相关特性
种类
分子量(万） PI
分 布(%)
清蛋白
6.9
6.1
55
1-球蛋白 2.1~30.8 7.3
5.0
2-球蛋白 4.1~72.5 6.8
9.0
-球蛋白
1.2~25 7.6
13.0
-球蛋白
15.6
8.0
11.0
-球蛋白
-球蛋白 2-球蛋白 1-球蛋白 清蛋白 前清蛋白
光学合成系统 核黄素 四甲基乙二胺（TEMED）
聚丙烯酰胺凝胶浓度与交联度
凝胶总浓度T=[(a+b)/m]×100% 交联剂百分比C=[b/(a+b)] ]×100%
a为Acr克数，b为Bis克数， m为缓冲液体积（ml) a:b＜10 凝胶变脆、硬、呈乳白色 a:b＞100易断裂 （一般a:b=30左右，根据T可适当调整））
蛋白质聚丙烯胺凝胶电泳
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳（圆盘电泳）
电泳的概念
带电粒子（胶体颗粒、离子等）在电场 的作用下在特定的介质中向与其电荷性 质相反的电极方向定向泳动的现象。
广泛应用于生物大分子的分离和鉴定
电泳的基本原理
利用物质的两个差异来分离物质
电荷差异
电荷性质 电荷数量
(色谱分析)凝胶电泳
25
2021/1/13
26
凝胶干燥器
2021/1/13
27
凝胶成像系统
2021/1/13
28
SDS－PAGE测定蛋白质 相对分子质量
2021/1/13
29
实验过程
安装电泳槽
凝胶制备
电泳
样品处理与加样
剥胶与固定
染色与脱色
2021/1/13
30
实验过程流程图
2021/1/13
31
考马斯亮蓝染色法
2021/1/13
49
蛋白质组学和双向电泳技术
一、蛋白质组学产生背景 1. 20世纪中后期，生命科学研究进入了分子生物学时代。随 着人类基因组全序列测定，生命科学跨入了后基因组时代。 2. 因mRNA的表达情况不能直接反应蛋白质的表达水平。 3. 蛋白质有自身特有的活动规律，如动态修饰、加工、转运 定位、结构形成、代谢等，均无法从基因组水平上的研究获 知。蛋白质构象更难于只靠DNA序列来解释。 4. 蛋白质才能动态反映生物系统所处的状态。 20世纪90年代中期，国际上萌发了蛋白质组学。
稳定的线性pH梯度中电泳，结果导致每种 蛋白质分子迁移到等于其pI的pH处（此时蛋
白质分子的净电荷为零），最终聚集形成一 个很窄的蛋白区带
2021/1/13
40
+
pH 3
+
pH 3
2021/1/13
+
pH 3
+
pH 3
pH 7.5 pH 7.5 pH 7.5 pH 7.5
–
pH 10
–
pH 10
–
465nm
棕红色
在酸性酸条性溶件液下中，蛋白质与考 马斯亮兰R-250结合形成蓝 色复合物（595nm处最大吸 收与峰蛋）白质，疏蓝水色区结的合深浅与蛋白 质浓度成正比关系
(色谱分析)凝胶电泳
2-DE使得分离分辨率大大提高，获得的信息也明 显增多，是目前电泳技术中分辨率最高、信息获得 最多的技术，常用于分析复杂样品及绘制蛋白质组 图谱，是蛋白质组学研究的核心技术
2020/10/4
54
2020/10/4
55
二维电泳基本操作流程
① 样品准备 ② 等电聚焦（IEF, 第一维） ③ SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE,第二维) ④ 染色 ⑤ 图像分析 ⑥ 质谱分析 ⑦ 数据库分析，鉴定蛋白
CH=CH2
CH CH2 ( CH CH2 )n
形
C=O
C=O
C NH2
成
NH
O
NH
O
凝 胶
CH2
催化剂
+ 2nCH2=CH C NH2
CH2
的
NH
NH
O
反
C=O
C=O
C NH2
应
CH=CH2
式
CH CH2 ( CH CH2 )n
2020/10/4
6
聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分子量的关系
C=2.6%
2020/10/4
在电场中以一定的迁移率从负极移向正极
62
2020/10/4
63
天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉，从石 花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。
2020/10/4
64
D-半乳糖
3，6-脱水-L-半乳 糖
琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力 的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成 大网孔型凝胶。
稳定的线性pH梯度中电泳，结果导致每种 蛋白质分子迁移到等于其pI的pH处（此时蛋
白质分子的净电荷为零），最终聚集形成一 个很窄的蛋白区带
2020/10/4
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2020/10/4
55
二维电泳基本操作流程
① 样品准备 ② 等电聚焦（IEF, 第一维） ③ SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE,第二维) ④ 染色 ⑤ 图像分析 ⑥ 质谱分析 ⑦ 数据库分析，鉴定蛋白
CH=CH2
CH CH2 ( CH CH2 )n
形
C=O
C=O
C NH2
成
NH
O
NH
O
凝 胶
CH2
催化剂
+ 2nCH2=CH C NH2
CH2
的
NH
NH
O
反
C=O
C=O
C NH2
应
CH=CH2
式
CH CH2 ( CH CH2 )n
2020/10/4
6
聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分子量的关系
C=2.6%
2020/10/4
在电场中以一定的迁移率从负极移向正极
62
2020/10/4
63
天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉，从石 花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。
2020/10/4
64
D-半乳糖
3，6-脱水-L-半乳 糖
琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力 的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成 大网孔型凝胶。
稳定的线性pH梯度中电泳，结果导致每种 蛋白质分子迁移到等于其pI的pH处（此时蛋
白质分子的净电荷为零），最终聚集形成一 个很窄的蛋白区带
第13章_电泳技术
1醋酸纤维素薄膜电泳
电泳仪器
架膜
加盖
接导线，开机
实验操作：
浸泡 将醋酸纤维素薄膜在缓冲溶液中浸泡20min，
取出识别光面和麻面。
点样 用镊子将薄膜置于滤纸上，吸收多余的液体，
用铅笔在薄膜麻面一端2cm处画一细线，利用 载玻片一侧蘸取样品，于细线处点样。
电泳 将薄膜麻面朝下，平悬于电泳槽支架的滤纸
㈢电泳结束后的变化 所有的载体两性电解质分子以增加 pI级数的办法将分别在阳、阴极之间到 达它们自己的位置而给出一个pI梯度。
优点： 混合物可以达到完全分离，而且只 要电场保持不变，扩散和对流迁移就不 会影响分离的有效性。
缺点： ①.载体两性电解质对产品产生污染；
②.pH梯度的稳定性不高；
定义：等速电泳是根据分子电荷的差别而不是分 子大小差别来进行物质分离的。仅适用于同种 电荷的分离。 原理:在上层凝胶层中，以迁移率最大的阴离子 为前导离子（Cl-)，迁移率最小的阴离子为末 尾离子（甘氨酸离子），以阳离子为反离子， 电泳开始时，将含有目标蛋白质的料液加入到 前导离子和末尾离子之间。
等速电泳特点
①分子量要小，以便与被分离大分子物质 分离； ②化学性质稳定； ③各成分的pI彼此接近，并在其pI值附近 有良好的缓冲能力； ④在pI处具有足够的电导，导电性均匀； ⑤两性电解质载体的数目要足够多； ⑥可溶性好； ⑦对280nm的紫外光没有或仅有很低的吸
2.载体两性电解质的合成
加成反应
丙烯酸+多乙烯多胺
不连续凝胶电泳：
最基本的凝胶电泳的凝胶柱中凝胶浓度和pH值 均一，为了提高凝胶电泳的分离性能，人们开发 了不连续凝胶电泳法。
电泳过程示意图
A为电泳前3层凝胶排列顺序，3层胶中均有快离子、慢离子 B显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄的区带。 C显示蛋白质样品分离成数个区带。
聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验过程
安装电泳槽凝胶制备源自电泳样品处理与加样
剥胶与固定
染色与脱色
实验步骤
一、制胶
1.配胶
配胶应根据所测蛋 白质相对分子质量范 围选择适宜的分离胶 浓度。由于SDS-PAGE 有连续体系和不连续 体系两种，两者各有 不同缓冲体系，因而
蛋白质的相对分子量 分离胶的浓
的范围
度
勇于开＜始1，04才能找到成 20%～30%
❖ 注意： ❖ TEMED量多少都会影响催化作用，须在碱性
条件下聚合
❖ 分子氧存在，聚合不完全，须去除分子氧， 隔绝氧
❖ 升高温度能提高聚合，降低温度能延迟聚合
（2）光聚合：核黄素-TEMED系统
❖ 核黄素（riboflavin）在光照下（可见光或紫外 光）分解，其黄素部分被还原成无色型，但在有 氧条件下无色型又被氧化成带有游离基的黄素， 其也能使Acr和Bis聚合形成凝胶。
（十二烷基硫酸钠，sodium dodecyl sulfate, SDS)
阴离子去污剂 变性剂 助溶性试剂
断裂分子内和分子间的氢键 分子去折叠 破坏蛋白质分子的二级和三级结构
❖ (2)强还原剂 巯基乙醇、二硫苏糖醇（DTT）
使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂，这样分离出的 谱带即为蛋白质亚基。
实验原理
不同分子量范围的蛋白质应选用不同的凝胶浓度。
蛋白质的分子量在15-200 kD之间时，电泳迁移率 与分子量的对数呈线性关系，因此SDS-PAGE不仅 可以分离鉴定蛋白质，还可以根据迁移率的大小测 定蛋白质亚基的分子量。
PAGE的浓度与孔径的关系
❖ PAGE孔径的大小主要由Acr和Bis这两种单体的 浓度决定。可以根据要分离物质分子的大小，选 择合适的单体浓度。
(色谱分析)凝胶电泳
度越快
蛋白质分子的大小和形状 分子质量越小、形状越接近球形，在电
场中迁移速度越快
2020/7/22
12
SDS-PAGE
1967年由Shapiro建立。 1969年由Weber和Osborn进一步完善。
他们发现样品介质和丙烯酰胺凝胶 中加入离子去污剂（SDS）以后,蛋白质 亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子 量的大小,电荷因素可以忽视。
25
2020/7/22
26
凝胶干燥器
2020/7/22
27
凝胶成像系统
2020/7/22
28
SDS－PAGE测定蛋白质 相对分子质量
2020/7/22
29
实验过程
安样品处理与加样
剥胶与固定
染色与脱色
2020/7/22
30
实验过程流程图
2020/7/22
31
考马斯亮蓝染色法
(色谱分析)凝胶电泳
电泳
带电粒子在电场 力作用下向着所 带电荷相反的方 向泳动的现象叫 电泳。
凝胶电泳
2020/7/22
电泳的用途？ 2
聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis ，PAGE）
2020/7/22
3
原理
聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简
CH=CH2
CH CH2 ( CH CH2 )n
形
C=O
C=O
C NH2
成
NH
O
NH
O
凝 胶
CH2
催化剂
+ 2nCH2=CH C NH2
CH2
的
NH
NH
O
蛋白质分子的大小和形状 分子质量越小、形状越接近球形，在电
场中迁移速度越快
2020/7/22
12
SDS-PAGE
1967年由Shapiro建立。 1969年由Weber和Osborn进一步完善。
他们发现样品介质和丙烯酰胺凝胶 中加入离子去污剂（SDS）以后,蛋白质 亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子 量的大小,电荷因素可以忽视。
25
2020/7/22
26
凝胶干燥器
2020/7/22
27
凝胶成像系统
2020/7/22
28
SDS－PAGE测定蛋白质 相对分子质量
2020/7/22
29
实验过程
安样品处理与加样
剥胶与固定
染色与脱色
2020/7/22
30
实验过程流程图
2020/7/22
31
考马斯亮蓝染色法
(色谱分析)凝胶电泳
电泳
带电粒子在电场 力作用下向着所 带电荷相反的方 向泳动的现象叫 电泳。
凝胶电泳
2020/7/22
电泳的用途？ 2
聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis ，PAGE）
2020/7/22
3
原理
聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简
CH=CH2
CH CH2 ( CH CH2 )n
形
C=O
C=O
C NH2
成
NH
O
NH
O
凝 胶
CH2
催化剂
+ 2nCH2=CH C NH2
CH2
的
NH
NH
O
容易被误读的凝胶电泳图分析 条带拖尾不一定都是DNA降解
容易被误读的凝胶电泳图分析条带拖尾不一定是DNA降解经常会遇到一些电泳新手的对DNA有降解问题困扰，究其原因是看电泳没经验，误读导致的误解。
所以很有必要就一种很容易被误读的电泳图进行深入分析。
以某一用户反馈的实验电泳图为例，用户提取的是新鲜分离的小鼠肝脏组织DNA实验。
图一：1-4孔为Q-PCR产物电泳图5为DNA Marker电泳图6、7为DNA电泳图大家第一眼看上去觉得最后一孔出现拖尾带是个什么情况？拖尾严重且DNA主带较暗，是DNA降解了吗？错。
主带（长片段）是基因组DNA，拖尾带是残留的降解RNA条带。
--凭什么这么说？用户提取的是新鲜分离的小鼠肝脏组织DNA，并且没有加RNA酶消化。
同样条件提取的DNA（第六孔）残留的拖尾带是不连续的，集中在某一区域（可以解读为残留的降解RNA较少，如果降解DNA的典型带型参考图四）。
所以我们立刻坚决地否定了用户有关DNA有降解的投诉，并预言：如果在提取DNA时加入RNase A就不会出现这种现象。
延长电泳时间，RNA拖尾会消失，DNA主带会变亮。
将电泳凝胶放置一段时间（如过夜），拖尾带会变暗甚至消失，而DNA主带会变亮（可能变模糊但不会消失）。
用户带着满满的疑惑尝试了延长电泳，结果对比如图二：图二：左边是电泳时间较长的电泳图，右边是电泳时间较短的电泳图有人也许会有疑问，如果不是DNA降解的话，那么DNA主带为什么会这么暗呢？其实这并非DNA量少产生的，而是由于残留的RNA过多以致电泳过程中将大部分EB带走，使得DNA主带没有足够的EB对其进行染色。
但是如果继续电泳一段时间，或者干脆电泳至RNA跑到电泳缓冲液中后，DNA也就会染上足够的EB了，这时就能看到正常亮度的DNA主带了。
我们来看看真正有降解的DNA条带是怎样的吧：图三：第一孔为DNA Marker电泳图后面几孔均为DNA 电泳图（从长期冻存的血液中提取的DNA）是不是觉得第二孔和图一的第七孔很像呢？如果说这是DNA降解的拖尾而不是RNA 降解的拖尾，是不是有点懵了。
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（二）pH梯度的建立
产生pH梯度的方法通常有两种：一种是用两 种不同pH的缓冲液互相扩散，在混合区形成 pH梯度，称为人工pH梯度。但这种pH梯度 不很稳定，常用于制备电泳。另一种是利用 两性电解质载体（Carrier ampholytes）在 电场的作用下自然形成pH梯度，称为天然 pH梯度。
（三）支持pH梯度的介质 （1）梯度溶液 （2）凝胶
四、其他电泳技术
（一）琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶可以用于蛋白质和核酸的电泳 支持介质，尤其适合于核酸的提纯、分析 琼脂糖凝胶电泳的分辨率较聚丙烯酰胺凝 胶电泳差一些，但在分离范围上优于聚丙 烯酰胺凝胶电泳，并有便于制备和操作的 优点
（二）醋酸纤维素薄膜电泳
用醋酸纤维素条带或塑料薄膜做支持物来进 行的电泳特点是分离快速，在低电压下，仅 0.5～2h，分离出来的区带非常清晰鲜明，背 景完全无色，操作方便，加上不会像纸电泳 那样，造成蛋白质的变性，所以醋酸纤维素 已在多种用途上完全取代滤纸电泳，而得到 比滤纸电泳更理想的结果，醋酸纤维素溶解 在丙酮里，被分离的区带就可以用比色计测 定，非常准确
等电聚焦电泳槽
（二）SDS-聚丙烯酰胺凝胶胶体的制备
（三）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的优缺点 及应用
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有设备简单， 样品用量甚微，操作方便等优点，现已成 为测定大多数蛋白质分子量的常用方法
三、等电聚焦电泳
（一）基本原理
等电聚焦电泳是在电泳槽中放入载体两性 电解质，当通以直流电时，利用两性电解 质形成的一个由阳极到阴极逐步增加的pH 梯度，使不同的酶或蛋白质聚焦于与其等 电点相当的pH值位置而进行分离的电泳技 术。
（三）聚丙烯酰胺胶体的制备
制胶模 1 梳形样品槽模板 2 长玻璃板（后面） 3 短玻璃板（前面） 4 U形橡胶框
（四）聚丙烯酸胺凝胶电泳的特点与用途
1、电渗作用比较小 2、凝胶孔径可调 3、电泳分辨率高 4、化学稳定性和热稳定性好 5、机械强度高
二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
制胶模 1 梳形样品槽模板 2 长玻璃板（后面） 3 短玻璃板（前面） 4 U形橡胶框
类型
Tris-HCl 凝胶浓度
凝胶孔径
样品胶 浓缩胶 分离胶
pH 6.7 pH 6.7 pH 8.9
3% 3% 7.5%
大（大孔凝胶） 大（大孔凝胶） 小（小孔凝胶）
不连续电泳三层凝胶的性质
不连续凝胶电泳示意图
（一）基本原理
在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基 硫酸钠（SDS），不影响凝胶的形成，不影响蛋 白质的电泳迁移率，因蛋白质的电泳迁移率主要 取决于其自身分子量的大小。
SDS能打开蛋白质分子间的氢键和疏水键，使蛋 白质变性成为松散的线状。
同时大多数蛋白质的每个氨基酸能与固定量的 SDS相结合 ，形成SDS–蛋白质复合物 。
（四）等电点聚焦电泳的操作过程 1、pH梯度支持介质的制备 2、电泳 3、分离组分的检测
（五）等电聚焦电泳的特点及应用
优点：（1）具有很高的分辨率（2）显现的 区带窄（3）聚焦力强（4）可直接并准确测 出等电点
等电聚焦技术的缺点是：①等电聚焦要求用 无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生 沉淀；②样品中的成分必须停留在其等电点 处，不适用于在等电点不溶或发生变性的蛋 白质
迁移率与带电分子所带净电荷成正比， 与分子的大小和缓冲液的黏度成反比
（二）影响电泳的主要因素
1、大分子的性质 2、电场强度 3、溶液的pH 4、溶液的离子强度 5、 电渗 6、温度 7、支持物的影响
二、分类
（一）按分离原理分类 1、区带电泳 2、自由界面电泳 3、等速电泳 4、等电聚焦电泳
（二）按有无固体支持物分类
1、按有无固体支持物可以分为两类：自由电泳和支持物 电泳。
2、支持物电泳根据所用的支持物不 同又可分为纸电泳、醋酸纤维薄膜 电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺 凝胶电泳（PAGE）、SDS－聚丙烯 酰胺凝胶电泳
第二节 常用ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ泳分离技术
一、聚丙烯酰胺凝胶电泳
（一）基本原理 1、凝胶的聚合及孔径 2、电泳效应 （1）连续性电泳系统的凝胶浓度一致，凝胶中的pH值
及离子强度与电泳槽液的相同。 （2）不连续电泳系统存在4个不连续性：凝胶层的不
连续性；缓冲液离子成分的不连续性；pH值的不连 续性；电位梯度的不连续性。4种不连续性，电泳时 会产生3种物理效应，即样品的浓缩效应、凝胶的分 子筛效应以及电荷效应。
（二）影响凝胶聚合的因素 1、试剂质量 2、凝胶浓度 3、温度和氧气的影响
选择聚丙烯酰胺凝胶浓度参考值
样品 蛋白质（酶） 核酸（RNA）
分子量范围
<104 (1～4)×104 4×104～1×105 1×105～5×105
>5×105
<104 104～105 1×105～2×106
适宜的凝胶浓度 (T%)
20～30 15～20 10～15 5～10 2～5
15～20 5～10 2～3.6
第八章 电泳分离技术
第一节 电泳的基本理论及分类
一、原理
（一）概念及原理 1、电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身
带相反电荷的电极移动的现象。
2、原理
电泳技术就是利用在电场作用下，由于 待分离样品中各种分子带点性质以及分子本 身大小、性状等性质的差异，使带电分子产 生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、 鉴定或提纯。