还原糖的测定
还原糖的测定方法_国标.pdf
食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
碱性酒石酸铜甲液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
L高锰酸钾标准溶液。
1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
5. 操作方法样品处理：乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约～ 2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，通常用来测定葡萄糖、果糖、麦芽糖等在食品和生物样品中的含量。
测定还原糖的方法有很多种，其中包括费林试剂法、硫酸铜比色法、硼酸硫酸铜比色法等。
本文将介绍硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法两种测定还原糖的方法。
硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硫酸铜溶液，取一定容量的硫酸铜溶液，通常浓度为0.1mol/L。
3. 反应，将样品溶液与硫酸铜溶液混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成红色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
硼酸硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硼酸硫酸铜试剂，将一定量的硼酸溶液与硫酸铜溶液混合制备硼酸硫酸铜试剂。
3. 反应，将样品溶液与硼酸硫酸铜试剂混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成蓝色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
以上两种方法均是通过还原糖与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在具体操作时，需要注意样品的处理、试剂的配制、反应条件的控制以及仪器的使用等细节，以确保测定结果的准确性和可靠性。
总结，硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法是常用的测定还原糖的方法，通过与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在实际操作中，需要严格按照方法步骤进行操作，以获得准确可靠的测定结果。
还原糖的测定
2、葡萄糖标准曲线的制作
取干净试管6支，按表1进行操作，用UV2600紫外可见分光光度计测吸光度，用0号管调零。以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/mL）为横坐标作图得标准曲线。
三、实验操作及记录
1、还原糖的提取
准确称取5.00g荞麦粉，加蒸馏水约8mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶内。用约25mL的蒸馏水冲洗研钵3次，洗出液也转入三角烧瓶中。于50℃水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）转移到100mL离心管中，于4000r/min下离心5min，沉淀用20mL蒸馏水洗一次，再离心，将两次离心的上清液合并，用蒸馏水定容至100mL，混匀，作为还原糖待测液。
2、王斐朱琳，《食品中还原糖含量测定的探讨》，创新科技，2014年16期。
9.0
9.0
葡萄糖含量/mg
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
葡萄糖浓度(mg/mL)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
0.000
0.084
0.189
0.302
0.411
0.524
现象：DNS试剂为黄色，反应后溶液为橘红色至棕红色，且还原糖浓度越高，溶液红色越深。
3、样品中还原糖的测定
表2样品中还原糖的测定
还原糖的测定（3,5-二硝基水杨酸法）
一、实验原理
1、还原糖是具有还原性的糖类的统称。分子中含有游离醛或酮基的单糖和二糖都具有还原性。如葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法
还原糖是一种重要的碳水化合物，广泛存在于植物和动物体内。
它在食品加工中起着重要作用，也是一种重要的营养物质。
因此，
准确测定还原糖的含量对于食品加工和营养评估具有重要意义。
下
面将介绍几种常用的还原糖测定方法。
首先，最常用的还原糖测定方法是费林试剂法。
该方法利用费
林试剂与还原糖发生化学反应，生成可见的蓝色产物，通过比色法
测定产物的光密度来计算还原糖的含量。
费林试剂法操作简便，结
果准确，广泛应用于食品工业和科研领域。
其次，还原糖的测定方法还包括硫酸铜法。
该方法利用硫酸铜
与还原糖在碱性条件下发生化学反应，产生沉淀物，通过沉淀物的
重量来计算还原糖的含量。
硫酸铜法操作简单，结果准确，适用于
各种类型的食品样品。
此外，还原糖的测定方法还包括酚酞法。
该方法利用酚酞与还
原糖在碱性条件下发生化学反应，产生可见的红色产物，通过比色
法测定产物的光密度来计算还原糖的含量。
酚酞法操作简便，结果
准确，适用于各种类型的食品样品。
最后，还原糖的测定方法还包括高效液相色谱法。
该方法利用高效液相色谱仪对食品样品中的还原糖进行分离和测定，具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，适用于各种类型的食品样品。
综上所述，还原糖的测定方法多种多样，各有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据样品的特点和实验条件选择合适的测定方法，以获得准确的测定结果。
希望本文介绍的内容对您有所帮助。
还原糖检测方法
还原糖检测方法
还原糖是指能够还原氧化铜溶液的单糖和部分双糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
还原糖检测方法是一种常见的食品分析方法，也被广泛应
用于生物医学领域和环境监测中。
常用的还原糖检测方法有以下几种：
1. 贝氏试剂法
贝氏试剂法是一种常用的还原糖检测方法。
该方法利用还原糖与碱性
铜酸钠反应，生成红色沉淀，沉淀的颜色与还原糖的浓度成正比。
该
方法操作简单、灵敏度高，但对于一些其他物质的干扰较大。
2. 亚甲蓝法
亚甲蓝法是一种比贝氏试剂法更为灵敏的还原糖检测方法。
该方法利
用还原糖与亚甲蓝反应，生成蓝色复合物，复合物的颜色与还原糖的
浓度成正比。
该方法灵敏度高、操作简单，但对于一些其他物质的干
扰也较大。
3. 酚硫酸法
酚硫酸法是一种常用的还原糖检测方法。
该方法利用还原糖与酚硫酸反应，生成紫色复合物，复合物的颜色与还原糖的浓度成正比。
该方法操作简单、灵敏度较高，但对于一些其他物质的干扰也较大。
4. 酶法
酶法是一种常用的还原糖检测方法。
该方法利用还原糖与葡萄糖氧化酶反应，生成过氧化氢和酮酸，过氧化氢与间苯二酚反应生成紫色化合物，化合物的颜色与还原糖的浓度成正比。
该方法灵敏度高、特异性强，但操作较为复杂。
总的来说，还原糖检测方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据具体情况进行考虑。
在实际应用中，还原糖检测方法可以用于食品中还原糖的含量测定，也可以用于生物医学领域和环境监测中。
还原糖的测定方法_国标
还原糖的测定方法（1）食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2）25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
《还原糖的测定方法国标》
《还原糖的测定方法_国标》还原糖的测定方法_国标一、范围本标准规定了用斐林试剂比色法测定试样中还原糖的含量。
本标准适用于所有食物样品中还原糖的测定。
二、原理还原糖与斐林试剂在加热条件下生成砖红色沉淀，通过与标准曲线对比，可以得出样品中还原糖的含量。
三、试剂和材料斐林试剂：甲液（称取14.3g硫酸铜（CuSO4·5H2O）和0.05g次甲基蓝（C13H16N3OClS）溶于水中，定容至100ml）、乙液（称取173g酒石酸钾钠（C4H4O6NaK·4H2O）和50g氢氧化钠溶于水中，定容至500ml）。
使用时将甲液、乙液等体积混合。
四、仪器和设备1.实验室用粉碎机2.水浴锅3.消煮炉或普通炉灶（能调节温度）4.容量瓶（100ml）5.移液管（10ml）6.比色管（10ml）7.试管（25ml）8.三角瓶（250ml）9.定时钟五、样品制备1.固体样品：取样品适量，用粉碎机粉碎，然后称取约0.2g样品置于试管中。
2.液体样品：直接取适量样品置于试管中。
3.在每个试管中加入4ml斐林试剂，充分混匀后静置10min。
4.将试管中的溶液倒入三角瓶中，加入约80ml水稀释，加热至沸后保持1min。
5.用移液管向每个试管中加入1ml样液，摇匀后置于试管架上。
6.在温度达到要求时将试管放入水浴中加热，同时开启计时器。
当时间达到要求时立即取出试管，用自来水冷却至室温。
7.将冷却后的溶液用移液管倒入比色管中，再加入约1ml的样液摇匀。
8.将比色管置于比色槽中，与标准曲线进行比色，得出样品的含量。
9.将整个测定过程中每个环节的时间、温度等条件记录下来，以便后续分析。
六、结果分析通过与标准曲线对比，可以得出样品中还原糖的含量。
计算公式为：含量=测定管吸光度÷校准管吸光度×标准品浓度。
其中吸光度需要在一定波长下测定。
同时需要注意实验过程中操作条件的控制，以保证结果的准确性。
如果操作条件不稳定或样品复杂性较高，需要进行适当调整或采取其他适合的方法进行测定。
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器(1) 滴定管(2) 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚(3) 真空泵(4)水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸:量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂:称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液:称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液:称取34.639g硫酸铜(CuSO4?5H2O)，加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5碱性酒石酸铜乙液:称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6精制石棉:取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2,3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2,3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
称取3.3g高锰酸钾，溶于1050 ml水中，缓缓煮沸15min，冷却，于暗处放置两周，用已处理过的玻璃滤锅过滤，贮存于棕色瓶中(注:玻璃滤锅的处理是指玻璃滤锅在同样浓度的高锰酸钾中溶液缓缓煮沸5min)标定:准确称取0.15~0.2克(准至0.001克)草酸钠，放入250ml的锥形瓶内，加80ml水和20ml硫酸溶液(1+4)，加热到75~85?，然后以待标定的高锰酸钾溶液滴定，近终点时，保持液温在60--70?,继续滴至溶液所呈现的粉红色保持30秒不消失即为终点，同时作空白。
还原糖测定的原理
还原糖测定的原理还原糖是指能够还原其他物质的糖类化合物，如葡萄糖、果糖等。
在食品加工、医药生产等领域，对还原糖含量进行测定具有重要意义。
本文将介绍还原糖测定的原理及其常用方法。
一、原理。
还原糖的测定原理是利用还原糖与氧化剂发生反应，氧化剂被还原为相应的还原产物，而还原糖则被氧化为酸。
常用的氧化剂有硝酸铜、费林试剂等。
以硝酸铜法为例，其反应方程式为：C6H12O6 + 2Cu2+ + 4OH→ Cu2O↓ + H2O + 2CH3COOH。
根据反应中生成的氧化铜沉淀的重量，可以计算出还原糖的含量。
二、硝酸铜法测定。
1. 样品处理，将待测样品加入硝酸铜溶液中，加热至沸腾，使还原糖与硝酸铜反应生成氧化铜沉淀。
2. 沉淀收集，将生成的氧化铜沉淀过滤、洗涤、干燥至恒定质量。
3. 计算含量，根据氧化铜沉淀的质量，通过计算公式计算出还原糖的含量。
三、费林试剂法测定。
费林试剂法是利用费林试剂与还原糖在酸性条件下发生显色反应，根据显色深浅来测定还原糖的含量。
其原理是还原糖在酸性条件下与费林试剂反应生成蓝色产物，显色深浅与还原糖的含量成正比。
四、光度法测定。
光度法是利用还原糖与氧化剂反应生成显色产物，通过测定产物的吸光度来测定还原糖的含量。
常用的显色产物有甲基橙、菲罗啉等，通过比色计或分光光度计测定吸光度，再根据标准曲线计算出还原糖的含量。
五、总结。
还原糖的测定方法多种多样，选择合适的方法需要根据样品特性、实验条件等因素综合考虑。
无论采用何种方法，都需要严格控制实验条件，准确操作，确保测定结果的准确性和可靠性。
通过本文对还原糖测定原理及常用方法的介绍，相信读者对还原糖的测定有了更深入的了解，能够在实际操作中更加灵活、准确地选择合适的测定方法，为相关领域的研究和生产提供有力支持。
《还原糖的测定方法_国标》
《还原糖的测定方法_国标》还原糖是利用还原性固体物质与硫酸酸作用而形成的糖类物质，是各种天然糖和蔗糖等碳水化合物的主要成分。
还原糖的测定方法主要包括酚酞法和锁紫法两种。
一、酚酞法1.原理还原糖在酸性溶液中能够与酚酞形成红色络合物，按照这个特性可以利用测定还原糖的含量。
酚酞法是将酚酞加入葡萄糖溶液，并加入硫酸，使葡萄糖反应生成邻磺酸基苯甲醛，酚酞与邻磺酸基苯甲醛产生红色络合物，根据颜色变化来测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品处理：将样品取适量加入标准瓶中，加入适量蒸馏水稀释。
（2）试剂溶液制备①酚酞指示剂：0.1%酚酞水溶液，加入适量氢氧化钠溶液调节其pH值到8左右；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）测定操作①在滴定管中加入5ml淀粉指示液；②将50ml试剂用热水浴加热至60℃，在加热的过程中不断振荡，直到试剂完全溶解；③加入3ml样品，再加入1.5ml的硫酸；④加入恰好的量的还原剂，至混合溶液变成淡绿色，继续振荡至反应彻底；⑤从头部滴入酚酞指示液，直至溶液变为粉色，记录滴定管体积。
（4）计算还原糖的质量浓度二、锁紫法1.原理锁紫法是一种定量测定还原糖的方法，其原理是利用还原性糖在酸性条件下氧化生成醛酸物质，再与锁紫剂作用形成深紫色络合物，根据反应色深与被测样品中还原糖含量成正比关系的特点，来定量测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品前处理：将样品取适量加入到锥形瓶中加入适量蒸馏水稀释，搅拌溶解。
（2）试剂溶液制备①锁紫试剂：将0.2g锁紫用少量水样吸湿后加入10mL浓氢氧化钠（4mol/L），用水稀释到100ml，在加入5ml浓硫酸搅拌，备用；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）操作流程①在锥形瓶中加入1ml锁紫试剂和30ml蒸馏水；②加入3ml样品后加入2ml还原剂，充分搅拌均匀；③经过10分钟左右，样品溶液颜色变为紫色，放置待沉淀，用滤纸滤掉沉淀；④将过滤后的溶液转移到光度计试样池，用蒸馏水稀释至标线；⑤根据光度计读数计算样品中还原糖的质量浓度。
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三、实验材料、主要仪器和试剂
1． 实验材料 小麦面粉。 2． 主要仪器 （1）比色管：25mL （2）大离心管：50mL×2 （3）烧杯：100mL （4）容量瓶：100mL （5）刻度吸管：1mL；2mL；10mL （6）恒温水浴锅 （7）离心机 （8）电子天平 （9）分光光度计
3． 试剂
（1）1mg/mL葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少 量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容100mL，混匀， 4℃冰箱中保存备用。
定容为100mL,待用 取0.5mL进行检测
（2）显色和比色 取2支25mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入 待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。 加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
表2 样品还原糖测定
管 号 还原糖 待测液 （mL） 总糖待 测液 （mL）
蒸馏水 （mL）
糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸
则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
·在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关 系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准 曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。 ·由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子 水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
2 1.8 1.6 1.4 1.2
1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
0 0.2 0.4 0.6 0.8
5
6
1.0
1.2
1.0
0.8
1.5
1.5
1.0
1.2
2． 样品中还原糖的测定
（1）还原糖的提取
3.00g食用面粉
放入100mL烧杯少量蒸馏水 调成糊状，再加35mL蒸馏水
50℃恒温水浴20min 4 000r/min下离心5min 收集上清液
还原糖的定量--3,5-二硝基水杨酸比色法
湖南师大生科院-2013
一、目的
1. 掌握还原糖和总糖测定的基本原理， 2. 学习比色法测定还原糖的操作方法和分光
光度计的使用。
二、原理
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原 糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原 糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植 物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性 的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性还原糖的 测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛的单 糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原
如何正确绘制和使用标准曲线?
摇匀,沸水浴加热5min 反应液冷却至室线
表1 葡萄糖标准曲线制作
管 号 1mg/mL葡萄糖标准液 （mL） 蒸馏水 （mL） DNS （mL） 葡萄糖含量 （mg） 光密度值 （OD540nm）
0 1 2 3 4
0 0.2 0.4 0.6 0.8
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠 的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水 定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
四、操作步骤 1． 制作葡萄糖标准曲线
葡萄糖标准液、蒸馏水和 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
DNS （mL）
光密度值 （OD540nm）
查曲线 葡萄糖量 （mg）
7
0.5
0.5
1.5
1.5
8
1.5
1.5
五、结果与计算：
计算出7、8号管光密度值平均值，在标准曲线上分别查出相 应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含 量。
六、思考题 3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行测定的?