色谱柱的维护保养
【色谱柱】色谱柱的维护方法 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】色谱柱的维护方法色谱柱维护和修理保养色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外，最紧要的是与日常的维护紧密相关。
色谱柱的使用寿命紧要是柱效和柱压两个指标来衡量，假如一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱已经结束。
因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，除去引起柱效下降和柱压上升的因素。
以下是色谱柱的维护方法：一、流动相的PH应在使用的范围内流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。
由于流动相的PH掌控不当而对色谱柱造成的损害，通常很难是色谱柱恢复，因此必需认真对待，严格掌控流动相的PH值。
二、去除样品和流动相中的固体颗粒样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵住不仅会引起柱压的上升，而且也会引起柱效下降，由于筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰型拖尾、变宽，从而使柱效下降。
因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析样品前对样品进行针筒过滤，流动相过0、45μm滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器样品和流动相经过滤后并不能完全除去固体颗粒物质，由于泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压上升、柱效下降。
保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱孔径相同，因此可以阻拦固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。
由于柱压上升在分析故障中占很大比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
假如色谱柱柱压上升是由于进样端筛板被堵引起的，可选择以下方式进行补救：1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min、2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。
四、正确使用缓冲盐缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻拦了基质上键合的碳链自由伸展，使色谱柱的保留本领下降，柱效降低。
【色谱柱】色谱柱使用维护 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】色谱柱使用维护色谱柱维护和修理保养1、色谱柱的使用说明：（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水可以是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为 2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，全部的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存：（1）反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度可以是室温。
3、色谱柱的再生：由于色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的加添，会显现色谱峰高降低，峰宽加大或显现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
c18色谱柱保养方法
C18色谱柱的保养方法C18色谱柱的保养方法主要包括以下几个方面：1.保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。
绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
2.每次新买的色谱柱虽然是经厂家测试过并密封好的，可是有的色谱柱到达手中时已经过很长的时间了，因此，每次拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。
首先，配制好65%的乙腈/水，再把色谱柱正确的连接在色谱仪上，出口放空（注意：出口端切不可连上检测器，以免污染了检测器），以低流速0.1ml/min~0.5ml/min（如果是LC/MC柱子，则应以0.3ml/min进行），不可以高流速进行，等看见柱子出口有液体流出后，过20分钟后再接上检测器，以循序渐进的方法将流速调至 1.0ml/min （如果是LC/MC柱子则应以0.3ml/min进行），继续冲洗2~8小时。
3.色谱柱的存储：在不使用色谱柱时，应将其存储在恒温箱或冰箱中，避免暴露在阳光下或高温环境中。
同时，要注意避免色谱柱的震动和振荡，以防止填料团聚或变形。
4.色谱柱的洗脱条件：为了避免填料的污染和附着物的积累，使用完毕后应进行适当的洗脱。
常用的洗脱方法包括使用pH2-3的酸性溶液，有机溶剂和水的混合溶液，或者乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。
阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗，除去交换性能强的盐，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有机物）、甲醇、水依次冲洗。
5.定期进行清洗：使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。
同时要定期用甲醇或丙酮冲洗色谱柱，保持色谱柱的清洁。
以上就是C18色谱柱保养的主要步骤和注意事项，遵循这些步骤可以有效延长色谱柱的使用寿命并保证实验结果的准确性。
相色谱柱的保养与维护
相色谱柱的保养与维护
相色谱柱是高精度仪器，需要进行专业的保养与维护，以保证其正常使用和延长使用寿命。
以下是相色谱柱的保养与维护方法：
1.保持干燥：相色谱柱应该存放在干燥、阴凉、通风的地方。
2.避免受力：安装相色谱柱时，应该根据操作手册准确安装，不强行扭曲、移动或者碰撞柱子。
以免影响柱内填料的均匀性。
3.避免受污物：在使用相色谱柱之前，需要清洁检查进样口，以保证样品的干净度。
另外，避免塞入颗粒物质。
4.定期清洁：使用过程中的一些尘垢，会附着在柱外表面。
可以用专用清洗剂或者乙醇进行清洗。
不可使用有机溶剂。
5.恰当使用：相色谱柱在使用过程中，需要根据操作手册进行良好的操作，避免流速过快、被串染、被污染等影响柱子使用寿命的问题。
6.正确仓储：在不使用相色谱柱时，应当拆下接头，用压板杆和塞子封闭固定孔、流出口，避免灰尘、水分等杂质污染柱子。
总之，保养相色谱柱的关键是要注意细节、方法科学，以保证柱子完好可用、长寿。
色谱柱的维护保养
优化后
• 峰宽 – 峰3: 0.057 min – 峰4: 0.076 min – 峰5: 0.099 min
• 分辨率 3/4 = 2.73 • 分辨率 4/5 = 2.35
优化前
DAD1 B, Sig=254,8 Ref=off (F:\PROJECTS\0217_M~1\IN-PRO~1\INSTRU~1\CONFIG07.D) mAU
色谱柱的维护保养
第5页
收到新色谱柱
• 核实色谱柱信息 – 是你订购色谱柱吗? – 规格是否正确? – 固定相是否正确?
• 检验物理性损坏 • 用标准测试样品在标准条件下测试柱子，以验证柱效 • 每支菲罗门色谱柱都经过单独检测
色谱柱的维护保养
第6页
管路和接头
• 色谱性能取决于整个系统，而不但仅是色谱柱 • 管路和接头会造成系统死体积 • 系统死体积会造成:
Nitroaromatics
4
3
4
3
1
2
7 56
5
6
7
1
2
2.0 Time (min)
Kinetex™ 2.6 µm C18 100 x 4.6 mm
36
色谱柱的维护保养
3.0
3.0
1. HMX 2. RDX 3. 1,3,5-Trinitrobenzene 4. 1,3-Dinitrobenzene 5. Nitrobenzene 6. 2,4,6-Trinitrotoluene 7. 2,4-Dinitrotoluene
23 1
1.0 Time (min)
Kinetex™ 2.6 µm C18 50 x 2.1 mm
液相色谱柱的日常维护保养
液相色谱柱的日常维护保养液相色谱柱是一种常见且重要的分析仪器，在实验室中被广泛应用。
为了保证液相色谱柱的良好工作状态和分析结果的准确性，日常维护保养是必不可少的。
预测维护在实验过程中，对液相色谱柱的使用会产生一定程度的损耗。
因此，在使用液相色谱柱的过程中，需要对其进行预测维护。
预测维护包括以下几个方面：1.液体进样器：每天使用前需要使用5%甲酸或醋酸水溶液进行清洗，冲洗10次；2.处理样品之前，需要使用纯水冲洗固相萃取（SPE）柱，以避免在反相色谱柱中残留的盐和其它非极性化合物损害色谱柱；3.沉淀时，孔径小的使用 0.45 微米滤膜；4.在一次实验操作中，同一规格的 Sample Loop 的使用次数不要超过30 次。
使用前，需要用洗针液清洗洗针头和 Sample Loop；5.使用过程中，如果发现色谱图出现异常，或者分离峰出现交叉、拖挂的情况，则需要对色谱柱进行常规维护。
常规维护常规维护主要涉及以下方面：色谱柱的清洗准备工作：1.将色谱柱固定在色谱仪上；2.关闭色谱仪，并将系统空气排出。
清洗步骤：1.用离子交换水（或去离子水）进行快速洗脱。
每 10 分钟换一次水，连续换 3 次；2.用5%甲酸（或乙酸）水溶液和纯水依次进行梯度洗脱，各洗 10 分钟，共需进行 20 分钟；3.用离子交换水（或去离子水）进行冲洗达 20 分钟，温度一般设置为室温；4.最后用重组缓冲液冲洗至少 30 分钟，直到色谱图正常为止。
清洗完毕后，需要用纯氮对色谱柱进行干燥，再关闭系统气路。
柱的保存柱的保存需要在低温，干燥，阴凉和避光的环境下进行。
存储柱的时间不宜过长，建议每次使用后立即保存，并在下次使用前先进行重新均衡。
色谱柱的更换在使用一段时间后，液相色谱柱的效果会逐渐降低，这时需要进行更换。
在更换时，需要注意以下几点：1.需要按照生产厂家提供的说明书进行更换；2.更换前需要对新柱进行校准；3.更换完成后，需要重新运行QC 样品，验证新柱的分离效果是否正常。
小议色谱柱的维护与保养
生堵塞 ． 柱子将不可能被彻底恢复 ， 只 能 通 过 去 掉 进 口端 的 部 分 填 料 。重 新 填 充
进 行 有 限 的柱 效 恢 复 。 而 且 修 复 的厚 度
是２ — ５ ｍｍ。
柱 两 大类 。 液 相色 谱 通 常 均 采 用 填 充柱 。
色 谱 柱 的 分 离 效 果 取 决 于 所选 择 的 固定
叠氮化钠或柳硫汞 ） 中， 并 将 购 买 新 色 谱
柱 时 附 送 的 堵 头堵 上 。 三 、色 谱 柱 的维 护 与 保 养 在 高 压 液 相 色谱 中的 应 用
的主要原因是 ： ①溶剂 中的不溶物 ； ② 样
品中的不溶物 ；③泵进样器等 中的不 溶 物： ④柱 内不溶物的形成等 。如果色谱柱
样的次数增加 。 出 现 色谱 峰 高 降 低 ， 峰 宽
加 大 或 出现 肩峰 。 柱效下降。 需 要定 期 进
行 彻 底 清 洗 和再 生 ．不 同 的 色 谱 柱 清 洗 方法各不相同比如： １ ． 反 相 柱 。分 别 用 甲醇 ： 水＝ ９ ０ ： １ ０ ， 纯 甲醇 （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ级 ） ， 异 丙醇 （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ级 ） ， 二
要 的分 支 。 在 人 类 进 人新 时代 之 际 ， 人 们 面临 着 在 信 息 科 学 、生 命 科 学 、材 料 科 学、 环 境 科 学 等 领 域 的快 速 发 展 的 挑 战 ， 在 这 些 领 域人 才 的 需 求 成 为 国家 高 度 发 展 的 至关 重要 的 因 素 。而 色 谱 技 术 是 生
保持 色谱 柱 反 方 向连 接 ．用 低 于 ０ ． ５ ７ ｍ ｌ ／ ｍ ｉ ｎ ？ 流速冲洗－ｄ ， 时 。如 果 压 力 不 下 降 ， 则 要 看 内置 过 滤 器 是 否 被 堵 塞 ．如 果 被 堵 塞 应 冲 洗 或 更 换 ．若 进 口端 的 填 料 发
色谱柱使用管理规程
色谱柱使用管理规程一、目的和适用范围为了规范色谱柱的使用，确保色谱分析的准确性和可靠性，特制定本管理规程。
本规程适用于实验室中使用的各类色谱柱。
二、工作原则1.资源共享：实验室内的色谱柱应尽量共享使用，避免重复购买。
2.保养维护：色谱柱在使用过程中应定期进行保养维护，延长其使用寿命。
3.检查验证：每次使用色谱柱前应进行检查和验证，确保其正常工作。
4.数据记录：使用色谱柱进行分析时应详细记录相关数据，以备后续分析和验证使用。
三、色谱柱的存储和保养1.存储条件：色谱柱应存放在干燥、阴凉、避光的地方，远离酸碱等有害物质。
2.温度控制：色谱柱应避免暴露在高温环境中，存放温度一般不超过30℃。
3.包装保护：未使用的色谱柱应保持原包装完整，避免受潮、损坏等情况。
4.清洗方法：使用完毕的色谱柱应及时进行清洗，避免残留物对下次使用的影响。
5.使用周期：色谱柱的使用周期应根据实际情况确定，一般建议每个色谱柱使用不超过100次。
四、色谱柱的检查和验证1.外观检查：每次使用色谱柱前应检查其外观是否完好，如有破损应立即更换。
2.连接检查：色谱柱的连接部分应检查是否松动，如有松动应重新连接或更换。
3.确认类型：使用色谱柱前应确认其类型和规格是否符合实验需求。
4.验证方法：使用标准样品对色谱柱进行验证，确认其分离效果和分析准确性。
五、色谱柱的使用记录1.样品信息：每次使用色谱柱时应记录样品的基本信息，包括样品名称、浓度、体积等。
2.柱温记录：记录色谱柱的运行温度，以便后续分析结果的比对和验证。
3.运行参数：记录色谱柱的运行参数，包括流速、时间梯度等。
4.分离效果：记录色谱柱的分离效果，包括峰形、峰高、峰面积等。
5.结果分析：对色谱柱的分析结果进行详细分析，包括峰的识别、定量等。
六、色谱柱的报废和更新1.报废标准：当色谱柱使用寿命超过预设次数或出现严重损坏时，应报废。
2.更新周期：实验室应定期更新色谱柱，以保证分析结果的准确性和可靠性。
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管路和接头
• 色谱性能取决于整个系统，而不仅仅是色谱柱 • 管路和接头会造成系统的死体积 • 系统死体积会导致:
– 峰展宽 – 峰形差 – 柱效降低 – 灵敏度降低
管路和接头
优化HPLC系统以获得最大性能 • 改变连接管路的内径（id）
350
300
300
0.280 0.467
0.697 0.972 1.275
0.204 0.399
0.650 0.958 1.308
250
250
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• 怎样去做? – 流动相入口过滤头 – 在线过滤器 – 保护柱 – 流动相脱气 – 过滤所有流动相组分 – 过滤所有样品
样品作为污染物的来源
• 样品基质是HPLC/UHPLC柱主要的污染物来源，常 会导致:
• 背压升高 • 色谱性能降低
– 峰形问题（分叉，拖尾） – 柱效降低 – 分辨率降低
样品的制备
接头
聚合物 手紧螺母
32圈螺纹/英寸 10号或0.190’’
锥箍
1/16’’OD管路 （0.010’’ID）
螺母
尖端固定长度 为关键尺寸
10-32 螺母和锥箍
1/4’’OD标准分析柱 （250 x 4.6mm ID）
色谱柱柱头
不同厂商的接头
连接接头
• 如果超出锥箍的管路长 度过长，锥箍将固定不 当，导致漏液
4. 检测器到废液瓶 • 可以使用更大的内径(0.010”)
11
接头
• 并非所有的色谱柱和接头都一样 • 使用锥箍的种类/形状也各有不同 • 固定长度不同 (0.080”到0.130”) • 固定长度很关键
– 管路一定要与色谱柱相匹配 – 不匹配的接头会导致死体积的增大或漏液 • 手紧接头 (聚合物的) – 容易使用 – 一体的 – 符合柱头的形状
其它注意事项
• 背压通常保持在3500 psi以下（常规的HPLC柱和系统） • UHPLC柱具有更高的压力限（≥9000 psi） • 流速必须符合色谱柱的背压限 • 避免突然的压力变化 • 万一背压升高，可以反冲色谱柱（向色谱柱制造商核实
一下）
色谱柱的保护
• 为什么要这么做呢? – 最大限度地延长色谱柱的寿命 – 减少系统损耗 – 从长远来看，可以节约时间和成本 – 获得最佳的结果
微生物在柱头填料 上的生长
其它注意事项
• 保持pH在2.0到8.0之间（旧型硅胶和极性封尾相）或 在1.5到10.0之间（新型硅胶）
• 低pH会使键合相从硅胶上断裂下来（水解） • 高pH会使硅胶溶解 • 如在接近pH极限下运行时，使用预饱和柱将使这些影
响降到最低
• 更新型的介质可以提供更宽的pH稳定性(1 – 12)
– 含有离子对的流动相平衡所需时间更长
流动相
• 使用HPLC级溶剂 • 使用最高纯度的化学药品和试剂 • 使用前脱气和过滤所有流动相 • 保证溶剂是互溶的 • 验证缓冲盐在混合水/有机流动相中的溶解度
（尤其采用从高水相到高有机相的梯度洗脱时） • 检查样品在流动相中的溶解度
流动相
• 强烈建议每天更换水相缓冲溶液，以最大程度的减少 微生物的生长，避免这些微生物堵塞在线过滤器和色 谱柱。
管路和接头
优化前
• 峰宽 – 峰3: 0.072 min – 峰4: 0.085 min – 峰5: 0.103 min
• 分辨率 3/4 = 2.06 • 分辨率 4/5 = 1.89
优化后
• 峰宽 – 峰3: 0.057 min – 峰4: 0.076 min – 峰5: 0.099 min
• 分辨率 3/4 = 2.73 • 分辨率 4/5 = 2.35
优化前
DAБайду номын сангаас1 B, Sig=254,8 Ref=off (F:\PROJECTS\0217_M~1\IN-PRO~1\INSTRU~1\CONFIG07.D) mAU
350
优化后
DAD1 B, Sig=254,4 Ref=off (F:\PROJECTS\0217_M~1\INSTRU~1\CHROMA~1\HPLCSY~1\TESTIN62.D) mAU
2
2.25 min
连接管路
1. 泵到进样器 • 可以使用大一点的内径(0.010” = 0.254 mm)
2. 进样器到色谱柱 • 管路内径最小化 • 通常使用0.007” (0.178 mm)或0.005” (0.127 mm) ID
3. 色谱柱到检测器 • 管路内径最小化 • 大一些的内径会影响分离效果 • 通常使用0.007”或0.005” ID
• 在向HPLC/UHPLC柱进样前，去除潜在的污染物 • 过滤样品(0.45或0.2 µm针式滤头) • 样品净化 – 例如SPE, 蛋白沉淀等
柱头处 – 新柱
柱头处 – 样品前处理不当
HPLC色谱柱的认识和维护
2
3
4
HPLC色谱柱的维护保养
HPLC色谱柱维护保养概要:
• 收到新的色谱柱 • 管路和接头 • 流动相注意事项 • 色谱柱的保护 • 保护柱 • 色谱柱的清洗 • 色谱柱的保存
收到新的色谱柱
• 核实色谱柱的信息 – 是你订购的色谱柱吗? – 规格是否正确? – 固定相是否正确?
• 如果超出锥箍的管路长度 过短，就会造成死体积， 导致峰展宽和拖尾
流动相
• 彻底冲洗HPLC泵和管路以去除气泡（打开冲洗阀来 加速过程）
• 连接色谱柱和进样器 – 检查流向是否与色谱柱标签指示方向一致
• 流动相起始流速为0.1 mL/min，随后逐渐增大到正常 流速
• 停止流速并将色谱柱与检测器入口连接 • 重启流速，用10-30个柱体积的流动相平衡色谱柱
– 0.17 mm id到0.12 mm id • 减小流通池的体积
– 标准流通池 – 13 µL, 10 mm 路径 – 半微量流通池 – 5 µL, 6 mm 路径
条件 • Luna® 3µm C18(2), 10 x 2.0 mm
– (MercuryMS™柱芯) • 50:50 乙腈/水 ，0.2 mL/min • HP1100 w/二元泵