小鼠摘除眼球采血及分离血清
小鼠常用采血方法
THE END
隐静脉采血
1
2
3
4
小量、反复小鼠采血的常用方法。特点是不用麻醉
尾部采血心脏采血Fra bibliotek12 34
心脏
小鼠采血量0.5-0.8ml，大鼠采血量1-1.5ml
下腔静脉采血
小鼠采血量0.5-0.8ml
1
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4
非抗凝血
血清
血清：离体的血液凝固之后，经血凝块聚缩释出的液体，即血清
抗凝血
血浆
血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不 含细胞成分的液体，即血浆。
Sequential bleeds
眼眶静脉丛采血 颌下静脉采血 隐静脉采血 尾部采血
需要麻醉
Terminal bleeds
心脏采血 下腔静脉采血
需要麻醉
小鼠面颈部血管解剖示意图
眼眶静脉丛采血
1
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4
小鼠采血量为0.2-0.3ml
大鼠采血量为0.4-0.6ml
眼眶静脉丛采血
颌下静脉采血
目前国际上一种最新的、最简单快捷的、最 人道的采血方法！
优点： 1.不会给大小鼠造成大的伤害 2.可反复采血，每次采血量可控于0.2-
0.5ml 3.操作方便，无需麻醉 4.采血后动物恢复快 5.符合3R原则
颌下静脉采血
2
3
1 1.无菌的、单包装的、一次性采血针
2. 4.0mm的针头适合小鼠（2到6周大小的BALB/C和 C57Bl/6)。
3. 5.0mm的针头更适合2个月或者更大的成年鼠。
实验室常用抗凝剂
乙二胺四乙酸（EDTA）盐 枸橼酸盐 草酸盐 肝素
常用：（采血后立即颠倒混匀8次） 1.黑色：枸橼酸钠； 血沉 2.浅蓝色：枸橼酸钠； 血凝试验（如PT、APTT） 3.深蓝色：肝素钠或EDTA-Na2；血液微量元素 4.紫色：EDTA-K2； 血常规（血液细胞分析） 5.绿色：肝素锂； 大部分生化、血氨 6.灰色：血糖降解抑制剂和EDTA-Na2； 血糖 7.棕色：肝素钠或EDTA-K2； 血铅 8.浅黄色ACD管： 葡萄糖、抗凝剂；血库试验 9.浅黄色SPS管： SPS液、氯化钠溶液；血液培养、微生物培养
健脾祛湿针法对ob小鼠瘦素的影响
健脾祛湿针法对ob小鼠瘦素的影响目的：探讨健脾祛湿针法电针对ob小鼠瘦素影响规律。
方法：将18只ob/ob 小鼠随机分成3组：针刺组、假针刺组、肥胖对照组，以c57小鼠作为固定组、以及空白对照组。
电针治疗时电针穴位组取后三里、三阴交、中脘和关元穴。
固定组、以及空白对照组、肥胖对照组不予以电针刺激，电针非穴位组选取斜肋部针刺。
各组体重差及体重降低率应用spss19.0统计软件进行单因数方差分析。
实验结束时，消毒小鼠眼球后，摘除小鼠眼球，取血并提取血清。
采用免疫酶联法测定瘦素的含量。
获得数据后应用spss19.0统计软件进行单因数方差分析其组间差异。
结果：1、通过28天的治疗，电针穴位组与肥胖对照组体重增长率有显著性差异（P=0.000），说明电针能显著降低ob小鼠的生长率。
2、经间单因素方差分析电针穴位组与其余各组血清中瘦素含量有显著性差异（P＜0.05）。
结论：统计结果显示健脾化湿针法显著改变了ob小鼠血清中瘦素含量，针对于瘦素紊乱的肥胖有重要的干预作用。
标签：针灸;瘦素;ob小鼠;1 前言肥胖（obesity）是指一定程度的明显超重与脂肪层过厚，是体内脂肪，尤其是甘油三酯积聚过多而导致的一种状态，是能量的摄入大于消耗，造成体内脂肪过度积聚或分布异常的一种慢性代谢紊乱性疾病疾病。
中医认为脾失健运，导致水湿内停是肥胖的基本病理机制，在治疗上以健脾利湿为主要原则。
在中医理论的指导下，中药、针刺、穴位埋线、灸法、耳穴压豆等等方法都广泛应用于临床。
而针灸以其安全、减肥作用显著、疗效持久及毒副作用小的优点已得到越来越多人的关注。
针灸减肥的基本理念是以调整脾胃功能和神经内分泌为原则，通过调整体内多种活性物质及代谢途径的综合作用而达到减肥效果的[2]。
即通过刺激经络腧穴来调整下丘脑—垂体—肾上腺皮质和交感—肾上腺髓质两大系统功能，加快基础代谢率，由此提高脂肪循环，产生热量，使积存的脂肪消耗掉，进而调整、完善、改善人体自身平衡[3]。
动物血液的采集、抗凝及血清分离技术实验目的
动物血液的采集、抗凝及血清分离技术实验目的动物血液的采集、抗凝及血清分离技术实验，是一项常用的生命科学实验技术。
该实验的主要目的是使用该技术从动物体内采集血液样本，然后对血液样本进行抗凝和血清分离处理，得到纯净的血清样本，以进行后续的研究。
血液是维持生命的重要物质之一，血清样本中含有许多生物大分子，如抗体、酶、激素等。
因此，血清样本可以用于研究生命科学领域的课题，如基础医学研究、药物研发、生物学实验等。
实验材料：小鼠或大鼠、抗凝剂、离心管、离心机、移液器、冰桶、平板、热水浴。
实验步骤：1、选择小鼠或大鼠进行血液样本的采集。
准备好动物和所需实验材料。
2、将离心管标明，每只小鼠或大鼠用一个离心管，分别通入不同的抗凝剂中，使抗凝剂充分混合。
3、拿出小鼠或大鼠，用酒精或碘酒消毒动物的采血部位（一般为尾部），并用镊子夹着皮肤使之易于穿刺。
4、用注射器注入部分抗凝剂，让其渗到穿刺处，然后在穿刺处刺入注射器，缓慢吸出血液至离心管中。
每只小鼠或大鼠最多采集300-500μL。
5、将血液样本离心约10分钟，血细胞沉淀在管底，将上清液吸出到新的离心管中。
6、将新的离心管置于热水浴中，设定温度在56-58℃之间，使血清凝结，然后置于冰桶中冷却。
7、将血液中的凝块用棉签或吸头慢慢挑出，将纯净的血清样本转移至新的离心管中。
8、用移液器分装血清样本，冷冻保存或使用于后续实验中。
实验注意事项：1、动物对人类的消毒要求严格，操作前要仔细消毒，以防止交叉感染。
2、由于采血时对动物的创伤，应采取痛苦较小或无痛的方法。
3、血液样本的采集量应根据动物种类、体重和年龄等因素而定，不可过多。
4、血清要避免暴晒和震荡，冷冻保存期限为1年左右。
需要重新使用时应先将样品回温至室温，避免多次冻融。
血液的采集、抗凝及血清分离技术实验是一项成熟的生命科学实验技术，它广泛应用于生物学、医学、药学等领域。
本实验的完成不仅能让学生学会实验操作的基本技巧，更能深入理解动物血液及其组成，为进一步的研究打下坚实的基础。
动物实验
动物实验●动物的选择选择的原则：一切实验动物应具有个体间的均一性，遗传的稳定性和容易获得三个基本要求。
1.从研究目的和实验要求选择，尽量选择与研究对象的机能，代谢，结构，疾病性质的动物。
2.是否易获得，是否经济，是否容易饲养。
●实验动物本实验室常用的实验动物多为小鼠和家兔1.小鼠(Mus musculus)实验小鼠是目前教学，医学科学研究工作中经常应用的，使用量最大的一种动物。
其性成熟早，产仔多，繁殖快，体型小，便于管理，价格低廉，应用极广，特别使用于需要大量动物进行的实验，如药物筛选，半数致死量，药物的效价比较等。
用人工接种或化学致癌物方法可以导致生长各种响应肿瘤，因此也很适应抗癌药物的研究。
我国医学实验中常用的小鼠是野生鼷鼠的变种，属于哺乳纲，啮齿目，鼠科，鼠属。
小鼠1.5-2 月龄体重达20g以上，可供实验使用。
常用的实验小鼠，尤其是纯品系小鼠，经过人们长期的定向培育与纯化之后，一般具有与野生动物或家畜不同的独有特性（对实验的敏感性和实验结果的一致性，个体动物遗传的均一性），这些都是衡量实验小鼠质量好坏的重要标志。
我国常用的实验小鼠品种有：Balb/c鼠，昆明鼠等。
2．家兔(Oryctolagus cunieulus Rabbits)兔形目，兔科。
常用的家兔为真兔属，由欧洲野生穴兔驯化而成，目前已有五十多个品种。
生物医学研究中常用的家兔均为欧洲兔的后代，使用最多的有新西兰兔，大耳白兔，青紫兰兔，荷兰兔，弗莱密西兔。
●抗原剂量的选择不同抗原的免疫原性强弱不同，取决于其分子量，化学活性基团，立体结构，物理性状和弥散速度等。
抗原的免疫剂量依照给予抗原的种类，免疫次数，注射途径以及受体动物的种类，免疫周期及所要求的抗体特性等而不同。
剂量过低不能形成足够强的免疫刺激，剂量过高，又有可能造成免疫耐受。
在一定范围内，抗体效价随注射抗原的剂量而增高。
蛋白质抗原的免疫剂量比多糖类抗原宽。
一般而言，小鼠首次抗原剂量为50-400μg/次，大鼠为100μg-1mg/次，加强免疫的剂量为首次剂量的1/5-2/5。
小鼠实验在各药物剂型研究中的应用
小鼠实验在各药物剂型研究中的应用实验小鼠来自与野生小鼠，经过人们长期选择培育而成。
十七世纪就被人们用作动物实验，是目前应用最广泛、被研究最详尽、品种最多的哺乳类实验动物，被广泛运用于各种药物试验。
药剂学在剂型的开发中同样需要药效学实验数据作为支持，所以各种剂型的动物学实验就很有必要，以下是几种常用剂型的小鼠实验做为例子进行探讨。
1.丸剂我们以祛风息痛丸为例进行讨论。
祛风息痛丸由祖师麻、独活、木瓜、当归等16味中草药组成，具有祛风、散寒、活血、止痛等功用，临床用于风寒湿痹、四肢麻木、周身疼痛和腰膝酸痛等症。
1.1 实验前准备药品与试剂祛风息痛丸(QF)(TW)：为糖衣浓缩丸，去糖衣后呈棕褐色，素丸每10丸重3．0 g，相当于生药3．0 g。
本试验所用为QFXTW成丸前药粉，为棕褐色粉末，1．0 g药粉与1．0 g祛风息痛丸含生药量相同，，临用前用蒸馏水配制为适当浓度的混悬液。
阿司匹林：临用前用蒸馏水配制为适当浓度的混悬液。
醋酸等试剂为国产分析纯试剂。
实验动物健康成年昆明种小鼠，日龄为45d，体重为18—22 g，雌雄兼用，灌胃给药前禁食不禁水8—12h。
1.2 实验方法1.2.1 对腹腔注射醋酸所致小鼠扭体反应的影响昆明种小鼠100只，体重18—22 g，随机分为5组，每组20只，雌雄各半。
对照组：灌胃生理盐水10 ml／kg；QFXTW 低、中、高剂量组：分别灌胃QFXTW 0．36，1．08，3．24 g／kg。
阳性药对照组(阿司匹林组)：灌胃阿司匹林0．4 g／kg。
每日灌胃一次，连续给药10 d，末次灌胃后2 h，给每只小鼠腹腔注射(ip)0．7％的醋酸(临用前新鲜配制)每只0．2 ml，5 min后记录15 min 内小鼠的扭体反应次数(扭体反应表现为动物腹部内凹，臀部高起，躯干和后肢伸张[1]）。
．1.2.2 对小鼠热板法痛阈的影响采用RI~200智能热板仪(成都泰盟)，控制热板温度为(55±1)℃进行热板实验 2。
常用实验动物的采血小白鼠的红白细胞记数2010
实验用品
乙醚、二甲苯棉球、常用手术器械、 注射器、玻璃取血管、培养皿、血细胞 计数板、计数器、显微镜、微量吸血管、 酒精棉球、消毒脱脂棉球、RBC稀释液、 WBC稀释液。
RBC稀释液：0.9%NaCl溶液 NaCl（维持渗透压）0.5g， Na2SO4（使溶液比重增加，RBC均匀分布不易下 沉）2.5g， HgCl2（固定RBC并防腐）0.25g，蒸馏水加至 100ml。 WBC稀释液：冰醋酸1ml（破坏RBC），1%龙胆紫 1ml（染白细胞核，便于计数），加蒸馏水至 100ml。
小鼠RBC正常范围：7.7-12.5×1012个/L(150～210个/格) 小鼠WBC正常范围：4.0-12.0×109个/L (10～30个/格)
小白鼠采血
1、剪尾采血 需血量少时可用此方法。
将动物固定,显露尾部,将尾尖剪去约5mm，从 尾根部向尾端部按摩，血即从断端流出。 若用二甲苯棉球涂擦尾部或事先将鼠尾浸在 45℃水中数分钟，使尾部血管充盈，可采到较多 的血，但注意二甲苯可致溶血。也可用锋利刀片 割破尾动脉或尾静脉，让血液自行流出，采血后， 消毒，止血。如将动物麻醉取血量可更多些。小 鼠每次采血约0.1ml，大鼠约0.4ml。为了多次反 复取血应尽量从鼠尾末端开始。
穿刺，血液借心脏跳动的力量进入注射器。亦 可在动物麻醉后，切开动物胸腔，直视心脏内 抽血或剪破心脏，直接用注射器、吸管等吸血。
4、眼眶后静脉丛采血
采血时，左手拇指和食指抓住鼠两耳之间的皮肤 使鼠固定，并用中指配合，轻轻压迫颈部两侧，阻 碍静脉回流，使眼球充分外突，提示眼眶后静脉丛 充血。右手持一次性采血针，将其一端插入内眼角 与眼球之间，轻轻向眼底方向刺入，小鼠刺入约2— 3mm，大鼠刺入约4—5mm，当感到有阻力时即停止刺 入，旋转微量吸血管以切开静脉丛，血液即流入取 血管中，采血结束后，拔出取血管，放松左手，出 血即停止。用本法短期内可重复采血。小鼠一次可 采血0.2—0.3ml，大鼠一次可采0.5—1.0ml。
小鼠外周血单个核细胞分离、纯化
小鼠外周血单个核细胞分离、纯化徐太哲;李丽;王长山【摘要】目的:探讨小鼠外周血单个核细胞(PBMC)最佳分离条件,提高细胞获得率与纯度,以便后续分子生物学实验.方法:小鼠摘除眼球取血,设置离心力、离心时间、实验环境温度等梯度优化,分别采用EDTA-K2、肝素、枸橼酸钠抗凝,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞,直接进行贴壁培养和分析获得率、纯度,计数存活率.结果:Ficoll密度梯度离心法经条件优化后分离的PBMC纯度可达85％,细胞获得率最高可达80％以上,活细胞百分率在92％以上.结论:Ficoll密度梯度离心法在优化条件下可有效地分离PBMC,对后续分子生物学实验无影响.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2016(039)004【总页数】3页(P10-11,13)【关键词】小鼠;Ficoll密度梯度离心;PBMC【作者】徐太哲;李丽;王长山【作者单位】佳木斯市红十字医院,黑龙江佳木斯154003;佳木斯大学,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学,黑龙江佳木斯154007【正文语种】中文【中图分类】R446.11+3外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)包括淋巴细胞和单核细胞。
是免疫系统的重要组成，是研究免疫老化和衰老的主要依据。
研究T、B淋巴细胞首要分离外周血单个核细胞，主要的分离方法是Ficoll-hypaque密度梯度离心法，因血液中各组成成分的沉降系数存在差异，而得以分离[1]。
离心后，单个核细胞因与分离液密度相当，集中在血浆层和分层液的界面上，呈白雾层，吸取该层细胞经洗涤离心即获得PBMC。
PBMC分离是分子生物学试验常用的技术，其效果直接影响PCR等后续试验结果。
实验对象小鼠因体重小，体内血液量少，Ficoll密度梯度离心法正适用这样少量血液的分离，本文探讨小鼠外周血单个核细胞的分离最佳条件。
1.1 材料与分组BALB/c小鼠18只，5～6月龄，体重23～25g，雌雄不限；小鼠外周血单核细胞分离液试剂(天津市灏洋生物制品科技有限责任公司)。
老鼠眼眶取血
.眼眶静脉丛采血采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套)，应防止动物窒息。
当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。
右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3～4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm)，使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。
刺入浓度，小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm。
当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。
若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。
若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。
左右两眼轮换更好。
体重20-25g 的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。
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小鼠摘除眼球采血及分离血清
一．器材离心管，弯头镊子，离心机，移液器
二．步骤
1. 摘除眼球采血
（1）左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤，小指固定尾部；（2）中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位，无名指按在腹部，捻动拇指，轻压取血侧眼部皮肤，使眼球充血突出；（3）用弯头镊夹取眼球；（4）根据需要捻动拇指与食指的方向，使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管；（5）同时用左手中指轻按小鼠心脏部位，以加快心脏泵血速度；（6）当血液流尽时，用脱臼法处死小鼠。
2. 分离血清（1）将离心管中的血置37℃温箱或水浴1小时，也可室温2小时；（2）再置4℃冰箱内3～4小时或过夜；（3）待血液凝固血块收缩后，4000rpm离心10分钟；（4）取上清于干净的离心管中，保存于-20℃，或加入防腐剂(0.01％硫柳汞或0.02％叠氮钠)，置4℃冰箱中保存备用。
三．注意： 1. 采血前，可给小鼠喂点水； 2. 摘眼球采血取血量能达0.8～1.2ml，但老年和疾病小鼠血量会降低；3. 采血场所有充足的光线；室温夏季保持在25～28℃，冬季，15～20℃为宜；4. 防止血液浸入眼部周围毛发，否则会造成污染和溶血； 5. 按压心脏时，用力一定要适度，若用力过度，一是会造成动物采血中途死亡，使采血不完全，二是有可能引起溶血现象发生，影响实验结果；6. 采血用的器材和试管必须保持清洁干燥；7. 采血时要防止小鼠挣扎，否则会损失比较多的血样；8. 血液凝固后不宜在4℃放置过久，否则会溶血。