柱色谱--column chromatography--Ilex chinensis
色谱法的分类及其原理
色谱法的分类及其原理（一）按两相状态气相色谱法:1、气固色谱法 2、气液色谱法液相色谱法:1、液固色谱法 2、液液色谱法（二）按固定相的几何形式1、柱色谱法(column chromatography) ：柱色谱法是将固定相装在一金属或玻璃柱中或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从柱头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法2、纸色谱法（paper chromatography）：纸色谱法是利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。
3、薄层色谱法(thin-layer chromatography, TLC) ：薄层色谱法是将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。
（三）按分离原理按色谱法分离所依据的物理或物理化学性质的不同，又可将其分为：1、吸附色谱法：利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。
适于分离不同种类的化合物（例如，分离醇类与芳香烃）。
2、分配色谱法：利用固定液对不同组分分配性能的差别而使之分离的色谱法称为分配色谱法。
3、离子交换色谱法：利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法，利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现分离。
离子交换色谱主要是用来分离离子或可离解的化合物。
它不仅广泛地应用于无机离子的分离，而且广泛地应用于有机和生物物质，如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离。
4、尺寸排阻色谱法：是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法，体积大的分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻，较早的淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。
这样，样品分子基本按其分子大小先后排阻，从柱中流出。
被广泛应用于大分子分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。
柱后衍生交换离子色谱法测定氨基酸组成
柱后衍生交换离子色谱法测定氨基酸组成
柱后衍生交换离子色谱法（Postcolumn Derivatization Ion Exchange Chromatography，PDIEC）是一种常用来测定氨基酸组成的分析方法。
该方法使用带有离子交换功能的柱进行色谱分离，将样品中的氨基酸分离开来。
在柱后，通过衍生化反应将氨基酸与某种试剂发生反应形成带有荧光或紫外可见吸收性质的产物，并通过检测这些产物的荧光或吸收信号来定量分析。
常用的衍生试剂有二硫染料（如二硫苏丹黑D、二硫苏丹红G 等）、芳香酮类（如二硫二羟甲基苯基乙酮，DABS-Cl）等。
这些试剂在与氨基酸发生反应后，会产生被吸收或荧光激发的物质，从而使氨基酸能够被检测到。
PDIEC方法具有高分离能力、高灵敏度和高选择性的优点，能够同时测定多种氨基酸，且对一些特定的氨基酸有较好的分析效果。
同时，该方法还能够测定非天然氨基酸和残基组成，对于生物样品的分析具有较高的应用价值。
总之，柱后衍生交换离子色谱法是一种常用的测定氨基酸组成的分析方法，可用于生物样品的分析和研究。
柱色谱(column chromatography)
操作预备1 取少量样品制成1%-5%的溶液；点板；确定合适的展开剂（对于混合溶剂，若极性大，还要进行变换，e.g. EA:PE=2:1→EA:PE=1:1）。
2 根据样品的质量、点板分离情况，选择大小合适的色谱柱以及合适量的硅胶。
色谱柱的选择：0-1g → 3.0cm2-3g → 4.3cm4-7g → 5.7cm吸附剂用量：〉30倍样品色谱柱高度：〉10倍柱直径湿法湿法装柱1 将柱竖直固定在铁架台上，取少量脱脂棉于色谱柱底部，用长玻璃棒将其轻轻塞紧，再在其上盖一层约0.5cm厚的石英砂。
2 关闭活塞，向柱中倒入容积1/4的洗脱剂。
3 将需要量的吸附剂置于烧杯中，加洗脱剂浸润并调成糊状。
4 打开柱下活塞调节流速为1滴/s，一次性将调好的吸附剂在搅拌下自柱顶缓缓注入柱中，轻轻敲击柱身下部四周，以保证吸附剂沉积面填装平整，并用空气泵压实。
（在以后加洗脱剂及石英砂时，务必保持沉积面平整）注：吸附剂最好一次加完，若分数次加，则会沉积为数层，在分离时易被误认为是一个色层。
5 于吸附剂沉积面上盖一层0.5cm厚的石英砂，敲击柱身使石英砂沉积面平整。
6 关闭活塞，装柱完毕。
注：在全部过程中，都需要始终保持吸附剂上有一段液柱，以避免空气进入吸附剂，若形成气泡应设法排除，否则倒出重装。
湿法上样湿法制样：将待分离样品溶于尽可能少的溶剂中。
1 打开柱下旋塞，小心放出柱中液体至液面下降到石英砂沉积面处，关闭活塞，将配好的溶液沿着柱内壁缓缓加入。
（切勿冲动沉积面）2 溶液加完后，小心开启柱下旋塞，放出液体至溶液液面将至石英砂沉积面，关闭旋塞，用少许溶剂冲洗柱内壁。
（同样不可冲动吸附剂）再放出液体至液面降到石英砂沉积面，继续冲洗柱内壁至柱壁和石英砂层没有颜色。
（样品全部进入到吸附剂中）注：加样操作的关键是要避免样品溶液被冲稀。
3 最后加入一块脱脂棉并轻轻压实，装柱完毕。
过柱1 由柱上端缓缓加入适量洗脱剂，打开柱下端活塞，开始过柱。
Chromatography 色谱 色谱法 色谱分析
二、色谱法的起源
1．创立：1906年，俄国植物学家Tsweet 植物色素分离见图示 2．现状：一种重要的分离、分析技术 分离混合物各组分并加以分析,还可以进行 制备 固定相——除了固体，还可以是液体 流动相——液体或气体 色谱柱——各种材质和尺寸 被分离组分——不再仅局限于有色物质
1906年，Tsweet 发现色谱分离现象
2、展望
⑴新型固定相和检测器
手性固定相、浸透限制性固定相、灌注色谱固定 相、生物色谱固定相等；蒸发光散射检测器
⑵色谱新方法的研究 超临界流体色谱法、毛细管电咏法、毛细管电色 谱法 ⑶色谱联用技术 GC-MS、LC-MS、GC-FTIR ⑷色谱专家系统 是一种色谱－计算机联用技术
第二节
色谱过程和基本原理
]
Ix: 待测组分的保留指数，z与z+n为一对正构烷烃 的含C数，一般n为1。t’R(X) 应介于t’ R(Z)和 t’ R(Z+n) 之间
（三）色谱峰高和峰面积
1.峰高h：指组分在柱后出现浓度极大时 的检测信号，即色谱峰顶至基线的距离 2.峰面积A：指色谱曲线与基线间包围的面 积
（四）色谱峰区域宽度：色谱柱效参数
Chromatography 色谱法
第一节 色谱法概述
一、色谱法的定义和用途 二、色谱法的特点 三、色谱法的起源
四、色谱法的分类
五、色谱法的发展
一、色谱法的定义及用途
定义：色谱法 (chromatography)，是一种物理或 物理化学的分离分析方法。
原理：利用物质在固定相和流动相中的分配系数 不同，使混合物中的各组分分离。 以前学过的分离方法有： 1. 沉淀法 是利用物质溶解度的不同而进行分离。 2. 蒸馏法 是利用有机物沸点的差异进行分离。 3. 萃取法 是利用组分在水相和有机相（互不相 溶）中的分配素数不同进行而分离。
快速柱色谱指南
警示：这些材料所叙述的实验可能是危险的，因此需要高标准的安全训练、特殊的设备和装置，并在合适的人员监管下才能进行。
对于履行这样的安全程序和措施，你负有全部的责任和义务，并独自承担其风险。
对于所提供的任何材料的内容或其执行情况， MIT 将不负任何责任和义务，不承担任何风险。
法律提示7.9. 快速柱色谱使用指南综述：快速柱色谱(Flash Column Chromatography)是一种快速而且（通常是）容易的分离复杂混合物的方法。
在5.301中，我们要进行相对较大量的快速柱色谱分离，分离约1g左右的物质。
色谱柱通常都比这根柱子小，你们中的一些人在进入研究室后会有这方面的实践体会。
柱色谱和薄层色谱的原理一样，但它可以用于制备量物质的分离。
因为我们是用压缩空气将溶剂推过柱子，故称其为快速柱色谱。
这不仅使分离效果更好，并且可缩短过柱时间。
读物：更加全面的描述，请参阅LLP 第205-214页。
制备和操作快速柱色谱：1）确定干燥、不含溶剂的待分离混合物的重量。
2）用薄层色谱选取溶剂体系，使R f的值处于0.2～0.3之间，但如果混合物复杂，这可能不现实。
在比较复杂的情况下，可能需要借助梯度洗脱的方式，简单地说，就是在纯化洗脱的过程中不断提高溶剂的极性，该技术在后面有更加详尽的介绍。
但是在薄层色谱分析中，你必需确定哪种溶剂体系将会使不同的点样处于R f在0.2～0.3的范围之内。
3）确定用于样品上柱的方法。
你可有三种选择：净试样法，溶液法或硅胶吸附法。
净试样法：如果样品是非粘性油状物，使用净试样法最为容易。
你可以用一个长的滴管过滤器将液体引入柱中，然后用预先确定的溶剂体系进行淋洗，把所有组分洗入柱子中。
溶液法：净试样法有时可能会引起分离柱断层。
因此，对于液体和固体，更为普遍的方法是将样品溶于溶剂中，然后将溶液加入分离柱。
最理想的状态是，混合物中所有组分在该溶剂体系（通常是戊烷或己烷）中的R f为0。
这在多数情况下是难以实现的，所以可选用那种只移动混合物中一个化合物的溶剂，或者你可以简单地用所选择的洗脱液。
体积排阻色谱_(sec)柱用的仪器_概述说明以及解释
体积排阻色谱(sec)柱用的仪器概述说明以及解释1. 引言1.1 概述体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）是一种常用的分离和测定高聚物、生物大分子以及纳米材料的方法。
它基于溶剂流动时样品在柱填充物中的渗透性，通过这种渗透性差异来实现对不同大小分子的分离。
SEC在生命科学、化工、材料科学等领域具有广泛的应用前景。
本文旨在对体积排阻色谱所使用的仪器进行概述说明，并解释其工作原理和关键组件。
同时，我们将介绍体积排阻色谱柱的结构、选择和优化方法，以及对样品准备、流动相选择和优化、参数设置和调整等方面给出操作注意事项。
1.2 文章结构本文包括引言、体积排阻色谱(SEC)柱介绍、体积排阻色谱仪器装置及关键组件说明、体积排阻色谱分析方法和操作注意事项以及结论部分。
在引言中，我们将对文章内容进行概述说明，并明确文章结构。
接下来，我们将详细介绍SEC柱的原理、结构以及选择和优化方法。
然后，我们将对体积排阻色谱仪器装置中的压力控制系统、流速控制系统和柱温控制系统进行说明。
在接下来的部分，我们将介绍体积排阻色谱分析方法所涉及的样品准备与预处理要点、流动相选择和优化方法以及参数设置和调整技巧。
最后，我们通过结论对整篇文章进行总结。
1.3 目的本文的目标是全面介绍体积排阻色谱所使用的仪器，帮助读者了解仪器的工作原理和关键组件，并提供一些操作须知。
通过阅读本文，读者将对体积排阻色谱有更深入的了解，并能够在实验中正确选择和使用相关设备，从而更好地开展SEC 柱分析工作。
2. 体积排阻色谱(SEC)柱介绍:2.1 SEC柱原理:体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，简称SEC）是一种基于分子尺寸差异的色谱技术。
该技术利用特殊设计的SEC柱实现对溶液中分子的分离和纯化。
其原理是根据样品中溶质分子在柱填料孔隙中的扩散速度而进行分离。
大尺寸分子由于无法进入较小的孔隙而沿柱床快速流过，而小尺寸的分子则能进入较小孔隙并在其中被滞留更长时间，因此产生了不同尺寸分子之间的强迫排阻现象。
色谱chemistry
色谱chemistry
色谱（Chromatography）是一种在化学和生物化学中常用的分
离技术，它能够分离混合物中的成分并确定它们的相对含量。
色谱
技术在实验室分析、制药、食品科学、环境监测等领域中得到广泛
应用。
色谱技术根据不同成分在固定相和移动相之间的相互作用力的
不同来实现分离。
常见的色谱方法包括气相色谱（Gas Chromatography, GC）、液相色谱（Liquid Chromatography, LC）、超高效液相色谱（Ultra-High Performance Liquid Chromatography, UHPLC）和薄层色谱（Thin Layer Chromatography, TLC）等。
在色谱分析中，样品首先被注入到色谱柱中，然后通过柱内的
固定相与移动相的相互作用，不同成分会以不同的速率通过柱，从
而实现分离。
分离后的成分可以通过各种检测器进行检测和定量分析，常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器、质谱检
测器等。
色谱技术在分析化学中扮演着重要的角色，它被广泛应用于药
物分析、环境监测、食品安全检测、生物化学等领域。
通过色谱技术，我们可以快速、准确地分离和分析混合物中的各种成分，为科研和生产提供了重要的技术支持。
总的来说，色谱技术是一种非常重要的分离和分析方法，它在化学和生物化学领域有着广泛的应用前景，对于解决复杂混合物的分析和鉴定问题具有重要意义。
色谱法的分类及其原理
色谱法的分类及其原理（一）按两相状态气相色谱法:1、气固色谱法 2、气液色谱法液相色谱法:1、液固色谱法 2、液液色谱法（二）按固定相的几何形式1、柱色谱法(column chromatography) ：柱色谱法是将固定相装在一金属或玻璃柱中或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从柱头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法2、纸色谱法（paper chromatography）：纸色谱法是利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。
3、薄层色谱法(thin-layer chromatography, TLC) ：薄层色谱法是将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。
（三）按分离原理按色谱法分离所依据的物理或物理化学性质的不同，又可将其分为：1、吸附色谱法：利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。
适于分离不同种类的化合物（例如，分离醇类与芳香烃）。
2、分配色谱法：利用固定液对不同组分分配性能的差别而使之分离的色谱法称为分配色谱法。
3、离子交换色谱法：利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法，利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现分离。
离子交换色谱主要是用来分离离子或可离解的化合物。
它不仅广泛地应用于无机离子的分离，而且广泛地应用于有机和生物物质，如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离。
4、尺寸排阻色谱法：是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法，体积大的分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻，较早的淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。
这样，样品分子基本按其分子大小先后排阻，从柱中流出。
被广泛应用于大分子分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。