毛细管电泳仪分离测定雪碧中苯甲酸钠
毛细管电泳仪分离测定雪碧 化学实验教学中心
饮料中各组分的分离测定色谱科学自从1903年俄国的茨维特发明了液固柱色谱之后，已有近100年的历史。
但是在20世纪末的20年间，以前所未有的速度发展，特别是进人生命科学。
材料科学和信息科学时代，对分离分析提出越来越高的要求。
常见的色谱可分为气相色谱、液相色谱、毛细管电泳。
气相色谱法（GC）分离效率、选择性、灵敏度都很高，但是它只适用于热稳定性好、易挥发的物质。
高效液相色谱法（HPLC）不受热稳定性及挥发性的限制，可以分析热稳定性差。
难挥发的物质，但是和GC相比，缺乏灵敏的通用型检测器，实验中需消耗大量的有机溶剂，特别是对于大分子物质因其分子扩散系数小、传质阻力大，使柱效率大大降低，以至于难以分离分子量大于2000的物质。
经典电泳技术和色谱理论相结合，利用毛细管电泳的分离模式多样化，毛细管内壁的修饰方法及流动的缓冲液中的添加剂的不同，以及新检测技术的发展，使毛细管电泳的应用非常广泛。
可分离多种阴阳离子、生物大分子等，利用多种手性选择剂，具有高分离能力的毛细管电泳在手性分离中极为重要。
饮料中的成份相对比较复杂，其中各种不同的物质选择不同的色谱分离检测方法至关重要。
本实验选取饮料中不同物质分别采用气相色谱、液相色谱、毛细管电泳等方法分离检测。
通过实验对比，对各类色谱进行较深入了解。
气相色谱仪分离测定奶茶中胆固醇1 实验目的（1）了解外标法定量的基本原理及操作步骤，掌握其计算方法及注意事项。
（2）了解奶茶的前处理过程，掌握仪器的基本操作。
2 实验原理外标法也叫标准曲线法，适用于在成分很复杂的样品中对某一种或几种组分定量，常用于常规分析。
外标法首先要配置一系列浓度的标准溶液，分别测定峰面积，以峰面积对浓度作图（下图）：A i～c i 关系曲线A i=fC i+a(a是常数)，用线性回归法求出f 和a，代入未知样的峰面积求出未知样的组分含量。
在用外标法定量时，要注意进样量一定要标准不能有误差，否则会导致标准曲线上的点偏高或偏低，影响结果的准确性。
毛细管电泳法同时分离检测饮料中的六种食品添加剂
毛细管电泳法同时分离检测饮料中的六种食品添加剂代语林;董婵婵;邓宁;何建波;王燕;朱燕舞【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)005【摘要】建立毛细管电泳法同时测定饮料中苯丙氨酸、对羟基苯甲酸甲酯、肉桂酸、山梨酸钾、抗坏血酸和苯甲酸6种食品添加剂的分析方法.在Peakmaster 5.3软件对电泳参数模拟的基础上,考察了缓冲液浓度、pH值以及分离电压对6种食品添加剂分离效果的影响.结果表明,在检测波长214 nm,进样时间10s的情况下,确定最佳电泳条件为40 mmol/L pH 9.0Na2HPO4-H3PO4的缓冲液,分离电压12 kV.在此条件下,6种食品添加剂在20～160mg/L范围内呈良好的线性关系(R＞0.9800),检出限为0.23～0.77 mg/L,加标回收率为97.3％～103.0％,相对标准偏差(RSD)为2.0％～3.8％,精密度试验结果相对标准偏差(RSD)为2.0％～3.8％,表明该方法操作简便、准确度高、精密度良好,能满足饮料中6种食品添加剂的检测需求.【总页数】5页(P187-191)【作者】代语林;董婵婵;邓宁;何建波;王燕;朱燕舞【作者单位】合肥工业大学化学与化工学院,安徽合肥230009;合肥工业大学化学与化工学院,安徽合肥230009;合肥工业大学化学与化工学院,安徽合肥230009;合肥工业大学化学与化工学院,安徽合肥230009;合肥工业大学化学与化工学院,安徽合肥230009;合肥工业大学化学与化工学院,安徽合肥230009【正文语种】中文【中图分类】O657.8【相关文献】1.毛细管电泳法分离检测饮料中的防腐剂 [J], 王钰;杨思文;代语林;邓宁;王燕;何建波;朱燕舞2.用高效毛细管电泳法分离六种肽类混合物的方法探讨 [J], 王玉洁;黄志东3.高效毛细管电泳法同时检测饲料中六种抗氧化剂 [J], 庞军;刘文红;宋合兴;曹小妹;高文惠4.毛细管电泳法快速分离检测六种苯的取代物 [J], 王昕5.高效毛细管电泳法同时分离检测六种地龙多肽 [J], 周鑫悦;张诗琪;林露;陈莉;李琦;赖昕;余丽双因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
区带毛细管电泳法(CZE)测定饮料中苯甲酸的含量
『 ２ 】 中华人 民 共 和国国家标准 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ５ ０ ０ ９ ． １ ３ — ２ ０ ０ ３ ． 食 品中铜 的测定 【 ｓ 】 ． 中华人 民共和国卫生部 ２ ０ ０ ３ — ０ ８ — １ １ 发布 ， ２ ０ ０ ４ — ０ １ — ０ １ 实施． 【 ３ 】 邱德仁． 原子光谱分析【 Ｍ 】 ． 上海： 复旦大学出版社 ， ２ ０ ０ ２ ． 【 ４ 】 世界卫生组织（ ｗＨ ０） 《 饮用水 质准￣ Ｊ １ ） （ ２ ０ ０ ２ 年英文版 ） ． 【 ５ 】 中华人 民共和国农 业行业标 准 Ｎ Ｙ ／ Ｔ ４ ３ ４ — ２ ０ ０ ０ ． 绿色食品 果 汁饮 料 Ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｆ ｏ ｏ ｄ － ｆ ｒ ｕ ｉ ｔ ｄ ｒ ｉ ｎ ｋ ｉ ｎ ｇ ） ［ Ｓ ］ ． 农业部 ２ ０ ０ ０ — １ ２ — ２ ２ 批准 ， ２ ０ ０ １ — ０ ４ 一
表 １ 苯 甲酸 浓 度 与 相 应 的 峰 值
ＩＩ １ ２ １３ １ ４ １ ５ １ ６
时间 ｒ ａｉ ｎ 样品 ３
对 数 据 进 行 分 析 得 如 图 １的 标 准 曲 线 ， 其 中 峰 值 ＝１ ／ 峰高 的绝 ｘ － ｊ － 值 。 ３
图２ ３种 样 品 的 毛 细 管 电 泳 色 谱 图 讨 论 本 文 采 用 峰 高 作 为 定 量 依 据 ，简 便 易 行 。 该 实 验 采 用 毛 细 管 电 泳 法 ， 只 需 经 过 对 样 品 的 简 单 稀 释 、过 滤 、脱 气 处 理 ，在 很 短 的 时 间 内 就 能 对 样 品
表２
其 中 ，１ 、 ２和 ３号 峰 分 别 代 表 １ 、 ２和 ３号 样
品 中的苯 甲酸 的毛 细管 电泳谱 图。 国 家 标 准 规 定 ，果 汁 饮 料 中 的 苯 甲酸 含 量 不 得
雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量的分析研究【开题报告】
毕业论文开题报告化学工程与工艺雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量的分析研究一、选题的背景、意义食品的营养丰富，极易受微生物污染而腐败变质。
含乳饮料含有丰富的蛋白质类及多种维生素，为了延长保存期和改善口味，一般在产品中添加一些防腐剂，防腐剂便成为重要的食品添加剂之一，防止食品腐败变质，延长食品保存期，抑制食品中微生物繁殖；添加剂在食品加工过程中被广泛使用。
《食品安全法》于2009年6月1日起颁布实施，食品安全引起社会各界的广泛关注，苯甲酸是有机化学防腐剂，添加到食品中用于抑制微生物、糖的生长，但使用量过大对人体会造成一定危害。
能引起哮喘等一系列过敏症状。
因此对食品中苯甲酸的含量进行检测有重要意义。
二、相关研究的最新成果及动态高效液相色谱法测定酸奶中苯甲酸。
高效液相色谱法直接测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠，在国际(GB／TS009 28—1996)和(GB／TSO09 29—1996)方法中只适用于汽水、果汁、配制酒等液体样品．而对固体或半固体的样品前处理多采用有机溶剂提取，操作过程繁琐．有机溶剂对操作者的健康造成危害。
HPLC测定含乳饮料中的山梨酸和苯甲酸含量在我国食品卫生标准对其应用范围和使用限量都有明确的规定[1 ]对文献报道了很多食品添加剂的分析方法,如薄层色谱法、气相色谱法、紫外分光光度法及传统的高效液相色谱法。
高效液相色谱法在对多种添加剂同时分析方面有其十分有利的条件。
在高效液相色谱法(HPLC)测定饮料中苯甲酸时，测量速度较慢，往往一针需要7—10 min，做一条工作曲线需要两小时左右，再测样品时仪器的灵敏度发生了改变，所以国家标准采用单点校正法测定，尽量缩短测量时间。
标准溶液的浓度尽量与待测溶液的浓度接近，可以消除仪器非线性影响，否则不在同一·线性范围内，可能引起较大的不确定度，而单点校正法并没有考虑线性影响，认为是绝对线性，不存在不确定度的。
根据小分量不确定度不足最大分量不确定度的1／3时，小分量不确定度可以忽略不计的原则，在本实验中，对于玻璃器皿的膨胀系数、A级吸量器具的不确定度均可以忽略，但对于样品预处理时使用的具塞比色管等给实验带来较大的不确定度，实验时必须加以控制，通过这样分析来源后，对于我们评定HPLC测量其他成分有很大的帮助。
测定碳酸饮料中苯甲酸钠含量
碳酸饮料中苯甲酸钠含量的测定与分析[实验日期]：年月日——月日[实验操作人]：[实验地点]：[实验目的]：1.学习使用双相滴定法进行饮料中苯甲酸钠的测定操作2.学习使用紫外—可见分光光度计，并将测定结果与双相滴定法进行比较。
3.体会化学分析方法和仪器分析方法在低含量测定中的优缺点[实验原理]：本实验采用双相滴定法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量。
本实验选做紫外-可见分光光度法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量，并将结果与双相滴定法进行对照苯甲酸钠的测定可以使用HCl滴定，但因为生成的苯甲酸常温下溶解度很小，几乎不溶于水，由此造成滴定终点的pH突越不够明显，另外游离的苯甲酸附着在容器和液面表面会影响观察滴定结果，并在一定程度上吸附少量的指示剂，不利于终点判断。
而苯甲酸在常温下难溶于水（0.34g/100ml），在空气中微挥发，有吸湿性，溶于热水，也溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。
苯甲酸钠常温易溶于水（53.0g/100ml，PH≈8）。
综合考虑，在本实验中采用乙醚来吸收水相中的游离苯甲酸，将苯甲酸提取入乙醇溶液中，之后在乙醇溶液中使用0.01mol/L的标准NaOH溶液以PP为指示剂滴定碳酸饮料样品至显粉红色，根据滴定消耗的NaOH标准溶液的体积计算碳酸饮料中苯甲酸钠的含量。
1注：选作部分相关内容见后。
[实验仪器]：50ml酸式滴定管，50ml碱式滴定管，250ml锥形瓶×3，500ml分液漏斗，1000ml1根据最新GB2760- 2003国家卫生标准规定,碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。
烧杯，250ml容量瓶×n，25ml移液管，10ml量筒，100ml量筒，玻璃棒，表面皿，带橡胶塞的细口瓶×2，50ml具塞量筒×2，2ml吸量管，10ml移液管。
电子分析天平（0.0001g），紫外-可见分光光度计，电热恒温水浴锅（室温+5℃~99℃）。
[实验试剂]：HCl溶液（1+1），40%NaOH溶液，草酸/邻苯二甲酸氢钾基准试剂，苯甲酸基准试剂，PP，无水硫酸钠(分析纯)，乙醚(分析纯)，NaCl(分析纯)，乙醇(分析纯)。
毛细管电泳法分离测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精
毛细管电泳法分离测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精胡美珍;王文铮;张燕琴【摘要】采用毛细管电泳-紫外检测法,考察了波长,电压,缓冲试剂、浓度、pH对山梨酸、苯甲酸、糖精分离的影响,得到了优化的实验条件.以硼砂20mmol/L(pH=7.5)为运行缓冲溶液,20kV为分离电压,检测波长为230nm的电泳条件下,进样时间为10s,山梨酸、苯甲酸、糖精可在12min内实现分离.山梨酸在5mg/L～50mg/L,苯甲酸在5mg/L～50mg/L,糖精在15mg/L～150mg/L范围内呈良好线性关系,迁移速度、峰面积相对标准偏差均小于4.5%,(n=5).用上述方法对实际样品进行测定,回收率在95%以上.【期刊名称】《上海师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2004(033)003【总页数】4页(P63-66)【关键词】毛细管电泳-紫外检测法;添加剂;山梨酸;苯甲酸;糖精【作者】胡美珍;王文铮;张燕琴【作者单位】上海师范大学,生命与环境科学学院,上海,200234;上海师范大学,生命与环境科学学院,上海,200234;上海师范大学,生命与环境科学学院,上海,200234【正文语种】中文【中图分类】O6570 引言毛细管电泳(简称CE)，是80年代初发展起来的一种新型高效的分离技术[1].它具有高效、快速、样品用量少、测定成本低等优点，自其产生以来，迅速渗透到与分析化学相关的各个学科.如：医药、环境、食品等各个领域.苯甲酸、山梨酸、糖精是常用的食品添加剂.国家规定限量使用.所以测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精的含量十分重要.目前上述三种添加剂，大都采用紫外分光光度法、薄层层析法、气相色谱法和高效液相色谱法等[2～4].本文用CE法分离测定上述三种添加剂，方法简便，灵敏度和重现性均符合食品分析的要求，样品前处理测定步骤较紫外光度法、薄层层析法简单，测定成本较HPLC低，有很好的实用价值.1 实验部分1.1 主要仪器与试剂仪器高效毛细管电泳仪、ACS2000紫外检测器(北京彩陆科学仪器有限公司)(中科院研究生院应用化学研究所); 毛细管总长度：60cm, 有效长度：54cm, 直径：50μm; CQ50超声波清洗器(上海超声波仪器厂);pHs-3C 型酸度计(上海华侨仪表厂);过滤器Ø25(上海市医工院);0.22μm 滤膜(上海兴亚净化材料厂);注射器5mL试剂硼砂(优级纯)、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、三(羟甲基)氨基甲烷(简称Tris)、山梨酸、苯甲酸、糖精均为分析纯，样品为汽水、番茄沙司，蜜饯，水为二次蒸馏水.1.2 实验方法1.2.1 标准样品的制备参照国标法，准确称取山梨酸、苯甲酸、糖精.分别溶解、定容，使其质量浓度均为1.0mg/mL.以0.22μm滤膜过滤备用.1.2.2 样品的制备汽水，经超声波超声，除去二氧化碳，0.22μm滤膜过滤，待用.番茄沙司、蜜饯：准确称取2g左右样品置于具塞小量筒中，加H3PO4数滴，准确加入乙醚10mL，连同量筒称其总量，猛烈振摇2min，再次称重，如重量减少，加入乙醚补充至原有重量，混匀.取乙醚5mL，置于烧杯中，经40℃水浴加热，将乙醚挥发后，用硼砂缓冲液定容至10 mL.经0.22μm滤膜过滤，待用.1.2.3 电泳条件以硼砂20mmol/L(pH=7.5)为电泳缓冲液，在20kV恒压下进行电泳分离，在230nm波长处检测，电动进样，进样时间10s.毛细管使用前用0.10mol/L的NaOH，水和电泳缓冲液分别冲洗30min.每次电泳后，用上述溶液各冲洗2min.2 结果与讨论2.1 测定波长的选择据有关资料[3,4]报道苯甲酸的最大吸收波长为227nm，山梨酸为250nm，糖精为207nm，综合考虑以230nm为测定波长.2.2 分离电压的选择分别配制山梨酸、苯甲酸、糖精浓度均为10mg/L的混合标准溶液.在波长为230nm，进样时间为10s，缓冲液为硼砂30mmol/L(pH=7.5)的电泳条件下，改变电压(10～25kV)，并观察分离情况.结果表明，电压在10～20kV范围内各组分的迁移时间随着分离电压增高，迁移时间减小，峰高增大，但分离度有所降低.电压增高，电流增大，产生焦耳热，使谱线变宽.综合考虑，实验选用20kV作为分离电压.2.3 缓冲试剂的选择分别配制浓度均为30mmol/L的硼砂、磷酸体系(磷酸二氢钠和磷酸氢二钠混合液)、Tris的缓冲体系，调节pH到7.5，进行试验.用山梨酸、苯甲酸、糖精浓度均为10mg/L的混合标准溶液试验.电泳条件：波长为230nm，进样时间为10s，电压20kV.结果表明，山梨酸、苯甲酸、糖精在在硼砂体系中分离情况最好，选择硼砂体系作为缓冲体系.2.4 缓冲液浓度选择以硼砂为缓冲液，分别配制20，30，40mmol/L硼砂溶液，pH均调节为7.5，按上述电泳条件进行.结果表明，硼砂浓度为20mmol/L时，山梨酸、苯甲酸、糖精可在12min内得到很好的分离，峰面积、峰高和峰形较30 mmol/L，40 mmol/L好，故选择20 mmol/L硼砂作为运行缓冲溶液.2.5 缓冲液pH的选择以20mmol/L硼砂溶液为缓冲介质，分别调节溶液的pH为7.5，8.0，8.5，9.0.在上述试验确定的条件下，观察上述3种组分的迁移行为，实验结果表明在pH为7.5时山梨酸、苯甲酸、糖精迁移时间差别最大，而且其中糖精的峰高较其他pH值时高，故缓冲液pH选择7.5.2.6 优化条件下的电泳图配制30 mg/L的山梨酸、30 mg/L的苯甲酸和90 mg/L的糖精混合标准溶液，按上述确定的分离条件进行，分离情况，见图1.2.7 工作曲线及检测限在上述优化条件下，对一系列山梨酸、苯甲酸、糖精的标准混合样品进行分析测定，测定其峰面积与浓度的关系，所得山梨酸、苯甲酸、糖精的线性范围相关系数及检测限.结果见表1.1-山梨酸；2-苯甲酸；3-糖精图1 混合标准液电泳图表 1 山梨酸、苯甲酸、糖精的线性范围及检测限被测物线性范围mg/L相关系数γ检测限mg/L山梨酸5.0^500. 99583.0苯甲酸5.0^500.99504.0糖精15^1500.99535.0*检测限按3倍噪声计算2.8 精密度试验配制浓度分别为30 mg/L的山梨酸、苯甲酸和90 mg/L的糖精的标准混合液平行进样5次，测得山梨酸迁移时间的RSD为1.9%，峰面积的RSD为4.5%；苯甲酸的迁移时间的RSD为2.2%，峰面积的RSD为4.2%；糖精的迁移时间的RSD 为3.8%，峰面积的RSD为3.3%.2.9 实际样品的测定取汽水、番茄沙司、蜜饯，经预处理后，按上述确定的电泳条件进行分离测定，结果见表2：表 2 实际样品测定结果(n=3)样品名称组分实际含量 (mg/L)添加量(mg/L)测得量(mg/L)回收率(%)汽水苯甲酸81.4440119.495.0番茄沙司苯甲酸82.2080169.4109山梨酸68.3580149.2101蜜饯苯甲酸107.080183.295.0糖精104.040145.11032.10 结论本法选用20mmol/L(pH=7.5)的硼砂作为缓冲溶液，20kV为采样和分离电压，10s进样，检测波长为230nm的电泳条件下，，山梨酸、苯甲酸、糖精可在12min内得到分离.本法线性关系良好(R>0.995)，迁移时间和峰面积相对标准偏差均小于4.5%，实际样品测定的回收率在95%以上，方法简单、快速，相对于其他分析方法，具有预处理简便，检测成本低等特点.由此可见，毛细管电泳法在食品分析领域有良好的应用前景.参考文献:[1] 陈义. 毛细管电泳技术及应用[M]. 北京：化学工业出版社,2000.[2] 胡慰望，谢笔钧.食品化学[M].北京：科学出版社,1992.[3] 国家技术监督局. 中华人民共和国国家标准[S].1996.[4] 黄伟坤.食品检验与分析[M]. 北京：中国轻工业出版社,1993.。
碳酸饮料中笨甲酸钠含量的测定与分析
碳酸饮料中笨甲酸钠含量的测定与分析摘要碳酸饮料中苯甲酸钠添加含量不仅影响着企业的品牌效益还会影响到消费者安全问题，然而目前国家标准中苯甲酸钠含量的测定方法不太适合测定实验研究，本实验提供了两种比较实用便捷和低成本的分析测定技术。
碱滴定法测定笨甲酸钠用标准氢氧化钠溶液滴定处理液至初显粉红色为终点，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积，再运用公式计算出样品中苯甲酸钠含量。
紫外分光光度法测碳酸饮料中的苯甲酸钠在酸性条件下经乙醚提取分离后,测定样品中苯甲酸钠的吸光度, 通过标准曲线的回归方程查得样品中苯甲酸钠的含量。
这两种方法不需要贵重的气相或液相色谱仪, 样品处理简单易于操作, 检验结果与国家标准中高效液相色谱法测定结果基本一致。
可作为饮料产品中苯甲酸钠含量监控的有效方法。
关键词：碳酸饮料苯甲酸钠碱滴定法紫外分光光度计1、前言苯甲酸钠又称安息香酸钠，分子式为C7H5NaO2，性状白色颗粒或结晶性粉末。
无臭或微带安息香气味,味微甜,有收敛性;易溶于水（常温）53.0g/100ml 左右,PH在8左右；是酸性防腐剂,在碱性介质中无杀菌,抑菌作用;其防腐最佳PH是2.5-4.0，在PH5.0时5%的溶液杀菌效果也不是很好.苯甲酸钠亲油性较大,易穿透细胞膜进,细胞体内,干扰细胞膜的通透性,抑制细胞膜对氨基酸的吸收;进入细胞体内电离酸化细胞内的碱储,并抑制细胞的呼吸酶系的活性,阻止乙酰辅酶A缩合反应,从而起到食品防腐的目的。
苯甲酸钠是用于内服液体药剂的防腐剂，有防止变质发酸、延长保质期的效果。
我国食品防腐剂主要采用苯甲酸钠及山梨酸钾，由于苯甲酸钠价格便宜，在碳酸饮料等饮品中作为防腐剂被广泛使用。
但苯甲酸钠用量过多会对人体肝脏产生危害, 甚至致癌。
为确保食品添加剂的绝对安全使用, 根据GB2760- 1996国家卫生标准规定,碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。
在中国大多数地区,碳酸饮料生产企业众多,规模较大,对防腐剂苯甲酸钠的添加控制水平较高,然而也有可能会发生防腐剂苯甲酸钠超标的情况。
高效毛细管电泳法同时测定药品中苯甲酸和山梨酸钾
硝酸咪康唑乳膏 : 准确称取 0. 3540 g 硝酸咪 康唑乳膏 , 加入少量重蒸乙醇溶解 , 转移到 50 mL 容量瓶中 , 加入 2. 50 mL , 1000 mgΠL 焦性没食子酸 溶液 , 然后用 20 mmolΠL 硼砂溶液定容 。用滤膜过 滤后备用 。 2 结果与讨论 2. 1 检测波长与内标物的选择
图 1 苯甲酸和山梨酸钾溶液紫外吸收光谱图 Fig. 1 The ultraviolet2visible absorption spectra of benzoic
acid and potassium sorbate 1 - 苯甲酸 ; 2 - 山梨酸钾
在 20 mmolΠL 的硼砂 (pH 9. 2) 缓冲溶液中 , 4 种不同的内标物质都能够出峰 , 但是焦性没食子 酸的迁移时间和苯甲酸及山梨酸钾的迁移时间较
4
漂移 , 考虑迁移时间以及基线的稳定等因素 , 选 择 25 ℃作为分离温度 。 2. 7 线性范围 、检出限及精密度
分别配制 1 、10 、100 、200 、400 mgΠL 的苯甲酸 和山梨酸钾的混合溶液 (内含 50 mgΠL 的焦性没食 子酸) , 在上述选定条件下进行电泳分析 。以苯甲 酸的相对峰面积 y1 和山梨酸钾的相对峰面积 y2 (即被测物的峰面积与内标物的峰面积之比) 分别 对它们的质量浓度 ρ( mgΠL) 进行线性回归分析 。 实验发现 , 苯甲酸和山梨酸钾在 1～400 mgΠL 的范 围内具有良好的线性关系 , 线性回归方程分别为 : y1 = 0103167ρ + 0103713 , R1 = 019999 ; y2 = 0103436ρ+ 0101094 , R2 = 019999 。以噪音的 3 倍 (SΠN = 3) 推算得苯甲酸和山梨酸钾的检出限均为 0115 mgΠL 。在上述最佳的条件下 , 取 10 mgΠL 的苯 甲酸和山梨酸钾的混合液 (含有 50 mgΠL 的焦性没 食子酸) 连续进样 7 次 , 迁移时间和峰面积的相对 标准偏差 (RSD) 如表 1 。
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毛细管电泳仪分离测定雪碧中苯甲酸钠
实验时间 2015-04-03
前言
实验通过毛细管电泳来分离测定雪碧中苯甲酸钠，用外标法测定含量。
毛细管电泳仪分离原理是基于电泳与电渗两者的共同作用。
关键词
毛细管电泳仪电泳电渗外标法
实验原理
电泳指带电粒子在电场作用下作定向运动的现象。
电泳有自由电泳和区带电泳两类，区带电泳是将样品加于载体上，并加一个电场。
在电场作用下，得到良好的分离。
因此，电泳又称电色谱。
本实验通过使用毛细管电泳法对饮料中苯甲酸钠含量进行定性定量测量，得出了饮料中苯甲酸钠的含量。
毛细管电泳的特色在于其电泳过程在散热效率极高的毛细管内进行，故能够引入高的电场强度，从而全面改善分离质量。
细柱子的最大优点有两个，一是减小电流，因此减少自热。
二是增大散热面积（侧面积与截面积之比），加快散热。
但也带来了进样和检测等技术方面的困难。
电泳与电渗：
电泳是在电场作用下带电粒子在缓冲溶液中的定向移动。
电渗是一种液体相对于带电的管壁移动的现象。
由于毛细管材料通常为熔融硅胶，其中的硅醇基团，是构成氢键吸附并使毛细管内电介质产生电渗流的重要原因。
在常用缓冲液pH值下，毛细管壁带负电，于是在贴近管壁的液体表面形成了一个和管壁电荷异号的偶电层。
在毛细管电泳中，电渗是指高电场作用下，偶电层中水和阳离子或质子引起流体朝负极方向运动。
电渗是毛细管电泳中最重要和最有趣的性质之一。
既然同时存在着泳流和渗流，故粒子在毛细管电介质中的运动速度应当是这两种速度的矢量和，其迁移速率是电泳和电渗力的函数：正离子的运动方向和电渗一致，故它应当最先流出，中性离子的泳流速度为“零”，将随电渗而行。
负离子因其运动方向和电渗相反，在电渗速度大于电泳速度时，它将在中性离子之后流出。
电渗流的值是缓冲液pH值的函数，一般随该值的增加而增大。
另外，电渗流还和缓冲液的浓度及其添加剂，管子表面的修饰程度有关。
检测电泳毛细管的直径极小，产生的溶质谱带体积也极小。
通常采用的检测方法是电泳的柱上检测。
此时峰宽对迁移时间将有一定的依赖性。
移动较快的组分通过检测窗所需的时间较短，反之则较长。
毛细管电泳的紫外检测属柱上检测，检测点靠近管子的末端。
毛细管的外壁通常有一层几微米的聚酰亚胺涂层。
使用时需要将一小段管子（小于1cm）的聚酰亚胺涂层去掉，以
形成观察池。
苯甲酸钠是苯甲酸的钠盐，无味或略带安息香气味，在空气中十分稳定，易溶于水，由于比苯甲酸更易溶于水，比苯甲酸更常用与工业生产。
但有研究显示，苯甲酸类具有叠加毒性作用，普遍已改用山梨酸盐作为防腐剂。
仪器与试剂
实验步骤
1.样品制备
将雪碧、芬达倒入烧杯后放在超声波仪中超声脱气，去除饮料中溶解的空气以及大量二氧化碳气体。
脱气后的雪碧、芬达溶液通过0.45μm的滤膜过滤后，转移至进样瓶中备用。
母液浓度为1.098mg/mL,再分别从母液中移取2mL、4mL、6mL、8mL、10mL溶液至25mL容量瓶中定容。
2.仪器的前期准备
打开计算机，等计算机启动完毕后，打开毛细管电泳仪电源开关。
通讯完毕后，分别在进样盘中放入相应的溶液：1、NaOH溶液；2、纯水；3、纯水；4、5、6、缓冲液（硼酸钠）；
7、空；8、废液。
11、12、13、14、15为苯甲酸钠的标准溶液；17、18为待测的雪碧、芬达。
CE平衡步骤：
第一步，纯水冲洗5分钟。
点击相应图标，设定inlet为2号位置，outlet为8号位置，冲洗（flush）300秒。
第二步，缓冲液冲洗5分钟。
操作同上，设定inlet为6号位置，outlet为8号位置，冲洗300秒。
3.设定参数并测量
设置好参数，获得标准溶液和雪碧中苯甲酸钠的保留时间及峰面积。
4.关机
用纯水冲毛细管约半小时，观察基线平稳后，可在工作站上关闭电泳仪及检测器，然后关闭工作站，再依次关闭仪器电源及计算机电源。
数据处理
1.实验数据
实验中得到的原始数据如表2所示：
表2 实验原始数据
2.将表2中的数据代入Origin8.0
绘制标准曲线，得到图1
峰面积/m A U *s
约化浓度/mg/mL
图1 苯甲酸钠标准曲线
注：图中的浓度为约化浓度，其单位长度的真实浓度为： c =
1.098mg mL
×
225
=0.08784mg/mL
线性拟合曲线：y=34.09863x-9.54746 3.计算雪碧中苯甲酸钠浓度
C=(182.24857+9.54746)÷34.09863×0.08784mg/mL =0.49408mg/mL
实验结果及讨论
1.实验结果
标准曲线为：y=34.09863x-9.54746
雪碧中苯甲酸钠浓度为C=0.49408mg/mL
2.讨论
实验中可能影响毛细管电泳的因素：
毛细管电泳是基于电泳和电渗对离子的共同作用，因此影响电泳和电渗的因素都有可能影响到实验。
○1分离电压：
高电压是实现CE快速、高效的前提，电压升高，样品的迁移加大，分析时间缩短，但毛细管中焦耳热增大，基线稳定性降低，灵敏度降低；分离电压越低，分离效果越好，分析时间延长，峰形变宽，导致分离效率降低。
○2温度：
控制温度可以调控电渗流的大小。
温度升高，缓冲液粘度降低，管壁硅轻基解离能力增强，电渗速度变大，分析时间减短，分析效率提高。
但温度过高，会引起毛细管柱内径向温差增大，焦耳热效应增强，柱效降低，分离效率也会降低。
思考题
（1）毛细管电泳分离原理：
粒子在毛细管内电解质中的迁移速度等于电泳和电渗流(EOF)两种速度的矢量和。
正离子的运动方向和电渗流一致，故最先流出；中性粒子的电泳速度为“零”，故其迁移速度相当于电渗流速度；负离子的运动方向与电渗流方向相反，但因电渗流速度一般都大于电泳流速度，故它将在中性粒子之后流出，从而因各种粒子迁移速度不同而实现分离。
（2）色谱的定性依据：在相同实验条件下，同种离子或粒子的保留时间是相同的；还可以后接检测器。
（3）外标法属于比较法。
优点：方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量；缺点：准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。