免疫荧光染色试剂盒-抗兔
细胞表面间接免疫荧光染色
细胞表面间接免疫荧光染色细胞表面间接免疫荧光染色是一种常用的细胞学实验技术，用于研究细胞表面蛋白的分布和表达。
该技术通过标记特定抗体，利用荧光染料对其进行可视化，从而在显微镜下观察和定位特定抗原在细胞表面的分布情况。
本文将详细介绍细胞表面间接免疫荧光染色的原理、步骤和应用。
一、原理细胞表面间接免疫荧光染色的原理基于免疫反应。
首先，需要选择与目标抗原特异性结合的一对抗体，其中一种抗体被称为一抗，另一种抗体被称为二抗。
一抗是直接与目标抗原结合的抗体，而二抗则与一抗结合。
一般情况下，一抗是小鼠或兔子产生的，而二抗是针对小鼠或兔子IgG的抗体。
二、步骤1. 细胞固定：将待染色的细胞固定在载玻片上，常用的固定剂包括甲醛、乙醛和冰乙酸。
2. 渗透：为了提高染色抗体的进入细胞的能力，需要对固定的细胞进行渗透处理。
一般使用0.1% Triton X-100或0.5% Tween 20进行渗透。
3. 阻断：为了防止非特异性结合，需要对细胞进行阻断处理。
常用的阻断剂包括牛血清白蛋白（BSA）和羊血清。
4. 一抗孵育：将合适浓度的一抗溶液加到载玻片上，与细胞孵育。
一抗与目标抗原结合后，可以利用荧光标记的二抗进行可视化。
5. 二抗孵育：将荧光标记的二抗溶液加到载玻片上，与一抗结合。
常用的荧光标记物有荧光素（FITC）、罗丹明（Rhodamine）和碳氰菲（Cy5）等。
6. 洗涤：将载玻片进行洗涤，去除未结合的抗体。
7. 封片：将载玻片倒置在抗褪色剂中，然后用封片胶封住玻片边缘，使样品不受空气氧化。
三、应用细胞表面间接免疫荧光染色广泛应用于生命科学领域，尤其在细胞生物学和免疫学研究中发挥重要作用。
具体应用包括：1. 细胞表面蛋白定位：通过荧光染色，可以观察和定位特定蛋白在细胞表面的分布情况，如受体、通道蛋白等。
2. 细胞凋亡检测：细胞表面间接免疫荧光染色可以用于检测细胞凋亡相关标志物，如细胞色素C和半胱天冬酶-3等。
3. 免疫细胞分型：通过特定抗体的染色，可以对免疫细胞进行分型，如T细胞、B细胞、巨噬细胞等。
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明
多色免疫荧光染色试剂盒使用说明多色免疫荧光染色试剂盒使用说明酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采纳HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤(HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。
之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来其次轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
TSA具体原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与四周的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增加。
简洁来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素。
荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟接近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。
然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。
再换个一抗来其次轮孵育，周而复始。
等到全部抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最终去检测结果。
由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担忧抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大削减了试验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。
也就是说，假如用TSA技术，同一张片子上全部的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。
搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行试验，而且信号放大的倍数大大增加。
茹创生物开发的试剂盒详细酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。
组织-免疫荧光染色
组织免疫荧光步骤：
1）取出切片，用 M PBS冲洗5min×3次；
2）滴加10%正常山羊血清37℃封闭45 min；
3）吸去多余液体，加入抗TSHR的一抗（1：100），放入湿盒中，37℃孵育1h后置于4℃冰箱中过夜（保持在湿盒中）；
4） M PBS冲洗5min×3次；
（至下一步开始要适度避光操作，防荧光淬灭！）
5）在黑暗条件下加入山羊抗兔IgG-FITC（1：200），37℃温育45 min；6）在黑暗条件下吸弃二抗 (注：不再冲洗)，加入DAPI染液（μg/ml），室温作用20 min；
7）在黑暗条件下 PBS冲洗5min×6次；
8）在黑暗条件下防荧光淬灭剂封片，荧光显微镜下观察，用合适波段激发，照相保存实验结果。
核实好下边的问题你就可以操作了：
1、准备 M PBS 500 ml，冲洗时动作既要轻柔防脱片，又要保证冲洗
彻底；
2、抗TSHR的一抗用1：100，用抗体稀释液稀释；
3、实验室有没有山羊抗兔IgG-FITC，使用浓度是1：200；
4、DAPI染液（μg/ml）实验室有吗
5、防荧光淬灭剂封片实验室有吗。
Immunoway免疫组织化学试剂 Polymer HRP Goat Anti Rabbit I
Polymer HRP * Goat Anti Rabbit IgG(H+L)【产品货号】RS0010【产品名称】1、通用名称：Polymer HRP羊抗兔二抗即用型（免疫组织化学）2、英文名称：Polymer HRP * Goat Anti Rabbit IgG(H+L)【包装规格】类别规格工作液10mL/瓶、100mL/瓶【预期用途】免疫组织化学染色，配合Immunoway常规兔来源的浓缩型或即用型一抗使用。
【作用原理】数个过氧化物酶分子和数个二抗分子结合在同一多聚体上构成了一种简单而灵敏的显色系统【主要组成成份】磷酸盐缓冲液0.01mol/LGoat anti Rabbit HRP 大于0.05mg/L【储存条件及有效期】1、储存要求：2℃～8℃密封保存。
2、有效期：一年。
【样本要求】新鲜活检或外科样本组织，甲醛固定，固定时间8-24小时要求取材、脱水、石蜡包埋并制成蜡块。
配合Immunoway常规浓缩型或即用型一抗使用。
【检验方法】1、人体组织样本先经甲醛固定。
2、固定后的组织经过脱水等一系列操作制备成蜡块。
3、用切片机把组织蜡块切成切片。
4、手工操作免疫组化实验。
常规推荐步骤如下：4.1. 将需要进行实验的组织切片取出，插入玻片架上后放入60-65℃的烤箱中，烤片1-1.5h。
4.2. 将切片置于以下染色缸中梯度反应：二甲苯10分钟×2次二甲苯5分钟无水乙醇5分钟×2次95%乙醇5分钟85%乙醇5分钟PBS清洗3分钟×3次4.3. 抗原修复（方法见一抗供应商，或采用常规高压、微波、酶修复等）4.4.根据组织大小直接滴加内源性过氧化物酶阻断剂到组织上，通常为100uL, 直至完全覆盖组织。
室温10分钟，PBS清洗3分钟×3次。
此步骤通常在水浴法、酶法等温和抗原修复后加入。
或者组织本身含有较多内源性过氧化物酶中加入。
4.5. 根据组织大小滴加一抗到组织上，通常为100uL,直至完全覆盖组织。
细胞免疫荧光染色的自我总结
免疫荧光实验所需试剂1、PBS和PBST（0.05% Tween 20 in PBS：2000mlPBS+1ml吐温）2、4％多聚甲醛/PBS(4g多聚甲醛+50-80mlPBS+加热至60℃并搅拌+滴加少量1mol/L 的NaOH溶液使其变清亮，定容至100ml)3、0.1％ triton X-100/PBS配制（999mlPBS+1ml Triton X-100/曲拉通X-100（碧云天ST795），因为Triton X-100很粘稠，需减掉枪头尖慢吸）4、2％二抗同源血清封闭：组织切片上有剩余的位点可以与一抗非特异性结合，造成后续结果的假阳性；封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合；也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致(中杉金桥封闭用正常羊血清工作液 ZLI9022)5、二抗（中杉金桥 594标记山羊抗兔IgG ZF0616）（中杉金桥 488标记山羊抗小鼠IgG ZF0512）细胞爬片的免疫荧光染色步骤：1）实验前一天，将细胞接入铺有22×22mm（或24×24mm）盖玻片[悬浮细胞需要用多聚赖氨酸包被过的玻璃片]的六孔板或十二孔板中。
2）第二天，待细胞汇合度达到70％左右开始进行染色步骤。
3）用新鲜配制4％多聚甲醛[4℃]固定细胞10分钟。
4）PBS洗三遍，每次5分钟。
5）用0.1％ triton X-100[PBS配制]对细胞透化处理10分钟。
6）加PBS，使液面覆盖玻片。
如果细胞贴壁好，PBS洗时可轻摇孔板洗三遍，每次5分钟[不必一直摇]。
如果细胞贴壁不好就不必了，可以考虑多加点PBS，或者每次浸泡时间稍延长1-2分钟。
7）2％二抗同源血清[购买的纯的羊或牛血清用PBS稀释至2%，当前用的是羊血清]封闭30分钟-60分钟，PBS简单冲洗两遍或者不洗。
8）染色前根据公司说明书建议的浓度配好1抗（1抗稀释液购自中杉金桥）[建议先测试抗体浓度，可依据公司推荐的浓度增加和减低浓度进行测试；如公司推荐1：200，可将抗体配成1：50、1：100、1：200、1：400、1：600，以不同浓度进行孵育，如果抗体有效，应当在有效染色的抗体浓度范围内都可染色，只是颜色深浅不同]，加入1抗，4℃冰箱孵育，一般要大于18小时[有的抗体可能需要多达50小时]。
免疫荧光染色
荧光免疫染色和DAPI染色实验1．实验原理免疫染色的实验原理类似于Western Blotting，两者都是运用抗体的特异性识别作用来显示目的蛋白，但是由于免疫染色需要在原位进行，而且蛋白没有经过富集，因此其实验难度较高。
实验的基本原理是：利用固定剂（通常是甲醛或多聚甲醛）将细胞固定，使得细胞膜的通透性大大增加，并且利用Triton-X-100使得一部分膜蛋白变性，从而使通透性进一步加强。
利用正常羊血清封闭，可以令许多蛋白先与血清内的非特异性抗体结合，而特异性的抗体由于动力学的关系可以通过竞争性的反应与目的蛋白结合，这一过程可以保证抗体识别的特异性。
二抗可以特异性识别一抗的Fc区域，利用二抗连接不同的荧光基团，就可以在荧光显微镜下观察到不同的荧光，从而显示目的基因的表达情况。
另外，免疫荧光实验由于其较高的敏感性可以显示出基因表达的亚细胞情况(核内，核外，膜上以及一些较大的细胞器上)，所以通常被用来作为基因定位的方法。
DAPI的中文名称是4，6-联脒-2-苯基吲哚，是一种常用的荧光染料，其作用机理与溴化乙锭（EB）等染色剂的机理类似：它们与DNA双螺旋的凹槽部分可以发生相互作用，从而与DNA 的双链紧密结合。
结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好UV （紫外光）的激发波长是356nm，使得DAPI成为了一种常用的荧光检测信号。
Jagielski M. et. Al在1976年首次运用该技术检测细胞培养中的支原体感染。
后来随着技术的进步，该技术被运用于各种微生物的检测、生长监测，胚胎发育过程的检测，细胞周期的检测和各种核定位的实验。
本实验就是利用DAPI染色标记细胞核的位置。
免疫染色实验方法和步骤免疫染色(immunol staining)包括免疫荧光(immunol fluorescence)、免疫组化(immunol histochemistry)、免疫细胞化学(immunol cytochemistry)等，可以参考如下步骤进行操作。
二步法抗兔、鼠通用型免疫组化检测试剂盒
⼆步法抗兔、⿏通⽤型免疫组化检测试剂盒FOR RESEARCH USE ONLY.Code No:GK500705Storage: Store vial at 2-8.℃Intended UseChemMate? EnVision? Detection Kit, Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse, is intended for use inimmunocytochemistry together with the TechMate? and Autostainer Instruments. The kit is employed in atwo-step procedure where the first step is incubation of the tissue with an optimally diluted primary rabbit ormouse antibody, and the second step is incubation with the ChemMate? EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse(ENV) reagent of the kit. This reagent is a peroxidase-conjugated polymer, which also carries antibodies torabbit and mouse immunoglobulins. The reaction is visualized by the ChemMate? DAB+ Chromogen alsoincluded in the kit.Reagents Materials providedBottle A ChemMate? DAKO EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse (ENV)5 mL, ready-to-useDextran coupled with peroxidase molecules and goat secondary antibody molecules against rabbit andmouse immunoglobulins. In buffered solution containing stabilizing protein and preservative.Bottle B ChemMate? Substrate Buffer2*6.25 mLBuffered solution containing hydrogen peroxide and preservative.Bottle C ChemMate? DAB+ Chromogen1*0.25mL, 50 x concentrated3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride in organic solvent. The colour of this reagent may vary from strongviolet to colourless without having any influence on the performance of the kit.Precautions ：1. Bottle A , ChemMate? EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse (ENV), contains material of animal origin and it cannot be excluded that trace amounts of human material could be present due to manufacturing procedures. As with any product derived from biological sources, proper handling should be used.2. Do not expose Bottle C , ChemMate? DAB+ Chromogen or the Substrate Working Solution (CHROM) to strong light.3. Bottle C , ChemMate? DAB+ Chromogen contains 1.5% 3,3’-diaminobenzidine tetrahydrochloride, and is labelled: Harmful.Storage ：Store the kit at 2-8 . The prepared Subs ℃trate Working Solution (CHROM) should be stored at 2-8 and used℃within 5 days.Quality Control ： Each staining run should include a known positive control specimen to ascertain a proper performance of all the applied reagents. If the positive control specimen fails to demonstrate positive staining, labelling of test specimens should be considered invalid. A negative control reagent should be used with each specimen to identify any non-specific staining. If non-specific staining cannot be clearly differentiated from the specific staining, the labelling of the test specimen should be considered invalid.Please contact us for more information about this product.EnVision? Detection Kit,Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse⼆步法抗兔/⿏通⽤型免疫组化检测试剂盒剂型：⼯作液编号：GK500705适⽤：⼀抗为兔抗或⼩⿏抗的免疫组化检测储存：2-8℃该试剂盒是⼀个特别敏感的⼆步法免疫组化试剂盒，适合与兔抗抗体或⼩⿏抗抗体配⽤。
免疫荧光组织(细胞)化学染色方法：补体法原理和操作指南
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：补体法原理和操作指南一、原理与意义免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——补体法，是一种荧光抗体染色法。
本法之荧光抗体不受免疫血清的动物种属的限制，因而一种荧光抗体可作更广泛的应用，敏感性亦较间接法高，效价低的免疫血清亦可应用，节省免疫血清，尤其是对检查形态小的如立克氏体、病毒颗粒等或浓度较低的抗原物质时甚为理想。
二、操作指南1、材料（1）免疫血清60℃灭活20min，用Kolmers盐水作2倍稀释成1：2，1：4，1：8……。
补体用 1：10稀释的新鲜豚鼠血清，抗补体荧光抗体等，按下述的补体法染色。
免疫血清补体结合的效价，如为1：32则免疫血清应作1：8稀释。
（2）补体用新鲜豚鼠血清一般作1：10稀释或按补体结合反应试管法所测定的结果，按2单位的比例，用 Kolmers盐水稀释备用。
Kolmers盐水配法：即在pH7.4、0.1mol/L的磷酸缓冲盐水中，溶解MgSO4的含量为0.01%浓度。
（3）抗补体荧光抗体：在免疫血清效价为1：4，补体为2单位的条件下，用补体染色法测定免疫豚鼠球蛋白荧光抗体的染色效价，然后按染色效价1：4的浓度用Kolmers盐水稀释备用。
2、操作步骤（1）涂片或切片固定。
（2）吸取经适当稀释之免疫血清及补体之等量混合液（此时免疫血清及补体又都稀释一倍）滴于切片上，37℃作用 30min，置于保持一定湿度的染色盒内。
（3）用缓冲盐水洗2次，搅拌，每次5min，吸干标本周围水液。
（4）滴加经过适当稀释之抗补体荧光抗体30min，37℃，水洗同（3）。
（5）蒸馏水洗1min，缓冲甘油封固。
3．对照染色（1）抗原对照。
（2）抗血清对照：用正常兔血清代替免疫血清。
（3）灭活补体对照：将补体经56℃ 30min处理后，按补体同样比例稀释，与免疫血清等量混合后，进行补体法染色。
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Emission Peak (nm)
Alexa Fluor 488
495
519
本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液，可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达
6个月，并且在6个月内至少可以重复使用10次。
本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。
本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片，至少可以检测300个样品。
轻摇动。 I. 滴一滴本试剂盒提供的抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上盖玻片，尽量避免气泡。 J. 如果一抗选用适当，在荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。
包装清单：
产品编号 P0176-1 P0176-2 P0176-3
—
产品名称 抗兔Alexa Fluor 488 免疫荧光染色二抗稀释液 抗荧光淬灭封片液
说明书
包装 0.03ml 50ml 15ml
1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。同时抗兔Alexa Fluor 488需避光保存。
注意事项：
需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光，特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。 荧光物质均易发生淬灭，染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存，但存放时间通常
推荐使用碧云天生产的免疫染色封闭液(P0102)，也可以按照如下方法配制含5%BSA的TBSTx作为封闭液： 含5%BSA的TBSTx的配制：在100毫升TBSTx中加入5克BSA，溶解并混匀，即为含5%BSA的TBSTx。 D. 一抗稀释液的准备： 推荐使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)，也可以使用上述封闭液，即含5%BSA的TBSTx，作为一抗稀释 液。 E. 一抗的稀释： 按照一抗说明书中推荐的用于免疫荧光染色的稀释比例用一抗稀释液稀释一抗。 F. 荧光标记二抗的稀释： 把荧光标记的二抗，按照1:1000的比例用本试剂盒提供的免疫荧光染色二抗稀释液进行稀释。根据荧光的强弱，稀 释的比例可以适当提高或降低。
使用说明：
1. 免疫荧光染色的准备工作： A. 固定液的准备： 推荐使用碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)，也可以用4%多聚甲醛作为固定液，或根据特定的一抗或样品采用 有效成分为乙醇、甲醇或其它类型的固定液。 B. 洗涤液的准备： 推荐使用碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，也可以按照如下方法配制TBSTx作为洗涤液： 10XTBS的配制：称取24.2g Tris (Tris碱), 80g NaCl；用盐酸调节pH值至7.6，定容至一升。 TBS配制：把10XTBS按照1:9的比例用水稀释至1X即为TBS。 TBSTx的配制：在TBS中加入Triton X-100使最终浓度为0.1％ ，混匀，即为TBSTx。 C. 封闭液的准备：
4. 对于组织切片：
A. 对于石蜡切片，需先完成脱蜡、水化和抗原修复。对于冰冻切片可以直接按照下面的步骤操作。 B. 用固定液固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。固定及后续的操作可以用碧云天的染色缸和染色架或邮寄夹进行操
作。 C. 去固定液，用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。 D. 用封闭液封闭60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。 E. 去封闭液，用稀释的特定一抗作用60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。为增强与一抗的结合，可以4℃作用过夜。 F. 去除一抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。每次洗涤时都可以在摇床上轻轻摇动。 G. 去除洗涤液，加入1毫升稀释好的荧光标记的二抗避光孵育60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。 H. 回收荧光标记的二抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，期间适当注意避光操作。每次洗涤时都可以在摇床上轻
Alexa Fluor 488是一种常用的非常明亮的绿色荧光探针。它比绝大部分常用的绿色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭， 而且背景更低。Alexa Fluor 488的荧光光谱与FITC和Cy2比较接近。Alexa Fluor 488的吸收(激发)和发射峰参见下表。
Fluorophore
Absorption Peak (nm)
免疫荧光染色试剂盒－抗兔Alexa Fluor 488 (Immunol Fluorence Staining Kit with Alexa Fluor 488-Labeled Goat Anti-Rabbit IgG)，含有Alexa Fluor 488标记的山羊抗兔IgG (H+L)抗体，可以用于检测兔来源的相应一抗，观察到的颜色为非常鲜艳 的绿色。
2. 对于贴壁细胞：
A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗 涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 按照特定的实验目的处理细胞后，吸尽培养液，加入1ml固定液，固定10分钟或更长时间(可4℃固定过夜)。 C. 去固定液，用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。 D. 用封闭液封闭60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。 E. 去封闭液，用稀释的特定一抗作用60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。为增强与一抗的结合，可以4℃作用过夜。 F. 去除一抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。每次洗涤时都可以在摇床上轻轻摇动。 G. 去除洗涤液，加入1毫升稀释好的荧光标记的二抗避光孵育60分钟，可以在摇床上轻轻摇动。 H. 回收荧光标记的二抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，期间适当注意避光操作。每次洗涤时都可以在摇床上轻
轻摇动。 I. 滴一滴本试剂盒提供的抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片
液，切勿弄反。 J. 如果一抗选用适当，在荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。
3. 对于悬浮细胞：
A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，吸除上清后轻轻弹散细胞。 B. 加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。 C. 离心去固定液，用洗涤液洗3次，每次3-5分钟。洗涤期间可以用手或摇床轻轻晃动。 D. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50微升液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。 E. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。如果条件许可，可以使用适当的离心机，通过离心把细胞贴紧在载
不宜超过一周，随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。 免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于
本实验。 如果观察时发现荧光过弱，可以适当提高一抗的浓度；如果荧光还是比较弱，可以适当提高荧光标记抗体的浓度。 需自行配制用于免疫荧光染色的相关试剂，需自备盖玻片和载玻片(可以向碧云天订购)。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
玻片上。 F. 用封闭液封闭60分钟。封闭及后续的操作可以用碧云天的染色缸和染色架或邮寄夹进行操作。 G. 去封闭液，用稀释的特定一抗作用60分钟。为增强与一抗的结合，可以4℃作用过夜。 H. 去除一抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。 I. 去除洗涤液，加入稀释的荧光标记的二抗避光孵育60分钟。 J. 回收荧光标记的二抗，用洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，期间适当注意避光操作。 K. 滴一滴本试剂盒提供的抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上盖玻片，尽量避免气泡。 L. 如果一抗选用适当，在荧光显微镜下可以观察到绿色的荧光。
免疫荧光染色试剂盒－抗兔 Alexa Fluor 488
产品编号 P0176
产品名称 免疫荧光染色试剂盒－抗兔 Alexa Fluor 488
包装 >300 次
产品简介：
免疫荧光染色试剂盒(Immunol Fluorence Staining Kit)系列是碧云天开发的用于细胞或组织切片免疫荧光染色的试剂盒。在 有适当的一抗检测特定的目标蛋白时，就可以使用免疫荧光染色试剂盒检测到红色、绿色或蓝色等荧光。