HPLC法测定饮料中色素柠檬黄_日落黄前处理方法的比较
柠檬黄 日落黄比较
替代H2O2添加剂性质1.柠檬黄柠檬黄铝色淀（08.005）5.1概述柠檬黄（柠檬黄铝色淀）又叫酒石黄；3—羟基—5羟基—1-(4'—磺基苯基)-4-(4'—磺基苯偶氮)-邻氮茂三钠盐；C. I.食用黄色4号。
本品为橙黄色均匀粉末或颗粒，无臭。
易溶于水、甘油、丙二醇，中性或酸性水溶液呈金黄色。
微溶于乙醇、油脂。
吸湿性，耐热性、耐光性强，在柠檬酸、酒石酸中稳定，遇碱变红色，还原时退色。
5.2作用食用橙黄色色素。
用于食品的加色、增色或调色。
5.3安全性（1）LD50：小鼠口服12.75g/kg(bw)，大鼠口服大于2g/kg(bw)。
（2）ADI：0一7.5mg／kg(bw)(FAO／WHO，1964)5.4使用范围可适量使用于果汁（味）饮料类、碳酸饮料、配制酒、糖果、糕点上彩装、西瓜酱罐头、青梅、虾（味）片、渍制小菜、红绿丝、冰淇淋、植物蛋白饮料、乳酸菌饮料、风味酸奶、油炸豆类、雪糕、膨化食品、香橙果珍干粉、果冻、糖果包衣、冰淇淋、雪糕、冰棍、可可玉米片(即食早餐谷类食品)、寿桃包，固体饮料，膨化食品、油炸小食品，饼干夹心，金桔，甘草橄榄，桃片，话李，芒果干，话杏，嘉应子、辣根膏、风味炼乳、固体方便汤料、固体复合调味料、果酱、水果调味糖浆（fruit toppings）、饼干夹心、调味糖浆、蛋黄酱、沙拉酱、蛋糕夹心、半固体复合调味料（除外蛋黄酱、沙拉酱）、抛光糖果、裹粉、煎炸粉、焙烤食品馅料（限于布丁、糕点），裹粉、煎炸粉，加工坚果与籽类、熟制豆类。
2.日落黄日落黄铝色淀（08.006）6.1概述日落黄（日落黄铝色淀）又叫1—(4'—磺基—1'—苯偶氮)—2—萘酚-6-磺酸二钠盐；C. I.食用黄色3号。
橙红色均匀粉末或颗粒，无臭。
易溶于水、甘油、丙二醇，微溶于乙醇，不溶于油脂。
水溶液呈黄橙色。
吸湿性，耐热性、耐光性强。
在柠檬酸、酒石酸中稳定，通碱变带褐色的红色，还原时退色。
液相色谱法测定饮料中日落黄、柠檬黄和胭脂红的含量
第40卷第5期2021年5月Vol.40No.5May.2021绵阳师范学院学报Journal of Mianyang Teachers'CollegeD01：10.16276/51-1670/g.2021.05.008液相色谱法测定饮料中日落黄、柠檬黄和胭脂红的含量李娟1,张形2,龙丽1（1.绵阳师范学院化学与化学工程学院，四川绵阳621000；2.绵阳市安州生态环境监测站，四川绵阳622651）摘要：通过高效液相色谱法对饮料中常见的日落黄、柠檬黄和胭脂红含量进行测定.选用Cleanert PWAX-SPE混合型弱阴离子交换柱和Cleanert PA聚酰胺小柱，吸附饮料中的合成着色剂，再用氨化甲醇洗脱，最后经反相色谱分离.采用Venusil®XBP C185»m4.6x150mm,用0.02mol/L乙酸铁溶液和色谱纯甲醇为流动相梯度洗脱，根据保留时间定性和峰面积比较进行定量.结果表明：0落黄、柠檬黄、胭脂红在20p,g/mL~100ixg/mL范围内都有良好的线性关系，相关系数R2^0.999,加标回收率为82.8%-102.36%，相对标准偏差为0.65%~1.32%.关键词：高效液相色谱法；饮料；日落黄；柠檬黄；胭脂红；合成色素中图分类号：0657.72文献标志码：A文章编号：1672-612X（2021）05-0039-060引言人工合成色素的检测方法有高效液相色谱法、薄层色谱法同、紫外-可见分光光度法⑺、液一质联用法⑹等.很多方法包括前处理只适用于检测基质比较简单的食品卩财，对于一些蛋白质含量高且基质复杂的食品（如:海产品，腌制蔬菜等）却不能准确测定其中的含量，而国家标准《食品中合成着色剂的测定》（GB/T5009.35-2003）⑷中规定的高效液相色谱法、薄层色谱法和示波极谱法来测定色素,这些方法前处理步骤繁琐，费时，成本高.为了方便检测不同饮料中柠檬黄、胭脂红和日落黄的含量，本文建立了同时检测以上3种合成色素的方法，该方法适用于各类不同饮料中日落黄、柠檬黄和胭脂红的测定，适用范围广、准确、操作简便、成本低且重复性好.1日落黄、柠檬黄、胭脂红的介绍和含量测定的研究现状11日落黄、柠檬黄、胭脂红的简介日落黄（sunset yellow,简称SY）［11］（图1-1）,又名食用黄色5号（日本）、食用黄色3号、橘黄、夕阳黄、晚霞黄，是一种水溶性偶氮类着色剂•化学名称为1-（4，-磺基-1，-苯偶氮）-2-蔡酚-6-磺酸二钠盐，分子式为C16H10N2Na2O7S2,相对分子质量452.37,是一种常用的人工食用色素，性质稳定，价格较低，广泛用于食品和药物的着色••柠檬黄又称酒石黄、腓黄血（图1-2）.分子式为C16H9N4O9S2Na3,化学名称为1-（4-磺酸苯基）-4-（4 -磺酸苯基偶氮）-5-毗哩咻酮-3-竣酸三钠盐，食用柠檬黄外观为橙黄色粉末，微溶于酒精，不溶于其他有机溶剂•主要生产原料为对氨基苯磺酸及酒石酸，由对氨基苯磺酸经重氮化，与1-（4-磺基苯基）-3-竣基-5-毗哩咻酮在碱性溶液中偶合、精制而成•大多用于食品、饮料、药品、化妆品、饲料、烟草、玩具、食品包装材料等的着色，也可以用于羊毛、蚕丝的染色•胭脂红，又名食用赤色102号（日本）、食用红色7号、丽春红4R、大红、亮猩红问（图1-3）,为水溶性偶氮类着色剂•分子式为C22H2°Oi3,化学名称为1-（4，-磺酸基荼偶氮）-2-荼酚-6,8-二磺酸三钠盐，是收稿日期：2020-01-15第一作者简介:李娟（1968-）,女，四川绵阳人，副教授,研究方向:仪器分析化学及结构化学.绵阳师范学院学报（自然科学版）觅菜红的异构体.胭脂红（Ponceau 4R ）是目前我国使用最广泛、用量最大的一种单偶氮类人工合成色素. 胭脂红作为食品色素可用于果汁饮料、配制酒、碳酸饮料、糖果、糕点、冰淇淋、酸奶等食品的着色，而不能用于肉干、肉脯制品、水产品等食品中,主要是为了防止一些不法分子通过使用色素将不良的原料肉如变质肉 的外观掩盖起来，欺骗消费者■图1日落黄Fig.l The sample ofsunset yellow图2柠檬黄Fig.2 The sample of tartrazine 图3胭脂红Fig.3 The sample of carmine12日落黄、柠檬黄、胭脂红含量测定的研究现状柠檬黄、日落黄、胭脂红色素是世界上最常用的合成食用色素，在饮料调色方面起着至关重要的作用•而作为广泛应用于饮料中的合成食用色素,消费者对这些色素的超标使用和食品安全也越来越关注,推动研 究学者们不断地对这几种色素的测定进行研究■刘奋等介绍了用高效液相色谱法配合DAD 检测器对柠檬黄、胭脂红、日落黄含量进行测定的方法％］，流动相为甲醇和0.02 mol/L 乙酸钱，梯度洗脱•针对各种合成色素的不同出峰时间，分别选用其最佳检测波长检 测,大大提高检测灵敏度，并有效克服了在254 nm 处的梯度洗脱时造成的基线漂移，提高了定量准确性.林壮森等介绍了采用分光光度法检测饮料中柠檬黄和日落黄的方法①一词，通过测定饮料在426 mm 和482 nm 波长处的吸光度，与柠檬黄和日落黄标准溶液比较，计算样品中柠檬黄和日落黄的含量•Medeiros 等采用掺硼金刚石电极结合流动注射分析，实现了对饮料和明胶样品中4种合成色素（柠檬黄、日落黄、亮蓝和SY ）的同时检测"I .2液相色谱法测定三种色素含量的实验原理日落黄、柠檬黄、胭脂红均具有苯磺酸钠结构，本文选用Cleanert PWAX-SPE 混合型弱阴离子交换柱 和Cleanert PA 聚酰胺小柱,用以吸附不同饮料中的合成着色剂，选用氨化甲醇洗脱，采用Venusil ® XBPC185 Jim 4.6X150 mm,以0.02 mol/L 乙酸钱溶液和色谱纯甲醇为流动相梯度洗脱，最后再经反相色谱分离.根据保留时间进行定性和比较峰面积进行定量■这种方法浓缩时间短，适用于大批量样品的同时检测•3实验部分3.1实验药品甲醇（分析纯佛山予华仪器科技有限公司、色谱纯西安天茂化工有限公司）；乙醇、甲酸、柠檬酸、氨水 （优级纯佛山予华仪器科技有限公司）；乙酸钱（色谱纯西安天茂化工有限公司）；柠檬黄标准储备液、日落黄标准储备液、胭脂红标准储备液（标准物质500 zg/mL ）深圳市时得佳科技有限公司）；超纯水（该实验所用水均为超纯水）.3.2主要实验仪器赛默飞高效液相色谱仪（UltiMate3000美国赛默飞世尔热电仪器有限公司）；PH 计（PHS-25型北京合 悦达科技有限公司）；圆形水浴氮吹仪（CM-36型北京成萌伟业科技有限公司）；多管真空固相萃取仪（5982-9110安捷伦科技（中国）有限公司）；固相萃取柱（Cleanert PWAX 杭州赛析科技有限公司）；溶剂过滤器李娟,等:液相色谱法测定饮料中日落黄、柠檬黄和胭脂红的含量（AL-01北京同德创业科技有限公司）3.3实验条件实验所需条件如下所示：色谱柱:Venusil®XBP C185pjn4.6x150mm；流速：1.0mL/min；进样量：20jxL；波长：254nm；柱温：35°C.3.4实验步骤3.4.1样品提取用分析天平分别称取市售10g（精确至0.000lg）茶类饮料（康师傅冰红茶、和其正）、果蔬汁类饮料（统一鲜橙多、农夫果园30%混合果蔬）、碳酸饮料（芬达、美年达）、功能饮料（东鹏特饮、乐虎）放入100mL烧杯中，含二氧化碳的样品（芬达、美年达）先表1实验梯度表Tab.l Table of experimental gradient 时间A%(0.02mol/L B%（色谱(min)乙酸皱）纯甲醇）0955108020 184060 2540602795540955加热以除去二氧化碳.3.4.2标准系列溶液的配制配制不同浓度的日落黄、柠檬黄、胭脂红标准系列溶液.3.4.3固相萃取柱净化Cleanert PWAX-SPE在全自动固相萃取仪中,依次向Cleanert PWAX-SPE小柱中加入6mL甲醇,6mL pH=6的水，完成SPE小柱的净化过程•将全部提取液转移到柱子中，然后再用6mL 水（pH=4）、6mL甲醇-甲酸溶液（6：4）和6mL水（pH=6）淋洗;然后通入空气约5min吹干小柱,最后用6mL2%氨化甲醇洗脱并接收洗脱液，将洗脱液置于圆形水浴氮吹仪中，在50T水浴中用氮气吹干，用1mL 超纯水溶解并定容，经0.45jim水系滤器过滤到样品瓶中，供HPLC待测.3.4.4测定取相同体积的样品溶液和标准系列溶液分别置于高效液相色谱仪中按照3.3所示的实验条件进行测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量-4结果与讨论4.1溶液标准曲线的绘制按照3.3所示的实验条件，将日落黄、柠檬黄、胭脂红标准系列工作溶液注人液相色谱仪中，测定相应的峰面积，得到日落黄标准系列浓度与峰面积的关系，黄标准曲线，如图4、5、6所示.of sunset yellow of lemon yellow of carmine red4.2各合成色素测定的标准曲线方程和相关系数根据3.3设定的实验条件测得日落黄、柠檬黄、胭脂红在设定浓度范围内，具有线性关系良好的标准曲线，日落黄、柠檬黄、胭脂红标准曲线的回归方程和相关系数见表2.4.3三种合成色素标准溶液色谱图日落黄、柠檬黄、胭脂红的混合标准溶液（80jxg/mL）的色表2各合成色素回归方程和相关系数表Tab.2Regression equation and related coefficient table of each synthetic pigment 合成回归方程相关系数疋日落黄彳=0.1735+0.03450.9998柠檬黄A=0.2519*c+0.09620.9992胭脂红A=0.1669*c+0.30160.9990绵阳师范学院学报（自然科学版）谱图如图3所示,积分结果如表4所示:表4日落黄、柠檬黄、胭脂红积分结果Tab.4 Integrating results of sunsetyellow , tartrazine and carmine峰名称保留时间/m in 峰面积样品量 pig/mL 柠檬黄 3.01715.27079.900 1胭脂红5.62015.35681.766 2日落黄6.60314.01580.787 5图7日落黄、柠檬黄、胭脂红混合标准溶液色谱图Fig.7 Chromatogram of mixed standard solutionof sunset yellow , tartrazine , and carmine4.4样品中三种合成色素的测定与结果4.4.1样品中日落黄的测定与结果 取3.5.3处理好的样品液，在波长为254 nm 处测定其的峰面积，平行测定三次，取平均值•结果如表5所示:表5饮料中日落黄的含量表Tab.5 Content table of sunset yellow in beverage种类峰面积日落黄浓度伽-mL-1样品质量/g样品日落黄含量/g ・kg -1统一鲜橙多5.633 032.362 110.008 30.003 2农夫果园30%混合果蔬 6.015 634.572 810.001 70.003 5芬达1.978 411.236 29.999 70.001 1美年达0.384 4 2.023 110.002 40.000 2康师傅冰红茶 4.764 527.341 110.121 30.002 7和其正0010.106 40东鹏特饮0010.010 30乐虎10.000 8由表5可知，不同类饮料中,果蔬汁类饮料（统一鲜橙多、农夫果园30%混合果蔬）中日落黄含量较茶类饮料（康师傅冰红茶、和其正）、碳酸饮料（芬达、美年达）和功能饮料（东鹏特饮、乐虎）的高，但均远小于《食 品添加剂使用卫生标准》（GB2760-1996）中规定的最大使用量■4.4.2样品中柠檬黄的测定与结果 取3.5.3处理好的样品液，在波长为254 nm 处测定其的峰面积，平行测定三次,取平均值•结果如表6所示:表6饮料中柠檬黄的含量表Tab.6 Content table of tartrazine in beverage种类峰面积柠檬黄浓度/憾'mL -1样品质量/g 样品柠檬黄含量/g ・kg -1统一鲜橙多6.494 625.400 810.008 30.002 5农夫果园30%混合果蔬&226 432.275 610.001 70.003 2芬达1.409 75.214 49.999 70.000 5美年达0.631 1 2.12310.002 40.000 2康师傅冰红茶7.508 329.424 810.121 30.002 9和其正0010.106 40东鹏特饮0010.010 30乐虎10.000 8李 娟,等:液相色谱法测定饮料中日落黄、柠檬黄和胭脂红的含量由表6可知，不同类饮料中,果蔬汁类饮料（统一鲜橙多、农夫果园30%混合果蔬）中柠檬黄含量比茶类饮料（康师傅冰红茶、和其正）、碳酸饮料（芬达、美年达）和功能饮料（东鹏特饮、乐虎）的高，但均远小于《食 品添加剂使用卫生标准》（GB2760-1996）中规定的最大使用量■4.4.3样品中胭脂红的测定与结果 取3.5.3处理好的样品液，在波长为254 nm 处测定其的峰面积，平行测定三次，取平均值•结果如表7所示:表7饮料中胭脂红的含量表Tab.7 Content table of carmine in beverage种类峰面积胭脂红的 浓度/阳■ mL'1样品质量/g样品胭脂红 含量/g * kg -1统一鲜橙多2.175 911.230 610.008 30.001 1农夫果园30%混合果蔬 5.327 730.114 710.001 70.003 0康师傅冰红茶 5.328 930.121 710.121 30.002 9和其正0010.106 40芬达009.999 70美年达0010.002 40东鹏特饮0010.010 30乐虎10.000 8由表7可知，不同类饮料中,果蔬汁类饮料（统一鲜橙多、农夫果园30%混合果蔬）中柠檬黄含量比茶类饮料（康师傅冰红茶、和其正）、碳酸饮料（芬达、美年达）和功能饮料（东鹏特饮、乐虎）的高，但均远小于《食 品添加剂使用卫生标准》（GB2760-1996）中规定的最大使用量.4.4.4日落黄、柠檬黄、胭脂红的加标回收率和精密度测定为了验证该方法的可靠性，进行了加标回收实验■准确称取不含日落黄、柠檬黄、胭脂红的不同类饮料10 g （精确至0.0001 g ），分别加入浓度为0.5|jLg/mL 、l.OjLg/mL.2.0 fig/mL 的混合标准溶液做加标回收实验，每个加标水平平行测定7次，以此来验证该方法的回收率和精密度，其结果如表8所示:表8加标回收率和精密度测定结果表（n=7）Tab.8 Results of standard recovery rate and precision measuring （n=7）加标浓度（lig/mL ）—合成色素 样品0.5 1.0 2.0________________回收率％~RSD%~回收率％~RSD%~回收率％~RSD%黄落 日红旨 月 胭84.360.8990.58 1.06100.230.9887.39 1.2188.650.9689.57 1.328&620.9991.29 1.1191.870.9689.56 1.2889.680.98101.050.8789.690.7590.220.8799.72 1.2499.680.8689.940.9983.45 1.0682.80.76100.210.88101.420.9899.890.65102.870.力102.360.69101.820.66100.360.力9&990.71100.290.7898.580.8587.890.82100.540.81100.240.91100.870.9689.980.8795.930.8597.580.81黄檬柠由表8可知日落黄、柠檬黄、胭月购:的平均加标回收率为82.8%~ 102.36%,相对标准偏差为0.65%-1.32%.5结论本文选用Cleanert PWAX-SPE 混合型弱阴离子交换柱和Cleanert PA 聚酰胺小柱,用以吸附不同饮料中的合成着色剂，选用氨化甲醇洗脱，采用Venusil®XBP C185“m4.6x150mm,以0.02mol/L乙酸钱溶液和色谱纯甲醇为流动相梯度洗脱，最后再经反相色谱分离•根据保留时间定性和比较峰面积进行定量得出:在市售常见的几类饮料中，果蔬汁类中日落黄、柠檬黄、胭脂红的含量较另外种类饮料的含量要高•其中茶类饮料中，康师傅冰红茶的日落黄含量为0.0027g/kg、柠檬黄含量为0.0029g/kg、胭脂红含量为0.0029g/kg；和其正的日落黄、柠檬黄、胭脂红含量均为未检出■果蔬汁类饮料中，鲜橙多的日落黄含量为0.0032g/kg、柠檬黄含量为0.0025g/kg、胭脂红含量为0.0011g/kg；农夫果园30%混合果蔬的日落黄含量为0.0035g/kg、柠檬黄含量为0.0032g/kg、胭脂红含量为0.0030g/kg.碳酸饮料中，芬达的日落黄含量为0.0011g/kg、柠檬黄含量为0.0005g/kg、胭脂红含量未检出;美年达的日落黄含量为0.0002g/kg、柠檬黄含量为0.0002g/kg、胭脂红含量未检出•功能饮料中，东鹏特饮和乐虎三种合成色素含量均为未检出•由实验数据可知，果蔬汁类饮料中合成色素较其他三类饮料相比含量最多,其中农夫果园30%混合果蔬的三种合成色素都是最高的.而在日落黄、柠檬黄、胭脂红这三种合成色素种，日落黄、柠檬黄含量相对较高，胭脂红含量最少•同时在这几类饮料中，日落黄、柠檬黄、胭脂红的含量都远小于其检出限和中国《食品添加剂使用卫生标准》中规定的最大使用量，说明这些饮料的色素添加要求都是符合中国《食品添加剂使用卫生标准》的.参考文献：[1]祁广建，王熠，沈国英，等.染色大米中苹果绿色素含量的HPLC测定[J].中国公共卫生,2002,19(5):629.[2]林春晓，曾红慧，付斌，等.高效液相色谐法检测熟食肉制品中人工合成色素的研究[J]冲国热带医学,2005,5(3)：556-557.[3]张正尧，高效液.相色谱法测定禽肉、乳制品中合成色素的研究[J].中国卫生检验杂志,2006,16(8):928-929.[4]中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员会.GB5009.35-2003食品中合成着色剂的利定[S].北京:中国标准出版社，2004.[5]食品中化学污染物及有带因素监调工作号[S].2012.123-1&[6]严浩英，张军，李树华，等.5种人工合成食用色素的薄层色谱扫描分析[J].现代预防医学,1997,24(2):192-194.[7]李必斌,张海霞，潘连富.紫外-可见吸收光谱法定性定量测定食用合成色素[J].中国卫生检验杂志,2001,11(1)-58-60.[8]李帮锐，冯家力,潘振球，等.高效液相色谱-质谱联用法测定饮料中的人工合成色素[J].中国卫生检验杂志,2007:17(4)：579-580[9]召卩仕萍，奚星林,陈洁贞,等.饮料和糖果中5种非法添加色素的检测[J].食品科学,2011,32⑷：189-192.[10]周宏霞，韩喜东,于军强，等.食用色素及其检测方法的研究进展[J].检验检疫科学,2009,19(4):71-76.[11]周家华主编.食品添加剂[M].北京:化学工业出版社,2001:520.[12]周家华，崔英德，曾顾.食品添加剂[M]：北京:化学工业出版社,2008：85[13]Talaska 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z Education,Central China Normal University,Wuhan,Hubei430079)Abstract:Disciplinary didactics is closely related to many subjects,which affects the teaching practice in elementary education and determines the quality of talent training.From the perspective of"Three essential issues and the direction of the output-oriented supply-side reform are discussed to educate excellent teachers.Integration of i-deological and political education into course is concerned to fulfill the fundamental task of cultivating successor with morality.As an example,Chemistry didactics curriculum is reconstituted to contain ideological and political education.It is shown that the integrated course education plays a role of demonstration,guidance and diffusion.Keywords:integration of ideological and political education into course,disciplinary didactics,outcomes-based education,Chemistry(责任编辑:陈英)(上接第44页)Determination of Sunset Yellow,Lemon Yellow and Carmine in Drinks by Liquid ChromatographyLI Juan1,ZHANG Tong2,LONG Li1(1.School of Chemistry and Chemical Engineer,Mianyang Teachers'College,Mianyang,Sichuan621000；2.Anzhou Ecological Environment Monitoring Station of Mianyang City, Mianyang,Sichuan622651)Abstract:The contents of sunset yellow,tartrazine and carmine,which are common in beverages,are determined by high performance liquid chromatography.Cleanert PWAX-SPE mixed weak anion exchange column and Cleanert PA polyamide column are used to adsorb the synthetic colorant in the beverage,eluting with ammoniated methanol,and finally separated by reverse phase ing Venusil®XBP C185|xm4.6x150mm, eluting with0.02mol/L ammonium acetate solution and chromatographically pure methanol as mobile phase gradient,quantitative according to retention time qualitative and peak area comparison.The results show that there is a good linear relationship between sunset yellow,tartrazine and carmine in the range of20jjig/mL~100jjLg/mL.The correlation coefficient was R2^0.999,and the recoveries were82.8%~102.36%,The relative standard deviation is0.65%~1.32%.Keywords:high performance liquid chromatography,beverage,sunset yellow,lemon yellow,carmine red, synthetic pigment(责任编辑:陈英)。
高效液相色谱法测定杏罐头中的柠檬黄_日落黄
2010年9月第31卷第9期食品研究与开发[J].分析测试学报，2004，23(3)：26-30收稿日期：2009-09-03为了改善食品的感官性状，常在食品中添加人工合成着色剂（又称色素）。
色素色泽鲜艳，着色力强，性质稳定，不易褪色，用量较低，可任意拼色，价格便宜。
但色素主要以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经化学合成，主要属苯胺类色素，有的色素在人体内可形成致癌性物质α-氨基萘酚和β-萘胺。
因此，世界各国对色素的品种、使用范围和使用量都有严格限制。
目前，我国对人工合成着色剂的使用范围和使用量都有严格的规定。
GB 2760-2007《食品添加剂使用卫生标准》[1]规定，西瓜酱罐头允许限量使用日落黄外其余均不得添加合成色素。
采用无水乙醇-氨水溶液浸泡，离心的方法提取被杏果肉吸附的柠檬黄、日落黄，高效液相色谱法测定，方法的重复性好，回收率、精密度较高。
1材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1仪器液相色谱仪：FINNIGAN Surveyor LC 美国菲尼根高效液相色谱仪JJ-2型；匀浆机：江苏省金坛市环宇科学仪器厂SK-1型；快速混匀器：江苏省金坛市医疗仪器厂KQ-250DB ；超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司型；AK/QC-058型离心机：上海安亭。
1.1.2试剂柠檬黄、日落黄溶液标准物质：国家标准物质研究中心；去离子水；无水乙醇、氨水、甲醇、甲酸、乙酸、柠檬酸、乙酸铵，均为分析纯；聚酰胺粉过200目筛；甲醇：色谱纯[2]。
1.2色谱条件色谱柱：Inertsil ODS-3V 4.6×250mm ；流动相：甲高效液相色谱法测定杏罐头中的柠檬黄、日落黄王冬妍，杨书宁（沈阳产品质量监督检验院，辽宁沈阳110022）摘要：水果罐头中添加的合成色素大部分被果肉所吸附，为充分提取色素，优化水果罐头中合成色素的测定方法。
采用无水乙醇-氨水溶液浸泡、离心，提取被杏果肉吸附的柠檬黄、日落黄，高效液相色谱法测定。
饮品中着色剂的HPLC检测方法
饮品中着色剂的HPLC检测方法作者：陈丰来源：《科学与财富》2020年第26期摘要：着色剂又称食品色素，主要用途是使食品赋予色泽和改善食品色泽的物质。
目前世界上常用的食品着色剂有60余种，我国允许使用的有46种，按其来源和性质分为食品合成着色剂和食品天然着色剂两类。
天然着色剂主要是指由动、植物组织中提取的色素，常用的天然着色剂有辣椒红、甜菜红、红曲红、胭脂虫红、高粱红、叶绿素铜钠、姜黄、栀子黄、胡萝卜素、藻蓝素、可可色素、焦糖色素等等。
合成着色剂主要以苯、甲苯等化工产品为原料，经过一系列反应制成的。
中国食品添加剂使用卫生标准列入的合成色素主要有胭脂红、苋菜红、日落黄、赤藓红、柠檬黄、新红、靛蓝、亮蓝等等。
与天然色素相比，合成色素颜色更鲜艳，不易褪色，且价格较低，但是长期大量使用将会对身体造成伤害，因此需要对合成着色剂的添加量进行检测。
关键词：着色剂;HPLC检测;天然色素;人工色素合成着色剂的性质合成着色剂可分为偶氮类和非偶氮类两种结构。
在酸碱条件下，两种结构的合成着色剂均稳定。
按着色剂的溶解性可分为脂溶性着色剂和水溶性着色剂，脂溶性着色剂由于不溶于水，在体内不易排出，毒性较大等原因，在食品行业已经不允许添加，现在世界各国使用的合成着色剂大部分为水溶性偶氮类着色剂。
合成着色剂的毒性合成着色剂少量食用可经肝肾代谢排出体外，但是若长期或一次性大量食用素含量超标的食品，可能会引起过敏、腹泻等症状。
当摄入量过大，超过人体器官负荷时，会在体内蓄积，对肾脏、肝脏产生一定伤害。
胭脂红等染色剂还会使人体的免疫力下降，并且增加癌症的发病率，因此饮品中的着色剂的使用必须控制在合适的范围，而对着色剂含量的检测也具有十分重要的意义。
本实验参考GBT21916-2008《水果罐头中合成着色剂的测定高效液相色谱法》以及GBT5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》，采用高效液相色谱仪，对着色剂标准品，线性以及加标回收率等进行检测方法验证，并且检测实际饮品中柠檬黄、胭脂红、日落黄的添加情况。
HPLC法测定饮料中色素柠檬黄_日落黄前处理方法的比较
型, Beckm an Coulte r公司 )。 1. 2 试剂与材料 1. 2. 1 标准储备溶液 柠 檬黄: 中国 计量科 学研究院 , 批 号: 07003, 浓度: 0. 50 m g /m ,l 不确定度为 1% , 有效期 至 2010年 8 月, 等级标准号为 GBW ( E) 100001a。
0. 56% ~ 2. 23% 之间, 由表中数 据可知, 经稀 释法处 理的 两个 样品的相对标准偏 差均 小于 聚酰胺 吸附 法 处理 的, 原因 在于 稀释法处理简单, 与聚酰胺法相 比, 少 了很多 中间吸 附、淋 洗、 解吸、蒸干、溶解、定容 的操 作, 减少 了操 作 误差 的产 生, 因此 样品的平行性较好。
表 2 两种方法的回收率比较
样品 1 原含量
方法 1(稀释 )
方法 2(吸附 )
柠檬黄 日落黄 柠檬黄 日落黄
( mg / kg) ( mg / kg) ( m g/ kg) ( m g /kg)
116. 58 93. 02 110. 19 84. 72
加入量
100. 00 100. 00 100. 00 100. 00
中国卫生检验杂志 2011年 1 月 第 21卷 第 1期 C h inese Jou rnal of H ea lth Laboratory Technology, Jan 2011; V ol 21 N o 1
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化学测定方法
H PLC法测定饮料中色素柠檬黄、日落黄前处理方法的比较
蔡增轩, 黄百芬, 王天娇, 冯靓, 任一平
1 材料与方法 1. 1 仪器
A lliance 2695高效 液相 色 谱仪 ( W aters公 司 ), 2996 二极 管阵列检测器 (W aters公司 ), 循 环水式 真空泵 ( SH Z - D ( III) 型, 予华仪器公司 ) , 旋转 蒸发 仪 ( RE - 52AA, 上 海亚 荣 ) , pH 计 ( 雷磁 PH SJ- 4A 型, 上 海精 科 ) , 高速 离心 机 ( m icrofuge 18
液相色谱法测定果酱中的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝
食品实验为了改善食品的颜色或外观，从而有利于产品销售，着色剂在食品工业中得到了很广泛的应用。
与天然色素相比，合成着色剂的着色力强、色泽鲜艳、不易褪色、稳定性好、易溶解、易调色、成本低，但安全性低，所以国家对合成着色剂的监管很严格。
根据GB 2760－2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》的规定，果酱（食品分类号04.01.02.05）产品允许使用合成着色剂，限值为：柠檬黄0.5g/kg、日落黄0.5g/kg、苋菜红0.3g/kg、胭脂红0.5g/kg、亮蓝0.5g/kg。
不过，GB 5009.35－2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》只适用于巧克力豆、硬糖、着色糖衣制品、蜜饯、配制酒、饮料、淀粉软糖等7种产品的测定，对于允许而且经常使用合成着色剂的果酱产品，则不在适用范围内。
本文通过检出限、回收率和精密度等检验数据，验证GB 5009.35－2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》的检测方法是否适用于果酱产品的检测，从而解决实验室选择测试方法的问题。
一、实验材料1.试剂及配制方法。
甲醇：色谱纯。
乙酸铵（CH3COONH4）溶液（0.02mol/L）：称量乙酸铵1.54g，加水至1L，后经微孔滤膜（0.45μm）过滤。
柠檬酸（C6H8O7·H2O）溶液（20g/100m L水），用该浓度的柠檬酸溶液把水调到pH6和pH4。
氨水溶液：氨水含量要求20％－25％，把2mL的氨水加水稀释至100mL。
甲醇－甲酸溶液：把甲醇、甲酸按体积比（6＋4）混匀。
无水乙醇－氨水－水溶液：把无水乙醇、氨水溶液、水按体积比（7＋2＋1）混匀。
聚酰胺粉（尼龙6）：过200μm（目）筛。
无水乙醇（CH3CH2OH），乙酸（CH3COOH）。
2.标准品。
柠檬黄（CAS︰1934－21－0）；苋菜红（CAS︰915－67－3）；胭脂红（CAS︰2611－82－液相色谱法测定果酱中的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝7）；日落黄（CAS︰2783－94－0）；亮蓝（CAS︰3844－45－9）。
高效液相色谱法同时测定饮料中柠檬黄、日落黄和诱惑红的含量
高效液相色谱法同时测定饮料中柠檬黄、日落黄和诱惑红的含量孙晓娟;许泳吉【摘要】采用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)同时测定了有色饮料中的合成色素柠檬黄(E102)、日落黄(E110)和诱惑红(E129).样品经溶解、超声去除气泡、稀释、0.45 μm的滤膜过滤后,直接用HPLC分析.考察了流动相的体系及比例、紫外测定波长和柱温对3种色素的分离检测效果的影响.确定流动相为V(甲醇)∶V(乙酸铵(0.02 mol· L-1》)=40∶60,紫外检测波长为254 nm,柱温为30℃.结果表明:柠檬黄、日落黄和诱惑红在该条件下均有较好的分离和检测,定量范围分别为0.30～10、0.50～10和1.0～10 μg·mL-1,3种色素的线性相关系数R2为0.999 0～0.999 3,检出限为0.09～0.50 μg·mL-1,相对标准偏差为0.07％～0.16％,回收率为94.77％～100.23％.该方法样品预处理简单、分离效果好,适用于饮料中柠檬黄、日落黄和诱惑红的同时测定.【期刊名称】《青岛科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(040)002【总页数】6页(P30-35)【关键词】高效液相色谱;饮料;柠檬黄;日落黄;诱惑红【作者】孙晓娟;许泳吉【作者单位】青岛科技大学化学与分子工程学院,山东青岛266042;青岛科技大学化学与分子工程学院,山东青岛266042【正文语种】中文【中图分类】O657.7合成色素作为常用的食品添加剂，因其颜色均匀、性质稳定、价格低廉等优点，往往受到生产者的青睐[1]。
然而，合成色素主要是由苯环和偶氮基团等物质缩合而成，研究表明，长期摄入过量的合成色素，会对人的身体健康造成威胁，易出现儿童注意力缺陷症、免疫系统损坏和过敏反应等[2-3]问题。
GB 5009—2016对目前允许使用的添加剂进行了严格的控制，其中包括柠檬黄(E102)、日落黄(E110)、诱惑红(E129)等多种合成色素[4-6]。
液相色谱法测定果蔬汁中柠檬黄和日落黄方法优化
液相色谱法测定果蔬汁中柠檬黄和日落黄方法优化程小会;邓敬颂【摘要】对液相色谱法测定果蔬汁中柠檬黄和日落黄进行了方法优化,对色谱条件进行了调整,采用ODS-C18型(250 mm×4.6 mm)色谱柱,流动相甲醇-0.02 mol/L 乙酸铵(体积比40:60,pH 4),流速为0.6 mL/min.采用紫外检测器,柠檬黄检测波长为430 nm,日落黄检测波长为510 nm.该方法测定结果的相对标准偏差为柠檬黄1.3%(n =4)、日落黄2.3%(n=4).柠檬黄和日落黄的平均回收率分别为84.17%、88.33%.该法满足实验要求.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2010(019)002【总页数】2页(P70-71)【关键词】高效液相色谱法;柠檬黄;日落黄;果蔬汁【作者】程小会;邓敬颂【作者单位】广州市农业科学研究院,广州,510308;广州市农业科学研究院,广州,510308【正文语种】中文合成着色剂柠檬黄、日落黄是国家批准使用的人工合成色素，因其独特的外观颜色，作为食品添加剂已经广泛地应用于果蔬汁中，但是其添加必须在规定范围内按规定限量使用，而且添加之后必须在食品标签上注明。
GB 2760-1996[1]规定，柠檬黄、日落黄用于果汁饮料的最大使用量为0.1 g/kg。
据了解，人体食用过量的柠檬黄、日落黄可引起过敏、腹泻、偏头痛、忧郁症、支气管哮喘等症状，还可能对人体的肾脏、肝脏和神经系统造成危害。
因此对食品中的柠檬黄、日落黄进行检测非常重要。
测定柠檬黄、日落黄的检测方法多是高效液相色谱法[2]，其原理是将果蔬汁中的合成着色剂用聚酰胺粉吸附提取制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性与峰面积比较进行定量。
但在大量的实验中发现，国标法中规定的聚酰胺粉难以将柠檬黄和日落黄完全吸附，样品回收率较低。
为此笔者做了多次实验对国标法进行了优化，方法优化后能较好地将果蔬汁中的柠檬黄和日落黄提取出来，提高了实验的准确度。
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[ Abstract] O bjective: Com parison o f tw o prepa ra tive m e thod dur ing determ ination of tartrazine and sunset ye llow w ater- so lu b ility co lour by HPLC in drinks. M ethods: Preparation sam ples w ith tw o m ethod respective ly, and test the resu lt w ith F - test and t- test a fter separation w ith HPLC. R sesu lts: F - test w ere perfo rm ed on the resu lts o f tw o m e thods, Fc < F t. t- test we re perform ed on the resu lt after adjustm entw ith recovery, tc < tt. Con clu sion: There w ere no s ignificant difference between tw o pre parative m ethods. [ K ey words] HPLC; Co lore; P repara tion
食品饮料中 人工 合成色 素是 重要 的监 测指 标, 我国 卫生 标准中对食品中人工 合成色素的允许量有明确的规定。 GB /T 5009. 35- 2003推荐了食品中色素的测 定方法, 分别为 高效液 相色谱法、薄层色谱法、示波 极谱法。 由于高 效液相色 谱法具 有灵敏度高、分离能 力好、速 度快 等优 点, 并且 高效 液相 色谱 仪器已 经 在 基 层 实 验 室得 到 普 及, 现已 经 被 广 泛 采 用。在 G B /T 5009. 35 - 2003中, 食品饮 料样品 的前处 理采用 经典的 聚酰胺吸附法, 但 操作 较为 繁琐。 SN /T 2105- 2008 和 SN /T 1743- 2006对 液体样品采用直接稀释法 处理。本文对 两种方 法予以比较, 认为两种方法的检测 结果无 显著性 差异, 具有一 致性。
的结果进行 F 检验 , F计 < F表。经对回收率校正后的结果进行 t检验, t计 < t表。结论: 两种前 处理方法 的精密度和 平均值 无显著性差异。
[ 关键词 ] 高效液相色谱; 色素; 前处理
[ 中图分类号 ] O 657. 7+ 2
[文献标识码 ] A
[文章编号 ] 1004- 8685( 2011) 01- 0069- 03
C omparison of p reparative m ethod during determ ination of tartrazine and sun set yellow w ater- solub ility colour by HPLC in drink s
CA I Z eng - xuan, H UAN G Ba i- fen, WAN G T ian - jiao, FEN G L iang, REN Y i- p ing ( Zhe jiang C entre fo r D isease Contro l and P revention, H angzhou 310051, China)
1 材料与方法 1. 1 仪器
A lliance 2695高效 液相 色 谱仪 ( W aters公 司 ), 2996 二极 管阵列检测器 (W aters公司 ), 循 环水式 真空泵 ( SH Z - D ( III) 型, 予华仪器公司 ) , 旋转 蒸发 仪 ( RE - 52AA, 上 海亚 荣 ) , pH 计 ( 雷磁 PH SJ- 4A 型, 上 海精 科 ) , 高速 离心 机 ( m icrofuge 18
(浙江省疾病预防控制中心, 杭州 310051)
[ 摘要 ] 目的: 对 H PLC 法测定饮料中人工合成色素柠檬黄、日落黄 时两种 前处理 方法进 行比较。方 法: 分别以稀 释和
聚酰胺吸附处理 样品, 经色谱分离后对计算结果进行统计处理, 对结果进行 F 检验和 t检验。结果: 经对两种前处理方法
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化学测定方法
H PLC法测定饮料中色素柠檬黄、日落黄前处理方法的比较
蔡增轩, 黄百芬, 王天娇, 冯靓, 任一平
0. 56% ~ 2. 23% 之间, 由表中数 据可知, 经稀 释法处 理的 两个 样品的相对标准偏 差均 小于 聚酰胺 吸附 法 处理 的, 原因 在于 稀释法处理简单, 与聚酰胺法相 比, 少 了很多 中间吸 附、淋 洗、 解吸、蒸干、溶解、定容 的操 作, 减少 了操 作 误差 的产 生, 因此 样品的平行性较好。
表 1 两种方法的精密度比较
方法 1 ( 稀释 )
方法 2(吸附 )
柠檬黄 ( m gkg) 日落黄 ( mg / kg) 柠檬黄 ( m g /kg) 日落黄 ( m g /kg)
样品 1 116. 05
92. 27
111. 15
85. 97
117. 02
93. 89
108. 62
83. 32
117. 33
142. 62
25. 17
148. 48
24. 28
142. 58
25. 38
149. 21
24. 66
147. 36
25. 29
150. 11
24. 59
147. 36
RSD ( % ) 0. 77
1. 36
0. 79
1. 64
图 2 直接稀释法处理样品色谱图 1. 4. 2 聚酰胺 吸附法 ( 方法 二 ) 取 试样 溶液 10 m l于 试管 中, 加热至 60 , 将 1 g 聚酰胺粉加少许水调成糊状, 倒入试样 溶液中, 搅拌片 刻, 以 G 3 垂熔 漏 斗抽 滤, 用 60 的 水洗 涤 5 次, 然后用甲醇 - 甲酸混合溶液洗涤 5次, 每次 5 m ,l 再用水洗 涤至中性, 用乙醇 - 氨水混合溶液解吸 5次, 每次 5 m ,l 收集解 吸液, 加乙酸中和, 蒸 发至 近干, 加水 溶解, 定 容至 5 m ,l 经滤 膜过滤后进样分析。样品色谱 图见图 3。
为 1. 0 m l/m in。线性流动相梯度洗 脱条件: 0 ~ 5 m ins, B: 15% ~ 20% , 5~ 10 m ins, B: 20% ~ 98% ; 10~ 12. 5 m ins, B: 98% ~ 98% ; 12. 5 ~ 13 m ins, B: 98% ~ 15% ; 13 ~ 20 m ins, B: 15% ~ 15% 。标准样品谱图如图 1所示。
图 1 标准样品色谱图 ( 50 g /m l) 1. 4 样品处理 1. 4. 1 稀释法 (方法一 ) 准确称取样 品 5 g于 10 m l容量瓶 中, 以水定容至刻度, 混匀后置于 塑料离心 试管中, 12000 RPM 离心 3 m ins, 取上清液过微孔滤膜后进样分析。样品色谱图见 图 2。
加入后
46. 24 252. 80 45. 04 247. 42
回收率 (% )
105. 24 104. 82 103. 01 102. 49
回收率校正
23. 94 141. 17 23. 72 141. 41
2. 3 实验结果显著性检验
中国卫生检验杂志 2011年 1 月 第 21卷 第 1期 C h inese Jou rnal of H ea lth Laboratory Technology, Jan 2011; V ol 21 N o 1
加入后
220. 13 195. 60 208. 76 180. 14
回收率 (% )
103. 55 102. 59 98. 56 95. 42
回收率校正
112. 59 90. 69 111. 80 88. 78
样品 2 原含量
25. 19 147. 97 24. 43 144. 93
加入量
20. 00 100. 00 20. 00 100. 00
品做加标试验, 处理方法 与平 行样品 相同, 添 加量见 表 2。以 平行样品结 果 的平 均 值作 为 样品 中 色素 的 原 含量。 两种 方 法、不同浓度的回收率在 95. 42% ~ 105. 24% 之间。经 回收率 校正后, 分别利用两种 方法 对两 个样 品的 检测 结果 具有 一致 性。
94. 22
109. 32
82. 11
115. 79
91. 70
110. 95
86. 44
116. 74
93. 03
110. 92
85. 74
RSD ( % ) 0. 56
1. 14
1. 04
2. 23
样品 2 24. 88
144. 98
24. 42
144. 75
25. 24
147. 08
24. 21
表 2 两种方法的回收率比较
样品 1 原含量
方法 1(稀释 )
方法 2(吸附 )
柠檬黄 日落黄 柠檬黄 日落黄
( mg / kg) ( mg / kg) ( m g/ kg) ( m g /kg)
116. 58 93. 02 110. 19 84. 72
加入量
100. 00 100. 00 100. 00 100. 00
图 3 聚酰胺吸附法处理样品色谱图