荧光原位杂交实验室检测项目
原位杂交和免疫荧光
原位杂交和免疫荧光
原位杂交和免疫荧光是两种常见的分子生物学实验方法。
这两种
方法都可以用于研究生物分子的定位和分布情况，进而揭示生物学过
程和功能。
下面我们分别来介绍一下这两种方法。
原位杂交是一种常用的分子生物学技术，主要用于检测和定位细
胞或组织中特定的DNA或RNA序列。
原位杂交的基本步骤包括：制备
探针，标记探针，处理样品，杂交和探针探测。
通常情况下，原位杂
交用于检测单个基因或特定基因家族的成员，可用于研究基因组结构、基因表达和基因型等方面。
该技术在医学诊断和药物开发方面也有广
泛应用。
免疫荧光是一种检测生物分子定位和分布情况的常用方法。
它利
用抗体与标记化学物质（如荧光素）相结合，通过荧光显微镜观察生
物分子的定位和分布情况。
免疫荧光主要应用于研究细胞内的蛋白质
定位和分布，也可用于研究病毒感染等方面。
该技术不仅能够静态观
察生物分子的分布情况，还可以通过时间分辨光学显微镜观察生物分
子的动态行为。
虽然原位杂交和免疫荧光技术各自有其独特的应用范围和特点，
但它们有一个共同的优点，即能够在不破坏组织结构的情况下观察分
子分布及定位情况。
这种特性使得这两种技术成为研究生物分子功能
和生物学过程的重要工具。
总之，原位杂交和免疫荧光技术是分子生物学领域内的两个重要
实验方法。
它们都能够在细胞或组织中观察特定生物分子的定位和分
布情况，为揭示生物学过程和功能提供帮助。
荧光原位杂交实验PPP文档(最全版)
Y染色体探针、人外周血中期染色体细胞标本、恒温水浴锅、培养箱、染色缸、载玻片、Nikon E-400、荧光显微镜、盖玻片、封口膜 、200μL移液器、20μL移液器、暗盒、指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20。 由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以将探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。 由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以将探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。 掌握原位杂交技术的操作方法，熟练掌握荧光显微镜的使用方法。
荧光原位杂交实验
一、实验目的
• 通过实验了解荧光原位杂交技术的基本 原理和在生物学、医学领域的应用。
• 掌握原位杂交技术的操作方法，熟练掌 握荧光显微镜的使用方法。
二、实验原理
• FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按 照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进 行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于 DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列， 因而可以将探针直接与染色体进行杂交从而将特定的 基因在染色体上定位。与传统的放射性标记原位杂交 相比，荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特 异性高和可以多重染色等特点，因此在分子细胞遗传 学领域受到普遍关注。目前这项技术已经广泛应用于 动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、 病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组 进化研究等许多领域。
三、实验用具及材料
• Y染色体探针、人外周血中期染色体细胞 标本、恒温水浴锅、培养箱、染色缸、 载玻片、Nikon E-400、荧光显微镜、盖 玻片、封口膜、200μL移液器、20μL移 液器、暗盒、指甲油、甲酰胺、氯化钠、 柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20。
细胞荧光原位杂交检查
细胞荧光原位杂交检查细胞荧光原位杂交是一种常用的分子生物学技术，可用于检测细胞中特定的核酸序列。
该技术主要基于细胞荧光信号的原理，能够在不同的细胞组织中快速定位并鉴别靶标分子的位置、表达水平、结构与功能。
检测原理：细胞荧光原位杂交检查是利用一种特殊的探针，通过与目标DNA或RNA特异性配对，从而使荧光探针和目标结合，从而显示出细胞内的目标分子的位置和表达情况。
具体而言，探针会有一段能与目标分子互补配对的区域，这个区域域可以被定放在靶标分子上的特定区域，利用标记有荧光信号的核苷酸分子，通过被荧光激光器激发，并能够发出荧光信号，通过显微镜观察，从而显示出靶标分子是否存在或表达水平。
应用场景：细胞荧光原位杂交技术广泛应用于癌症、遗传性疾病、病毒感染等疾病的诊断与治疗、基因定位、基因表达分析等方面。
在肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤的分析中，可以检测肿瘤细胞中致癌基因的突变和拷贝数变化，通过观察荧光信号的强度和位置区分良性与恶性病变细胞，有着重要的临床价值。
在遗传研究中，细胞荧光原位杂交可以定量和比较不同组织和细胞类型中基因表达水平的差异，有助于分子生物学的研究和系统生物学的发展。
在新药研发中，细胞荧光原位杂交可以用来评估靶标和药物之间的相互作用，优化药物筛选和发展流程，提高新药研发成功率。
需要注意的是，细胞荧光原位杂交技术需要使用特殊的设备、药剂和反应条件，操作时需要仔细、精确、严谨，特别是在显微镜下观察细胞时必须严格控制条件，避免误差。
同时，不同类型的靶标分子，探针的选择、合成和设计都有一定的限制，需要深入了解相关知识，根据具体情况采用不同的方案和技术。
总之，细胞荧光原位杂交技术是一项广泛应用的分子生物学技术，具有高度特异性和灵敏性，是研究细胞结构和功能、诊断和治疗疾病、新药研发等领域不可或缺的工具。
在掌握技术原理和操作技巧的基础上，合理利用、探索和创新，将有助于推动分子生物学和临床医学的发展。
tsa荧光原位杂交法
tsa荧光原位杂交法
TSA荧光原位杂交法（Tyramide Signal Amplification Fluorescence In Situ Hybridization）是一种用于检测蛋白质或
核酸表达的方法。
该方法是在常规原位杂交的基础上引入了TSA荧光信号放大
技术。
在该方法中，首先将标记有特定荧光物质的探针与待测样品中的目标分子结合，形成杂交复合物。
然后使用辣根过氧化物酶结合物（HRP）标记的亲和试剂结合到杂交复合物上，再加入过氧化物酶底物和有机过氧化物，促使荧光信号的产生。
由于有机过氧化物的作用，信号放大，使得目标分子的表达区域更加明显，并且可以在荧光显微镜下观察和定量化。
TSA荧光原位杂交法具有高灵敏度、高特异性和高分辨率的
优点，并且可以应用于细胞、组织和固定的病理学切片等多种样品类型。
它在生物医学研究、基因组学和分子诊断等领域发挥着重要作用，有助于了解基因表达和蛋白质定位等关键信息。
荧光原位杂交实验具体步骤及详细说明
荧光原位杂交实验具体步骤及详细说明荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是一种用于确定DNA或RNA序列在细胞或组织中的位置的技术。
下面将详细介绍荧光原位杂交的具体步骤和相应的详细说明。
1.细胞准备首先，需要准备细胞样本。
可以选择使用原代细胞，细胞悬液或切片等。
2.固定将细胞固定在载玻片或载玻片上面。
固定通常使用的试剂是乙酸乙酯和甲醇的混合物，通常比例为1:33.水合将载玻片中的组织或细胞水合处理。
这一步可以通过将载玻片浸泡在去离子水或缓冲液中进行。
4.处理将载玻片进行预处理，以使DNA或RNA序列更易于杂交。
常用的预处理方法有：-煮沸：将载玻片浸泡在2×SSC（1×SSC：0.15MNaCl,0.015MNa3C6H5O7·2H2O,pH7.0）中，然后置于热盖板上加热至100°C，持续约10-20分钟。
-碱性水解：将载玻片浸泡在10%NaOH中，进行碱性水解，然后在盐溶液中冲洗。
5.杂交探针准备荧光探针或荧光标记的引物。
探针的选择取决于要检测的DNA或RNA序列。
探针的设计通常基于目标序列的序列信息，并且通过化学修饰和荧光标记以增加其杂交效率和检测灵敏度。
6.杂交将探针加到载玻片上的样本上，并与目标序列进行杂交。
杂交过程中，探针与目标序列进行互补配对，形成探针-目标复合物。
杂交的温度取决于探针的碱基组成和目标序列的GC含量。
7.洗涤将载玻片在洗涤缓冲液中进行洗涤，以去除未与目标序列杂交的探针。
8.检测使用荧光显微镜观察载玻片上的标记。
荧光标记的探针将通过荧光显微镜检测获得荧光信号。
根据荧光信号的数量和强度，可以确定目标序列的位置和数量。
9.成像和分析通过拍摄荧光显微镜图像来记录荧光信号。
使用图像处理软件进行图像分析，包括亮度分析和定量信号分析。
总结：荧光原位杂交是一种用于确定DNA或RNA序列在细胞或组织中位置的强大技术。
c-met扩增fish判读标准
c-met扩增fish判读标准C-met扩增FISH（荧光原位杂交）是一种用于检测c-met基因扩增的分子生物学技术。
c-met是一种编码肝细胞生长因子受体的基因，在多种癌症中被发现扩增。
FISH技术可以帮助确定肿瘤细胞中c-met基因的扩增情况，从而为临床诊断和治疗提供重要信息。
在进行c-met扩增FISH检测时，通常会使用荧光标记的探针与待测组织样本中的c-met基因进行杂交。
通过观察荧光信号的数量和分布，可以判断c-met基因的扩增情况。
下面是一些常见的c-met扩增FISH判读标准：1. 扩增定义，通常情况下，c-met扩增被定义为存在大量额外的c-met信号。
标准可以根据实验室的具体操作和设备进行微调，但一般来说，超过20%的肿瘤细胞显示c-met扩增被认为是阳性的。
2. 信号数量，除了百分比外，还需要考虑c-met信号的数量。
通常情况下，如果细胞核中存在5个或5个以上的c-met信号，就可能被认为是阳性的。
3. 细胞形态，除了数量外，观察c-met信号的形态也很重要。
扩增的c-met信号通常呈现为明亮而不规则的斑点状分布，而非扩增的情况下信号则比较均匀。
4. 结合其他检测，在判读c-met扩增FISH结果时，通常还需要结合临床病理资料和其他分子生物学检测结果，以确保最终的诊断和治疗决策的准确性。
需要注意的是，不同的实验室和临床实践可能会有不同的标准和解读方法，因此在进行c-met扩增FISH检测时，应该由具有相关经验和资质的专业人员进行操作和解读。
同时，对于c-met扩增FISH结果的解读也应该结合临床背景和其他辅助检查结果进行综合分析，以确保最终的诊断和治疗决策的准确性。
荧光原位杂交操作步骤
荧光原位杂交操作步骤荧光原位杂交听起来很复杂呢，其实操作步骤也有章可循啦。
一、样本准备。
要做这个实验，先得把样本处理好。
如果是细胞样本的话，就得把细胞乖乖地固定在载玻片上，就像把小娃娃放在小床上一样安稳。
这一步可不能马虎，固定不好后面就不好办啦。
要是组织样本呢，得把组织切成薄片，薄到像纸片一样精致才行。
然后同样把它固定好，这就为后面的杂交打下了好基础。
二、探针准备。
接下来就是探针啦。
探针就像是专门去找目标的小侦探。
得按照实验要求把探针配好，浓度要刚刚好哦，太浓了可能会乱了阵脚，太稀了又可能找不到目标。
把探针在合适的缓冲液里调配好，就像给小侦探准备好装备一样。
三、杂交反应。
然后就到了杂交这一步啦。
把准备好的探针滴到有样本的载玻片上，再盖上盖玻片。
这时候就像把小侦探放到了有目标的地方，让它们去寻找匹配的东西。
然后把载玻片放到一个合适温度的环境里，这个温度很关键呢，就像给小侦探们创造一个舒适的工作环境。
在这个环境里让探针和样本中的目标DNA或者RNA去结合，这个过程需要一点时间，就像小侦探寻找目标也不能太着急呀。
四、洗涤。
杂交完了之后呢，就要把那些没有结合的多余探针洗掉。
这就像是把那些凑热闹的家伙赶走，只留下真正找到目标的小侦探。
用合适的洗涤液轻轻地洗，可不能太粗暴，不然把已经结合好的也冲走了就糟糕啦。
五、检测。
最后就是检测啦。
这时候要用专门的荧光显微镜去看。
打开显微镜，就像打开一个神秘的宝藏盒子。
如果杂交成功了，就能看到漂亮的荧光信号啦，就像在黑暗中看到了闪闪发光的小星星。
那些荧光信号所在的地方就是探针找到目标的地方呢。
荧光原位杂交虽然有点复杂，但是按照这些步骤一步一步来，就像照顾小宠物一样细心，也能顺利完成这个有趣的实验啦。
荧光原位杂交试验方案
FISH鉴定反硝化聚磷菌试验方案1 试验材料与方法1.1 试验仪器高速离心机：可达36000转/分钟高压灭菌锅：160℃以上杀菌恒温箱：为杂交提供恒定温度荧光显微镜：捕捉荧光图片恒温水浴锅纯水机1.2 试验所用试剂及配置方法（1）0.2mol/L（pH 7.4）磷酸缓冲溶液（PB）试剂为NaH2PO4·2H2O和Na2HPO4·12H2O。
首先称取NaH2PO4·2H2O 31.2g，加重蒸水至1000mL溶解即为0.2mol/L的NaH2PO4溶液；称取Na2HPO4·12H2O 71.632g，加重蒸水至1000mL溶解即为0.2mol/L的Na2HPO4溶液。
取19mL的NaH2PO4溶液和81mL的Na2HPO4溶液充分混合即为0.2mol/L（pH 7.4）磷酸缓冲溶液。
常温保存。
（2）0.01mol/L磷酸盐缓冲溶液（PBS）试剂为NaCl和PB。
称取NaCl 8.5g和0.2mol/L的PB 50mL，加入到1000mL的容量瓶中，最后加重蒸水至1000mL，充分摇匀即可。
常温保存。
0.02mol/L的PBS，只需使PB的量加倍，即取100mL的PB即可。
以此类推。
（3）4%多聚甲醛溶液称取40g多聚甲醛，置于三角瓶中，加入500mL的0.1mol/L的PB，加热至60℃左右，持续搅拌使粉末完全溶解，滴加少量1mol/L NaOH使溶液清亮，再用1mol/L的HCl将PH 调至7.4，最后补足0.1mol/L的PB至1000mL，充分混匀即可。
（4）0.5mol/L（pH7.4）Tris-HCl缓冲液主要试剂为Tris（三羟甲基氨基甲烷）。
先用400mL蒸馏水溶解60.57gTris，加入大约420mL的HCl后，用1 mol/L的HCl或1 mol/L的NaOH将pH调至7.4，最后加重蒸水至1000mL。
4℃冰箱保存。
（5）铬矾明胶液在1000mL烧杯中用800mL水加热溶解4g明胶，待其完全溶解后，再加入0.5g铬矾（十二水·碳酸钾铬）。
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ALK基因断裂检测
C-Met基因扩增检测
PTEN基因缺失检测
TopoⅡα基因异常检测
神经母细胞瘤N-myc
基因扩增检测
胶质瘤1p、19q缺失检体易位
IGH/CCND1染色体易位
API2/MALT1染色体易位
IGH/MALT1染色体易位
BCL6基因断裂检测
滑膜肉瘤SS18基因断裂检测
尤文/Ewings肉瘤EWS
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腺泡状横纹肌肉瘤
PAX3-FKHR易位检测
前列腺癌TM PRSS2-ETS
融合基因检测
尿路上皮脱落细胞染色体异常检
hTERC基因扩增检测
E948
白血病融合基因分型
BCR-Abl基因融合
935元
外周血、骨髓
荧光原位杂交实验室检测项目
收 费 代 码
收费名称
FISH检测项目
收费标准
标 本 要 求
报告时间
E976
病理切片肿瘤基因原位杂交检测-荧光法（FISH）
Her-2基因扩增检测
1900元
新鲜组织、石蜡包埋组织、白片、胸腹水白片须用涂胶防脱片，组织切片
厚度4~5μm
自接到标本或申请单之日起3个工作日
EGFR基因拷贝数检测