人牙龈成纤维细胞原代培养
成纤维细胞原代培养
利用组织块可以成功地培养得到原代培养的人皮肤真皮成纤维细胞。
培养中应该注意以下事项：①一般皮肤主要取白手术过程中切除的部分组织，方法似外科取断层皮片手术操作，但组织一般2—3cm 即可，注意取材时不要用碘酒消毒．此外，不要切取太厚，要尽量去除皮下组织，如果皮下脂肪太厚会影响组织块的贴壁，不易于日后细胞的游出．②尽量去除表皮，如有表皮未被完全剔除，则可能造成表皮细胞竞争生长，最为常见的为角质形成细胞的污染，它可以和成纤维细胞共同生长．虽说在今后的传代培养时可通过细胞纯化方法适当去除，但这种混和生长状态会对后续实验产生影响．所以，一旦发现细胞污染，应立即停止实验，重新培养．③在剪切组织块时要注意保持组织块湿润，可向其表面滴加几滴培养液，要始终保持其成湿润状态，这一点要特别注意而且十分重要．剪切时要掌握好时间，尽量在短时间内完成．④组织块在最初贴壁时不是很牢固，所以开始加液不应太多，以刚刚浸没组织块为易，特别要注意，在最初几天时要减少移动培养瓶次数，避免过多晃动而造成组织块脱壁，最好在开始3 d内不换液．⑤文献报告成纤维细胞培养多在CO 培养箱内进行，培养箱内环境为CO 浓度50 ml／L，湿度95％，培养瓶为开放式．因其湿度，温度及氧气与人体内实际情况较为接近，所以适合成纤维细胞的成长．但开放式培养的同时也增加了细胞培养污染的机率，所以，可以根据自己实验室的条件选用合适的培养方法，如半开放式和充气后密闭瓶口，其效果也十分理想．但同时要密切观察培养液的pH变化，以保持适宜的酸碱度．⑥细胞培养失败的最常见原因是污染，其中以微生物污染最常见，污染一旦明确，多数将无法救治，应尽快弃之，以防止污染扩大，影响其他细胞．因此，应在各个阶段严格遵守无菌操作原则，把好每一关口，尽可能禁止其他污染的物品进入操作环节，以避免造成时间、人力、物力的浪费．。
人牙周膜成纤维细胞的原代培养及鉴定
ｖｉｔｒｏ ｆ ｏｒ ｆｕｔｕｒｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｈ ＰＬＦ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｅｙｔｏｋｉｎｅｓ．
【关键词 】 牙周膜 ；成纤维细胞 ；细胞培养技术
Ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｄｅｎｔ ｉｆ ｉｃａｔ ｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ＲＥＮ Ｊｕａｎ，ＬＩ Ｘｉａ，ＳＵＮ Ｋｅ—
ｑｉｎ，ＣＨＥＮＧ Ｊｕｅ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｎｇ－ｙｕ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｒａ ｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏ ｆ Ｓｈａ ｎｘｉ Ｍｅｄｉｃａ ｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａ ｎ
研究牙周组织疾病 的重要手段 。日前关于牙周膜细 医科大学 口腔医院 口外科因正畸而拔 除的双尖牙 ．
胞的原代培养有酶消化法和组织块培养法【１，２１两种 ， 年 龄 １２～２６岁 ，所选 牙齿 均无 龋坏 、根尖 周疾 病及 牙
本实验采用组织块法培养牙周膜细胞 ，并对其进行 周 炎 。拔牙前 嘱患者用 ３％双氧水 含漱 ，碘 伏 消毒 术
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ； Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ；Ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
人 牙周 膜 成 纤 维 细胞 （ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａ— ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；ＣＯ２培 养 箱 （Ａｓｈｅｖｉｌｌｅ ＮＣ，ＵＳＡ）；ＧＢ一 Ⅱ
人牙龈成纤维细胞的体外培养及生长曲线测定
人牙龈成纤维细胞的体外培养及生长曲线测定
人牙龈成纤维细胞的体外培养及生长曲线测定作者：王文瑜闫福华姚丽艳陈小玲来源：《海峡科学》2007年第08期【摘要】目的：体外培养正常人牙龈成纤维细胞并测定其生长曲线，初步了解该细胞生物学特性。
方法：用改良组织块法培养人牙龈成纤维细胞，通过MTT比色法研究细胞的生长曲线。
结果：改良组织块法原代培养细胞成活率达80％，培养细胞呈梭形，从第3天呈对数生长，第4－5天进入平台期。
结论：改良组织块法能简便快速地获得人牙龈成纤维细胞，初步了解其生物学特性。
【关键词】人牙龈成纤维细胞组织培养生长曲线人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts, HGFs）是牙龈固有层结缔组织的主要组成细胞，不仅具有活跃的自身更新能力，而且具有合成和降解胶原、弹力纤维、糖蛋白等细胞外基质的功能[1]。
本实验采用改良组织块培养法进行人GFs的原代培养，研究其生物学特性，为进一步研究做好准备。
1 材料和方法1.1主要试剂和仪器DMEM培养液(Gibco，美国)，胰蛋白酶(Gibco，美国)，胎牛血清FBS(天津灏洋生物公司)，超净工作台(上海力申科学仪器有限公司)，CO2孵箱( Heraeus，德国)，倒置相差显微镜(广州光学仪器厂)，MTT (Sigma,美国)，酶联免疫检测仪(Human 德国)1.2方法1.2.1 原代培养选取本院需行阻生牙拔除的患者，在征得患者同意后在术中切取小块牙龈组织。
要求患者没有牙龈增生、炎症及使用过导致牙龈增生的药物。
术前将拔牙器械及术区周围消毒灭菌，无菌条件下获取小块牙龈组织（约3mm×3mm）[2]，立即放入装有无血清DMEM培养液的小瓶中，在超净工作台内用含有抗生素(青霉素100u/ml，链霉素100μg/ml)的PBS反复冲洗，用锐利小剪刀尽量去除牙龈上皮，在玻璃皿上剪成1mm3左右的碎块，均匀铺于六孔培养板底面，其上覆盖20×20mm盖玻片。
沿盖玻片边缘缓慢加入含10％FBS的DMEM培养液4m1，在饱和湿度、5%CO2、37℃标准环境下孵育。
不同烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞毒性和炎性损伤的影响
不同烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞毒性和炎性损伤的影响目的：本实验通过研究4种非贵金属烤瓷合金(镍铬合金、钴铬合金、钛合金、纯钛)浸提液对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)活性及不同时间下(1h、2h、3h、6h)细胞产生炎性因子TNF-a水平的影响,比较4种非贵金属烤瓷合金的生物相容性,为临床选择良好的烤瓷修复体提供理论依据。
方法：实验1、牙龈成纤维细胞原代培养。
采用组织块法原代培养人牙龈成纤维细胞,倒置纤维镜下观察细胞形态并对第三代细胞进行免疫学鉴定,采用血球计数法绘制细胞生长曲线。
实验2、MTT 法检测烤瓷合金浸提液对牙龈成纤维细胞活性的影响。
将4种非贵金属烤瓷合金试件(镍铬合金、钴铬合金、钛合金、纯钛)分别浸透在含体积分数为10% FBS的DMEM液中。
浸提7天后分别作用于体外培养的人牙龈成纤维细胞48h,空白对照组为含体积分数为10%FBS的DMEM液,MTT比色法测定各组细胞的吸光度值,并计算其相对增殖率。
实验3.ELISA法检测不同时间下烤瓷合金浸提液对牙龈成纤维细胞中炎性因子TNF-a水平的影响。
将4种烤瓷合金试件(镍铬合金、钴铬合金、钛合金、纯钛)分别在含体积分数为10% FBS的DMEM中浸提7天。
用ELISA法测定人牙龈成纤维细胞与烤瓷合金浸提液作用1n、2h、3h、6h 后各组烤瓷合金浸提液中牙龈成纤维细胞分泌的TNF-a的含量。
结果：1、原代培养出牙龈成纤维细胞,镜下观察细胞呈梭形,具有长短不等的数个突起,核为卵圆形并靠近胞质中央,细胞成螺旋状、放射状或栅栏状。
免疫组化鉴定Anti-Vimentin染色阳性,Anti-Cytokeratin染色阴性,为来源于中胚层的成纤维细胞。
2、MTT结果显示,烤瓷合金浸提液与牙龈成纤维细胞作用48h后,各组细胞的相对增殖率从小到大依次为镍铬组77.78%、钛合金组79.01%、钴铬组85.19%和纯钛组98.77%,而且各组烤瓷金属的细胞毒性均为0级或1级。
原代成纤维细胞培养基配方
原代成纤维细胞培养基配方1.引言1.1 概述成纤维细胞是一类常见的细胞，广泛存在于人体各个组织中，包括皮肤、血管、肌肉和内脏等。
在细胞培养技术的发展过程中，原代成纤维细胞培养基的配方变得越来越重要。
原代成纤维细胞培养基是一种提供养分和适宜环境的培养液，可以维持原代成纤维细胞的生长和增殖。
原代成纤维细胞培养基的配方包括多种关键成分，如培养基基础成分、生长因子、附加物等。
不同的组分可以提供细胞所需的营养和信号物质，使细胞能够在体外环境下继续生长和繁殖。
原代成纤维细胞培养基配方的研究对于细胞生物学、组织工程和再生医学等领域具有重要意义。
通过优化培养基的配方，可以提高原代成纤维细胞的增殖速度和存活率，同时改善其功能和特性，为细胞研究和临床应用提供更好的工具和基础。
然而，目前关于原代成纤维细胞培养基的配方研究还比较有限。
不同实验室和研究者之间存在着很大的差异，配方的选择和调整仍然依赖经验和试错。
因此，进一步的研究和探索仍然是十分必要和迫切的。
本文将深入探讨原代成纤维细胞培养基配方的概念和重要性。
我们将详细介绍培养基的组成、各种成分的作用机制，并总结现有研究的进展和局限性。
最后，我们将展望未来的研究方向，希望通过进一步的研究和探索，为原代成纤维细胞培养基的配方优化和应用提供更好的指导和支持。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章结构部分的主要目的是为读者提供对整篇文章的摘要和框架。
通过描述文章的组织结构，读者可以更好地理解文章的内容和逻辑顺序。
首先，本文将介绍原代成纤维细胞培养基的概念和重要性。
这一部分将讨论成纤维细胞在生物医学和生命科学研究中的重要作用，以及为什么培养基对于细胞培养的成功和细胞功能的研究是至关重要的。
其次，本文将详细介绍原代成纤维细胞培养基的组成。
这一部分将讨论培养基中各种组分的作用和功能，如营养物质、生长因子、酶和血清的添加等。
读者将了解到培养基中各种组分的重要性和对细胞生长和功能的影响。
人眼Tenon's囊成纤维细胞原代培养的研究
人眼Tenon's囊成纤维细胞原代培养的研究陈珺;李宁;廖荣丰【摘要】目的探讨体外培养原代人眼Tenon's囊成纤维细胞的方法及其生长特性,为抗纤维化研究提供靶细胞模型.方法取翼状胬肉及斜视手术患者的Tenon's囊组织,用组织块法培养原代成纤维细胞.用免疫荧光方法鉴定细胞.对细胞进行传代、冻存和复苏的观察.对复苏后的细胞行MTT法检测其活力并绘制生长曲线.结果入眼Tenon's囊成纤维细胞可以在体外用组织块方法培养出来,呈典型的长梭形.免疫荧光鉴定细胞波形蛋白染色阳性.细胞多次传代后依然生长迅速,3d即可长满瓶底.复苏后细胞2～6d处生长对数期,增殖能力良好.结论人眼Tenon's囊成纤维细胞体外生长状态良好,可以液氮冻存,复苏后细胞活力较强,可以用于抗纤维化增生的基础研究.【期刊名称】《临床眼科杂志》【年(卷),期】2016(024)001【总页数】4页(P1-4)【关键词】人Tenon囊;成纤维细胞;细胞培养技术【作者】陈珺;李宁;廖荣丰【作者单位】230022 合肥,安徽医科大学第一附属医院眼科;230022 合肥,安徽医科大学第一附属医院眼科;230022 合肥,安徽医科大学第一附属医院眼科【正文语种】中文纤维增生性疾病在多个医学领域(包括眼部、皮肤、整形和肿瘤等)中尚属治疗难点，对其发生发展和机制还有待进一步研究[1，2]。
瘢痕化的形成是其共同的表现，瘢痕化的产生主要是与多种细胞因子的产生、细胞及细胞外基质活动有关的生物学过程[3-7]。
其中人眼Tenon's囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs)的过度增殖是纤维瘢痕化的主要原因，所以探索简单快速地培养出大量HTFs，观察其生长特性，研究细胞经过数次传代、液氮冻存及复苏后的活力如何，为抗瘢痕化的研究提供理想细胞模型。
一、取材本实验已经安徽医科大学第一附属医院伦理委员会审核批准，人眼Tenon's囊组织均取材于本院斜视及翼状胬肉手术患者，患者均签署知情同意书，无既往眼部手术史，术中打开结膜囊暴露Tenon's组织，取材约5 mm×5 mm大小并放入含DMEM培养液的无菌离心管中，装入无菌冰盒带回实验室。
人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定-最新文档
人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定-最新文档人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定The primary culture and identification of human gingival fibroblastsCUI Juan1, SUN Keqin1, LI Xia1, ZHANG Huaping2(1.Oral Medicine Department of Oral Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China; 2.Central Laboratory of Oral Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)[] Objective: T o isolate and culture human gingival fibroblasts (HGFs) in vitro, and provide the experimental condition for further research on the HGFs regulation by cytokines. Methods: HGFs were primary cultured by tissue explant culture technique and identified by morphological analysis and immunocytochemical analysis. Results: The HGFs were cultured and passaged successfully. The cells showed long spindle or star appearance. By immunocytochemical analysis, these cells tested positive to anti-vimentin antibody and negative to anti-keratin antibody, indicating the cells were mesoderm derived fibroblasts. Conclusion: The cells cultured by tissue explant culture technique are consistent with typicalHGFs' characteristics of morphology and immunocytochemical observation. The HGFs are used as cell model in vitro for future research on HGFs regulation by cytokines.人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)是牙龈结缔组织中的主体细胞,在牙周组织的保护和修复中起重要作用[1]。
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人牙龈成纤维细胞原代培养
人牙龈成纤维细胞原代培养是指从人牙龈组织中分离出的成纤维细胞在体外的培养过程。
具体步骤如下：
1. 采集人牙龈组织样本，通常通过牙龈刮片或手术切取进行采集。
2. 将采集到的组织样本放入含有抗生素和抗真菌药物的培养基中，以避免污染。
3. 组织样本经过消化酶的处理，将细胞从组织中分离出来。
4. 将分离出的细胞转移到含有营养物质和生长因子的培养基中。
5. 在适当的温度、湿度和二氧化碳条件下，将细胞培养在细胞培养箱中。
6. 观察和检测细胞的生长状态，通常通过显微镜观察细胞形态、细胞数量和细胞活力等指标。
7. 经过一段时间的培养，当细胞达到足够数量时，可以进行细胞传代，即将细胞从原培养瓶中转移到新的培养瓶中，以保证细胞的正常生长和建立永久细胞库。
人牙龈成纤维细胞原代培养可以用于研究人牙龈组织的生理和病理过程，以及在临床牙周疾病和牙体牙髓疾病的治疗中的应用。