N-乙酰半胱氨酸对急性肺损伤大鼠的保护作用

第３３卷第４期２００８年８月贵阳医学院学报ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＵＩＹＡＮＧＭＥＤＩＣＡＬＣｏＬＬＥＧＥＶ０１．３３Ｎｏ．４２００８．８Ｎ一乙酰半胱氨酸对急性肺损伤大鼠的保护作用黄毅１，李秀珍２（１．贵州省遵义医院呼吸内科，贵州遵义５６３００２；２．贵阳医学院附院呼吸内科，贵州贵阳５５∞０４）【摘要］目的：探讨Ｎ一乙酰半胱氨酸（ＮＡｃ）对油酸（０Ａ）诱导的急性肺损伤（Ⅲ）大鼠的保护作用。

方法：成年雄性ｓＤ大鼠１８只，随机分成对照组、损伤组（Ａｕ组）和Ｎ一乙酰半胱氨酸组（ＮＡｃ组），后两组在注射０Ａ后３ｈ检测肺湿重与肺干重比（Ｗ／Ｄ），肺组织匀浆髓过氧化物酶（ＭＰ０）、超氧化物歧化酶（ｓ０Ｄ）、丙二醛（ＭＤＡ）及肺组织病理检查。

结果：Ａｕ组ＭＰ０、ＭＤＡ明显升高，ｓＯＤ明显降低，与对照组比较有明显差异（Ｐ＜Ｏ．０１），ＮＡｃ组ＭＰ０、ＭＤＡ低于Ａｕ组，ＳＯＤ明显升高，Ｐ＜０．０１；Ａｕ组ＭＰ０水平与肺组织病理损伤程度成正相关（ｒ＝Ｏ．７９３，Ｐ＜０．０１）；肺组织病理组织学显示，ＮＡｃ预处理能明显改善肺组织病理损伤。

结论：ＮＡｃ对Ａｕ大鼠具有保护作用，其保护机制可能与清除氧自由基有关。

［关键词］急性肺损伤；Ｎ一乙酰半胱氨酸；氧自由基；过氧化物酶类；超氧化物歧化酶；丙二醛［中图分类号】Ｒ５６３．１９［文献标识码］Ａ［文章编号］１０００．２７ｃｒ７（２００８）０４明７４拐ＴｈｅＰｒｏｔｅｃｔｉＶｅＥｆｆｅｃｔｏｆＮ－ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅｏｎＡｃｕｔｅＬｕｎｇＩｎｊｕｒｙｉｎＲａｔｓＩｎｄｕｃｅｄｂｙＯｌｅｉｃＡｃｉｄＨＵＡＮＧＹｉｌ．ＵＸｉｕｚｈｅｎ２（Ｊ．巩卿咄矿矗印咖，屁叫觑印涮，驯弱砌Ｄ２，仇诎纰，劬妇；２．巩即刺旷胁卿幡町，孤删融ｉＰ删矿咖胁删伽姆，蛳昭跏泓，觎舭，吼ｉ胍）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ｏｂｊ∞石ｖｅ：。

ｒｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐＩＤｔｅｃｔｉｖｅｅ雎ｃｔｏｆＮ—ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ（ＮＡｃ）∞ｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｉｎｍｔｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｏｌｅｉｃａｃｉｄ（ＯＡ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＥｉｇＩｌｔｅｅｎｍａｌｅＳｐｎＩｇｕｅ—Ｄ删ｌｅｙｍｔｓｗｅ陀ｍｎｄｏ“ｙｄｉ－ｖｉｄｅｄｉｎｔｏａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒ）ｒ（ＡＬＩ）目Ⅺｕｐ（ｎ＝６），Ｎ—ａｃｅｔ）ｒｌｃｙｓｔｅｉｎｅ（ＮＡＣ）目Ⅺｕｐ（ｎ＝６）蚰ｄｃｏｎ・扛Ｄｌ伊叫ｐ（ｎ＝６），ｎｅｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎ３ｈ如ｒＯＡｏｒｓａｌｉＩｌｅａｄｍｉｎｉｓｔｍｔｉｏｎ．ｈｌｌｇｗｅｉｇｈ∥ｄｒｙｒａｔｉｏ（Ｗ／Ｄ），ｔＩＩｅｃｏｎｃｅｎ岫ｄｏｎｓｏｆｌｕｎｇｈｏＩｎｏｇｅＩｌａｔｅｍｙｅｌｏｐｅ蒯ｄａ弛（ＭＰ０），ｍａｌｏｎｄｉａ－ｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ），肌ｄｓｕｐｅ蒯ｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）ｗｅｒｅｍｅ船ｕｒｅｄ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｎｅｐ础ｏｌｏｇｉｃａｌｃｈ锄ｇｅ８ｏｆｌｕｎｇｗｅｒｅｅ舶ｍｉｎｅｄｗｉｔＩｌｌｉｇｈｔＩＴｌｉｃｍｓｃｏｐｅ．ＩⅧｔｓ：ＩｎＡＵｇｒｏｕｐ，ｌｅＶｅｌｓｏｆｌｕｎｇｈ砌０９ｅ－ｎａｔｅｓＭＰＯ，ＭＤＡｗｅｒｅｓｉ印ｉｆｉｃ觚ｔＩｙｈｉｇｈｅｒ粕ｄｔ｝ｌｅｌｅｖｅｌｏｆＳＯＤｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｄｙｌｏｗｅｒｔｈａｎ山ｏ∞ｉｎｃｏｎｔｍｌｇｍｕｐ锄ｄＮＡＣｇｍｕｐ（ＡＵ尸＜Ｏ．０１）．１１１ｅｌｅＶｅｌｓｏｆＭＰＯｉｎｍｔｓｏｆＡＵｇＩ．ｏｕｐｈａＶｅａｓｉ印ｉｆｉ—ｃａｎｔｌｙｐｏｓｉｔｉＶｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉ山ｌｕｎｇｐａｔｈｏｌｏ百ｃａｌｉｎｊｕｒｙ∞ｏｒｅｓ（ｒ＝０．７９３，ｐ＜Ｏ．０１）．Ｈｉｓｔｏｐａｔｌｌｏｌｏ舀ｃ６ｎｄｊｎｇｓｓｈｏｗｅｄｌｅ鹪ｌｕＪｌｇｉｎｊｕ巧ｉｎＮＡＣｇｍｕｐ廿１ａｎｉｎＡＵｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｄｎｓｉｏｎｓ：ＮＡＣｍｉｇｌｌｔｈａＶｅｅⅡ．ｅｃｔｏｆａ儿ｅｖｉａｔｉｎｇｔ１１ｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｏｌｅｉｃａｃｉｄ，ｏｆｗｈｉｃｈｔｈｅｍｅｃｈ枷ｓｍｍｉｇｈｔｂｅａｓ∞ｃｉａｔｅｄｗｉ山ｆ南ｅｏ）【ｙｇｅｎｍｄｉｃａｌｅｌｉⅡｌｉｎａｔｉｏｎ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］∞ｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ；Ｎ・ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ；ｐｅｍ】【ｉｄａｓｅｓ；ｓｕｐｅｒ０】ｄｄｅｄｉｓｍｕｔａ∞；ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅ—ｈｖｄｅ急性肺损伤（ＡｃｕｔｅＬｕｎｇＩｎｊｕｒｙ，ＡＬＩ）是由脓毒血症、创伤和休克等多种病因引起的全身炎症反应综合症（ｓｙｓｔｅｒＩｌｉｃｉＩｌⅡａｎ蚰ａｔｏｒｙ１１ｅｓｐｏｎ∞ｓｙｎｄｍｍｅ，ＳＩＲＳ）在肺部的表现，病死率３４％一６０％。

目前国３７４内外对ＡＵ的药物干预研究较多，但临床研究结果均未能取得满意的疗效。

Ｎ一乙酰半胱氨酸（Ｎ—ａｃｅｔｙ・ｌｃｙｓｔｅｉｎｅ，ＮＡＣ）是一种经典的祛痰药，不仅具有溶解黏液作用，而且具有较强抗氧化、抗炎作万方数据４期黄毅等Ｎ一乙酰半胱氨酸对急性肺损伤大鼠的保护作用’用‘¨。

本文以Ａｕ大鼠模型为研究对象，观察ＮＡＣ对Ａｕ的影响及其作用机制，旨在为ＡＵ的药物治疗提供依据。

１材料和方法１－ｌ实验动物及主要器材成年雄性ＳＤ大鼠１８只，体重２００一２５０ｇ，购于贵阳医学院实验动物中心。

油酸（ＯＡ）购自广东西陇化工厂（批号０１０７１３１），组织髓过氧化物酶（ＭＰＯ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）试剂盒购于南京建成生物工程研究所，ＮＡＣ试剂盒购自美国Ｓｉ舯ａ公司。

１．２Ⅲ动物模型的复制实验大鼠以３％戊巴比妥钠４０ｍｇ／ｌ【ｇ腹腔麻醉，固定于手术台，Ａｕ组（ｎ＝６）大鼠尾静脉缓慢注射ＯＡＯ．２ｍＬ／ｋｇ，ＮＡＣ组（ｎ＝６）除注射ＯＡ前３ｄ每天给大鼠腹腔注射ＮＡＣ１５０ｍｇ／ｋｇ外，其余同Ａｕ组；对照组（ｎ＝６）尾静脉注射生理盐水０．２Ⅱｄ／ｋｇ。

１．３肺干重、肺湿重测定经颈动脉快速放血处死大鼠，立即开胸取左肺称湿重后，置于７０℃烤箱内２４ｈ完全脱水后称干重，计算肺湿重与干重比值。

１．４ＭＰＯ、ＳＯＤ、ＭＤＡ测定取右中上肺组织制成１０％肺组织匀浆，３０００ｒ／ＩＩｌｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清一２０℃保存待测。

肺组织匀浆ＭＰｏ、ＳＯＤ、ＭＤＡ测定严格按照南京建成生物工程研究所提供的试剂操作说明书进行。

１．５肺病理组织学染色取右下肺组织，置人１０％中性福尔马林中固定后，石腊包埋，ＨＥ染色。

病理形态学积分方法旧’根据肺间质水肿、肺泡水肿、炎细胞浸润、透明膜形成、肺不张改变等指标，按“无、轻、中、重”程度分别计“Ｏ、１、２、３分”，然后累计总分。

ｌ－６统计学处理用ＳＰＳＳｌＯ．Ｏ统计软件包进行数据统计处理，结果用ｉ±ｓ表示。

两样本间比较用Ｉ检验，多组样本间比较用方差分析，Ｐ＜Ｏ．０５有统计学意义。

２结果大鼠肺组织ＰａＯ：、肺湿重与干重比值及病理积分见表ｌ，大鼠肺组织ＭＰＯ、ＳＯＤ及ＭＤＡ水平见表２。

Ａｕ组肺组织ＭＰＯ与病理积分成正相关ｒ＝０．７９３。

Ｐ＜０．Ｏｌ。

表１各组大鼠Ｐ的：、肺湿重与肺干重比值、病理积分ｒＩ铀．１１ｋｌｅＶｅｌｓ０ｆＰａ０２，Ｗ／Ｄ瑚Ｉｔｉｏａｎｄｐａ吐ｌｏｋ，ｇｉｃａｌｓｃｏｒｅｓｏｆｌｕｎｇｓｉｎｄｉ丘．ｅｒｅｎｔ舯ｕｐｓ（孑±５）组别ｎＰａ０２（ｍｍＨｇ）ｗ／Ｄ病理积分（分）ＡＵ组６５４．１７±４．４０（”９．０３±１．０６（１’６．１７±Ｏ．７（１）ＮＡＣ组６６３．３３±４．２３（１）（２’６．９ｌ±Ｏ．２７（１）（２’３．６７±０．８（１）（２）对照组６９３．６７±２．１６４．９９±Ｏ．５８Ｏ注：ｗ／Ｄ代表肺湿重与干重比值；¨’与对照组比较，Ｐ＜Ｏ．０１；‘２’与叫组比较，Ｐ＜０．０ｌ。

表２各组大鼠ＭＰＯ、ＳＯＤ、ＭＤＡ、水平呦．２ｎｅｌｅＶｅｌｓｏｆＭＰＯ，ＳＯＤ蛆ｄＭＤＡｉｎｌｕＩｌｇｔｉｓｓｕｅｓｉｌｌｄｉⅡ色ｒｅｎｔｇ∞ｕｐｓ（孑±ｓ）组别ｎＭＰ０（Ｕ／ｇ）ＭＤＡ（岬ｏＬ／ｇ）ＳＯＤ（（Ｕ／ｍｇ））札Ｉ组６１１．２０±Ｏ．９３（１’３１．１７±１．２２（１’５７．１５±３．４８（１’ＮＡＣ组６６．５４±０．７９（１）（２芝１．７６±０．５Ｂ（１）（２’７７．∞±２．８１（１，（２＇对照组６２．９９±Ｏ．９９１２．６ｌ±１．９４１０６．１３±３．３５注：（１’与对照组比较，Ｐ＜０．叭。

（２’与Ａｕ组比较，Ｐ＜０．ｏｌ。

大鼠肺组织肉眼观：对照组大鼠肺呈均匀淡粉红色，包膜光滑，弹性好，表面未见病损灶，切面均质，无液体溢出。

Ａｕ组大鼠肺表面呈暗红色，可见肺包膜下普遍充血水肿，弹性降低，肺体积增大显著，切面可见粉红色泡沫状液体。

ＮＡＣ组大鼠肺表面呈暗红色，肺包膜下充血水肿轻，肺体积较ＡＵ组减小。

光镜下对照组大鼠肺组织结构完整，肺泡腔清晰，肺泡隔无水肿、炎症等改变。

ＡＵ组大鼠光镜下可见明显肺泡和肺间质水肿、炎细胞浸润、透明膜形成、肺不张。

ＮＡＣ组大鼠光镜下肺泡和肺间质水肿、炎细胞浸润等改变较轻。

３讨论ＡＬＩ是由非心源性的各种严重肺内、外致病因素等多种原发疾病引起急性进行性加重的呼吸困难和难治性低氧血症。

目前认为，各种病因引发过度的炎症反应，不受控制发展为ＳＩＲＳ，继续进展则为多器官功能障碍综合征（ｍｕｌｔｉｐｌｅｏｒｇ锄ｄｙ８ｆｕｎｃ－ｔｉｏｎｓｙｎｄｍ眦，ＭＯＤＳ），肺脏是这一病理进程中首位易受损伤的器官，ＡＬＬ／ＡＲＤＳ是ＭＯＤＳ在肺部的表现。

本实验显示，各组大鼠注射ＯＡ后呼吸增快，伴有呼吸窘迫和动脉血氧分压明显下降，肺组织病理学改变符合Ａｕ病理变化，提示油酸复制急性肺损伤模型成功建立。

ＡｌＪ复杂的发病机制为药物干预提供了可能，３７５万方数据贵阳医学院学报３３卷目前的临床研究显示糖皮质激素Ｈ１、表面活性物质ＨＪ、吸人性一氧化氮口１在ＡＬＩ治疗中未能显示出满意疗效。

ＮＡＣ是Ｌ．半胱氨酸乙酰化的衍生物，因其具有降解痰液黏蛋白中二硫键的能力，自２０世纪６０年代以来广泛用于慢性阻塞性肺疾病的祛痰治疗，疗效好且毒副作用小。

研究发现ＮＡＣ具有强大的抗氧化、抗炎作用…。

有研究显示，肺组织中多形核白细胞浸润是ＡＵ发病过程中的早发事件，其中多形核白细胞在肺内的“扣押”是引发损伤的关键∞Ｊ。

多形核白细胞在肺内浸润的程度可以用ＭＰＯ活力来判断一Ｊ，本实验结果显示，肺损伤后３ｈ肺组织中ＭＰＯ明显增加，肺组织病理证实ＯＡ致伤后３ｈ有肺泡和肺间质水肿、充血、炎细胞浸润等病理改变。

相关性分析显示肺损伤程度与ＭＰｏ呈正相关，说明Ａｕ肺组织内多形核白细胞的“扣押”与肺损伤严重程度密切相关。