琼脂糖凝胶电泳目的及后续工作
实验琼脂糖凝胶电泳一原理二目的掌握核酸电泳的方法
10×Loading Buffer (RNA电泳用) 组份浓度
配制量10 ml 配制方法 1. 称量下列试剂，置于10 ml离心管中。
2. 2. 向离心管中加入约4 ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。 3. 加入5 ml的甘油（Glycerol）后，充分混匀。 4. 用DEPC处理水1011121314151617181920212223M
Total RNA from Arabidopsis plants
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 1819 20 21 M
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
2011.5.23
14 15 16 17
Total RNA from Arabidopsis Plants
(DNA用)
本制品是核酸电泳用Loading Buffer。制品中含有SDS， 可即刻停止各 种酶促反应。使用时向酶促反应液中加入1/10量的本制品，即可上样 电泳。 本制品中含有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)，可以观察电泳的进行 情况。溴酚蓝在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中约与300 bp的双链线状 DNA的迁移速度相同（在0.5×TBE中)。 本缓冲液配制组成合理，缓冲液中不含核酸酶（DNase或RNase)，特别 适用于各种酶促反应的停止以及各种酶促反应后的琼脂糖凝胶电泳。 一般来说，各种限制酶、修饰酶的酶促反应后电泳时，常使用本制品。
4、电泳缓冲液(10*) TAE TBE TPE
50×TAE Buffer(pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸, 100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告引言琼脂糖凝胶电泳是一种重要的实验技术，广泛应用于生物学、医学、食品科学等领域。
本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的原理、实验步骤和结果分析，并探讨其在蛋白质分离与分析中的应用。
正文一、原理琼脂糖凝胶电泳是一种基于电荷与尺寸的分离技术。
琼脂糖是一种天然多糖，在适当条件下能形成渗透性较小的凝胶状。
当电场施加在凝胶上时，电荷带负的样品分子会被推向正电极，电荷带正的样品分子则被推向负电极，从而实现了分离。
二、实验步骤1. 准备样品：将待分离的蛋白质样品加入一定体积的载体溶液中，混合均匀。
2. 制备琼脂糖凝胶：根据需要分离的蛋白质的大小范围选择不同浓度的琼脂糖制备凝胶。
3. 装置电泳槽：将琼脂糖凝胶放置在电泳槽中，注入足够的电泳缓冲液，以确保电泳过程中的稳定性。
4. 分析样品：将样品加入琼脂糖凝胶槽中的孔上，并施加适当电压，使样品分子在凝胶中迁移。
5. 染色与可视化：电泳结束后，可以使用染料对凝胶进行染色，以可视化待分析的蛋白质条带。
6. 结果分析：根据蛋白质条带的迁移距离和形态，进行结果的解读和分析。
三、实验结果在本次实验中，我们使用琼脂糖凝胶电泳技术分离了不同分子量的蛋白质样品。
结果显示，随着样品分子量的增大，迁移距离逐渐增加，形成了不同大小的蛋白质条带。
通过与已知分子量的标准品进行对比，我们可以确定待分析样品的分子量范围。
四、讨论与应用琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，在蛋白质分离与分析中具有广泛的应用。
它可以用于研究蛋白质的结构、功能和相互作用关系。
同时，琼脂糖凝胶电泳还可以检测蛋白质的表达水平和纯度，并在生物医药领域中寻找新药靶点、分析疾病标志物等方面起到重要作用。
然而，琼脂糖凝胶电泳也存在一些局限性，如无法分离分子量较大的蛋白质，分辨率相对较低等。
因此，研究人员在分离与分析蛋白质时还需综合考虑实验目的和样本特点，选择合适的方法和技术。
总结琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离与分析蛋白质的技术。
电泳实验报告
电泳实验报告实验目的，通过电泳实验，观察DNA片段在凝胶中的迁移情况，了解电泳原理及其在分子生物学中的应用。
实验原理，电泳是利用DNA、RNA、蛋白质等带电颗粒在电场作用下的迁移特性，实现其分离和检测的一种方法。
在琼脂糖凝胶电泳中，DNA片段在电场作用下向阳极迁移，根据其大小和电荷不同而呈现出不同的迁移速度，从而实现分离。
实验材料与方法：1. 实验材料，琼脂糖凝胶、TBE缓冲液、DNA标记物、DNA样品、电泳槽、电源、UV透射仪等。
2. 实验步骤：a. 制备琼脂糖凝胶，将琼脂糖溶解于TBE缓冲液中，加热至溶解后倒入电泳槽中，待凝固后形成凝胶。
b. 样品处理，将DNA样品加入荷尔蒙染料和加载缓冲液，混匀后加热变性，然后迅速冷却至室温。
c. 电泳操作，将处理好的DNA样品加载至琼脂糖凝胶孔中，连接电源进行电泳。
设定合适的电压和时间，待电泳结束后取出凝胶进行染色。
d. 结果分析，观察DNA在凝胶中的迁移情况，利用UV透射仪观察染色后的凝胶图像，分析DNA片段的分离情况。
实验结果与分析，经过电泳实验，观察到DNA样品在凝胶中呈现出不同的迁移带，说明DNA片段得到了有效的分离。
根据迁移带的位置和数量，可以初步判断DNA样品中的不同片段的大小和含量。
通过对实验结果的分析，可以进一步了解DNA样品的组成和结构。
实验结论，电泳是一种常用的分子生物学技术，通过本次实验，我们深入了解了电泳原理及其在分子生物学中的应用。
实验结果表明，电泳可以有效分离DNA 片段，为后续的分子生物学研究提供了重要的技术支持。
实验注意事项：1. 实验操作要严格按照步骤进行，避免样品污染和凝胶破坏。
2. 在电泳过程中要注意安全，避免发生电击和化学品接触。
3. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，保持实验环境整洁。
通过本次电泳实验，我们对电泳技术有了更深入的了解，为今后在分子生物学领域的研究工作奠定了基础。
希望通过不断的实验和学习，能够更好地掌握电泳技术，为科学研究做出更大的贡献。
DNA琼脂糖凝胶电泳
思考题： 五、思考题：
影响电泳的主要因素? 影响电泳的主要因素?
荧光染料EB染色的原理和优点是什么？ EB染色的原理和优点是什么 * 荧光染料EB染色的原理和优点是什么？ 1、原理： 原理：
EB： EB：即3,8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲锭溴盐 二氨基- 乙基Bromide)。 EB是一种扁平分子 是一种扁平分子， (Ethidium Bromide)。 EB是一种扁平分子，它可以嵌 入核酸相邻的碱基之间， 在紫外线激发下 ， 发出红橙 入核酸相邻的碱基之间 ， 在紫外线激发下， 色荧光。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。 色荧光。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。 DNA的结合几乎没有碱基序列特异性
实 验 二
DNA琼脂糖凝胶电泳 DNA琼脂糖凝胶电泳
学时： 学时：3
实验目的： 一、实验目的：
1、掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的 原理和方法。 原理和方法。 2、学习核酸染色的方法。 学习核酸染色的方法。
二、实验原理: 实验原理
电泳技术： （一）电泳技术： 电泳定义： 1 、 电泳定义 ： 是指带电粒子在电场中向与其自身
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理： （二）琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作为支持介 电泳是用琼脂糖凝胶 泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法， 泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法，已 成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。 成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。 琼脂糖英文名 琼脂中提取出来的 琼脂糖英文名agarose，是从琼脂中提取出来的，由半 英文名 ，是从琼脂中提取出来的， 乳糖和3.6-脱水- 半乳糖相互结合的链状多糖。 相互结合的链状多糖 乳糖和3.6-脱水- 半乳糖相互结合的链状多糖。琼脂糖和 琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶， 琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶，电泳 都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶 中具有分子筛效应。 中具有分子筛效应。 分子筛效应
deae琼脂糖凝胶 电泳
deae琼脂糖凝胶电泳
DEAE琼脂糖凝胶电泳是一种常用的离子交换层析技术，用于分离和纯化带有不同电荷的生物大分子（如蛋白质和核酸）。
下面是该技术的基本原理和步骤：
1. DEAE琼脂糖：DEAE（二乙氨乙基）琼脂糖是一种具有阳离子交换性质的树脂。
它可以与带有负电荷的生物大分子发生静电相互作用。
2. 样品加载：首先将待分离的样品加载到经过预处理的DEAE琼脂糖凝胶柱中。
样品中带有负电荷的生物大分子会被DEAE树脂吸附。
3. 洗脱：通过以逐渐增加浓度或pH值的缓冲溶液，洗脱在DEAE琼脂糖上吸附的目标生物大分子。
这样，不同带电性质的生物大分子就可以被分离开来。
4. 收集分馏：根据样品中目标生物大分子的特点和需求，收集分离出的纯化目标物。
DEAE琼脂糖凝胶电泳是一种常见且有效的离子交换技术，广泛应用于生物化学、分子生物学和生物医学研究中。
它可以实
现对生物大分子的分离和纯化，有助于深入了解生物分子的结构和功能。
琼脂糖凝胶电泳检测实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测实验报告一、实验目的本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳检测方法，对DNA分子进行分离和检测，掌握琼脂糖凝胶电泳技术的操作步骤和原理，并了解其在生物学领域中的应用。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离DNA分子的方法。
其原理是利用电场作用力将DNA分子从样品中移动到凝胶中，并根据DNA分子大小不同，在凝胶中形成不同迁移距离的带状图案。
根据带状图案可以得到DNA片段大小及其相对含量。
三、实验步骤1.制备琼脂糖凝胶：将1g琼脂糖加入100ml TAE缓冲液中，加热搅拌至溶解，冷却至60℃左右时倒入模具中，待冷却成固体后取出。
2.制备DNA样品：将待检测DNA样品加入适量TAE缓冲液中，使其浓度为50ng/ul。
3.装载样品：取出制备好的琼脂糖凝胶，将其置于电泳槽中，加入适量TAE缓冲液，然后将DNA样品注入琼脂糖凝胶孔中。
4.进行电泳：将电泳槽盖好，接通电源，设定电压和时间，进行电泳。
5.染色和成像：取出琼脂糖凝胶，进行染色处理，然后用成像仪拍摄带状图案。
四、实验结果通过琼脂糖凝胶电泳检测方法，成功分离出待检测DNA样品中的DNA分子，并形成了带状图案。
根据带状图案可以看出不同大小的DNA片段在凝胶中形成了不同迁移距离的带状图案。
五、实验分析1.影响DNA迁移距离的因素：DNA片段大小、琼脂糖浓度、电场强度等因素都会影响DNA分子在凝胶中的迁移距离。
一般来说，较小的DNA片段在相同条件下迁移距离较大。
2.应用领域：琼脂糖凝胶电泳技术广泛应用于生物学领域中对DNA分子的检测和分析。
例如，可以用于分析DNA序列、检测基因突变等。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了琼脂糖凝胶电泳技术的操作步骤和原理，并了解了其在生物学领域中的应用。
同时，我们也发现琼脂糖凝胶电泳技术具有操作简单、成本低廉、结果可靠等优点，是一种常用的DNA分子检测方法。
实验二 琼脂糖凝胶电泳实验
实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】（1）学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2）掌握使用水平式电泳仪的方法；（3）学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。
【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。
核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的电泳缓冲液中（pH约8.5），核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。
核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。
因此，核酸分子的迁移率由下列几种因素决定：（1）DNA的分子大小。
线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。
（2）DNA分子的构象。
当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。
相同分子量的线状、开环和超螺旋质粒DNA在琼脂糖凝胶中移动的速度是不一样的，超螺旋DNA移动得最快，而开环状DNA移动最慢。
如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时，可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收，用同一种限制性内切酶分别水解，然后电泳，如在凝胶上出现相同的DNA图谱，则为同一种DNA。
（3）电源电压。
在低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。
但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大，因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。
要使大于2kb 的DNA 片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。
（4）离子强度影响。
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。
在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分离和分析DNA、RNA 等核酸分子。
本次实验的目的是：1、掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理和操作方法。
2、学会制备琼脂糖凝胶，并能够正确上样和进行电泳。
3、能够通过电泳结果判断核酸样品的质量、大小和浓度。
二、实验原理琼脂糖是一种从海藻中提取的多糖，加热溶解后冷却可形成凝胶。
琼脂糖凝胶具有多孔的网状结构，能够起到分子筛的作用。
核酸分子在电场中会向正极移动，由于其分子大小、形状和电荷密度的不同，在琼脂糖凝胶中的迁移速度也不同。
小分子的核酸迁移速度快，大分子的核酸迁移速度慢，从而实现分离。
DNA 和 RNA 分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度主要取决于以下因素：1、分子大小：分子越大，迁移速度越慢。
2、分子构象：超螺旋 DNA 比线性 DNA 迁移速度快，而线性DNA 又比开环 DNA 迁移速度快。
3、琼脂糖浓度：琼脂糖浓度越高，凝胶孔径越小，对分子的阻碍作用越大，迁移速度越慢。
4、电场强度：电场强度越大，迁移速度越快，但过高的电场强度可能导致发热和条带扭曲。
在电泳过程中，通常使用溴化乙锭（EB）或其他核酸染料对核酸分子进行染色，以便在紫外灯下观察和拍照。
三、实验材料和仪器1、材料DNA 样品：已知大小的 DNA 标准品、待测 DNA 样品。
琼脂糖：电泳级琼脂糖。
电泳缓冲液：常用的有 TAE（Tris乙酸EDTA）和 TBE（Tris硼酸EDTA）缓冲液。
核酸染料：溴化乙锭（EB）或其他安全的核酸染料。
上样缓冲液：通常含有甘油、溴酚蓝等成分，用于增加样品密度和指示电泳进程。
2、仪器电泳仪：提供稳定的电场。
水平电泳槽：用于容纳琼脂糖凝胶和进行电泳。
微波炉：用于加热溶解琼脂糖。
紫外透射仪：用于观察和拍照电泳结果。
移液器：用于准确量取和移取液体。
四、实验步骤1、制备琼脂糖凝胶称取适量的琼脂糖粉末，加入一定量的电泳缓冲液，在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解，溶液澄清透明。
琼脂糖凝胶电泳实训报告
一、实验目的通过本次实训，掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理和操作步骤，学习利用琼脂糖凝胶电泳技术分离、鉴定DNA片段，并了解实验结果的分析方法。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，利用琼脂糖凝胶作为电泳介质，根据DNA分子大小和所带电荷的不同，在电场作用下实现DNA分子的分离。
琼脂糖凝胶是一种多聚糖，具有良好的胶凝性和稳定性，其形成的凝胶具有网状结构，孔径大小可调节，能够对DNA分子进行筛选和分离。
在琼脂糖凝胶电泳过程中，DNA分子在电场作用下向正极移动，其迁移速率受到以下因素的影响：1. DNA分子的大小：分子越大，迁移速率越慢。
2. DNA分子的电荷：在高于其等电点的pH溶液中，DNA分子带负电荷，向正极移动。
3. 电场强度：电场强度越大，DNA分子的迁移速率越快。
4. 琼脂糖凝胶的孔径：孔径越大，分子迁移速率越快。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：DNA样品、琼脂糖、电泳缓冲液、DNA分子量标准品、TAE缓冲液、DNA染色剂等。
2. 实验仪器：电泳仪、电泳槽、紫外透射仪、微量移液器、凝胶成像系统等。
四、实验步骤1. 准备琼脂糖凝胶：按照实验要求配制TAE缓冲液，加入琼脂糖，加热溶解后，冷却至60℃左右，加入DNA样品，混匀后倒入电泳槽，待凝胶凝固。
2. 准备DNA分子量标准品：将DNA分子量标准品稀释至适当浓度，备用。
3. 加样：将DNA样品和DNA分子量标准品分别加入琼脂糖凝胶的样品孔中，注意避免样品溢出。
4. 电泳：接通电源，调整电压至适当值，进行电泳。
5. 染色：电泳结束后，取出凝胶，加入DNA染色剂，染色5-10分钟。
6. 观察结果：使用紫外透射仪观察凝胶，记录DNA片段的迁移距离，并与DNA分子量标准品进行比较，分析实验结果。
五、实验结果与分析1. 观察到DNA分子量标准品在琼脂糖凝胶中形成了清晰的区带，且区带之间的距离与DNA分子量大小呈正相关。
2. 实验样品在琼脂糖凝胶中也形成了清晰的区带，且区带大小与DNA分子量标准品相符。
PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析
PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析【实验目的】1.学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术；2.掌握群体遗传学基因频率与基因型频率的计算方法。
【实验原理】1. 凝胶电泳是分离、鉴定、纯化及制备DNA片段最常用的方法，可分为两类，一类是琼脂糖凝胶电泳，适用于l kb和大于l kb以上DNA；另一类是聚丙烯酰胺凝胶电泳，适用于小于l kb的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是一种简便易行的分离、纯化和鉴定DNA片段的方法。
分为水平板和垂直板两种，一般采用水平电泳。
2. 琼脂糖凝胶在DNA分子泳动时兼有“分子筛”和“电荷”的双重作用。
3. DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。
4. 由于琼脂糖凝胶具有网络结构，因此电泳时，带电颗粒的分离速度不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小。
5. 由于实验中相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此他们能以同样的速度向正极移动。
6. 相对分子质量小者泳动快，大的泳动慢。
7. 溴化乙锭是分子生物学实验中常用的DNA荧光染料，含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团，它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。
DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。
溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍。
所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5μg/mL）时，可以检测到少至10ng的DNA条带8. TBE（成分：Tris，EDTA，硼酸，蒸馏水）的作用：a.稳定体系酸碱度（正负极氧化还原反应，使正极变酸、负极变碱性）b. 使溶液具有导电性，以利于DNA分子的迁移c. 其中的EDTA螯合镁离子，防止电泳时激活DNA酶9.引物二聚体: 引物二聚体是引物的3’端间相互错配扩增形成的。
引物二聚体的出现是必然的，只是或多或少的问题，电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现，只是含量低我们的肉眼看不到而已。
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琼脂糖凝胶电泳的应用
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
1.分离纯化大片段DNA 琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广，尤其适于分离大片段DNA。
普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。
分离后如需回收：将需要的DNA胶部分切下，尽量不要切到多余的胶。
切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚或氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。
2.提取大分子DNA构建大片段基因组文库的关键就是获得高分子量的基因组DNA。
而利用成熟的商品化试剂盒提取基因组DNA只能得到大小约在20kb左右的DNA;酶抽提法需经过多次抽提法才能得到较纯的DNA，但极易造成基因组断裂，也难以得到大于300kb的基因组DNA。
两种方法均不能达到目的，但经过研究人员不懈的研究，利用琼脂糖凝胶制备成凝胶块提取基因组DNA能够获得足够大的DNA片段，可以完全符合构建粘粒基因组文库的要求。
在此过程中研究人员在用低熔点琼脂糖还是普通熔点琼脂糖制备凝胶块的问题中选择了后者，因为低熔点琼脂糖价格昂贵且胶块在制备纯化的过程中容易断裂，而普通熔点琼脂糖与低熔点琼脂糖在基因组DNA制备方面没有区别。
3.PCR产物检测在基因组DNA的提取中，DNA经孵育及抽提、沉淀后以70%乙醇洗涤2次，再适量的双蒸水溶解DNA。
然后在1.0%的琼脂糖凝胶上进行电泳，以1kb DNA ladder 为参照，估计DNA溶液浓度。
具体检验方法是:2.0%琼脂糖制成凝胶，取6 微升AFLP-PCR产物与1微升上样缓冲液混匀后上样，用1×TBE电泳缓冲液，120V电泳50min，使用EB溶液染色后在凝胶成像系统(ChampGel-3200)上观察拍照。
4.免疫扩散法中的应用免疫扩散法是指抗原与抗体在同一凝胶中扩散的方法，是观察可溶性抗原与相应抗体反应和抗原抗体鉴定的最基本方法之一。
利用琼脂糖凝胶作为扩
散介质，使抗原与抗体在琼脂糖凝胶中自由扩散而相遇，从而形成抗原抗体复合物，由于此复合物分子量增大并产生聚集，不再继续扩散而形成肉眼可见的带状或线状沉淀带。
抗原抗体复合物的沉淀带是一种特异性的半渗透性屏障，它可以阻止免疫学性质与其相似的抗原抗体分子通过，而允许那些性质不相似的分子继续扩散，这样由不同抗原或不同抗体所形成的沉淀带各有各的位置，从而可以分离和鉴定混合系统。
利用琼脂糖凝胶作为扩散介质是因为一定浓度的琼脂糖凝胶，其内部为多孔网状。
而且孔径很大，可以允许大分子物质(分子量自十几万到几百万以上)自由通过。
因为大多数抗原和抗体的分子量都在20万以上，所以它们在琼脂糖凝胶中几乎可以自由扩散。
而且琼脂糖凝胶又具有良好的化学稳定性、含水量大、透明度好、来源方便、处理容易等优点，因此是免疫沉淀检测技术中最理想的扩散介质。
双向琼脂扩散实验中也用琼脂或琼脂糖作为扩散介质，原因同上。
5.琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法在生物技术实验中，PCR反应获得的目的片段，酶切后所得特定的DNA序列，分子杂交中所制备的探针等，经过琼脂糖凝胶电泳后，目的片段与其它DNA分开，这就需要有一套方法将目的DNA 从凝胶中分离出来，通过处理后得到纯化的目的DNA，以用于以后分子杂交，重组子构建，序列分析等。
①柱回收试剂盒：目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱。
全程不过10多分钟，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。
这个方法几乎不需要什么技巧就能得到稳定的结果，也是目前最多商品化试剂盒选择的方法。
但是这个方法不适合用于大片断的回收。
②玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比前面的方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。
前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，Buffer溶解，加入纯化填料填料吸附混合，快速离心沉淀去上清，洗涤沉淀后，干燥沉淀，最后用洗脱液纯化介质中吸附的片断释放出来，离心，取上清，就是回收的产物。
这个方法适合各种不同大小的片断，特别是大片断的回收，但是操
作就较前者复杂一些。
③低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。
④透析带电洗脱法。
切下的条带放在充满TAE的透析带中再电泳一段时间，让DNA 走出凝胶，走向溶液中，再反向电泳一会儿，将附在透析带上的DNA 赶回溶液中，取溶液部分，再用TAE洗洗袋子，合并溶液后传统方法酚抽沉淀，那块胶通常还要再染色看看残留。
由于绑透析带非常难搞，只有在万不得已的非常大的片断时才会考虑的。
也是丙烯酰胺电泳凝胶产物回收的方法之一。
⑤DEAE纤维素膜纸片法和其他改良法。
早期实验室最常用方法之一。
将DEAE纤维素膜裁成小条活化处理。
电泳后在目的条带前切一刀，将比条带略宽的DEAE纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳一会儿，条带上的DNA 被膜片截留，取出膜片冲洗后转移到离心管中加缓冲液65度保温洗脱，直到膜上没有DNA 了，将溶液用酚氯仿抽提沉淀。
这个方法不适合做较大的DNA ，因为洗脱比较困难.
6.Northern blot 和Southern blot的第一步
Northern blot （诺瑟杂交）是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过Northern blot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。
而Southern blot 是一种常用的DNA 定量的方法。
这两种方法首先都要将DNA用凝胶电泳分离找出目的片段，再将目的片段转到固体膜上进行检测。
Southern blot原理是将待测的DNA 样品固定在固相载体（硝酸纤维膜或尼龙膜）上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA 的位置上显示出杂交信号，通过检测信号的有无、强弱可以对样品定性、定量，从而计算出转入的拷贝数。
Northern blot 首先通过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段。