第二十五章免疫增殖病及检验
免疫增殖病的检验培训课件
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（四）其它检测方法
本周蛋白检测：多发性骨髓 病阳性率极高
本周蛋白在PH5.0的条件 下，加热至50~60ºC时出现沉 淀，继续加热至90ºC后又重 新溶解。根据这种理化性质 ，又将其称为凝溶蛋白。
免疫增殖病的检验
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小结：
1、掌握免疫增殖病的定义 2、熟悉免疫增殖病的免疫损 伤机制
3、熟悉常见的免疫增殖病的 临床表现及免疫学特征
第一节 免疫增殖病的分类
一、定义
免疫增殖病（
immunoproliferative disease）是
指免疫器官、免疫组织或免疫细
胞（包括淋巴细胞和单核—巨噬
细胞）异常增生（包括良性或恶
性）所致的一组疾病。
这类疾病的表现有免疫功能
异常及免疫球蛋白质和量的变化
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二、免疫增殖病的分类
增殖细胞
增高不显著，一般在
20mg/ml以下。
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免疫增殖病的检验
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图26-3
免疫增殖病的检验
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1、如果待测标本与某型球 蛋白重链及轻链抗血清产生 相同迁移度的特殊沉淀弧， 提示存在单克隆丙种球蛋白 (M蛋白)，此现象多见于IgG 、IgA、 IgM型多发性骨髓 瘤或原发性巨蛋白血症。
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(三)免疫固定电泳
将待测血清或其它标本在琼脂平
板上作区带电泳，分离后于其上
覆盖含抗k或r轻链或各类重链的
抗血清滤纸，当抗体与某区带中
的单克隆免疫球蛋白结合后，便
形成复合物而沉淀下来，再通过
漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着
色区带，即可判断单克隆丙种球
蛋白的轻链或重链型别。
免疫增殖病的检验
20121218-免疫增殖性疾病及其检验
单克隆免疫球蛋白增殖多呈恶性发展趋势，故免 疫球蛋白异常增殖性疾病多专指单克隆免疫球蛋白异 常增殖的疾病。
单克隆免疫球蛋白增殖病的分类
第二节 免疫球蛋白异常增生性 疾病的免疫损伤机制
浆细胞异常增殖 正常体液免疫抑制 异常免疫球蛋白增殖所造成的病理损伤 溶骨性病变
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
图1－4号为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱
A：正常人
B：IgG型浆 细胞骨髓瘤
C：原发性巨球 蛋白血症
D：多克隆丙种 球蛋白血症
E：低丙种球蛋 白血症
2.免疫球蛋白定量测定
单向琼脂扩散法 免疫浊度法
1) 血清免疫球蛋白定量 IgG、IgA、IgM
Urine protein electrophoresis
实验室检查：
血象：贫血为首见征象，晚期有全血细胞 减少
血钙、血磷：增加 肾功能检查：血尿素氮及肌酐增加 免疫球蛋白：M蛋白增加，正常Ig减少 尿：出现本周蛋白 骨髓象：浆细胞异常增生
二、原发性巨球蛋白血症
是分泌IgM的浆细胞恶性增殖性疾病； 好发于男性。
B细胞增殖
IgM
骨髓外浸润为主
粘膜出血、 血 视力减退、 粘 神经症状、 综 （头痛、眩 合 晕、嗜睡等） 征
淋巴结、 肝、脾 肿大
三、重链病
重链病（Heavy chain diseases）是 突变的浆细胞产生的重链异常增多或重 链异常不能与轻链装配是导致血清重链 过剩的原因，致使血清中和尿中出现大 量游离的无免疫功能的免疫球蛋白重链 所导致的疾病。
临床检验技士-临床免疫学和免疫检验 讲义 25
第二十五章免疫增殖性疾病及其免疫检测免疫增殖性疾病是指由于淋巴细胞异常增殖所引起的疾病。
浆细胞功能异常导致免疫球蛋白异常增殖性疾病分为良性增殖病和恶性增殖病两大类疾病。
第一节免疫球蛋白异常增殖性疾病的概念及分类免疫球蛋白异常增殖性疾病是指由于浆细胞的异常增殖而导致的免疫球蛋白的异常增加，引起机体病理损伤的一组疾病。
通常多克隆增殖的免疫球蛋白多为良性反应性增殖或继发某一疾病，如肝病、结缔组织病及急性感染等。
单克隆免疫球蛋白增殖多呈恶性发展趋势，故免疫球蛋白异常增殖性疾病多专指单克隆免疫球蛋白异常增殖的疾病。
第二节免疫球蛋白异常增殖性疾病的免疫损伤机制异常的免疫细胞增殖，不具有免疫活性，其本身将造成免疫系统的直接损害或通过分泌有关物质进一步损害正常的免疫细胞和其他组织，最终导致疾病。
一、浆细胞异常增殖是指单克隆浆细胞异常增殖并伴有单克隆免疫球蛋白或其多肽链亚单位合成异常。
如骨髓瘤。
二、正常体液免疫抑制正常的体液免疫中，IL-4启动B细胞进入DNA合成期；IL-5促进B细胞继续增殖；IL-6促使B细胞分化成浆细胞，及反馈抑制IL-4控制B细胞的增殖分化过程。
另外，大量的浆细胞瘤分泌无活性的Ig，其Fc段与正常B细胞等有Fc受体的细胞结合，将Fc受体封闭，影响对其他生物信息的接收，并可阻断B细胞的增殖、发育和影响抗原提呈。
三、异常免疫球蛋白增殖所造成的病理损伤单克隆的浆细胞异常增殖产生大量的单克隆异常免疫球蛋白或免疫球蛋白片段，这些异常免疫球蛋白或片段不具有正常抗体功能，但其在组织的沉淀可造成组织变性和淋巴细胞浸润，进而导致相应器官的功能障碍。
单克隆免疫球蛋白浓度过高，甚至可以导致血液黏稠度增加，产生一系列直接或间接的病理损害。
四、溶骨性病变浆细胞瘤大多伴有溶骨性破坏。
患者体内高水平IL-6是使破骨细胞数量增多的重要因子，溶骨性破坏与浆细胞的恶性增殖有非常密切的关系，是骨髓瘤患者疾病恶化的重要原因之一。
第章免疫增殖性疾病及其免疫检测
免疫增殖性疾病及其免疫检测什么是免疫增殖性疾病？免疫增殖性疾病（Immunoproliferative disease）是指一类由于免疫系统异常而导致的疾病，包括多发性骨髓瘤、恶性组织细胞病、淋巴瘤、白血病、自身免疫性疾病等。
这类疾病的发展过程中，免疫细胞异常增生，导致诸如肝脾增大、贫血、感染、出血等一系列临床表现。
疾病的罹患与免疫系统的失调密切相关，是因为机体无法消除或者抑制免疫系统异常增生细胞的增殖。
免疫增殖性疾病的免疫检测对于免疫增殖性疾病的检测方法，很多免疫学的检测手段都可以用于辅助临床诊断，如常规血常规、血电解质、血清肝功能及肾功能、免疫球蛋白测定、T细胞和B细胞检测、肿瘤标志物等。
临床医生还需要结合详细的临床病史、体格检查及影像学检查等，综合分析，进行综合判断。
免疫球蛋白测定在免疫增殖性疾病中，病人的免疫系统会异常增生细胞，同时分泌异常的免疫球蛋白。
因此，测定病人的免疫球蛋白，对于诊断和评估免疫增殖性疾病的病情至关重要。
1.总免疫球蛋白测定总免疫球蛋白测定是测定病人血液中IgG、IgM以及IgA三种免疫球蛋白的总量。
在多发性骨髓瘤病人的血清中，三种免疫球蛋白的总量均会升高，因为瘤细胞分泌大量异常的IgG、IgM和IgA，导致病人总免疫球蛋白的水平升高。
2.免疫电泳免疫电泳是一种以电泳原理为基础的技术，将血液中的免疫球蛋白分离并鉴定它们的种类和数量。
在多发性骨髓瘤的诊断中，血浆蛋白免疫电泳检查是非常重要的检查手段。
由于瘤细胞活跃分泌异常Ig，因此在电泳之后，Ig会暴露在凝胶表面，可以很容易地发现瘤细胞分泌的异常Ig,从而诊断出多发性骨髓瘤。
T细胞和B细胞检测T细胞和B细胞检测是检测免疫增殖性疾病的重要方法之一。
在多发性骨髓瘤等疾病的发展过程中，免疫细胞异常增生，而其中又包含了B细胞和T细胞。
B细胞是制造抗体的细胞，T细胞则是调节体内免疫反应的重要细胞类型。
1.流式细胞术流式细胞术是一种检测细胞表面标志物、检测细胞包括B细胞和T细胞个数的手段。
免疫增殖性疾病及其免疫检测-PPT课件
㈠ 临床特点
1、发病的年龄轻；2、以发热、贫血，严重 肾功能损害（λ型）为特点；3、多数有溶骨 性损害。4、有淀粉样变性。
㈡ 免疫学特征
1、血清中异常轻链水平↑，轻链蛋白 κ/λ型比值明显异常，正常Ig水平↓或明 显↓；
第三节 单克隆免疫球蛋白增殖病
该病突出的特点是患者血清中存在异常 增多的单克隆蛋白（M蛋白），其在类别、亚 类、H链、L链抗原结构等方面完全相同，但 多无免疫活性，又称副蛋白。
本周蛋白（Bence-Jones protein）——为过量合成的κ或λ型轻链， 游离存在于血清中，可从患者尿中排出。
一、多发性骨髓瘤
熟悉：⑴ 单克隆丙种球蛋白的临床免疫 学特征 ⑵ 常见的免疫球蛋白增殖病
了解：免疫增殖性疾病的免疫损伤机制
A 正常人
B
白蛋白 α1 α2 β γ
IgG型浆细胞骨髓瘤
C 原发性巨球蛋白血症
D
多克隆丙种球蛋白血症
E 低丙种球蛋白血症
图1 血清蛋白区带电泳和扫描图谱示意图
－
＋
孔中为血清标本，槽中
A
3、骨髓中有淋巴细胞样浆细胞浸润；
4、血清相对粘度↑，＞4；
5、本周蛋白尿（10～30%患者可有，常为 κ）。
三、重链病
是由于浆细胞发生突变和异常增 生，致使血清和尿中出现大量游离的 无免疫功能的免疫球蛋白重链所导致 的疾病。
根据重链的不同可进一步进行免 疫分型，以γ、α、μ型为多见。
四、轻链病
3、正常的Ig水平明显↓。
㈣ 诊断标准
免疫学特征3项中具备2项即可诊断；但 IgM或IgD除具备免疫学特征1、2项外，还须 有多处溶骨性损害。
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第二十五章免疫增殖性疾病及其免疫检验Immunoproliferative Disease and Immunoassay第一部分目的要求和教学内容一、目的要求：掌握免疫增殖病的概念、单克隆丙种球蛋白病的临床免疫学特征及检测方法；了解其它类型的免疫增殖病。
二、教学内容1、免疫增殖病的概念及分类。
2、单克隆丙种球蛋白的临床免疫学特征：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链症、良性单克隆丙种球蛋白病的免疫学特征。
3、单克隆丙种球蛋白病的检测方法；血清蛋白区带电泳、免疫球蛋白定量测定、免疫电泳、尿中游离轻链的检测方法及临床价值。
第二部分测试题一、选择题：(一)单项选择题(A型题)1．有关M蛋白，下列哪项叙述是错误的：（）A．多由骨髓恶性增殖的浆细胞分泌B．是一种异常增多的单克隆丙种球蛋白C．理化性质均一D．具有一定的免疫活性E．其性质可为IgG、IgA、IgM、IgE或IgD2．下列哪一项不是多发性骨髓瘤的典型特征：（）A. 骨损害B. 反复感染C. 贫血D. 骨髓中不成熟粒细胞比例增高E. M蛋白3．原发性巨球蛋白血症的典型特征是：（）A. 贫血B. 骨损害C. 尿毒症D. 高血粘度使血流不畅E. 反复感染4．鉴定M蛋白类型，首选的方法是：（）A.血清蛋白区带电泳B. 免疫选择电泳C. 免疫电泳D. 免疫球蛋白测定E. 免疫固定电泳5．临床上诊断为骨髓瘤，但免疫电泳无异常发现，这可能是：（）A．淀粉样变性B．非分泌性骨髓瘤C. 分泌性骨髓瘤D. 原发性巨球蛋白血症E．重链病6．在单克隆丙种球蛋白病的检测中，一般的检测顺序为：（）A.免疫电泳，血清蛋白区带电泳，Ig定量测定B.血清蛋白区带电泳，Ig定量测定，免疫电泳C.本周氏蛋白测定，血清蛋白区带电泳，Ig定量测定D.Ig定量测定，免疫电泳，本周氏蛋白测定E.血清蛋白区带电泳，Ig定量测定，本周氏蛋白测定7．下列关于重链病的叙述哪项是正确的：（）A. 是一种良性病变B. 常伴有骨损害C. 尿中多可检出本周氏蛋白D. 血清和尿中出现大量游离的重链E. 常见的有α、δ和μ型8．某患者血清蛋白区带电泳发现有异常球蛋白区带，进一步免疫电泳发现，患者血清仅与λ抗血清产生一条特殊的沉淀弧，与五种抗Ig抗血清不产生沉淀，可能是：（）A. 伴有肾功能不全的轻链病B. 伴有肾功能不全的重链病C. 轻链病，肾功能正常D. 重链病，肾功能正常E. 尚未发现的新型轻链病9．某患者血清蛋白区带电泳发现有异常球蛋白区带，进一步免疫电泳发现，患者血清与抗IgＡ抗血清及抗κ轻链抗血清产生明显的特殊沉淀弧，可诊断为：（）A. IgG κ型骨髓瘤B. IgG λ型骨髓瘤C. IgＡκ型骨髓瘤D. IgＡλ型骨髓瘤E. 尚不能做出诊断10．尿本周蛋白的本质是（）A．IgGB．IgAC．H链D．K\入链11．冷球蛋白检测的主要临床意义为（）A．用于肾功能的判断B．用于冷球蛋白血症的判断C．用于肝功能的判断D．用于Ig异常的判断12．免疫增殖病诊断中用于检测和鉴定异常增殖的最常用方法是（）A．免疫球蛋白定量B．纤维薄膜电泳C．免疫电流D．尿本周氏蛋白测定13．多发性骨髓瘤：A．常可以自愈B．也称浆细胞瘤C．尿中一般无本周蛋白D．外周血中可无M蛋白E．一般无贫血14．巨球蛋白血症是以分泌何种Ig的浆细胞恶性增殖为病理基础的疾病：A． IgAB． IgGC． IgED． IgME． IgD15．巨球蛋白血症：A．常有骨质损害B．常骨髓侵润C．常无肝、肺、淋巴结肿大D．好发于婴幼儿E．常有血粘滞过高综合征（二）、配伍题问题1-4A．IL-2B．IL-3C．IL-4D．IL-5E．IL-61．可启动休止期的B细胞进入DNA合成期的细胞因子是：2．促进B细胞继续增殖的细胞因子是：3．促进B细胞分化成浆细胞的细胞因子是：4．正常条件下，可反馈抑制IL-4 控制B细胞的增殖分化的细胞因子是：问题5-8A．B细胞数降低B．血清中IgM异常增多C．浆细胞异常增生D．血和尿中出现大量异常的重链E．血中IgG 减少5．导致体液免疫功能缺陷的是：6．多发性骨髓瘤是由于：7．巨球蛋白血症是：8．重链病可在：二、填空题：1．本周蛋白在PH5.0的条件下，加热至（ ）时出现沉淀，继续加热（ ）后重新溶解。
2．冷球蛋白是指温度低于（ ）时发生自发聚合，达到（ ）时沉淀，加温后又可溶解的（ ）。
3．多发性骨髓瘤的免疫学特征为血中和尿中出现 （ ），骨髓中（ ）_比例显著升高。
三、名词解释：1. M 蛋白（monoclonal protein ）：2. 冷球蛋白：3. 本-周蛋白：4. 免疫增殖病（immunoproliferative disease ）：5. 重链病(heavy chain disease) ：6. 轻链病(light chain disease) ：四、简答题：2．何谓重链病？3．何谓轻链病？4．何谓免疫球蛋白异常增生性疾病？5．何谓浆细胞异常增殖？五、 论述题１．恶性与良性单克隆丙种球蛋白病如何鉴别？第三部分 参考答案与题解一、选择题(一)单项选择题(A 型题)1．D 2．A 3．E 4．A5．6. E 7. D 8．C 9．C 10．D ．D ．B 13．A 14．D15．B（二）、配伍题1．图中小孔中加的为待测血清样本，槽a, b, c, d, e, f 中加的分别是：a 抗正常人血清；b 抗IgG 血清；c抗IgA 血清；d 抗IgM 血清；e 抗κ血清；f 抗λ血清。
箭头所指为骨髓瘤蛋白。
(1) 从图中结果判断样本中骨髓瘤蛋白的类型； (2) 图为何种检测方法，并简述其原理。
1．A 2．C 3．B 4．D 5．C 6．D 7．E 8．E二、填空题：1．本周蛋白在PH5.0的条件下，加热至( 40-60℃ )时出现沉淀，继续加热( 100℃ )后重新溶解。
2．冷球蛋白是指温度低于( 10℃ )时发生自发聚合，达到(0~4℃)时沉淀，加温后又可溶解的( Ig )。
3．多发性骨髓瘤的免疫学特征为血中和尿中出现( M 蛋白 )，骨髓中( Ig )比例显著升高。
三、名词解释：1．M 蛋白:单克隆免疫球蛋白，是B 淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白；2．冷球蛋白: 一组低温下发生沉淀，加温后又复溶的Ig 。
3. 本-周蛋白（bence-Jones ）:尿中游离的免疫球蛋白轻连。
4. 免疫增殖病（immunoproliferative disease ）：LC 异常增殖引起的疾病.5. 重链病(heavy chain disease):突变的浆细胞产生异常增多的重链或质量不能与L 链装配的 Ig 重链，血清和尿中H 链过剩导致的疾病。
6. 轻链病(light chain disease)：异常的LC 产生大量的Ig 的L 链在肾脏和内脏组织，导致肾损伤和淀粉样病变的疾病。
四、简答题：2．重链病（heavy chain diseases ）。
是由于浆细胞发生突变和异常增生，致使血清和尿中出现大量游离的无免疫功能的免疫球蛋白重链所导致的疾病。
3．轻链病（light chain diseases ）是突变的单克隆浆细胞产生的大量轻链，血浆中轻链含量异常增加，增加的轻链从肾脏排泄，血和尿中可查及大量的轻链蛋白。
4．免疫球蛋白异常增生性疾病是指由于浆细胞的异常增殖而导致的免疫球蛋白异常增生造 成机体病理损伤的一组疾病。
5．浆细胞异常增殖通常是指单克隆浆细胞异常增生并伴有单克隆免疫球蛋白或其多肽链亚 单位合成异常。
答： 1)IgA 型1．图中小孔中加的为待测血清样本，槽a, b, c, d, e, f 中加的分别是：a 抗正常人血清；b 抗IgG 血清；c抗IgA 血清；d 抗IgM 血清；e 抗κ血清；f 抗λ血清。
箭头所指为骨髓瘤蛋白。
(3) 从图中结果判断样本中骨髓瘤蛋白的类型； (4) 图为何种检测方法，并简述其原理。
免疫电泳。
是将区带电泳和免疫双向扩散相结合的一项技术。
原理：先用区带电泳技术将蛋白质抗原按其所带电荷、分子量构型不同在凝胶中电泳，分成肉眼不可见的若干区带，电泳停止后，沿电泳方向挖一与之平行的抗体槽，加入相应的抗血清，置室温或 7℃作双向扩散，经18-24小时后，已分离成区带的各种抗原成分与抗体槽中相应抗体在两者比例适合处形成弧形沉淀线。
根据沉淀线的数量、位置和形态与已知标准抗原抗体生成的弧形沉淀线进行比较，可分析待测样品中所含成分的种类和性质。
五、论述题1.恶性与良性单克隆丙种球蛋白病的鉴别诊断答：恶性单克隆丙种球蛋白病良性单克隆丙种球蛋白病症状贫血骨损害骨髓象M蛋白正常Ig 游离轻链骨髓瘤或淋巴瘤的症状几乎都出现溶骨性损害很普遍浆细胞＞10%，常高于20g/dl，降低常出现在血清和尿中无症状或原有基础疾病的症状一般无，但可因其他疾病而伴发除转移性骨疾病外不常见形态正常或异常浆细胞＜10%，形态一般正常随病情而增高低于20g/dl，较稳定增高或正常一般呈阴性。