铜绿假单胞菌.

4.PA临床意义：
广泛存在环境中的条件致病菌，是院内感染 主要病原菌
可引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、 烧伤感染、囊性纤维变性、心内膜炎等
有多种毒力因子：包括菌毛、荚膜多糖、内 毒素、外毒素、绿脓菌素、蛋白酶、磷脂酶等 粘附素：菌毛的神经氨酸酶分解上皮细胞表面 的神经氨酸促进细菌侵入 荚膜：多糖类物质抗吞噬细胞的吞噬作用；使 细菌锚泊在细胞表面，与呼吸道感染有关
oprD2基因缺失或者表达减少，引起OprD2蛋白缺失或者
表达减少，导致亚胺培南渗透障碍。
② 细菌生物薄膜的形成：细菌分泌多糖基质、纤 维蛋白、脂蛋白等将菌体包绕成膜样物。
物理阻挡作用：逃避宿主免疫清除和抗菌药物的杀 伤。
耐药基因的开启：生物膜在较低血药浓度下开启耐 药基因表达形成细菌耐药。
3.细菌药物主动转运系统
药物作用靶位的改变
细
菌 常
抗菌药物的渗透障碍
见
耐
药物的主动转运系统
药
机 制
药物灭活酶的产生
转座子和整合子介导的耐药基因盒 转移和水平传播
1.药物作用靶位的改变
① 青霉素结合蛋白（penicilin binding protein,PBP）位点：
目前研究最多的药物结合靶位，它是β内酰胺类抗生 素结合位点。
第三类：金属酶，由假单胞菌属、脆弱拟杆菌属、 产黄菌属、沙雷菌属及嗜麦芽黄单胞杆菌属产生的可水解 碳青霉烯类抗生素的金属酶。
第四类：其他不能被克拉维酸完全抑制的青霉素酶
② Ambler分类：
根据β-内酰胺酶的特殊性、动力学参数及其 基因的核苷酸序列，将β酶分为A、B、C、D四 类：
A：青霉素酶，活性部位为丝氨酸残基，由多种质粒 编码。如TEM1、SHV1、ROB1或PC1酶。
TEM 系 列 ， SHV 系 列 ， BES-1 ， PER-1、2，CTM-M系列等
部分碳青酶烯酶
KPC-1、2、3等
AmpC酶（ 头 孢菌素酶 ，不 AAC-1 ， ACT-1 ， CFE-1 ， CMY 系
被克拉维酸抑制）
列，DHA系列，FOX系列，LAT
系列，MIR，MOX
部分广谱β-内酰胺酶、
PA鉴定程序
非发酵菌鉴定系统
7.铜绿假单胞菌耐药性：
多重耐药，能天然抵抗多种抗生素。比如氨苄 青霉素、磺胺甲噁唑等。常用三代头孢和氨基糖 苷类联合治疗。
各种抗生素治疗过程中（铜绿假单胞菌所致感 染）都可能发生耐药。初代敏感菌株在治疗3－4
天后可能发生耐药，有必要重复分离菌株。
第三部分 细菌常见耐药机制
菌体DNA复制 叉不能正常复制
2.抗菌药物的渗透障碍
① 菌体外膜抗生素通道蛋白(Opr)的缺失或者表达 量减少：导致抗生素不能进入菌体或者进入菌 体的药物剂量少，从而导致细菌的耐药。
PA外膜蛋白中的OprC、OprD、OprE是小分子亲水性 抗生素进入细菌的通道。OprD又分为OprD1、OprD2、 OprD3三种，其中OprD2孔道是小分子碳青酶烯类（美罗 培南除外）选择性快速进入菌体的特异性通道。如果
主动外排泵分类：
主要易化超家族 （Majior Facilitator Superfamily,MFS）
主 质子驱动力系统 动 外 排
泵 ATP偶联盒膜转 运系统
小多药耐药蛋白 （Small Multidug Resistance，
家族
SMR）
耐药结节细胞分 （Resistance Nodulation-
大多β内酰胺类、碳青酶烯
青霉素类
抑制剂
克拉 维 酸
－ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
EDTA －
代表性酶 G－菌AmpC酶、MIR-1
＋
＋
G＋青霉素酶
＋
－
TEM-1、TEM-2、SHV-1
＋
－
TEM-3至TEM-26、SHV-2至
SHV-6、产酸克雷伯菌K1
±
－
TEM-30至TEM-36、TRC-1
＋
－
PSE-1、PSE-3、PSE-4
3>假单胞菌属鉴定程序：
第二部分 铜绿假单胞菌
1.PA培养特性：
专性需氧、营养要求不高 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，培 养物呈
蓝绿色，故俗称“绿脓杆菌”。 培养物有生姜气味
2.PA菌落特征:
典型菌落：扁平湿润，边缘不规则，菌落和培养 基灰绿色，表面有金属光泽
内毒素、外毒素
5.PA生化反应
氧化酶＋ O/F：O（氧化分解葡萄糖） 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 乙酰胺酶＋ 明胶液化＋
6.PA临床检验： 1>采集标本：各种临床标本
医疗器械 环境用品
2>检验方法：直接镜检
分离培养(血平、MAC平板) 鉴定 分型：血清学分型
质粒指纹图谱分型 脉冲场凝胶电泳分型等
3>分离培养： 普平 18-24h圆形 大小不一 边缘不整 扁平 湿润 常呈融合态 琼脂被染成绿或黄 绿色 血平 扁平 湿润 有金属光泽 琼脂被染成 蓝绿或灰绿 有溶血环 MAC平 微小无光泽半透明 48h后菌落呈 棕色
4>鉴定： 初步鉴定
最终鉴定
菌体形态 菌落特征 产色素 气味 氧化酶 非发酵菌生化鉴定系统 API-NE试条
化家族
cell Division,RND）：PA
MexAB-OprM
MexCD-OprJ
MexEF-OprN
MexXY-OprM
MexJK-OprM
MexGHI-OpmD
MexVW-OprM
4.药物灭活酶的产生
钝化酶 ：如氨基糖苷类钝化酶。
药
物
修饰酶 ：如氨基糖苷类修饰酶，主要有N-乙酰转移酶
（AAC）、O-核苷转移酶（ANT）等，它主要通过共
绿脓菌素：绿色色素，由铜绿假单胞菌的 RpoS基因编码产生的代谢产物，具有氧化还原 活性的化合物，能催化超氧化物和过氧化氢产生 有毒氧基团，引起组织损伤。在致病中起重要作 用
弹性蛋白酶：降解弹性蛋白，引起肺实质损伤 和出血；降解补体和白细胞蛋白酶抑制物；可与 相应抗体形成复合物，沉积于感染组织中
磷脂酶C ：能分解脂质、卵磷脂，损伤组织 细胞
灭
价修饰的方式使氨基糖苷类药物与核糖体的结合减少，
活
促进药物摄取EDP-Ⅱ被阻断，从而导致耐药。aac(6′)-
酶
Ⅱ基因主要决定庆大霉素耐药；ant(2′′)-Ⅰ可使庆大霉 素和妥布霉素修饰失活。
水解酶 ：主要指β内酰胺酶，它包括广谱酶、超广谱酶、金 属酶（MBL）和AmpC酶等 。
① Bush β-内酰胺酶分类：
4>非发酵菌与肠道杆菌、 弧菌科区别
鉴定试验
非发酵菌 肠杆菌科
弧菌科
氧化酶
＋
－
＋
葡萄糖氧化/发酵(O/F)
O/－
F
鞭毛
单、丛、周 周鞭毛
F 单、丛
2.假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为 5个rRNA群
rRNAⅠ群/假单胞菌属 rRNAⅡ群/伯克菌属 rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属 rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属 rRNAⅤ群/窄食单胞菌属 其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等
OXA系列
部分超广谱β-内酰胺酶
OXA系列
部分碳青酶烯酶
OXA-23 至 OXA27 ， OXA40 ， OXA48
部分碳青酶烯酶（不被克拉 IMP，VIM系列，GIM-1，SPM-1，
维酸抑制）
NDM-1
NDM-1：
Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶(New Delhi Metallo—βlactamase 1),其基因bla NDM-1片段475bp。
根据生化特征或氨基酸序列的同源性，将其分为四 类：
第一类为头孢菌素水解酶（Amp-C酶），产生菌主 要是革兰阴性菌，如假单胞菌、肠杆菌、不动杆菌和克 雷伯杆菌等，由染色体介导。
第二类为青霉素酶和超广谱酶，包括革兰阳性菌的 青霉素酶，质粒介导的TEM和SHV酶及其衍生物组成的 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、羧苄青霉素酶、苯唑西 林酶（OXA酶）和由沙雷菌属与肠杆菌属产生的非金属 碳青霉烯酶。 。
假单胞菌属各种菌产生的色素
菌名 铜绿假单胞菌
色素
颜色
绿 脓 素 、 红 脓 素 、 荧 光 素 蓝、红、黑、黄色 （青脓素）、黑脓素
荧光假单胞菌
荧光素
黄绿色
恶臭假单胞菌
荧光素
斯氏假单胞菌
未定名黄色素
洋葱伯克霍尔德菌 未定名黄色素 、紫色素
黄绿色 黄色 黄色、紫色
腐败希瓦讷拉菌 未定名黄色素
淡红褐色
铜绿假单胞菌及其 耐药机制
彭咏麟
一.非发酵菌、假单胞菌 二. 铜绿假单胞菌
三.细菌常见耐药机制
第一部分 非发酵菌、假单胞菌
1.非发酵菌(Nonfermentative Bacilli)：一群不 发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖、需氧或 兼性厌氧、革兰阴性无芽胞杆菌。
葡萄糖氧化发酵试验（O/F） 溴甲酚紫
1>假单胞菌属（Pseudomonas）种类：
铜绿假单胞菌(P.aeruginosa，PA)
荧光假单胞菌(P.fluorescence ) 恶臭假单胞菌(P.putica ) 斯氏假单胞菌(P.stutizeri) 曼多辛假单胞菌(P.mendocina) 产碱假单胞菌(P.alcaligenes) 假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)
B ：金属酶(metalloenzymes)，活性部位为半胱氨 酸残基。主要为碳青霉烯酶，耐药的抗生素包括碳青霉 烯类、青霉素、第一、二、三代头孢菌素、氨曲南。
C ：头孢菌素酶(AmpC 酶)，活性部位为丝氨酸残基， 由染色体上一组Amp基因介导，它的产生与β-酶诱导剂 有关，归因于调控基因突变。