PCR室内质量控制标准操作程序
PCR实验室试剂的质检标准操作程序
PCR实验室试剂的质检标准操作程序1.目的：保证每批用于临床实验的试剂的质量良好，符合要求。
2.适用范围：各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂（HBV、HCV、HPV、CT）。
3.负责人：操作人：4.程序：4. 1收到试剂后，目测试剂是否处在冻存状态。
4. 2核对试剂品种和数量并检查包装：外包装（厂名厂址、、批准文号、批号和有效期等）;内包装（试剂瓶完整性、试剂配备品种完整性、使用说明书有否等）。
4. 3及时将试剂转入-20.。
冰箱保存。
将上述检测核对情况在记录本上登记。
4. 4最迟在前批次试剂存量尚可维持常规实验一周时，按如下要求对新批号试剂进行效验实验。
4. 5效验实验：4. 5. 1要求设置：空白对照、阴性对照、阳性对照、室内质控各一，阳性标准品梯度（104、105、106、108）。
4. 5. 2出现如下情况中任何一种的，判断为试剂不合格，不能用于临床检测：a）空白对照出现扩增。
如扩增曲线CT值大于25，需重复实验确证试剂污染。
b）阳性对照和阳性标准品均未检出，或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。
4. 5. 3阳性对照未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存在问题。
重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。
更换提取液后该批试剂方可使用。
4. 5. 4空白对照无扩增，阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。
单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。
4. 5. 5阳性对照检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大5个循环以上。
提示阳性标准品存在问题。
更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。
4. 5. 6空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照正常检出，阳性标准品导出的标准曲线之斜率（-2.9〜-3.9）、截距（26〜34）、相关性（-0.99）均在使用范围内，表明该批试剂良好，可以投入临床使用。
PCR实验检测标准操作规范
PCR检测实验室操作规范一、PCR 实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染,保证检测结果的可靠性。
2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等.3．负责人：4．细则:4．1流感实验室为急传所的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等. 4．2 本实验室采用实时荧光定量（定性）PCR 技术作为病毒基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区)、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识.标本的接收则在检验科标本接收处进行.4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用. 4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP 文件。
4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。
4．6 非本实验室工作人员,未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
二、PCR 实验室工作制度1．目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。
2．适用范围：所有本实验室人员。
3．负责人:4．细则：4．1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作。
4．2 各区的用品不得混用。
4．3 在各区的实验操作过程中,操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程.4．4 试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP 文件)。
4．5 标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA 时cDNA 的合成（见相关SOP 文件）。
PCR实验室室间质评管理程序
1.目的室间质量评价（EQA）也被称作能力验证（PT），它既能考察本实验室结果的准确性，检查实验室室内质控的质量，同时还能了解自己实验室与其他实验室之间的差异。
通过实验室之间的比对来判定实验室的检测能力。
2.范围卫健委临检中心室间质评、四川省临检中心室间质评。
3.职责实验室负责人指定人员负责与卫健委、省临检中心联系，申请参加项目，要求及时发放质控物，专业组组长负责安排室间质评活动，及时将卫健委、省临检中心的质控物进行测定、上报；结果回来后及时总结室间质评结果。
4.室间质评程序4.1 PT计划与组织：专业组组长计划第二年参加室间质评的项目，以及未参加室间质评项目的替代方案，填写《室间质评计划表》里，交由实验室主任审核，由实验室主任指定人员在上报截止日期之前统一上报相应组织。
4.2 质控品的接收和验收：收到质控品后由专业组组长或指定相关人员根据其相关说明对质控品的数量、批号、包装进行验收并登记《室间质评样本处理记录表》，如有不符样本（遗漏、重号或破损的情况）及时与卫健委、省临检中心联系。
4.3 质控品保存:按照室间质评说明书要求妥善保存，并进行温度记录。
4.4 质控品检测：4.4.1 实验室按照室间质评样本说明书上的建议测定日期安排测定日期和人员独立完成检测。
4.4.2 室间质量评价样本应与常规工作放在一起做，技术人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂检测质控品，不能单独操作，应把它当作临床标本同样看待。
4.5 质评结果上报：4.5.1 按照室间质评样本说明书上的建议测定日期，及时测定，及时填写《室间质评标本处理记录》，并上报数据，检测结果须在截止日期前上报。
4.5.2 上报结果步骤：4.5.2.1 进入卫健委临床检验中心或四川省临床检验中心网站，登录科室账号。
4.5.2.2 进入主页，选择要上报的项目，根据系统提示及上报结果要求填写相关数据及资料，核对无误后，提交上报结果。
4.5.2.3 完成“质评试验上报”后，在“已上报数据”处查看上报数据及资料是否填报无误，及时填写《室间质评标本处理记录》，并整理原始记录和上报记录。
PCR实验室规范化管理与质量控制
(5) 实验室不能随意更改检测体系
体系建立后，如有必要更换试剂品牌，
实验室主任须向科技术负责人提交书面
报告说明更改理由；经科技术委员会讨
论，科技术负责人签字批准方可更换。
6. PCR检测的标本管理
(1) 标本接收 接收标本时应核对标本与检验申请单 的一致性，对标本状态进行登记记录， 并在登记本上签字。 检验申请有不清晰情况时，应即时与 临床科室或相关人员联系核实，并做好 记录。
因其核酸扩增和检测同时完成，故无专门的产物检测 试剂）
2、PCR试剂盒的分类
定性测定： PCR-ELISA、PCR-膜上杂交、荧光PCR （分子信标和Taq Man等） 定量测定： 荧光定量PCR 、PCR-ELISA定量等。
3、影响PCR试剂盒质量的因素
内在因素: 原材料、核酸提取方法、方法学设计 外在因素： 试剂盒的运输和贮存
培训与上岗证
PCR检测干扰因素较多，结果分析复杂，其应用
需要与临床充分沟通。
PCR实验室工作人员应掌握相关学科知识及应用 能力（实验技能、分析能力、沟通能力）
4. 仪器设备的管理
(1)建档管理： a. 仪器设备的一般情况 b. 仪器设备的相关文件 c. 仪器设备的损坏，故障，修理记录 d. 有问题的仪器设备停用标识 e. 仪器设备的报废处理 (2) 仪器设备的分区专用 (3) 仪器设备的校准和检定 (4) 进行定期的维护和保养
扩增和产物检测质控
质控管设计
已知弱阳性样本质控
已知阴性样本质控 试剂空白质控
已知弱阳性样本质控
监测整个实验过程有效性
阴性血清样本质控
监测实验室的以前扩增产物 的污染； 由实验操作所致的标本间的 交叉污染； 扩增反应试剂的污染。
pcr实验室质量控制流程
pcr实验室质量控制流程英文回答：Quality control is an essential part of any PCR laboratory workflow. It ensures that the results obtained from PCR experiments are accurate, reliable, and reproducible. In this article, we will discuss the quality control process in a PCR laboratory.1. Equipment and reagent verification:Before starting any PCR experiment, it is crucial to verify the performance of the equipment and reagents used. This includes checking the functionality of the thermal cycler, ensuring the accuracy of pipettes, and confirming the integrity and quality of the PCR reagents.中文回答：质量控制是PCR实验室工作流程中至关重要的一部分。
它确保从PCR实验中获得的结果准确、可靠且可重复。
在本文中，我们将讨论PCR实验室中的质量控制流程。
1. 设备和试剂验证：在开始任何PCR实验之前，验证所使用的设备和试剂的性能非常重要。
这包括检查热循环仪的功能，确保移液器的准确性，并确认PCR试剂的完整性和质量。
英文回答：2. Positive and negative controls:One of the key steps in PCR quality control is the inclusion of positive and negative controls. Positive controls contain the target DNA sequence, and their amplification serves as a validation of the PCR reaction. Negative controls, on the other hand, do not contain the target DNA sequence and should not produce any amplification. These controls help identify contaminationor other issues that may affect the accuracy of the results.中文回答：2. 阳性和阴性对照：PCR质量控制的关键步骤之一是包含阳性和阴性对照。
PCR实验室标准操作规程
PCR实验室作业指导书文件编号:第1版编制:审核:批准:生效日期:2015年＊月＊日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测,不受任何对检测工作质量有不良影响得、来自实验室内部或外部得不正当得商业、财务与其她方面得压力与影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性得信任得活动。
2、严格遵循实验室认可依据得国际标准,严格按标准得管理要素与技术要素得要求建立自我完善得管理体系与控制检测全过程各环节得机制,所有与检测有关得人员熟悉与之相关得质量文件,并在工作中执行这些政策与程序,真正把标准作为科学管理检测实验室得先进管理模式,尽可能把差错降到最低限度,确保检测数据准确可靠,检测结果与技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”得服务宗旨,严格保护客户得机密与所有权,热忱提供优质服务,努力实现让上级放心、客户满意得服务标准。
4、主动开展实验室得比对实验与其她有效地检测质量监控方案,并通过日常检测得监督机制,持续改进、不断完善管理体系,从而保证其充分性与有效性、修订页目录前言 ............................................................................................................................................ 错误!未定义书签。
质量方针ﻩ错误!未定义书签。
质量管理体系组织结构图ﻩ错误!未定义书签。
一、工作制度............................................................................................................................. 错误!未定义书签。
PCR实验室得设置及管理规程ﻩ错误!未定义书签。
PCR实验室程序管理文件及标准化操作程序
程序文件的管理和维护制度1. 目的：基因诊断程序文件是指导临床基因扩增检验活动的法规性文件，属内部受控文件，不得擅自修改、涂改，不得遗失、外借翻印。
为保持其现行有效和持续适应性，并确立因条件变化进行修改的程序。
2．编写依据：2.1 ISO/IEC170250－1999《检测和校准实验室能力的通用要求》因卫生部《临床基因扩增检验实验室技术验收表（check list）》是根据ISO/IEC17025而设计2.2 卫生部《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》及《临床基因扩增检验实验室工作规范》3．适应范围：临床检验标本4．内容5．编制及职责：程序文件由PCR实验室负责人主持编写、修订、审核并保持它的现行有效性。
由科主任批准和颁布实施，并负责解释。
6．发放与持有者责任：程序文件由科主任批准发放，发放与回收要登记签字，由PCR实验室负责人保管，并组织全室工作人员认真学习，了解内容，熟悉其中各项规定，程序文件执行情况纳入实验室目标管理，与奖惩挂钩。
持有者调任时，要收回该程序文件。
7．修订：科室任何工作人员均可提出对程序文件的修改建议，文件修改须经有关人员讨论，PCR实验室负责人根据条件变化提出是否修改的决定，如作小的修改则可在修改页上进行，修改文件经科主任审核批准后，并填写入程序文件修改页。
如果文件须作重大修改，PCR实验室负责人可进行改版。
新版程序文件经科主任批准后生效，收回旧版，并予以销毁，登记签字后发出新版，保证工作现场只有唯一的，最新的使用版本。
实验室内务管理及清洁制度1 目的：保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。
2 范围：实验室相关人员及医院清洁工人。
3 内务管理及清洁制度3.1 内务管理制度a.实验人员要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。
b.进入实验室的工作人员必须遵守实验室的单一流向的规定，禁止逆向走动。
c.非本室工作人员未经允许不得进入实验室。
d..实验室工作人员应严格遵守各项规章制度和操作规程。
室内质控标准操作程序
室内质控标准操作程序
1.目的控制产前诊断实验的重复性、精密度，并检测其准确度的改变，提高本室常规工作中的批间、批内标本检测的一致性。
2. 适用范围本程序适用产前诊断羊水、外周血、脐血和地贫基因检验质量负责人和检验人员对染色体结果和基因分析室内质量控制。
3．制定依据《全国检验操作规程》《临床基因扩增检验技术》叶应妩、申子瑜李金明主编人民卫生出版社出版2007年第三版
4. 职责实验室质量负责人和检验人员负责本规程的执行。
评估检测结果正确与否，判定当日结果是否可以被采用。
5、操作步骤
5.1地贫基因质控制品的来源：自配
方法：收集阳性血清100ml,充分混匀后，做10次测定，得出地贫基因型，做记录并描图。
然后以200ul/。
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PCR室内质量控制标准操作程序
1．目的：随时了解并控制实验室检测的精密度变化。
2．适用范围：核酸扩增荧光定量检测实验室。
3．负责人：1 操作人：1 1 1
4．程序：
4．1血清质量控制品制备及操作
4．1．1质控品制备：
收集本室检测的临床样本，HBV DNA定量为106copies/ml的样本混匀，并分装于0.5ml的离心管中，每支110µl，编号后（如Qb0201-n），-20℃保存。
4．1．2 操作：
每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测，记录此标本的检测结果；计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。
4．1．3如果使用商品化的质控品，按4．１．２要求执行。
4．2 室内质控图的使用方法
4．2．1 描点
a）图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。
对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不变化。
只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。
b）每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病
人的标本同时检测。
将日期、检测结果和操作者如实记
录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对
应点，用直线将该点与前一天的点连接。
c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档
案。
4．2．2 图形分析
a）如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负
责人，迅速查找原因。
必要时复测标本，然后方可发出
报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。
b）如果在X±2s线以外，或出现连续6点以上在一侧
等规律变化，均应即使向有关负责人反映，并积极查找
原因。
但当天的检验结果一般可以发出。
4．2．3 通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源
a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的
向上或向下改变。
这种变化往往是由于一个新的情况引
起的。
如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。
在找原因时，应重点注意“漂移”
前后发生了那些变动的因素。
b）趋势性变化：向下或向上的趋势性变化表明检测的
准确度发生了渐渐地变化。
这种变化往往是由于一个逐
渐改变的因素造成的。
如质控血清的降解，试剂效价的
降低等。
c）连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6天以上
出现在靶值同一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之
回复围绕在靶值随机分布的状态。
因为按照统计学原理，由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小。
连续6天以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5％。
因此凡出现连续6天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。
如结果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，一般检验报告可以照常填发。
d）其他规律变化：（周期性等）
4．2．4 通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源a）每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和s与该批测定的X和s进行比较。
如果X发生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。
如果当月s不同则表明检测的精密度发生了变化。
b）将使用同一批号质控血清的CT值的X和s按月份列出。
如果X逐月上升，应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。
如果各月份X基本一致而s逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，
应重点从操作、管理上找原因。
c）在数年中，把每个月的CV和失控规律列成表，可用作检测质量的历史性回顾及趋势分析。
5. 本文涉及以下图表：
PCR室内质控记录表
室内质控图。