实验 维生素C的提取及定量测定
实验 维生素C 的提取及定量测定（碘量法）
一、实验目的
1.学习滴定分析法的基本原理
2.学习对蔬菜和食品中Vc 含量进行测定的方法
二、原理
“滴定”(titration)是将已知准确浓度的溶液--标准溶液通过滴定管滴加到待测溶液中的过程。
待“滴定”进行到化学反应按计量关系完全作用为止，然后根据所用标准溶液的浓度和体积计算出待测物质含量的分析方法称为滴定分析法。
先使用铜盐与过量的KI 进行反应生成CuI2
CuI2 不稳定随即分解为Cu2I2 和游离的碘
生成的碘和维生素C 反应 ,直到溶液里的VC 被碘全部氧
化为止。
剩余的微量碘与淀粉指示剂生成蓝色。
在弱酸性条件下 ,可被碘氧化为脱氢抗坏血酸：
三. 试剂
⑴ 0.01 mol/L 硫酸铜（CuSO4 5H2O ）:取0.25g 胆矾溶于
水中定容成100ml 溶液。
⑵ 30% KI 溶液：称量30g 的KI ，然后加入70g 的水，搅拌均匀即可
⑶ 1%可溶性淀粉指示剂
⑷ 偏磷酸-醋酸溶液:称取偏磷酸15g ，溶于40mL 冰醋酸和450mL 蒸馏水所配成的混合液中。
过滤。
贮于冰箱内，此液保存不得超过10天。
四 、实验操作步骤
1. 制样：称取样品20g （分2-3次研磨），加少量石英砂及少量偏磷酸-醋酸匀浆，过滤后，加偏磷酸-醋酸定容到250ml ；
2. 吸取5ml 偏磷酸-醋酸, 加10mL 30%KI 溶液。
再加10滴淀粉指示剂溶液。
随即用标准硫酸铜溶液(0.01mol/L)进行滴定，边滴定边振摇，直至显示出蓝色（或红棕色），且稳定30s 不退，记录滴定量V0（此为空白对照，注意：会很快变色，要逐滴加入）；
3. 精确吸取5mL 样品溶液于100mL 三角瓶中，加10mL 30%KI 溶液。
再加10滴淀粉指示剂。
随即用标准硫酸铜溶液进行滴定。
边滴定边振摇，直至显示出蓝色（或红棕色），且稳定30s 不退，记录滴定量V1
4 . 计算：Vc 分子量为176
L-抗坏血酸含量(mg/5ml)＝ V ×c
V:（V1-V0）标准硫酸铜毫升数
c=0.88, 即1ml 0.01mM/ml 标准硫酸铜溶液相当于1/2x0.01 mmol 42242CuSO +4KI=CuI +2K SO 22222CuI =Cu I
+ I
Vc=1/2x176x0.01=0.88mg抗坏血酸。
五、实验结果:
计算Vc含量(mg/mL)。
滴定法测定维生素C含量
滴定法测定维生素C含量一、本文概述维生素C，也被称为抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素，对人体健康具有多种益处，包括增强免疫力、促进铁质吸收、参与胶原蛋白的合成等。
由于其生理功能和广泛的应用，维生素C的含量测定在食品、药品、化妆品等领域具有重要意义。
滴定法作为一种经典的化学分析方法，因其准确度高、操作简便等优点，被广泛应用于维生素C含量的测定。
本文将详细介绍滴定法测定维生素C含量的原理、实验步骤、注意事项以及结果分析。
通过本文的阅读，读者可以了解滴定法的基本原理和实验操作，掌握维生素C含量测定的基本方法，为实际工作和研究提供有益的参考。
二、滴定法基本原理滴定法是一种常用的化学分析方法，通过测量一种已知浓度的试剂（称为滴定剂）与被测物质发生化学反应所需的量，从而确定被测物质的含量。
在维生素C含量的测定中，滴定法被广泛应用。
滴定法的基本原理是基于化学反应的定量关系。
在滴定过程中，滴定剂与被测物质按照一定的化学计量比进行反应，直到反应完全。
通过测量滴定剂的使用量，可以推算出被测物质的含量。
对于维生素C的滴定测定，通常使用碘作为滴定剂。
维生素C（抗坏血酸）具有还原性，可以与碘发生氧化还原反应。
在滴定过程中，碘逐渐与维生素C反应，直到维生素C完全消耗。
此时，通过测量剩余的碘的量，可以推算出样品中维生素C的含量。
滴定法的优点在于操作简便、准确度高、适用范围广。
然而，滴定法也需要注意一些影响准确度的因素，如滴定剂的纯度、操作误差等。
因此，在进行滴定法测定时，需要严格控制实验条件，确保测量结果的准确性。
通过滴定法，我们可以有效地测定样品中维生素C的含量，为食品、药品等产品的质量控制提供重要依据。
滴定法也为研究维生素C 的生理功能和代谢途径提供了重要的实验手段。
三、实验材料与方法试剂：维生素C标准品，碘酸钾（KIO₃），硫代硫酸钠（Na₂S₂O₃），淀粉指示剂，盐酸（HCl），氢氧化钠（NaOH）等。
标准溶液的制备：精确称取一定量的维生素C标准品，用适量水溶解后，转移到容量瓶中定容，得到标准溶液。
维生素C的提取及含量测定
荧光法
总结词：灵敏度高
详细描述：荧光法是通过测量荧光强度来测定维生素C含量的方法。维生素C在特定波长光的激发下能够发出荧光，荧光强度 与维生素C含量成正比。该方法具有灵敏度高、选择性好等优点，但需要使用到荧光分光光度计和特定波长的光源。
分光光度法
总结词：操作简便
详细描述：分光光度法是一种通过测量物质对光的吸收程度来测定物质含量的方法。维生素C在特定 波长光的吸收有特征性，通过测量吸光度可以确定维生素C的含量。该方法具有操作简便、准确度高 等优点，但需要使用到分光光度计和特定波长的光源。
超临界流体萃取法
总Байду номын сангаас词
一种新型的提取方法，具有高提取率和纯度。
详细描述
超临界流体萃取法是利用超临界流体作为溶剂，从果蔬中提取维生素C的方法。该方法具有高提取率 和纯度，且溶剂可以循环使用，对环境影响较小，但设备成本较高，操作技术要求较高。
03
维生素C含量的测定方法
碘量法
总结词：经典方法
详细描述：碘量法是一种常用的维生素C含量测定方法，基于维生素C的还原性， 能够还原碘酸钾为碘，通过滴定法测量碘的含量，从而确定维生素C的含量。该 方法具有操作简便、准确度高等优点，但需要使用到滴定仪器和化学试剂。
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实验仪器
榨汁机、离心机、分光光度计、容量瓶、滴定管等。
实验试剂
乙醇、碳酸钙、草酸、硫酸等。
实验操作步骤
样品处理
将新鲜蔬菜和水果清洗干净，切碎后放入榨汁机中榨汁，收集果汁。
提取
将果汁倒入离心管中，加入适量乙醇和石英砂，充分搅拌后离心分 离，收集上清液。
测定
将上清液倒入容量瓶中，加入适量碳酸钙和草酸，摇匀后用滴定管 加入硫酸，再用分光光度计测定吸光度。
维生素C的定量测定
三、方法和步骤
1、用天平准确称取柚果肉 克，或桔皮 克或草莓 克。 、用天平准确称取柚果肉5克 或桔皮4克或草莓 克或草莓2克 放入乳钵中， 盐酸5~10ml研磨。放置片刻，将提取 研磨。 放入乳钵中，加1%盐酸 盐酸 研磨 放置片刻， 液滤入50ml容量瓶。反复抽提 容量瓶。 液滤入 容量瓶 反复抽提2~3次，最后用 次 最后用1%盐酸稀 盐酸稀 释滤液至刻度并混匀，每次量取5或 释滤液至刻度并混匀，每次量取 或10ml放入小锥形瓶内 放入小锥形瓶内 进行滴定。 进行滴定。 2、用0.001N2，6-二氯酚靛酚钠溶液（兰色）滴定至 二氯酚靛酚钠溶液（ 、 ， 二氯酚靛酚钠溶液 兰色） 红色，保持15-30秒不褪色。滴定过程宜迅速，不超过2 红色，保持 秒不褪色。滴定过程宜迅速，不超过 秒不褪色 分钟。要使结果准确，滴定使用的2， 二氯酚靛酚钠不 分钟。要使结果准确，滴定使用的 ，6-二氯酚靛酚钠不 应少于1ml或多于 或多于4ml。假如滴定结果在 以外， 应少于 或多于 。假如滴定结果在1~4ml以外，则必 以外 须增减样品用量或将提取液适当稀释。另取1% HCl 5或 须增减样品用量或将提取液适当稀释。另取 或 10ml作空白对照滴定。 作空白对照滴定。 作空白对照滴定
（3）标准抗坏血酸溶液：溶解100毫克纯抗坏血酸粉结 标准抗坏血酸溶液：溶解100毫克纯抗坏血酸粉结 100 晶于1%草酸中，再稀释到500毫升。 1%草酸中 500毫升 晶于1%草酸中，再稀释到500毫升。
3、仪器设备
50ml三角瓶、乳钵、 ml微量滴定管、10ml吸量管、 50ml三角瓶、乳钵、5ml微量滴定管、10ml吸量管、量 ml三角瓶 微量滴定管 ml吸量管 筒、50ml量瓶 50ml量瓶 ml
ONa
兰色
维生素C的定量测定
五、步骤
1、提取 、
洗净蔬菜或松针、擦干 20g 20g蔬菜或松针+2%草酸 100ml（置组织捣碎机中 +2% 100ml 打成浆状） 取浆状物5.0g，倒入50ml容量瓶中，用2%草酸 溶 液稀释到刻度，静置10min 过滤（最初数毫升滤液弃去） 之滤液离心取上清
2、 滴定 、
1）标准液滴定： ）标准液滴定： 准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml（含0.1mg抗坏血 酸），置100ml锥型瓶中，加9ml 1%草酸,用2,6－二氧 草酸, 草酸 酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。由所用染 料的体积计算出1ml染料相当于多少mg抗坏血酸。 2）样液滴定 ） 准备吸取上清液三份，每份10.0ml分别放入二个 100ml锥型瓶中，同前法滴定。
四、 试剂
2%草酸溶液： 2%草酸溶液： 草酸溶液 草酸2g溶于100ml 2g溶于100ml蒸馏水 草酸2g溶于100ml蒸馏水 1%草酸溶液 草酸溶液： 1%草酸溶液： 1g草酸于100ml蒸馏水 草酸于100ml 溶1g草酸于100ml蒸馏水 标准抗坏血酸溶液： 标准抗坏血酸溶液： 准确称取50.0mg纯抗坏血酸，溶于1% 50.0mg纯抗坏血酸 准确称取50.0mg纯抗坏血酸，溶于1% 草酸溶液，并稀释至500mg。（贮棕色瓶 500mg。（贮棕色瓶， 草酸溶液，并稀释至500mg。（贮棕色瓶， 冷藏，最好临用时配置） 冷藏，最好临用时配置）
实验十 二
维生素C的定量测定 维生素 的定量测定
——2，6-二氧酚靛酚滴定法 ， 二氧酚靛酚滴定法
一、目的：
利用氧化还原反应，測定新鲜蔬菜或松针 中的維生素C含量。
二、实验技能： 实验技能：
学习药品称量及配置、体积测量、吸量管、 滴定管及电磁加热搅拌器的使用等实验技 能。
维生素C的定量测定.
试管 试剂(ml) 标准维生素C溶液 蒸馏水 草酸—EDTA溶液 偏磷酸-乙酸 1:19硫酸 5% 钼酸铵
V.C质量（µg） A760nm
123
4
5
6
样品
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.5
1.0 0.8
0.6 0.4 0l 各0.5ml 各1.0ml 各2.0ml 混匀，30℃ 水浴15min，立即比色
维生素C的定量测定
——磷钼酸法
一、实验目的
了解维生素C的测定方法，理解其理化性质。
二、实验原理
钼酸铵在一定条件下（硫酸和偏磷酸根离子 存在）与维生素C反应生成蓝色结合物，在 一定范围内，A与浓度成正比
三、实验器材
1.分光光度计（760nm），比色皿 2.计算纸（9 cm×9 cm） 3.37℃水浴 4.离心机 （离心管100ml 、50ml） 5.组织捣碎机
0 50 100 150 200 250
0.000
五、实验步骤
2. 样品测定 材料洗净擦干，称取1g，加入草酸—EDTA溶液10ml研磨充分，取 上清离心，4000rpm，5min，留上清备用，样品参照上述表格操作， 根据A760nm值在标曲上查找V.C质量。 3.计算 m = m0.v1× 100 / （m1 v2× 103） 说明: m 100g样品中含V.C质量（mg） m0. 查标曲得V.C质量（µg） v1 稀释后总体积 （10ml） m1 称样体积（1g） v2 测定时取样体积 （0.5ml） 103 µg 换成mg
四、实验试剂
1. 桔子，绿色菜叶等 10-20g 2. 5% 钼酸铵 3. 0.05M草酸-0.02MEDTA溶液 4. 硫酸 （硫酸:水=1:19） 5. 乙酸 （乙酸:水=1:5） 6. 偏磷酸-乙酸 7. 标准维生素C溶液 （4℃，1W）
维生素C的定量测定
三、样品滴定
准确吸取样品提取液（上清液或滤 液）两份，每份１0.0mL，分别放入 ２个100mL锥形瓶中，按上面的操作 进行滴定并记录所用染料溶液体积 （mL）。记作ＶＡ
四、结果计算
取两份样品滴定所用染料体积平均值， 代入下式计算 100g 样品中还原型抗坏 血酸的含量：
ＶＣ含量（mg/100 g样品）
OH
还原型2,6-二氯酚靛酚 （无 色）
实验材料、主要仪器和试剂
实验材料：鲜枣
仪器：天平、榨汁机、容量瓶、吸管、
锥形瓶、微量滴定管、纱布
试剂：2％草酸、1％草酸
标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）：
用1％草酸溶液溶解。临用现配。
0.１％的2,6-二氯酚靛酚溶液： ２5mg 2,6-二氯酚靛酚溶于１５ 0mL含５.２mg碳酸氢钠的热水中， 冷却后再用蒸馏水稀释至２５０ mL，滤去不溶物，贮棕色瓶内， 4℃保存一周有效。
＝
（VＡ－ＶＢ）×T×Ｃ
W×Ｄ
×100
式中： VＡ— 滴定样品提取液消耗染料平均值（mL） ＶＢ—滴定空白对照所耗用的染料的平均 ml 数 T —１mL染料所能氧化抗坏血酸mg数 Ｃ —样品提取液的总ml数 Ｄ —滴定时所取的样品提取液ml数 W —样品重量（g）
预计结果及其分析 测得的 Vc的含量较文献值偏低，分 析如下：
思考题： 为什么用 2% 草酸提取样品？为 什么用 1% 草酸溶解抗坏血酸标 准液？
用 2 ％草酸制备样品提取液，可 有效地抑制抗坏血酸氧化酶，而防 止维C被氧化影响测定结果。
如果样品中有较多亚铁离子（ Fe2＋）时，亦会使染料还原而影响 测定，这时应改为 8 ％乙酸制备样 品提取液。
实验五 定
维生素C的定量测
果蔬中维生素C的提取和定量测定
试验十三食物中维生素C的提取和含量测定（2，4－二硝基苯肼法）【实验目的】1．熟悉维生素C的生理功能。
2．掌握食物中维生素C的提取和含量测定。
【实验原理】维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，是具有L-糖构型的不饱和多羟化合物，属于水溶性维生素。
维生素C缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。
维生素C分布很广，植物的绿色部分及许多水果(橘类、草莓、山楂、辣椒等)的含量更为丰富。
维生素C具有很强的还原性。
易被氧化成脱氢维生素C。
脱氢维生素C 仍保留维生素C的生物活性，在动物组织内被谷胱甘肽等还原成维生素C。
在pH>7.5时，脱氢维生素C易将其分子构造重新排列，使其内酯环裂开，生成没有活性的二酮古洛糖酸。
维生素C、脱氢维生素C和二酮古洛糖酸合称为总维生素C。
食物中的总维生素C包括还原型和脱氢型两种形式。
食物陈旧，贮存日久以及经过烹调处理的食物，其中有相当一部分维生素C成为脱氢型，此种形态的维生素C仍有85%左右的维生素C活性，所以对这类食物常常测定总维生素C。
测定时须将样品中的还原型维生素C氧化成脱氢型维生素C。
因脱氢维生素C和二酮古洛糖酸都能与2，4-二硝基苯肼作用生成红色的脎，脎的生成量与总维生素量成正比。
于是将脎溶于硫酸，再与同样处理的维生素C标准液比色，可求出样品中的总维生素C的含量。
【器材和试剂】1. 器材硏钵、恒温水浴、72型分光光度计、50m1容量瓶、刻度吸管、100m1锥形瓶。
2. 试剂（1）橘皮。
（2）9N硫酸：25m1浓硫酸(比重1.84) 缓慢加入700m1蒸馏水中，冷却后稀释至1000mI。
（3）2% 2,4-二硝基苯肼：溶解2g 2,4-二硝基苯肼于100ml4.5mol/L（9N）硫酸中，过滤。
4℃保存。
每次用前需再过滤，保存时间限于2周。
（4）85%硫酸：90m1浓硫酸(比重1.84)缓慢加入100mI水中。
（5）1%草酸溶液。
（6）10%硫脲：称取硫脲50g溶于1%500mI草酸中，4℃保存。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)一、目的要求:(1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
(2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
(3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理:维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图:当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器:(1)天平 (2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HCl)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
维生素C的定量测定实验报告
生物化学实验报告维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的掌握2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法二、实验原理维生素C又称抗坏血酸。
在1928年从牛的肾上腺皮质中提出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。
因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。
三、实验器材1、松针、菜椒、大枣；2、取液器3、容量瓶100ml4、微量滴定管5ml5、电子天平6、研钵、烧杯数只7、漏斗两个四、实验试剂1、2%草酸溶液：称取草酸8.0311g，溶于400ml蒸馏水中；2、1%草酸溶液：称取草酸4.0254g，溶于400ml蒸馏水中；3、标准抗坏血酸溶液；4、1%HCl；5、0.1% 2，6-二氯酚靛酚溶液。
五、实验操作1、样品的提取松针：从南京大学教学楼前摘取的新鲜松针，用水清洗干净，吸去表面的水。
准确称取2.0004g，放在研钵中加入1%HCl溶液5ml一起研磨，研细。
放置片刻，将提取液转入100ml容量瓶中，如此反复几次加入提取液。
最后用1%HCl溶液定容，混匀，（每10ml样液中含松针0.20004g）静置10min，过滤，备用；菜椒和大枣：用水洗净，吸去表面水分。
准确称取得大枣 2.0025g、菜椒1.9963g。
分别加2%草酸10ml于研钵中，研细，转移提取液于100ml容量瓶中并用2%草酸溶液定容。
（这样，每10ml样液中含有枣0.20025g，或者菜椒1.9963g）静置10min，过滤，弃去最初几毫升滤液，备用；2、滴定标准抗坏血酸溶液：准确吸取标准抗坏血酸溶液 1.0ml加9ml 1%草酸在100ml锥形瓶中，微量滴定管以0.1%2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s 即终点；样品滴定准确称取10.0ml样品溶液，放入100ml锥形瓶中，用与标准抗坏血酸溶液滴定相同的方法滴定；六、数据记录七、数据计算由标准液滴定数据求出1ml染料相当于多少mg抗坏血酸：T = 0.1mg / 0.26ml = 0.385 mg/ml计算每100g样品中含抗坏血酸的质量公式：1000⨯=m VT m 其中：m 100g 样品中含抗坏血酸的质量；V 滴定时所用去染料的体积数；T 每毫升染料能氧化抗坏血酸质量数，0.385mg/ml ；0m 10ml 样液相当于含样品之质量数。
维生素c的定量测定
实验9：维生素C的定量测定（磷钼酸法）一、实验目的1、了解维生素C的测定方法。
2、加深理解维生素C的理化性质。
二、实验原理钼酸铵在一定条件下（有硫酸和偏磷酸根离子存在）与维生素C反应生成蓝色结合物。
在一定浓度范围（样品控制浓度在25—250ug/ml）吸光度与浓度成直线关系。
在偏磷酸存在下，样品所存在的还原糖及其它常见的还原性物质均无干扰，因而专一性好，且反应迅速。
MoO42-+维生素CMo（MoO4）2+维生素C（还原型）钼蓝（氧化型）三、实验器材1、松针、绿色蔬菜、橘子、广柑等富含维生素C的生物材料。
2、722型（或7220型）分光光度计。
3、水浴锅。
4、离心机4000r/min。
5、组织捣碎机。
6、吸管0.10ml(×2)，0.20ml (×2)，0.50ml (×2)，1.0ml (×3)，2.0ml (×1)，5.0ml (×1)。
试管1.5cm×15cm(×10)。
7、试管架。
8、吸管架。
四、实验试剂1、5%钼酸铵：5g钼酸铵加蒸馏水定容至100ml。
2、草酸（0.05mol/L）-EDTA(0.02mmol/L)溶液：称取草酸6.3g和EDTA二钠0.75g，用蒸馏水溶解后定容至1000ml。
3、硫酸（1：19）：取19份体积蒸馏水加入1份体积硫酸。
4、冰乙酸（1：5）：取5份体积蒸馏水加入1份体积冰乙酸即可。
5、偏磷酸-乙酸溶液：粉碎好的偏磷酸3g，加入48ml（1：5）冰乙酸，溶解后加蒸馏水定容至100ml；必要时过滤；此试剂放冰箱中可保存3天。
6、标准维生素C 溶液（0.25mg/ml ）：准确称取维生素C25mg ，用蒸馏水溶解，加适量草酸（0.05mol/L ）-EDTA(0.02mmol/L)溶液，然后用蒸馏水稀释至100ml ，放冰箱贮存，可用一周。
五、实验操作1、制作标准曲线取试管9支，按表1进行操作。