原位杂交与免疫组化(2)
her2表达检测方法汇总
her2表达检测方法汇总
HER2（人类表皮生长因子受体2）是一种与乳腺癌相关的蛋白质，其过度表达与乳腺癌的发展和预后有关。
因此，准确检测HER2表达对于乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义。
以下是一些常见的HER2表达检测方法的汇总：
1. 免疫组化（IHC），免疫组化是一种常用的HER2表达检测方法，通过对组织切片进行染色并观察HER2蛋白在细胞膜上的表达情况来进行评估。
根据染色的程度和范围，可以将结果分为0、1+、2+和3+四个等级。
2. 荧光原位杂交（FISH），FISH是一种分子遗传学技术，通过使用荧光标记的探针来检测HER2基因的扩增情况。
FISH可以提供更准确的HER2基因状态信息，尤其适用于IHC 2+的病例。
3. 免疫组化和原位杂交联合检测（IHC-FISH），IHC-FISH联合检测结合了免疫组化和原位杂交两种方法的优势，可以提高对HER2状态的准确性和可靠性。
4. 基因组学测序技术，随着基因组学技术的发展，越来越多的
实验室开始采用基因组学测序技术来检测HER2基因的扩增或突变情况，这种方法可以提供更为全面的遗传信息。
5. 蛋白质质谱法，蛋白质质谱法通过分析组织样本中的蛋白质表达情况来评估HER2的表达水平，虽然在临床应用中较少见，但具有潜力成为一种可靠的HER2检测方法。
总的来说，选择合适的HER2表达检测方法取决于实验室设施、技术人员的经验以及患者的具体情况。
在临床实践中，常常会结合多种方法来进行综合评估，以确保对HER2状态的准确判断。
免疫组化和原位杂交检测结果_概述说明
免疫组化和原位杂交检测结果概述说明1. 引言1.1 概述本文旨在对免疫组化和原位杂交检测结果进行综合概述和解释。
免疫组化和原位杂交是两种常用的生物学实验技术，用于检测细胞或组织中特定蛋白质或核酸的表达情况。
通过对这两种技术的原理、方法、应用领域以及实验步骤和注意事项的介绍，可以使读者更好地理解并合理应用这些检测结果。
1.2 文章结构本文分为五个主要部分：引言、免疫组化检测结果、原位杂交检测结果、免疫组化与原位杂交比较分析以及结论。
在引言部分，我们将简要介绍本文的目的和文章结构，提供一个整体的框架来帮助读者理解后续内容。
1.3 目的本文旨在全面说明和讨论免疫组化和原位杂交检测结果，并对它们之间的异同进行比较分析。
通过了解免疫组化和原位杂交技术的基本原理、应用领域以及实验步骤等方面信息，读者可以更好地理解和解释这些检测结果，从而能够更科学地进行相关研究工作。
此外，我们将通过案例分析和发展趋势的讨论，对免疫组化和原位杂交技术在未来的应用进行展望，并提供一些建议。
2. 免疫组化检测结果：2.1 原理和方法：免疫组化是一种常用的实验技术，通过特异性抗体对目标分子进行检测。
该技术基于免疫学原理，利用抗体与相应的抗原结合来定位和可视化感兴趣的蛋白质或分子。
在免疫组化实验中，首先需要选择合适的抗体，该抗体可以是单克隆或多克隆抗体，并且需要与所需检测的目标分子有高度的特异性和亲和力。
然后，在样本处理过程中，对组织或细胞进行固定、包埋等步骤以保持其形态结构，并消除内源性酶活性。
接下来，将样本切片后进行染色处理，通常采用荧光标记物或酶标记物进行可视化显示。
最后，使用显微镜观察并记录结果。
2.2 应用领域：免疫组化技术广泛应用于生物医学研究领域。
它在肿瘤学、神经科学、器官发育等领域起着重要作用。
例如，在肿瘤学中，通过免疫组化可以检测肿瘤组织中的细胞分子标记，从而对肿瘤类型、分级和预后进行鉴定。
在神经科学领域，免疫组化可以帮助研究人员探索神经元的分布、表达和功能。
荧光原位杂交与免疫组化法检测乳腺癌HER-2表达的临床意义
荧光原位杂交与免疫组化法检测乳腺癌HER-2表达的临床意
义
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，HER-2在乳腺癌中的
表达程度与疾病的预后密切相关。
荧光原位杂交（FISH）与
免疫组化（IHC）是目前最常用的检测HER-2表达的方法之一。
免疫组化法通过检测HER-2蛋白在乳腺癌细胞膜上的表达水
平来确定HER-2的状态。
它是判断HER-2高表达的最常见方法，通常可以在乳腺癌组织切片中快速检测，检测结果可定量化。
但是，免疫组化法不能直接测量HER-2基因水平，由于
存在不能确定的判断标准，结果可能存在误差。
FISH法是测量HER-2基因扩增的直接方法。
对于免疫组化测
试结果不确定的患者，FISH测试需要进一步检测HER-2基因
是否扩增。
如果FISH检测结果显示HER-2基因扩增，则患者很可能需要接受更为积极的治疗。
通过比较FISH和免疫组化方法的结果，可以更好地确定个体
患者HER-2的表达情况，并作出更为准确和有效的治疗决策。
例如，HER-2扩增和免疫组化高表达的患者可能受益于靶向HER-2的治疗，如赫赛汀。
此外，HER-2基因扩增可能是预
后不良的风险因素，需要密切监测治疗反应和疾病复发。
因此，FISH和免疫组化是乳腺癌HER-2表达检测的重要手段。
这些方法的准确性和精度已经得到了明显的提高，可以作为指导乳腺癌个体化治疗的重要依据。
分析对比荧光原位杂交(FISH)与免疫组化(IHC)检测乳腺癌HER-2基因
（ ５ ８ ． ８ ２ ％） ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｗ ａ ｓ ｐ ｏ ｓ ｉ ｉ ｔ ｖ ｅ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｗｏ ｔ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ（ 瑙 ＝Ｏ ． ４ １ ２ ， Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ． Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｂ ｅ ｆ ｏ ｅ ｒ ｈ ｅ ｒ ｃ ｅ ｐ ｔ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ ， ｈｅ ｔ
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疗是 否 应 用 赫 赛 汀 。 ・
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以作为是 否应用赫赛 汀的初 步依 据 ； ＨＥ Ｋ－ ２蛋 白表达 阳性 的病例有 必要 进一 步进 行 Ｈ Ｅ Ｋ一 ２基 因扩增检测 ， 来确 定临床 治
组织学技术与染色方法
组织学技术与染色方法组织学技术是研究组织构造和生物学特性的基础。
在生物学、医学和病理学领域，人们广泛应用组织学技术来研究细胞和组织的结构和功能。
染色方法是组织学技术中的一种重要方法，它可以改变组织的颜色和形态结构，从而使人们更加清晰地观察和研究组织。
本文将介绍组织学技术和染色方法的相关内容。
一、常规组织学技术常规组织学技术是指在组织学和病理学研究中常用的组织学技术，主要包括固定、包埋、切片和染色等步骤。
其中，固定是针对活体组织的一种处理方法，用于保持组织的形态结构和化学结构，同时杀死细胞，以避免组织或细胞的萎缩变形。
主要方法有酸性酒精、福尔马林等。
包埋是将固定后的组织放入合适的包埋剂中，使组织变硬，便于制备切片。
切片是将包埋后的组织切成同样大小的薄片，然后染色或进行其他特殊处理，便于观察和诊断。
二、染色方法染色是组织学技术中的一项重要方法。
染色可以使组织或细胞的不同结构和化学成分显示出不同的颜色，从而方便人们观察和研究组织。
1. 常用染色方法（1）H&E染色H&E染色是组织学研究中最常用的染色方法之一。
该方法主要利用酸性染料和碱性染料的性质不同，在染色后能够将细胞核染成深蓝色，胞浆和细胞质染成淡粉红色，从而方便人们观察和区分不同的细胞类型和组织结构。
（2）伊红染色伊红染色是一种常用的组织学样本染色方法，主要用于染色血液和骨髓切片。
该方法主要利用伊红染料的亲和性，将细胞核染成红色或紫色，细胞质和其他组织及细胞结构则染成红色，能够明显突出血液细胞和骨髓组织结构。
（3）PAS染色PAS染色是糖和糖蛋白类物质的特异性染色方法，主要用于组织中糖和糖蛋白的检测和定量。
该方法主要利用PAS染料与糖类物质形成复合物的性质，将糖染成淡红色或玫瑰红色。
2. 新兴染色技术（1）免疫组化染色免疫组化染色技术是一种利用抗体与特定抗原相互作用的特异性染色方法。
该技术可以检测和鉴定组织或细胞中特定的蛋白质、抗原等，从而在诊断和治疗等方面具有非常重要的应用价值。
免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察
免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察1. 引言1.1 背景鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，其病因尚不完全清楚。
已有研究表明埃波斯坦-巴尔病毒（EB病毒）可能与鼻咽癌的发展密切相关。
EB病毒是一种常见的人类病毒，感染后可引起多种疾病，包括淋巴瘤和鼻咽癌等。
检测EB病毒在鼻咽癌中的存在对于该疾病的诊断和治疗具有重要意义。
当前，免疫组化技术和原位杂交技术被广泛应用于肿瘤诊断和研究中。
免疫组化技术可以通过检测特定抗原的表达水平来判断肿瘤的类型和分级，而原位杂交技术则可以检测病毒的核酸序列，从而确定病毒的存在。
双标记技术结合了免疫组化和原位杂交技术的优势，可以同时检测抗原和核酸，提高了诊断的准确性和可靠性。
本研究旨在通过免疫组化和原位杂交双标记技术检测EB病毒在鼻咽癌中的存在，探讨其在鼻咽癌诊断中的应用以及对该疾病的诊断和治疗的意义。
通过对免疫组化与原位杂交双标记技术的应用效果进行观察和分析，为鼻咽癌的早期诊断和治疗提供更准确的依据。
1.2 研究目的本研究的目的是探讨免疫组化与原位杂交双标记技术在诊断鼻咽癌中的应用效果。
鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，而EB病毒被认为是导致鼻咽癌发生的一个重要因素。
通过检测EB病毒在鼻咽组织中的存在情况，可以帮助早期诊断和治疗鼻咽癌。
免疫组化技术是一种通过特定抗体与靶分子结合的技术，可以帮助我们检测出EB病毒在组织中的表达情况。
而原位杂交技术则可以帮助我们检测出EB病毒的基因组在组织中的存在情况。
将两种技术结合起来进行双标记，不仅可以提高对EB病毒的检测灵敏度和准确性，同时也可以更加直观地观察病毒在组织中的分布情况。
通过本研究，我们旨在验证免疫组化与原位杂交双标记技术在鼻咽癌诊断中的准确性和可靠性，为临床提供更好的诊断方法，帮助医生更早地发现和治疗鼻咽癌，提高患者的生存率和生活质量。
1.3 意义鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，其发病率逐年增加，给患者的生活质量和健康造成了严重威胁。
免疫组化 (2)
一、名词解释：1.PAS 反应：即过碘酸--雪夫反应显示糖原，简称PAS反应。
其原理是通过利用过碘酸的氧化作用，使糖分子中的二醇基氧化为二醛基，释放出游离的醛基，醛基与雪夫schiff液反应，生成紫红色化合物，在有多糖的地方就会呈现出紫红色的阳性反应。
2.Feulgen 法：即福尔根反应显示DNA 法。
其原理是组织用1NHCl 60℃水解，将DNA分子中脱氧核糖核酸与嘌呤间的连链打开，使之释放出醛基与雪夫schiff液发生反应，生成紫红色化合物，在有DNA的地方就会呈现出紫红色的阳性反应。
3.PAP法：即过氧化物酶—抗过氧化物酶技术，该方法采用过氧化酶和免疫夹心增强技术，使酶和抗体形成可溶性PAP免疫复合物。
通过抗体使标记分子（抗辣根过氧化物酶)定位于抗原附件。
4.核酸探针：带有标记物的已知序列的核酸片段，它能和与其互补的核酸序列杂交，形成双链，用于待测核酸样品中特定基因序列的检测。
根据核酸性质分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针、cRNA探针及寡核苷酸探针等。
5.核酸分子杂交：是指已标记的探针和样本中的靶序列通过碱基的互补配对结合而形成杂交体的过程，整个实验周期较长，过程也较复杂，而杂交反应则较短。
6.质量控制：指组织化学反应各环节中获得最佳效果的技术把握，是组织化学的关键环节，是取得满意效果的必要条件，是提高结果可信度的根本保证。
7.诱发荧光：组织细胞中的某些物质本身不发荧光，但在经过一定的化学反应后可以转变成荧光分子，即被诱发出荧光。
此技术目前主要应用在生物胺的显示中。
8.定量分析：是指在组织细胞化学阳性结果的基础上，对阳性结果进行测量，以数值反映被检测物质的含量的方法。
常用的包括人工定量分析和仪器定量分析。
9.固定：为了更好地保持细胞和组织原有的形态结构，防止组织自溶，而采用一些的物理或化学方法，使细胞的蛋白变性，酶失去活性，但是要保存其抗原性。
10.组织化学：指在形态学基础上研究组织或细胞中物质的化学成分和活性，并进行定性、定位、定量及其代谢状态的学科。
常用免疫组织化学染色方法
常用免疫组织化学染色方法免疫组织化学染色是通过将抗原与抗体结合来检测组织中特定蛋白质的染色方法。
它是现代生物医学中常用的一种技术，可以用于研究分子生物学、细胞生物学、病理学等领域。
以下是一些常用的免疫组织化学染色方法介绍：1. 免疫组化染色(Immunohistochemistry, IHC)：免疫组化染色是免疫组织化学中最常用的方法之一、其基本原理是使用一种与目标抗原特异性结合的抗体，将抗原与抗体结合，然后通过染色方法将表达该抗原的细胞或组织可视化。
常用的染色剂包括多聚酶、酶标、荧光素和放射性同位素。
IHC可以用于检测细胞表面抗原、细胞器中的抗原以及胞内蛋白质的定位。
2. 免疫荧光染色(Immunofluorescence, IF)：免疫荧光染色利用荧光标记的抗体来检测特定抗原。
它可以提供高度特异性和灵敏度的探测，可以用于研究蛋白质的亚细胞定位、蛋白质相互作用等。
利用该方法可以用于检测多种类型的标记（单标记、双标记、复合标记等），从而实现多重染色或共定位染色。
3. 免疫电镜染色(Immunoelectron microscopy, IEM)：免疫电镜染色是一种将金粒标记的抗体用于电子显微镜下观察并定位特定抗原的方法。
通过将金粒结合到抗原-抗体复合物上，可以在电子显微镜下清晰地观察到抗原的位置和分布。
这种方法具有高分辨率和高特异性的优点，广泛应用于超微结构的研究。
4. 免疫酶标染色(Immunoenzyme staining, IES)：免疫酶标染色是使用酶作为标记物，通过化学反应将抗原与酶标记的抗体结合，从而显示出特定抗原的位置和分布。
常用的标记物包括辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP)等。
在检测抗原时，标记物可以与染色底物产生反应生成可见色素，形成染色，以显示抗原的位置和分布。
5. 免疫组织化学原位杂交(Immunohistochemical in situ hybridization, IHC-IS)：免疫组化原位杂交技术是一种结合了原位杂交和免疫组化技术的方法。
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实验步骤
2.探针的制备 1.FISH 样 本 的 制备 3.探针标记
4.样本的预处理
6.染色体显带 5.杂交 7.荧光显微镜检 测8.结果分析Fra bibliotek实验步骤
1.FISH 样 本 的 制备 2.探针的制备 3.探针标记
4.样本的预处理
5.杂交 6.染色体显带
7.荧光显微镜检测
具体实例.
THANKS
原位杂交与免疫组化
MEDICAL REPORT
PART 01 免疫组化的概念
主要内容
一、免疫组化 二、原位杂交
PART 02 免疫组化的步骤 PART 03 免疫组化的应用 PART 04 原位杂交
一、免疫组化
原理
抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组 织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的 某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，
的二抗
免疫组化应用
在科研中的应用
在科研中的应用
在科研研究某个基因与疾病的发生 （肿 瘤）临床分期，预后，患者生存率等的相 关性。最终的目的是考察这个基因的临床 意义。
二、原位杂交
基本原理
分类 荧光原位杂交类型
原位杂交
探针
实验步骤 实验流程
具体实例
基本原理
1.核酸分子杂交的基本原理是利用核酸分
免疫组化的概念
通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去
探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与 抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化 学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达 到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定 量的研究。
1.染色方法
免疫组化的步骤
2.石蜡组织切片的制备 3.免疫组化染色（石蜡切片）
年中总结报告 BUSINESS REPORT
次抗体，其二抗为未标记桥抗体。
石蜡组织切片的制备
1.取材：从动物或者患者取下组织材料。
2.固定：将所需的材料进行固定，使得组织内蛋白质
迅速凝固液（甲醛）细胞内结构和成分不再发生改变。 3. 脱水：固定后的组织内进行脱水，以 便石蜡的浸入。脱水用梯度酒精进行脱 水（自动脱水机） 4.浸蜡与包埋：组织放置刚过熔点的石蜡中，然后进行包埋，将透明后浸了 蜡的组织块放到盛有熔化石蜡的模块中，并使之凝固成蜡块。（包埋机）
子（DNA，RNA）的碱基对形成氢键的互
补性（A=T,A=U,C=G），用一标记的2.核 算探针去检测与之碱基互补的靶核酸
免疫学中抗原—抗体的反应
分类
1.组织
2.细胞
3.染色体
荧光原位杂交类型
1.基因组原位杂交
2.荧光原位杂交
3.多色荧光原位杂交
探针
基因探针，即核酸探针，是一段带有检测 标记，且顺序已知的，与目的基因互补的 核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分 子杂交与目的基因结合，产生杂交信号， 能从浩瀚的基因组中把目的基因显示出来 。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至 少必须具备以下两个条件：①应是单链， 若为双链，必须先行变性处理。②应带有 容易被检测的标记。它可以包括整个基因 ，也可以仅仅是基因的一部分；可以是 DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA
染色方法
1.直接法 用标记物（荧光素、霉素）直接标记在
EARLY GOAL
2.间接法 荧光素，霉标记在二抗 上（二抗：抗产生一抗 动物的LgG抗体）。
一抗上，标记抗体与抗原结合。再通过 显色或者荧光激发后在显微镜下观察 4.ABC法 （亲和素—生物素—过 3.非标记Ab桥法 氧化物霉复合法）等等
桥法是霉标记抗体的改进，经过三
5.切片与贴片：(组织切片机) （1）切片 （2）展片 （3）贴片
免疫组化染色(石蜡切片)
5.封闭 1. 考 片 65 摄 氏 度 1-2h 2. 常规二甲笨脱 蜡，和梯度酒精 水化 3.灭活内源性过
氧化物酶
4.抗原修复
6.一抗过夜
8.显色
10. 常 规 梯 度 酒 精 脱水，透明，干燥，
封片。
7. 加 入 有 标 记 9.苏木素复染