实验九 红细胞比容的测定
医学临床实验—血细胞比容测定
血细胞比容测定
【目的】
掌握血细胞比容的温氏测定法。
【原理】
将定量的抗凝血液灌注于温氏管中，经过一定的速度和时间离心沉淀后，观察压紧红细胞层占全血体积的比值。
【实验器材或试剂】
1 器材：温氏比积管、毛细吸管、离心机。
2 试剂：按EDTA-K223.5mg/每试管（或肝素钠0.2mg/每试管）标准，将抗凝剂分装于小试管中干燥。
【操作步骤】
1、抽取静脉血2.0ml，立即注入装有抗凝剂的抗凝管中并混匀。
2、用细长毛细滴管吸取混匀的抗凝血，插入温氏比积管底部，然后将血液缓慢注入至10cm 刻度处，避免产生气泡。
3、将加好血液的比积管置于水平离心机，以3000r/min的速度离心30min，读取压实红细胞层柱高的毫米数，然后再以同样速度离心10min至红细胞层高度不再下降为止。
【结果计算】
血细胞比容＝红细胞层柱高的毫米数×0.01
【注意事项】
1、所用器材必须清洁干燥，以防溶血，如遇溶血现象应加以注明。
2、不能使用影响红细胞体积的抗凝剂。
3、离心速度和时间要规范化，否则血细胞比容的误差很大。
【临床意义】
1、参考范围：男性：0.40~0.50
女性：0.37~0.48
2、增高或降低
A、血细胞比容增高：见于各种原因所致的血液浓缩或红细胞绝对性增多。
临床上测定脱水病人的血细胞比容，作为计算补液量的参考。
B、血细胞比容减低：见于各类贫血。
3.1 红细胞比容的测定
[实验目的]
学习和掌握用温氏分血管测定红细胞比容的方法。
[实验原理]
将定量的抗凝血灌注于特制的、具有刻度的比容管内，定时、定速离心后,有形成分和血浆分离，上层淡黄色液体是血浆，中间一薄层白膜是白细胞和血小板（或栓细胞），下层不透明的暗红色部分为红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。
根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积）。
[主要仪器与器械]
温氏分血管，普通离心机，长针头，干棉球等。
[实验方法与步骤]
1.取血
2.离心
3000r·min-1，30min。
3.读数
注意事项
☐选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。
本实验采用柠檬酸钠抗凝。
☐血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。
☐温氏分血管内壁必须清洁干燥。
血液进入分血管内的刻度读数要精确，血柱中不得有气泡。
思考题
☐在哪些情况下，红细胞的比容明显增加？
☐测定红细胞比容时，常出现的误差来源是什么？☐测定红细胞比容的实际意义是什么？。
血细胞比容测定讲稿-文档资料
（二）、减低 胞体积大小不同，两者 减低不一定平行，故临床常用计算 红细胞平均容积、红细胞平均血红 蛋白含量和红细胞平均血红蛋白浓 度，有助于贫血的鉴别与分类。
2、可用作计算MCV、MCHC的基础 数据，是影响全血粘度的决定因素 之一（例血液粘度增高致休克）。 3、大量饮水
1、 MCV（fl）=每升血液中红细胞体 积/每升血液中红细胞数=Hct/RBC 例：红细胞为 3.50*1012/L ，红细 胞比容0.36则： MCV=0.36/3.50*1012/L=103 fl
2、 MCH（pg）=每升血液中血红蛋白含 量/每升血液中红细胞个数=HB/RBC 例：红细胞为 3.50*1012/L ，血红蛋白 为120 g/L，则： MCH=120g/L/3.50*1012/L=34.20 pg
3、MCHC（g/L ）=每升血液中血红 蛋白含量 /每升血液中红细胞体积 = HB/ Hct 例：血红蛋白为 120 g/L ，血细胞 比容为0.36，则： MCHC=120 g/L/0.36=333 g/L
4 、红细胞形态改变时应注明（如大 红细胞、小红细胞、椭圆形红细胞、 镰形红细胞等），变形性减低的红 细胞可使血浆残留量增加6%。不能 使用改变红细胞容积的抗凝剂。
5 、 红细胞增多症时，血细胞比容明 显增加，血浆残留量亦会增加。 6 、避免血液稀释（静脉三通管抽血） 7、离心条件必须恒定。
（二）、血液分析仪法： 1、避免溶血 2 、避免血液稀释（静脉三通管抽血） 3、应注意Hct与红细胞计数和红细胞 平均体积测定值的相关性。
（四）、相对离心力
1、相对离心力（RCF）g=1.118x10-5 x有效离心半径（cm）x转速2/min
2、温氏法测定时以相对离心力 2264g（即有效离心半径22.5cm， 3000r/min）离心30 min，读取 红细胞层的高度。
红细胞比容和三种平均值、网织红细胞计数、
②MFR：粗颗粒在10个以上，或细小颗粒超过15个。
③LFR：细胞内含15个以下细小颗粒
参考值
①网织红细胞百分数： 成人和儿童:0.005～0.025
新生儿:
0.02～0.06
②网织红细胞绝对数： 成人和儿童: (24～84)X109／L
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[检测原理]
1.普通光学显微镜法 活体染色（新亚甲蓝或煌焦油蓝)的碱性着色基团 网织红细胞RNA的磷酸基(带负电荷) RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩， 蓝色的点状、线状或网状结构 ， 显微镜下计数 1000个红细胞中所占的网织红细胞数，以百 分比或分数数表示。
[检测原理]
2．仪器法
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[检测原理] 1．手工法 同时计数红细胞，测定血红蛋白和血细胞比容，
计算出红细胞3个平均指数。 例：RBC为3.50X1012／L，Hct为0.36，Hb为120g/L
Hct 0.36 MCV＝—— （fl）＝—————— ＝103（fl） RBC 3.50X1012／L
Hb Hb MCH＝—— （pg）， MCHC＝——（ g／L ） RBC Hct
当HCT大于0.7，RBC为(7-10)X1012／L, Hb大于 180g／L，即可诊断。
临床意义
3．红细胞平均指数计算的基础数据
红细胞平均值(MCV、MCHC)可用于贫血的形态 学分类。
4．血液流变学指标
HCT增高表明红细胞数量偏高，
全血黏度增加，严重者表现为高黏滞综合征，
微循环障碍、组织缺氧。 HCT与其他血液流变学指标联合应用，可对一些 血栓前状态进行监测。
2.2.28红细胞比容红细胞平均指数
血细胞比容测定
（一）温氏法
1．原理 温氏（Wintrobe） 法是利用血液中不同的有 形成分比重的差异，将定 量的抗凝血以一定的速度 和时间离心后，血液中有 形成分沉淀，读取压实红 细胞层在全血中所占体积 的百分比
血细胞比容测定
（一）温氏法
2．简要操作 抗凝血注入Wintrobe管→以 2264g离心力离心30分钟→读数→再离心10 分钟→判读结果
血细胞比容测定
血细胞比容概念
• 血细胞比容（HCT），是指一定体积（1L）的全血 中（抗凝血）红细胞所占容积的相对比例
• HCT的高低主要与红细胞数量、大小有关，主要用 于贫血和红细胞增多的诊断，反应血液稀释和血 液浓缩变化
• 还可根据RBC、Hb、Hct计算红细胞平均值 • HCT测定可采用直接离心法（包括温氏法和微量
• 2．降低 ：①各种原因引起的血液稀释；②各种原因引起 的贫血
• 3．临床补液量的参考 各种原因导致脱水时，HCT都会增 高
• 4．真性红细胞增多症诊断指标 当HCT大于0.7，RBC为 （7～10）×109/L，Hb大于180g/L，即可诊断
• 5．计算红细胞平均指数 ，对贫血的形态学分类有帮助。 • 6．血液流变学指标 自发性凝血时，HCT可＞0.6
贫血形态学分类及临床意义
贫血形态学分类 正常细胞性贫血
大细胞性贫血 单纯小细胞性贫血 小细胞低色素性贫血
MCV 正常
增高 降低 降低
MCH 正常
增高 降低 降低
MCHC 正常
正常 正常 降低
临床意义
急性失血、急性溶血、再生 障碍性贫血、白血病等
巨幼细胞性贫血
慢性炎症、尿毒症等
缺铁性贫血、珠蛋白生成障 碍性贫血、慢性失血等
实验九 红细胞比容的测定
1）液体透明红色，不分层： 完全溶血（最大渗透抵抗力或最小渗透脆性）
2）上层透明红色，下层浑浊红色： 部分溶血（最小渗透抵抗力或最大渗透脆性）
3）上层无色，下层浑浊红色： 无红细胞溶解
结果：
0.42～0.46 ％ NaCl 溶液：部分溶血 0.32％～0.34％ 细胞沉降率测定 （示教）
记录血凝时间
观察项目
（1）正常 （2）少许棉花放入试管底部 （3）用石蜡油润滑整个试管内表面 （4）放在水浴槽中 （5）竹签搅拌血液（烧杯） （6）加肝素8单位 （7）放草酸钾 1～2ml
(8) 放组织液 0.1ml
实验报告： 目的，结果，讨论，结论
放血入肝素抗凝烧杯内 3）吸取10ml抗凝血入离心管，以3000rmp离心
30min 4）读数，计算红细胞比容（％）
结果：
男：40～50％ 女：37～48％
实验十 红细胞渗透脆性（示教）
目的：学习测定红细胞渗透脆性 步骤：
1）配置各种低渗盐溶液（0.7％～0.25％ NaCl） 2）每试管内加抗凝血1滴，与盐溶液充分混合 3）室温下放置1h，观察试管内液体分层
目的： 用惠氏法测定红细胞沉降率 步骤：
1）取抗凝血至惠氏沉降管0刻度，擦拭外面血迹 2） 将沉降管固定在固定架上 3） 1h 末读取红细胞下沉的毫米数
结果：男性 0~15 mm/h; 女性 0～20 mm/h
实验十五 血液凝固
目的：了解血液凝固的基本过程及
加速或延缓血凝的因素
步骤：
1） 家兔以乌拉坦（1g/kg，i.v.）麻醉、背位固定 2） 颈总动脉插管（近心端用动脉夹夹住） 3） 试管或烧杯内放血 2 ml 左右, 每30秒观察一次，
实验9 红细胞比容测定 （示教） 实验10 红细胞渗透脆性 （示教） 实验11 红细胞沉降率测定（示教） 实验15 血液凝固
血液的组成和红细胞比容的测定
血液的组成和红细胞比容的测定[实验目的]：1、了解血液的组成，区别血浆、血清、血细胞及纤维蛋白。
2、测定红细胞比容。
[实验对象]：家兔[实验用品]：兔手术器械、动脉插管、试管、小烧杯、离心机、抗凝剂（肝素钠等）。
[方法与步骤]：1.兔颈动脉采血，徐徐注入试管A、B、C、D （肝素处理），F（未经肝素处理），封口膜封闭试管口,3000r/min离心30min。
取出，读取前4支试管血细胞柱刻度及全血刻度；再次离心5min,若血细胞柱刻度不变，取前4支试管血细胞压积的平均值，即为此家兔的血细胞压积值。
血细胞压积=血细胞柱刻度/全血刻度2.观察A、B、C、D、F试管中血液，分析其不同。
[实验结果]：1． A、B、C、D试管上层为血浆，下层为红细胞，中间一白色薄层为白细胞和血小板；而试管F中，上层为血清。
2．家兔血细胞比容测定：编号血细胞柱长度(cm) 全血柱长度(cm) 红细胞比容(%)ABCD此家兔红细胞比容为[分析讨论]:血液、血浆、血细胞比容血清、血浆[结论]：1、2[思考题]：1.测定红细胞比容的实际意义是什么？血液凝固及其影响因素[实验目的]：1、了解血液凝固的基本过程及加速或延缓血液凝固的因素。
2、学会兔颈部手术的基本操作。
[实验对象]：家兔[实验器材]：哺乳动物手术器械、兔手术台、动脉插管、动脉夹、气管插管、注射器、小试管8支、小烧杯2个、竹签、恒温水浴槽、冰块、棉花。
[药品]：25%乌拉坦溶液、石蜡油、肝素、草酸钾、肺组织浸液。
[实验步骤]：1．麻醉与固定仰卧位固定在兔台上，用１%普鲁卡因溶液局部麻醉。
2．手术颈动脉插管3. 观察项目(1) 观察加速或延缓血液凝固的因素，比较内源性凝血和外源性凝血将8支试管准备好（1，对照管；2，放棉花少许；3，蜡油润滑内表面；4，置于37℃水浴槽中；5，置于冰水浴槽中；6，加肝素8单位；7，加草酸钾1~2mg；8，加肺浸液1ml），打开动脉夹，每管加入血液2ml，即刻开始计时（6,7,8号试管加入血液后轻轻摇匀，使血液与试剂充分混合），每隔15s，将试管倾斜一次，至血液不再流动为止。
红细胞比容测定实验原理
红细胞比容测定实验原理
红细胞比容的测定原理是将抗凝血置于孔径统一的温氏管或毛细玻管中，以一定转速离心一定时间后，计算红细胞层占全血的体积比。
具体来说，将抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中，离心一定时间，血浆和血球分离，在毛细玻璃管内形成两个明显的相分离层，上层为血浆，下层为红细胞。
通过读取分离层的高度差，即可计算出红细胞比容。
这种方法被称为离心法，主要有两种常见的实验方法：温氏法和微量法。
其中，温氏法是将血样加到温氏管中，经过适当的加热让血液凝固，并保持放置一定时间，最后进行离心操作。
而微量法则是直接将血样加到毛细玻管中，并进行离心操作。
总之，红细胞比容测定的原理是根据离心法，在一定条件下将抗凝血置于孔径统一的温氏管或毛细玻管中进行离心操作，通过计算红细胞层占全血的体积比来测定红细胞比容。
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指导老师: 韩晓华
实验九 红细胞比容测定（示教）
目的： 学习测定红细胞比容的方法 步骤：
1）家兔以乌拉坦（1g/kg，i.v.）麻醉、背位固定 2）颈总动脉插管（用0.1％肝素溶液湿润），
记录血凝时间
观察项目
（1）正常 （2）少许棉花放入试管底部 （3）用石蜡油润滑整个试管内表面 （4）放在水浴槽中 （5）竹签搅拌血液（烧杯） （6）加肝素8单位 （7）放草酸钾 1～2ml
(8) 放组织液 0.1ml
实验报告： 目的，结果，讨论，结论
目的： 用惠氏法测定红细胞沉降率 步骤：
1）取抗凝血至惠氏沉降管0刻度，擦拭外面血迹 2） 将沉降管固定在固定架上 3） 1h 末读取红细胞下沉的毫米数
结果：男性 0~15 mm/h; 女性 0～20 mm/h
实验十五 血液凝固
目的：了解血液凝固的基本过程及来自加速或延缓血凝的因素步骤：
1） 家兔以乌拉坦（1g/kg，i.v.）麻醉、背位固定 2） 颈总动脉插管（近心端用动脉夹夹住） 3） 试管或烧杯内放血 2 ml 左右, 每30秒观察一次，
放血入肝素抗凝烧杯内 3）吸取10ml抗凝血入离心管，以3000rmp离心
30min 4）读数，计算红细胞比容（％）
结果：
男：40～50％ 女：37～48％
实验十 红细胞渗透脆性（示教）
目的：学习测定红细胞渗透脆性 步骤：
1）配置各种低渗盐溶液（0.7％～0.25％ NaCl） 2）每试管内加抗凝血1滴，与盐溶液充分混合 3）室温下放置1h，观察试管内液体分层
1）液体透明红色，不分层： 完全溶血（最大渗透抵抗力或最小渗透脆性）
2）上层透明红色，下层浑浊红色： 部分溶血（最小渗透抵抗力或最大渗透脆性）
3）上层无色，下层浑浊红色： 无红细胞溶解
结果：
0.42～0.46 ％ NaCl 溶液：部分溶血 0.32％～0.34％ NaCl 溶液：完全溶血
实验十一 红细胞沉降率测定 （示教）