基因检测技术比较
基因检测技术比较
TaqMan 技术 Specific Target Amplification (if necessary)
Fwd
Y
Rev
Allele-Specific Genotyping Reaction
Fwd
Y
Rev
TaqMan
T
Probes
C
TaqMan 技术 1. Probe hybridization
3. Probe displacement & cleavage
T
T
Y
Y
T Y
2. Target amplification
4. PCR & cleavage products
MGB技术
原理：针对Taqman探针荧光淬灭不彻底的问题，3'端采用了非荧光性 的淬灭基因，大大降低了本底信号的干扰。此外，MGB探针的3'端还连 接了一个二氢环化吲哚卟啉-三肽，可以大大稳定探针与模板的杂交, 而 短探针的荧光报告基团和淬灭基团的距离更近, 淬灭效果更好，荧光背 景更低，使得信噪比更高：一个15bp的MGB 探针的信噪比大于6,优于 理想状态下的25bp的普通Taqman探针（信噪比约为1.5）。允许采用 更短的探针也简化了探针的设计和成本。
二 基因芯片技术
基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组 已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一 块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中 带有荧光标记的核酸序列，与基因芯片上对应位置的核酸 探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置， 获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸 的序列。
九、基因芯片检测原理及简要过程
T7 promoter
华大基因、达安基因、贝瑞和康三大无创DNA检测技术平台比较
华大基因、达安基因、贝瑞和康三大无创DNA检测技术平台比较点击数：7561录入时间：2014-6-6[打印此页][返回]2014年2月，国家食药监总局和卫计委联合发布通知，暂停基因测序临床应用。
而在临床医学上，基因测序应用最广泛、最成熟的是无创产前基因检测，尤其是产前唐氏综合征筛查。
相比于传统技术，无创产前基因检测仅需抽取少量孕妇外周血，用高通量测序技术即可准确分析胎儿是否患有染色体疾病，具有安全、快速、检测周期短等优势，已逐渐被中国大众所接受。
据统计，无创产前基因检测目前在中国已经积累了超过40万例临床应用。
“叫停令”直接影响了国内多家实施基因检测的公司，但所幸的是，“叫停”并不是完全停止，通知第二条规定：“基因测序诊断产品应按规定经食品药品监管部门审批注册，并经卫生计生行政部门批准技术准入方可应用。
”中国当前市场使用的测序仪均不符合这一条件。
为促进无创产前基因检测在中国市场尽快获批，各大测序服务提供商开始通过高通量基因测序仪的“国产化”，来满足现有的监管法规要求。
贝瑞和康此次联合Illumina共同生产新型测序仪，并向食药总局申请注册，使得Illumina公司的测序平台进入了中国的注册审批程序。
据财新网消息，除贝瑞和康外，当前正在向食药总局申请注册的“国产”测序仪包括：华大基因的BGISEQ1000（基于CG的测序平台）、中山大学达安基因股份有限公司的DA8600（基于Life Technologies公司的Ion Proton测序平台）。
这些公司都是国内无创产前检测的领头公司。
现在，他们站在差不多同一条起跑线上，将在中国市场上进行搏杀。
他们之间的竞争，将会走向何方？我们可以从各自使用的技术平台和申报国家医疗器械注册证情况探知一二。
竞争激烈“国产化”将走向何方？当前，全球市场上测序仪最主要的提供商是美国的Illumina公司和Life Technologies公司，我国市场上的基因测序仪也几乎被这两家公司垄断。
四种基因检测技术比较
技术平台
双脱氧测序法 dideoxy (sanger) sequencing （属于直接测序法的一种） （如ABI测序仪）
技术特点
价格：便宜 检测灵敏度：25% 直接测序法是基因突变检测的金标准 检测全面，任何一种突变类型都可检测出来 是定性检测方法，即只能检测出有没有发生突变 有大量文献支持 价格：适中 检测灵敏度：5%（选择合适的检测灵敏度非常重要！太高或太低都不合适！） 直接测序法是基因突变检测的金标准 检测全面，任何一种突变类型都可检测出来，如可检测K-ras基因18种突变类型 是定量检测方法，即可检测出野生型与突变型各自的百分比 有大量文献支持 价格：很贵 检测灵敏度：1%（灵敏度太高，实验过程稍有些许污染就会出现假阳性结果） 定量PCR法不是基因突变检测的金标准 检测不全面，只检测几种突变类型，如只检测K-ras基因7种突变类型 不是定量检测方法，无法检测出野生型与突变型各自的比例 有少量文献支持 价格：很贵 检测灵敏度：0.1%（灵敏度太高，不可避免会出现很多假阳性结果） 液相芯片法不是基因突变检测的金标准 检测不全面，只检测几种突变类型，如只检测K-ras基因7种突变类型 不是定量检测方法，无法检测出野生型与突变型各自的比例 有少量文献支持
）有限公司是国内最早开展K-ras等肿瘤基因突变检测服务的公司，从2008年8月开始用焦磷酸测序法检测 天为止已检测超过10000多例K-ras样本了，GFR样本也已超过5000例。
焦磷酸测序法 Pyrosequencing （也属于直接测序法的一种） （如基因科技）
临床常用基因突变及融合基因检查方法
临床常用基因突变及融合基因检查方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：临床常用基因突变及融合基因检查方法随着基因组学和分子生物学的发展，基因检测技术在临床诊断中的应用日益广泛。
基因突变和融合基因是许多疾病的发生和发展的关键因素，因此对其检测越来越受到重视。
本文将介绍一些临床常用的基因突变及融合基因检查方法，希望能够帮助读者更深入了解这一领域的知识。
1. PCR技术PCR技术是一种常用的基因检测方法，通过扩增特定基因片段，可以检测到基因的突变。
PCR技术具有高灵敏度和高特异性的优点，可以快速、准确地检测基因突变。
在临床诊断中，PCR技术经常用于检测与疾病相关的基因突变，如遗传性疾病、肿瘤等。
2. 高通量测序技术高通量测序技术是目前最流行的基因检测技术之一，可以同时测序大量基因，并快速高效地识别突变。
高通量测序技术具有高灵敏度、高准确性和高通量的优点，可以帮助医生更准确地诊断疾病，并指导个体化治疗方案的制定。
3. 质谱技术质谱技术是一种基于质量-电荷比的物质分析技术，可以用于检测DNA、RNA等生物分子。
质谱技术具有高灵敏度、高分辨率和高准确性的优点，可以用于检测基因突变、基因表达水平等，对于肿瘤的早期诊断和治疗、药物敏感性的评估等方面具有重要的意义。
1. FISH技术FISH技术是一种常用的融合基因检测方法，通过用荧光染料标记特定基因，可以直接观察到基因的融合情况。
FISH技术具有高分辨率、高灵敏度和高特异性的优点，可以帮助医生准确诊断某些特定的融合基因相关的疾病，如慢性髓性白血病、胃肠道间质瘤等。
在临床实践中，基因突变和融合基因的检测对于疾病诊断、治疗和预后评估具有重要的意义。
随着基因检测技术的不断发展和完善，相信在未来会有更多更高效、更精准的检测方法出现，为临床诊断和治疗带来更多的帮助和改善。
希望本文能为读者对基因突变及融合基因检查方法有更深入的了解和认识。
第二篇示例：临床常用基因突变及融合基因检查方法基因突变是指基因组中的某个基因发生了突变，使其序列发生了改变，导致基因的功能发生变化或失去功能。
临床上最常用的基因检测技术
临床上最常用的基因检测技术肿瘤基因检测是指应用分子生物学技术，从基因水平检测细胞和组织的肿瘤分子靶标变化，以协助病理诊断和分型、指导靶向治疗、预测治疗反应及判断预后的一种病理诊断技术，也称为肿瘤分子病理。
目前，临床上最常用的检测技术平台有：荧光PCR技术、ARMS-PCR 技术、Sanger测序技术、高通量测序技术（NGS）、FISH技术等。
◎荧光PCR技术荧光定量PCR（realtime-PCR）技术是几年基于普通PCR技术发展的一种新技术。
它借助荧光信号来检测PCR产物，通过荧光染料或荧光标记的特异探针，对PCR产物进行标记跟踪，在扩增过程中，每经过一次循环，荧光定量PCR法检测目的基因仅需检测样本是否具有扩增信号即可，且PCR反应具有核酸扩增的高效性，可检测出微小突变。
根据探针标记不同可分为TaqMan探针法和ARMS法，ARMS法的灵敏度比TaqMan探针法更高，更容易从大量野生型DNA中选择富集低浓度的DNA突变。
◎ARMS-PCR技术扩增阻碍突变系统（ARMS）是PCR技术应用的发展，也称等位基因特性PCR（AS-PCR）等，用于对已知突变基因进行检测。
该法通过设计两个5'端引物，一个与正常 DNA互补, 一个与突变 DNA互补, 对于纯合性突变，分别加入这两种引物及3'端引物进行两个平行PCR, 只有与突变DNA完全互补的引物才可延伸并得到PCR 扩増产物。
如果错配位于引物的3'端则导致PCR不能延伸。
ARMS-PCR是目前实验室常用的基因突变检测方法。
ARMS-PCR 法检测灵敏度高，可检测肿瘤细胞中突变比例为 l %甚至更低的突变基因。
◎ Sanger测序技术Sanger测序法的基本原理是在DNA聚合酶的作用下, 将dNTP/ddNTP的混合物加到特异性引物的末端, 产生长短不等的寡核苷酸链, 并带有与四种碱基对应荧光标记。
当带有荧光标记的寡核苷酸链混合物通过基因分析仪毛细管进行电泳分离时, 软件就能根据荧光颜色判断对应碱基, 而根据荧光信号出現的先后顺序, 判断对应碱基在序列中所处的位置, 以此获得特定基因特定位点及片段的 DNA序列, 从而达到鉴别诊断疾病的分子发病机制、指导临床疾病治疗的目标。
基因组疾病常用的检测方法
基因组疾病常用的检测方法
基因组疾病常用的检测方法主要包括基因检测和基因组测序。
基因检测是一种通过分析人类基因组的特定区域来诊断遗传疾病的方法，而基因组测序则是一种更全面的方法，可以检测整个基因组的变异。
基因检测通常使用聚合酶链式反应（PCR）技术来扩增特定的DNA片段，然后使用各种技术，如核酸分子杂交、基因测序等，来检测这些片段是否存在突变。
基因组测序则使用高通量测序技术，能够快速检测整个基因组的变异，包括单核苷酸变异、插入或缺失等。
这些方法可以帮助医生确定病因，预测疾病的发展和预后，以及制定个性化的治疗方案。
因此，基因组疾病常用的检测方法对于遗传疾病的诊断和治疗具有重要意义。
基因检测技术在家庭遗传病诊断中的应用
基因检测技术在家庭遗传病诊断中的应用家庭遗传病指由基因突变引起的遗传性疾病，这类疾病往往从父母传给子女。
由于疾病的遗传性质，一旦发生在家庭中，很可能影响多代人。
为了及早发现和治疗这类疾病，基因检测技术在家庭遗传病神奇显示出了强大的应用范围和前景。
本文将从基因检测技术、遗传疾病和基因检测技术在家庭遗传病诊断中的应用三个方面进行详细探讨。
一、基因检测技术基因，又叫遗传因子，是决定人类遗传信息的基本单位。
正常的基因可以保证身体其他系统的正常功能，而基因突变则会导致某些基因缺陷。
当基因突变同时发生在一对配偶中，他们后代患遗传疾病的风险会加大。
而基因检测技术是精细地解析基因序列，寻找患病基因的技术。
简单地说，基因检测技术可以了解一个人的遗传特征帮助预测个体未来可能会患哪些疾病。
二、遗传疾病的分类加入到基因检测技术在家庭遗传病诊断中的应用，是需要了解遗传疾病的基础知识的。
遗传疾病是由基因突变引起的，可以分为单基因遗传病、染色体异常病和多基因遗传病三类。
其中，单基因遗传病是由单个基因的突变引起的。
多基因遗传病则可能会同时受到多个基因的影响，表现出多样的临床症状。
三、基因检测技术在家庭遗传病诊断中的应用3.1保障遗传疾病患者个性化治疗基因检测技术在基因层面上了解病情，可以帮助医生制定个性化治疗方案。
例如，一个人患有囊性纤维化，医生可以通过基因检测确定患者突变的基因，进而设计出针对这种基因缺陷的治疗方案。
有了基因检测技术的支持，针对基因突变所引起的临床症状，医生可以围绕患者治疗策略，并且密切监测疾病的进展情况。
3.2辅助家族遗传病风险检测和家族计划家庭遗传病通常是由一系列家族成员共同遗传而来。
通过基因检测技术，可以有效地预测患病家族成员的风险。
如果发现患者基因幼斜的基因表型为遗传病，医生还可以为患者建立完善的医学健康档案，用于日后的治疗、继承和生育甚至咨询家庭计划工作。
这里，家庭计划需要注意的是，并不是所有的家族遗传病都可以通过夫妻基因检测来避免。
常用基因检测方法原理与局限
常用基因检测方法原理与局限基因检测是通过分析个体的DNA序列来评估其健康状况、疾病风险、药物反应等信息的技术。
常用的基因检测方法包括PCR、测序、FISH和SNP芯片等。
下面将对这些方法的原理和局限进行详细阐述。
PCR（聚合酶链反应）是一种常用的基因检测方法，它通过体外扩增特定DNA片段，从而使其可检测。
PCR的原理是利用酶（聚合酶）在特定温度下反复复制和合成DNA。
PCR通常包括三个步骤：变性、退火和延伸。
变性步骤将DNA库中的双链DNA分离为单链，退火步骤则使引物与模板DNA发生互补结合，延伸步骤通过加入dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）和聚合酶使新的DNA链合成。
PCR可以快速、高效地扩增特定DNA片段，广泛应用于基因诊断、研究等领域。
然而，PCR也存在一些局限。
首先，PCR扩增的片段通常较短，这限制了对较大DNA片段的检测。
其次，PCR的结果可能受到杂交和引物不匹配等因素的影响，导致假阳性或假阴性结果。
此外，PCR扩增的过程需要选择适当的引物，这对于未知基因或引物可用性受限的情况来说是一个挑战。
测序是一种通过分析DNA序列来确定其碱基组成的方法。
Sanger测序是最早也是最常用的测序方法之一，其原理是将待测DNA片段复制为互补链，然后在复制过程中加入一些特殊的dNTPs，其中包含荧光染料。
复制完成后，通过电泳将反应产物分离并通过激光扫描仪进行荧光检测，根据颜色的强度和顺序可以确定DNA序列。
近年来，高通量测序技术的出现大大提高了测序效率和准确性。
测序方法的局限在于需要高昂的成本和复杂的实验步骤。
此外，测序是一种相对缓慢的方法，需要一定时间来处理和分析大量的DNA样品。
同时，测序还可能受到测序深度的限制，从而无法检测到低频变异。
FISH（荧光原位杂交）是一种基因检测方法，它通过特殊的探针和荧光染料来检测特定DNA序列的位置和数量。
FISH的原理是在未变性的DNA上与荧光染料标记的探针反应，然后通过显微镜观察荧光信号的位置。
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TaqMan 技术
Specific Target Amplification (if necessary)
Allele-Specific Genotyping Reaction
Fwd
Y
Rev
Fwd
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Rev
TaqMan Probes
T
C
TaqMan 技术
当DNA碱基通过 纳米孔时，它们 使电荷发生变化， 从而短暂地影响 流过纳米孔的电 流强度，灵敏的 电子设备检测到 这些变化从而鉴 定所通过的碱基。
二 基因芯片 技术
基因芯片的测序原理是杂交测序方法， 即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进 行核酸序列测定的方法，在一块基片表面 固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶 液中带有荧光标记的核酸序列，与基因芯 片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时， 通过确定荧光强度最强的探针位置，获得 一组序列完全互补的探针序列。据此可重
1. Probe hybridizatio3n. Probe displacement & cleavage
T
T
Y
Y
T Y
2. Target
4. PCR & cleavage
MGB技术
原理：针对Taqman探针荧光淬灭不彻底的问题，3' 端采用了非荧光性的淬灭基因，大大降低了本底信号 的干扰。此外，MGB探针的3'端还连接了一个二氢环 化吲哚卟啉-三肽，可以大大稳定探针与模板的杂交, 而短探针的荧光报告基团和淬灭基团的距离更近, 淬 灭效果更好，荧光背景更低，使得信噪比更高：一个 15bp的MGB 探针的信噪比大于6,优于理想状态下的 25bp的普通Taqman探针（信噪比约为1.5）。允许
分子信标技 术
分子信标（ Molecular beacon，MB）是 一种呈发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针， 两端的核酸序列互补配对，因此标记在一端 的荧光基团与标记在另一端的淬灭基团紧紧 靠近。荧光基团被激发后产生的光子被淬灭 剂淬灭，由荧光基团产生的能量以红外而不
是可见光形式释放出来。
Thanks!
的第二代测序技术诞生了。
1. I3)桥式PCR
扩增 与变性
2.PCR
(3)焦磷酸测 序
第三代测序 技术
以PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore Technologies纳米孔单分子测
基因SNP检测技术 比较
吴鹏超 遗传与健康产
品线
基因多态性检测技 术：
一 DNA测序技术（DNA sequence） 二 基因芯片（gene microarray）
技术
三 实时定量PCR（Real time PCR， RT-PCR）技术
一 DNA测 序技术
从1977年第一代DNA测序技术 （Sanger法），发展至今三十多年时 间，测序技术已取得了相当大的发展， 从第一代到第三代乃至第四代，测序 读长从长到短，再从短到长。下面我
序技术，被称之为第三代测序技术。
PacBio SMRT 技术
基本原理： DNA聚合酶和 模板结合,4色荧 光标记 4 种碱
基（即是 dNTP）,在碱基 配对阶段,不同 碱基的加入,会 发出不同光,根 据光的波长与峰 值可判断进入的
碱基类型。
Oxford Nanopore Technologies
组出靶核酸的序列。
九、基因芯片检测原理及
简要过程
T7 promoter
PCR
体内转录
荧光素
T7 promoter
片段化
1.5 小时
ACGT
杂交、冲洗
扫描分析
1 小时
图 2 样品处理与检测过程简图
三 实时定量 PCR技术
由于染料不能区分特异性PCR产物和引 物二聚体等非特异产物，也不能区分不同探 针，所以检测的特异性始终不如后来出现的
采用更短的探针也简化了探针的设计和成本。
FRET技术Leabharlann 原理：探针由两条和模版互补、且相邻的特异探 针组成（距离1—5bp），上游探针的3`端标记供体荧 光基团，相邻下游探针的5`端标记Red 640受体荧光 基团。当复性时，两探针同时结合在模板上，供体基团 和受体基团紧密相邻，激发供体产生的荧光能量被 Red640基团吸收，使得检测探头可以检测到Red640 发出波长为640的荧光。当变性时，两探针游离，两基 团距离远，不能检测到640波长的荧光。FRET探针检 测的信号是退火时的实时信号，每次检测信号始终严格 对应模版的数量，非累积信号，可以用于做Tm曲线和 SNP检测。两个单标记探针的长短不影响信号的传递， 而探针间的距离通常为1-5bp。
们就一一介绍前三代测序技术。
第一代测序 技术
Sanger法核 心原理是： 由于ddNTP 的2’和3’都不 含羟基，其 在DNA的合 成过程中不 能形成磷酸 二酯键，因 此可以用来 中断DNA合 成反应。
第二代测序 技术
第一代测序技术的主要特点是测序读 长可达1000bp，但其测序成本高，通量 低严重影响了真正大规模的应用。而经 过不断的技术开发和改进，以Roche公 司的454技术、illumina公司的Solexa， Hiseq技术和ABI公司的Solid技术为标记